微生物室作業(yè)指導(dǎo)書

微生物室作業(yè)指導(dǎo)書微生物室崗位一、崗位設(shè)備以及工藝流程1．設(shè)備流程全玻璃茄形瓶全玻璃茄形瓶(800ml)標(biāo)準(zhǔn)型雙人凈化工作臺臥式圓形壓力蒸汽消毒器(121標(biāo)準(zhǔn)型雙人凈化工作臺臥式圓形壓力蒸汽消毒器(121℃×45min)不銹鋼接種瓶(10L)種子罐種子罐(0.65M3)2．崗位設(shè)備一覽表序號設(shè)備編號設(shè)備名稱規(guī)格型號數(shù)量〔臺〕1JZ-1臥式圓形壓力蒸汽消毒器YXQ-WY-21-60012JZ-2標(biāo)準(zhǔn)型雙人凈化工作臺SW-CJ-1C23JZ-3不銹鋼接種瓶10L24JZ-4新飛冰箱BCD-165E15JZ-5容聲冰箱BCD-203A16JZ-6澳柯瑪冷藏展示柜SC-23017JZ-7電熱手提式壓力蒸汽滅菌鍋YXQ。SG41。28018JZ-8生物顯微鏡XS-1819JZ-9落地扇FS18-40110JZ-10電動攪拌機(jī)D60-2F211JZ-11增力電動攪拌器JJ-1112JZ-12超級恒溫水浴CS501113JZ-13超級恒溫器HH．S114JZ-14恒溫磁力攪拌器78HW-1315JZ-15電熱蒸餾水器HS。Z11。5116JZ-16電熱恒溫培養(yǎng)箱SKP-01117JZ-17電熱鼓風(fēng)枯燥箱DGF30/T-I118JZ-18精密PH計PHS-3B119JZ-19阿貝折射儀WYA120JZ-20弧形往復(fù)式生物液體培養(yǎng)震蕩臺HSZ-1121JZ-21回轉(zhuǎn)式恒溫調(diào)速搖床DKY-Ⅱ122JZ-22不銹鋼培養(yǎng)架1.5m×1.1m223JZ-23中效送風(fēng)機(jī)〔帶電加熱〕800M3/h124JZ-24除濕器DH-350B13．工藝控制流程茄形瓶菌種斜面茄形瓶菌種斜面(800ml)孢子懸浮液轉(zhuǎn)入不銹鋼接種瓶(孢子懸浮液轉(zhuǎn)入不銹鋼接種瓶(無菌操作)臥式圓形壓力蒸汽消毒器(121℃×45min)培養(yǎng)溫度：30℃低溫保藏制備孢子懸浮液〔無菌操作臺操作〕接種子罐培養(yǎng)接種子罐培養(yǎng)(30℃)取樣監(jiān)測不同時段PH值、溫度及鏡檢。取樣監(jiān)測不同時段PH值、溫度及鏡檢。發(fā)酵罐培養(yǎng)發(fā)酵罐培養(yǎng)(30℃)檢測菌絲體酶活取樣監(jiān)測不同時段PH值、溫度及鏡檢。檢測菌絲體酶活取樣監(jiān)測不同時段PH值、溫度及鏡檢。4．工藝控制要點(diǎn)控制工程工藝參數(shù)超出控制范圍影響調(diào)整措施茄形瓶菌種斜面培養(yǎng)溫度30℃影響嚴(yán)格控制控溫器茄形瓶菌種斜面保藏溫度低溫保藏影響嚴(yán)格觀查冰箱蒸汽消毒器消毒壓力及時間121℃×45min影響嚴(yán)格按照壓力容器操作規(guī)程操作，控制好壓力及溫度。4.1制備孢子懸浮液：必須在無菌操作臺上制備。4.2孢子懸浮液轉(zhuǎn)入不銹鋼接種瓶：必須在無菌情況下操作。4.3接種子罐、發(fā)酵罐培養(yǎng)：溫度30℃；壓力0.1Mpa；超出控制范圍影響；4.4檢測菌絲體酶活：溫度50±1℃；超出控制范圍影響；二、操作控制程序1．菌種斜面操作控制程序1.1操作步驟1.1.1別離1.1.1.1、將培養(yǎng)皿用玻璃鉛筆標(biāo)記，標(biāo)明-4、-5、-6各3只，另外6個試管插入試管架，分別標(biāo)明-l、-2、-3、-4、-5、-6。