肌糖原的酵解 - 副本課件

肌糖原的酵解

——實(shí)驗(yàn)研討肌糖原的酵解-副本01實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

肌肉糜的糖酵解乳酸的測(cè)定

02結(jié)果和分析03課后研討題04心得與體會(huì)

PPT主要內(nèi)容提要：肌糖原的酵解-副本實(shí)驗(yàn)內(nèi)容——肌肉糜的糖酵解（1）取4支試管編號(hào)，加入新鮮肌肉糜0.5g。1、2管為樣品管，3、4管為對(duì)照管。向3、4對(duì)照管內(nèi)加入15%的偏磷酸溶液3mL，用玻璃棒將肌肉碎塊打散攪勻，以沉淀蛋白質(zhì)、終止酶的反應(yīng)。（2）4支試管中分別加入3mLpH7.4的磷酸緩沖液和1mL0.5%淀粉，用玻璃棒充分?jǐn)噭颉Ｔ偌尤?mL/管液體石蠟，以隔絕空氣。將4支試管同時(shí)放入37℃恒溫水浴中保溫1小時(shí)。肌糖原的酵解-副本

（3）取出試管，立即向1、2號(hào)試管內(nèi)加入15%偏磷酸液3mL并混勻。將各試管內(nèi)容物分別過(guò)濾，棄去沉淀。（4）量取每個(gè)樣品的濾液4mL,分別加入已編號(hào)的試管中，然后每管內(nèi)加入飽和的硫酸銅液1mL，混勻，再加入0.4g氫氧化鈣粉末，用玻璃棒充分?jǐn)噭?，放?0min，并不時(shí)攪動(dòng)內(nèi)容物，使糖沉淀完全。將每個(gè)樣品分別過(guò)濾，棄去沉淀。肌糖原的酵解-副本實(shí)驗(yàn)內(nèi)容——乳酸的測(cè)定（1）取4支潔凈、干燥的試管，編號(hào)。各加入濃硫酸1.5mL和3滴對(duì)羥基聯(lián)苯試劑（每滴大小要一致），混勻后放入冰浴中冷卻。（2）將每個(gè)樣品的濾液0.25mL逐滴加入到已冷卻的上述混合液中，隨加隨搖動(dòng)冰浴中的試管，注意冷卻（注意加對(duì)羥基聯(lián)苯和濾液時(shí)避免滴到試管壁上）（3）將各試管混合均勻，放入沸騰的水浴中待顯色后即取出，比較和記錄各管溶液的顏色深淺，并加以解釋。肌糖原的酵解-副本結(jié)果和分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果：左一（樣品1）：呈現(xiàn)紫羅蘭色，顏色較淺左二（樣品2）：呈現(xiàn)紫羅蘭色，顏色較深左三（空白1）：呈現(xiàn)深黃色左四（空白2）：呈現(xiàn)淺黃色結(jié)果分析：左一（樣品1）：乳酸可以與硫酸共熱便成乙醛，后者再與對(duì)羥基聯(lián)苯反應(yīng)生成紫羅蘭色物質(zhì),可能因淀粉或蛋白質(zhì)處理不徹底，影響了其顯色效果。左二（樣品2）：乳酸可以與硫酸共熱便成乙醛，后者再與對(duì)羥基聯(lián)苯反應(yīng)生成紫羅蘭色物質(zhì)。左三（空白1）：在加入三氯乙酸后，沒(méi)有完全震蕩，肌肉糜中的酶沒(méi)有與三氯乙酸完全反應(yīng)，導(dǎo)致其后加入的淀粉發(fā)生酵解反應(yīng)，最終生成少量乙醛與顯色液發(fā)生反應(yīng)；另外在肌肉糜中本身含有糖類(lèi)，在未加入三氯乙酸之前反映了一部分，生成部分乳酸。左四（空白2）：分析同上肌糖原的酵解-副本課后研討題1.本實(shí)驗(yàn)在37℃保溫前不加液體石蠟是否可以？為什么？

不可以，肌糖原的酵解實(shí)驗(yàn)最后是測(cè)量乳酸的含量，而乳酸的產(chǎn)生是在無(wú)氧條件下產(chǎn)生的。糖酵解是糖原在細(xì)胞溶膠中經(jīng)過(guò)一系列酶反應(yīng)生成丙酮酸，在無(wú)氧條件下轉(zhuǎn)換為乳酸；若有氧存在，丙酮酸會(huì)進(jìn)入線粒體，在酶催化條件下最終生成水和CO22.本實(shí)驗(yàn)如何檢驗(yàn)糖酵解作用？

糖酵解作用最后由乳酸的生成來(lái)觀察，在除去蛋白質(zhì)和糖后，乳酸和濃硫酸共熱變成乙醛，后者再與對(duì)羥基聯(lián)苯反應(yīng)生成紫紅色物質(zhì)，根據(jù)顏色的顯色加以鑒定。肌糖原的酵解-副本3.在乳酸測(cè)定過(guò)程中，為什么先要進(jìn)行冰浴并隨時(shí)冷卻？

濃硫酸接觸有水的試劑后會(huì)放出大量熱，冰浴可以吸收濃硫酸放出的熱量。4.在本實(shí)驗(yàn)中，怎樣做才可以盡可能減小實(shí)驗(yàn)誤差得出理想結(jié)果？