將無菌生理鹽水往6個試管中各參加4.5ml。1.1.1.2、開始稀釋。用吸管吸取已搖勻的孢懸液O.5mL注入-l試管，搖勻。即從O.5mL加至5mL，稀釋10倍，這一試管的菌液濃度為原菌液濃度的1/10，即lO-1，簡稱-1。另取一吸管從-l試管吸0.5mL至-2試管，搖勻。再取一吸管從-2試管吸取O.5mL至-3試管……依次進(jìn)行。要求一支試管只吸取一個稀釋菌液，隨即換掉，并在吸取菌液入下一號試管前，用吸管吸取和吹出此已搖勻后的菌液3—5次，以幫助菌液均化。2.1.1.3、從-4號試管開始，在吸取0.5mL至下一試管后，同一試管吸取菌液個0.2mL至3個同一稀釋標(biāo)號的培養(yǎng)皿中，直至-6試管為止。采用什么樣方式和勻菌液于培養(yǎng)基內(nèi)，可根據(jù)要求進(jìn)行。然后將9個培養(yǎng)皿放在30℃的保溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)好后收入冰箱待用。1.2、接種1.2.1操作步驟(以液體試管移接液體試管說明)1.2.1.1、左手手拿兩只液體試管，外側(cè)為菌液試管。1.2.1.2、將接種環(huán)在火焰上燒紅滅菌。12.1.3、右手取下管塞，接種環(huán)涼后使用。1.2.1.4、試管口靠近火焰滅菌。1.2.1.5、將一環(huán)菌液移至培養(yǎng)液管中。1.2.1.6、將接種環(huán)在培養(yǎng)液中搖晃一下，取出。1.2.1.7、先將試管在火焰上消毒后，塞管塞。1.2.1.8、將接種環(huán)火焰滅菌放回原處。1.2.1.9、在試管標(biāo)簽上標(biāo)上日期等送培養(yǎng)箱培養(yǎng)。1.3.培養(yǎng)1．3．1、培養(yǎng)室必須清潔。1．3．2、培養(yǎng)物不應(yīng)擺放過于稠密，需有一定的間隙。1．3．3、控制好培養(yǎng)溫度以及觀察培養(yǎng)中的生長情況。1．3．4、培養(yǎng)好的菌種要收藏好。1．4、保藏菌種保藏主要是低溫保藏，方法根據(jù)?工業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)手冊?上的相關(guān)方法進(jìn)行。2．臥式圓形壓力蒸汽消毒器操作控制程序2．1操作控制程序2．1．1加水：使用此消毒器前須開啟進(jìn)水閥，使水進(jìn)入蒸汽發(fā)生器內(nèi)，加至離水位表頂端5—10毫米處為止，NN關(guān)NANN。每次消毒前應(yīng)檢查貯水，如有不夠應(yīng)予補(bǔ)充。2．1．2堆放：將待消毒的物品預(yù)以妥善包扎，順序地相互之間保持適當(dāng)間隙地放入消毒室內(nèi)。堆放物品時不宜緊靠消毒室門，以免蒸汽的冷凝水沿門壁滴在物品上，致使物品吸收過多水份，消毒終了進(jìn)不易枯燥。料包不易太大，一般以20厘米×10厘米為佳，否那么將延長消毒時間。對溶液進(jìn)行消毒時，應(yīng)灌注于硬質(zhì)耐熱玻璃瓶中，以不超過其容積的3／4為宜，用棉塞塞好，牛皮紙包好，切勿使用未打孔的橡膠或軟木塞。2．1．3密閉：將門關(guān)上，按順時針方向撥動鎖緊手柄至中方位，使撐檔進(jìn)入門圈內(nèi)，然后轉(zhuǎn)動八角轉(zhuǎn)盤，使門和墊圈密合，不要將門閉得過緊，以免損壞墊圈。2．1．4加熱：將壓力控制開關(guān)的鈕撥至開處，電源指示燈亮，表示通電。關(guān)閉總閥，按各類物品所需消毒溫度，將轉(zhuǎn)動鈕撥至0.07、O.11、0.14Mpa，此時電源指示燈亮，表示開始加熱，至相應(yīng)壓力時會自動切斷電源，指示燈也隨之熄滅。以后電流時通時斷，自動地使壓力表指示。在加熱時要適當(dāng)?shù)胤_消毒正中下端冷凝水泄出器前的控制閥，使冷凝水從夾套內(nèi)排出，確保到達(dá)相應(yīng)的溫度。2．1．5消毒：當(dāng)夾套內(nèi)的加熱蒸汽到達(dá)所選擇的控制壓力時，即可將其導(dǎo)入消毒室，其步驟為：先將冷凝水泄出器前面的冷凝閥鈕開少許，然后將總閥撥至“消毒〞，這時蒸汽便由夾套進(jìn)入消毒室，放出熱量進(jìn)行加熱和潤濕消毒物品，消毒室內(nèi)之空氣和冷凝水也由冷凝水泄出器不斷排出，這時，夾套內(nèi)的蒸汽壓力下降，消毒室內(nèi)壓力上升，當(dāng)消毒室溫度到達(dá)預(yù)選溫度值時，開始計消毒時間。2．1．6枯燥：消毒時間終了后，按各種不同消毒物品要求任由消毒室內(nèi)蒸汽自然冷卻或預(yù)以慢排或快排。如溶液培養(yǎng)基那么須自然冷卻或慢排，待消毒室壓力降至O位后，再候l—2分鐘，方可開啟消毒閥門，取出物品。2．1．7終了：如不再繼續(xù)消毒時，可關(guān)去電源開關(guān)，將總閥撥至“全排〞，排去套層內(nèi)的蒸汽并將大門開啟，散發(fā)消毒室內(nèi)剩余蒸汽，使消毒室內(nèi)壁經(jīng)常保持枯燥。2．2考前須知：2.2.1:不同類型的物品不要同時進(jìn)行消毒2.2.2:使用前須查水位表，保持足夠的貯水量2.2.3:當(dāng)蒸汽進(jìn)入消毒室內(nèi)，應(yīng)徐徐開放冷凝水2.2.4:平安閥提柄每周提拉1—2次，以保持其靈活性2.2.5:應(yīng)保持其清潔和枯燥2.2.6:消毒器應(yīng)在完整情況下操作，并由專人負(fù)責(zé)，防止發(fā)生事故2.2.7:消毒器旁應(yīng)懸掛操作規(guī)程以備查閱和遵循2.2.8:確保電源接地，保證平安3.標(biāo)準(zhǔn)型雙人凈化工作臺操作控制程序3.1操作控制程序3.1.1、使用前先對操作區(qū)外表作清潔處理，啟動風(fēng)機(jī)20分鐘后，即可開始工作。3.1.2、在工作臺面上不要存放不必要的物品，保持操作區(qū)內(nèi)的潔凈氣流不受干擾。3.1.3、禁止在工作臺面上記筆記，工作時應(yīng)盡量防止作明顯擾亂氣流的動作。3.1.4、定期(一般3月一次)用QDF—2A型球式風(fēng)速計測量操作區(qū)風(fēng)速，如發(fā)現(xiàn)不符合技術(shù)要求，那么可調(diào)節(jié)風(fēng)機(jī)組電機(jī)使用電壓。3.1.5、經(jīng)常注意工作臺上微壓表的指針，當(dāng)指針從綠色區(qū)進(jìn)入紅色區(qū)時，說明此時高效空氣過濾器的容塵量己趨于飽和，必須半有一次用風(fēng)速計測量工作區(qū)風(fēng)速，當(dāng)平均風(fēng)速0.3m/s時說明高效空氣過濾器失效，應(yīng)預(yù)以更換。4.接種瓶使用操作控制程序4.1操作控制程序4.1.1、接種瓶滅菌前必須進(jìn)行再次清洗并濾干水或者用75％酒精進(jìn)行浸泡后沖洗(用蒸餾水)干凈并濾干水，然后用棉塞及2層牛皮紙包扎瓶口。4.1.2、接種管在滅菌前，也須按照清洗按種瓶一樣進(jìn)行清洗，待干后墊好墊圈，用8層脫脂紗布、2層牛皮紙進(jìn)行包扎。