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中蛋白質(zhì)和糖對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響很大，在實(shí)驗(yàn)前要把實(shí)驗(yàn)所用的試管洗干凈，在實(shí)驗(yàn)糖酵解過(guò)程中要在無(wú)氧條件下進(jìn)行。肌糖原的酵解-副本5.闡述分析糖酵解作用在糖代謝過(guò)程中的地位及生理意義理情況下，大多數(shù)組織有足夠的氧以供有氧氧化之需，很少進(jìn)行糖酵解，因此這一代謝途徑供能意義不大，但少數(shù)組織，如視網(wǎng)膜、睪丸、腎髓質(zhì)和紅細(xì)胞等組織細(xì)胞，即使在有氧條件下，仍需從糖酵解獲得能量。在某些情況下，糖酵解有特殊的生理意義。例如劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)，能量需求增加，糖分解加速，此時(shí)即使呼吸和循環(huán)加快以增加氧的供應(yīng)量，仍不能滿足體內(nèi)糖完全氧化所需要的能量，這時(shí)肌肉處于相對(duì)缺氧狀態(tài)，必須通過(guò)糖酵解過(guò)程，以補(bǔ)充所需的能量。在劇烈運(yùn)動(dòng)后，可見(jiàn)血中乳酸濃度成倍地升高，這是糖酵解加強(qiáng)的結(jié)果。又如人們從平原地區(qū)進(jìn)入高原的初期，由于缺氧，組織細(xì)胞也往往通過(guò)增強(qiáng)糖酵解獲得能量。在某些病理情況下，如嚴(yán)重貧血、大量失血、呼吸障礙、腫瘤組織等，組織細(xì)胞也需通過(guò)糖酵解來(lái)獲取能量。倘若糖酵解過(guò)度，可因乳酸產(chǎn)生過(guò)多，而導(dǎo)致酸中毒。肌糖原的酵解-副本5.總結(jié)本實(shí)驗(yàn)操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)和注意事項(xiàng)。

實(shí)驗(yàn)成功的兩個(gè)關(guān)鍵步驟：

（1）向空白管加入30%三氯乙酸。30%三氯乙酸的作用是使肌肉糜失活，這一步一定要保證肌肉糜完全失去活性，以增強(qiáng)最終顯色的比色效果，判定肌肉糜失活的標(biāo)識(shí)是肌肉糜呈慘白色，無(wú)血色。（2）加入飽和CuSO4和Ca(OH)2粉末。加入飽和CuSO4和Ca(OH)2粉末的作用是去除反應(yīng)體系中的糖和蛋白質(zhì)，對(duì)羥基聯(lián)苯反應(yīng)非常敏感，若體系中含有糖和蛋白質(zhì)，可能會(huì)對(duì)以后的顏色鑒別產(chǎn)生影響，因此這步非常關(guān)鍵。肌糖原的酵解-副本注意事項(xiàng)：（1）30%三氯乙酸的作用是使肌肉糜失活(即肌肉糜中的蛋白失活)，因此在用30%三氯乙酸處理空白管中的肌肉糜時(shí)，一定要充分，直至肌肉變?yōu)閼K白色為止，在處理過(guò)程中，可使用玻璃棒不斷攪捻肌肉糜，使其充分接觸三氯乙酸，以使肌肉糜完全失活。（2）加液體石蠟?zāi)康氖歉艚^空氣，給反應(yīng)體系創(chuàng)造無(wú)氧環(huán)境，加入的石蠟不用太多，剛好把口封住最佳。（3）37度保溫時(shí)間1-1.5h，可通過(guò)前期的預(yù)實(shí)驗(yàn)確定最佳保溫時(shí)間。肌糖原的酵解-副本（4）在加入飽和CuSO4之前需將肌肉糜挑出。（5）加入飽和CuSO4和Ca(OH)2粉末的作用是去除反應(yīng)體系中的糖和蛋白質(zhì)，加入飽和CuSO4和Ca(OH)2粉末如一定要充分震蕩10min，使CuSO4、Ca(OH)2和反應(yīng)體系充分接觸，完全去除多余的糖和蛋白質(zhì)。（6）乳糖的測(cè)定中，在加入樣品濾液和對(duì)羥基聯(lián)苯時(shí)，一定不要加到壁上，否則會(huì)對(duì)結(jié)果造成干擾。肌糖原的酵解-副本心得與體會(huì)1.在碾碎肌肉糜時(shí)，要注意玻璃棒不要硬捅試管底部，而是擠壓試管壁。2.空白組加完三氯乙酸后，不要急著加磷酸緩沖液，而是不斷用玻璃棒攪動(dòng)肌肉糜，使肌肉糜完全失去血色，變?yōu)榘咨珵橹?，即熟肉的顏色一樣，此步驟是本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵所在，要是沒(méi)有使空白組中的酶沒(méi)有完全失活，則空白組中也會(huì)發(fā)生酵解作用，所以會(huì)使最后的空白組有顏色。3.加入淀粉溶液的目的是增加第五濃度，使酵解左右明顯，從而使實(shí)驗(yàn)結(jié)果明顯。4.實(shí)驗(yàn)中加入石蠟的目的是為了產(chǎn)生無(wú)氧環(huán)境，從而使酵解左右得以正常進(jìn)行，否則在有氧條件下會(huì)進(jìn)行有氧呼吸，不產(chǎn)生乳酸。

肌糖原的酵解-副本5.實(shí)驗(yàn)中加入飽和硫酸銅溶液的目的是為了除去糖，加氫氧化鈣的目的是為了讓蛋白質(zhì)變質(zhì)，原因是糖類(lèi)和蛋白質(zhì)會(huì)影響最乳酸的顯色反應(yīng)，此步驟也是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，加入這兩樣?xùn)|西后，一定要充分振蕩，除去糖類(lèi)和蛋白質(zhì)的影響。6.用于檢驗(yàn)乳酸產(chǎn)物的四只試管必須是干燥潔凈的，否則可能會(huì)混入糖類(lèi)或蛋白質(zhì)對(duì)最后結(jié)果產(chǎn)生影響