4.1.3、進(jìn)行高壓滅菌。4.1.4、滅菌完畢后，放置無菌室內(nèi)，開啟紫外燈照射30分鐘，待用。4.1.5、孢子懸浮液制備完畢，并將孢懸液轉(zhuǎn)入無菌瓶內(nèi)，要特別注意無菌操作。4.1.6、轉(zhuǎn)完后，在無菌操作下用無菌接種管摞緊接種瓶時，要特別注意無操作。4.1.7、假設(shè)接種時間還未到，裝有孢懸液的接種瓶不得搬離無菌室，待接到接種通知后，再從無菌室取出接種瓶到種子罐處進(jìn)行接種。接種時必須在無菌條件下進(jìn)行操作。4.1.8、搬運(yùn)接種瓶過程中，禁止瓶口傾斜以及接種管口的包扎物松動脫落。4.1.9、接種完畢，接種瓶、管必須認(rèn)真沖洗，然后倒立于干凈的桌面上濾干水，待下次使用。5.紫外燈使用操作控制程序5.1操作控制程序5.1.1、紫外燈使用范圍：紫外燈使用范圍包括，菌種室、緩沖間、培養(yǎng)間、微生物實(shí)驗(yàn)室、搖瓶問、淋門以內(nèi)、南平安門以內(nèi)的控制區(qū)。5.1.2、紫外燈的使用時間：每天上班前20分鐘為紫外燈照射時間。5.1.3、其它：使用紫外燈時，注意觀察紫外燈是否正常，有異常情況應(yīng)及時反映給車間，要時進(jìn)行更換。5.1.4：固定的紫外燈照射不到房間死角或設(shè)備內(nèi)部，可用流動紫外燈照射。5.1.5：紫外燈使用情況和時間填寫“紫外燈使用情況記錄〞，并由使用者簽名。6.電熱蒸餾水器使用操作控制程序6.1操作控制程序6.1.l、蒸發(fā)器安裝完畢后，將蒸餾水器放水龍頭關(guān)閉，然后翻開水源使水經(jīng)冷凝器流入回水漏斗中，注入蒸發(fā)器內(nèi)，直至水位上升到水位鏡處暫將水源關(guān)閉。6.1.2、接通電源開始加熱。6.1.3、當(dāng)蒸發(fā)器內(nèi)水沸騰，開始出蒸餾水時，將水源翻開，冷卻水源由小到大逐漸調(diào)整，以所出蒸餾水40－45為宜。同時用水閥調(diào)整進(jìn)水量使蒸發(fā)過程中，蒸發(fā)器內(nèi)水位高度保持在水位鏡范圍內(nèi)。6.1.4、每次使用完畢應(yīng)將鍋內(nèi)剩水排凈，清洗干凈，保持枯燥清潔。6.2考前須知：6.2.1．電源電壓，必須與本設(shè)備要求電壓相符，使用請必須接好地線。6.2.2．蒸餾用水應(yīng)符合國家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，使用天然水應(yīng)經(jīng)處理前方可使用。6.2.3．本蒸餾水器軟管自備，使用請應(yīng)按要求接好。.2.4．在使用前切記先加水后通電，蒸餾過程中要隨時觀察，調(diào)整進(jìn)水量，保持平安水位。7.無菌室使用操作控制程序7.1操作控制程序7.1、進(jìn)入GMP無菌室，在外脫下所穿的鞋，將換下的鞋、套上專用黑塑料袋，放入鞋柜中(或指定地點(diǎn)〕轉(zhuǎn)身180°取出拖鞋，穿拖鞋進(jìn)入一更更衣室。并將白大褂脫下，整齊放入更衣框內(nèi)后，進(jìn)入緩沖間，并用洗手液洗手，烘干，然后進(jìn)入二更更衣室。7.2、進(jìn)入二更更衣室，戴口罩，穿工作服、褲。不得長發(fā)外露，換上工作鞋，更換后的拖鞋，放入更衣柜內(nèi)或指定地點(diǎn)，然后進(jìn)入緩沖間。7.3、進(jìn)入緩沖間后，進(jìn)行手的消毒、烘干，然后進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室。7.4、進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室7.4.1、進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室開始工作前，首先了解清楚電閘、氣閘等所設(shè)的位置。7.4.2、實(shí)驗(yàn)室必須經(jīng)常進(jìn)行衛(wèi)生清掃，每3個月定期進(jìn)行空間消毒滅菌(用一些化學(xué)試劑如甲醛熏蒸l—2天，再用氨水中和20分鐘，然后開排風(fēng)吹，或者用乳酸熏蒸等)。7.4.3、工作前后必須用新潔爾滅溶液進(jìn)行地面潔凈消毒，用75％的酒精擦拭操作臺及桌椅。7.4.4、每天開啟紫外燈消毒20分鐘，專人負(fù)責(zé)并作好記錄。7.4.5、每月用甲酚皂擦拭一次室墻面、門窗的消毒。7.4.6、進(jìn)入無菌操作前必須先用紫外燈滅菌20—30分鐘。7.4.7、進(jìn)入無菌室時，穿戴好無菌工作服，推開操作間門，進(jìn)入后立即關(guān)門。7.4.8、操作時禁止談話，禁止在無菌操作過程中進(jìn)入無菌室內(nèi)無故走動。7.4.9、無菌操作完畢后，進(jìn)行清潔衛(wèi)生，開啟紫外線燈對無菌室滅15分鐘，此后關(guān)閉紫外燈，無菌操作結(jié)束。7.4.10、嚴(yán)禁不相關(guān)及外來人員進(jìn)入無菌室。7.4.11、使用的電器設(shè)備應(yīng)定期檢查。7.4.12、離開實(shí)驗(yàn)室時，應(yīng)換下工作服，不得穿工作服到室外。8.菌種室發(fā)酵中控操作控制程序8.1操作控制程序8.1.1、PH值：當(dāng)發(fā)酵工段操作人員配好料通知取樣時，菌種室中控人員校好酸度計取樣調(diào)PH值6.0±0.1，然后做好接種準(zhǔn)備工作。8.1.2、種子罐接種：料液打入種子罐后，操作人員對其進(jìn)行實(shí)消，當(dāng)罐內(nèi)溫度降至培養(yǎng)溫度并保持穩(wěn)定10－15分鐘即可進(jìn)行接種，并記錄接種時間。8.1.3、種子罐培養(yǎng)中控：從接種完畢即開始計時培養(yǎng)，并在接種后1、4、6、8、10小時時分別取樣監(jiān)控工程為PH值、溫度、鏡檢、并做好中控記錄，培養(yǎng)10小時后，那么每小時取一次樣進(jìn)行監(jiān)測，直到可移種時下移種通知單。8.1.4、發(fā)酵罐培養(yǎng)中控：當(dāng)發(fā)酵罐內(nèi)培養(yǎng)液溫度降至培養(yǎng)到一定程度可移種的培養(yǎng)液移種入發(fā)酵罐內(nèi)，并記錄翻罐時間，從移完種開始計時培養(yǎng)，待到達(dá)停罐條件時，中控人員應(yīng)提前下達(dá)具體停罐時間開始離心別離，同時做好中控記錄。8.1.5、酶活測定：分別取前6次離心所得菌絲體少許捏細(xì)混勻。準(zhǔn)確稱取0.1g放于50ml12.5％的蔗糖溶液中，在溫度為50℃±1的條件下開啟反響，并記錄時間，反響1h后停止攪拌，取出反響液進(jìn)行滅酶，用孔徑為０.45μ濾膜過濾出10－15ml樣品，送樣進(jìn)行HPLC檢測，計算出酶活并填寫酶活測定通知單，一式肆份，下發(fā)管理部門及酶化車間。9.生物顯微鏡操作控制程序9.1操作控制程序9.1.l、將所需觀察的標(biāo)本放在工作臺上夾住。9.1.2、將各倍率物鏡順序地裝在物