臨床微生物檢驗課件

腸桿菌科

一.腸桿菌科概述二.大腸埃希菌(埃希菌屬)三.沙門菌屬四.志賀菌屬五.耶爾森菌屬六.枸櫞酸桿菌屬七.克雷伯菌屬八.腸桿菌屬、泛菌屬、哈夫尼菌屬九.沙雷菌屬十.變形桿菌屬、普羅威登菌屬、摩根菌屬

第一節(jié)

概述

一、概念、分類與命名二、臨床意義三、生物學(xué)特性四、微生物學(xué)檢驗

第一節(jié)

概述一概念、分類與命名（一）概念

腸桿菌科是棲居在人和動物腸道內(nèi)一大群生物學(xué)性狀相似革蘭陰性無芽胞桿菌。這些腸桿菌科的細菌可隨糞便等排泄物排出體外而廣泛分布在水、土壤和植物中.

許多腸桿菌科細菌既是腸道的正常菌群，也是條件致病菌(8種醫(yī)院感染的條件致病菌),機體抵抗力下降、寄居部位的改變或腸道菌群失調(diào)時引起機會感染或二重感染.

部分腸桿菌科的細菌是致病菌,引起人類腹瀉和腸道感染(四個菌屬).

腸桿菌科中對人類致病性較強能能引起傳染病的兩個菌種是鼠疫耶爾森菌和傷寒沙門菌.

第一節(jié)

概述（二）分類與命名

腸桿菌科種類繁多，歷史上分類與命名較為混亂，近年腸桿菌科采用生化反應(yīng)、抗原分析核酸雜交和序列分析技術(shù)進行分類，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)腸桿菌科31個菌屬，120多個菌種,主要分布于13個菌屬中。埃希菌屬，沙門菌屬，志賀菌屬，耶爾森菌屬，枸櫞酸桿菌屬克雷伯菌屬，腸桿菌屬，泛菌屬，哈夫尼菌屬沙雷菌屬變形桿菌屬、普羅威登菌屬、摩根菌屬

第一節(jié)概述

二臨床意義

腸桿菌科細菌種類多，可引起腸道內(nèi)、外多種感染。腸桿菌科占臨床分離菌總數(shù)50%和革蘭陰性菌80%，近50%的敗血癥、70%以上的泌尿道感染和大量的腸道感染是由腸桿菌科細菌引起的。（一）人類腸道外感染

除志賀菌外，大腸埃希菌、克雷伯菌、變形菌、腸桿菌和沙雷菌等引起泌尿道、呼吸道、傷口等（醫(yī)院）感染。（二）人類腸道感染

本科中許多細菌與腹瀉有關(guān)，埃希菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬、耶爾森菌屬引起急慢性腸道感染、食物中毒、旅行者腹瀉及腸熱癥等。

第一節(jié)概述

三生物學(xué)特性（一）形態(tài)結(jié)構(gòu)

G-桿狀球桿狀,無芽孢,多有鞭毛.

（二）抗原成分

1O抗原細菌細胞壁脂多糖.特異多糖決定O抗原特異性。血清學(xué)分群。

2H抗原不耐熱蛋白質(zhì)抗原,多肽鏈氨基酸序列構(gòu)型和空間結(jié)構(gòu)決定H抗原特異性.血清學(xué)分型

3表面抗原包繞O抗原外側(cè)不耐熱多糖抗原,粘液或莢膜多糖結(jié)構(gòu)決定其特異性.可阻斷O抗元與相應(yīng)抗體反應(yīng)

第一節(jié)概述

(三)變異性

1S-R變異

菌落由光滑型變?yōu)榇植谛?/p>

2H-O變異

細菌失去鞭毛,動力消失

第一節(jié)概述(四)培養(yǎng)和生化特性

1培養(yǎng)

營養(yǎng)要求不高兼性厭氧

2主要生化特性

（1）

發(fā)酵葡萄糖(產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣)

（2）氧化酶陰性

（3）觸酶陽性

（4）可將硝酸鹽還原至亞硝酸鹽.

第一節(jié)概述(五)抵抗力

抵抗力不強不耐干燥消毒劑敏感低溫有耐受力耐膽鹽一定程度抵抗染料抑菌作用

第一節(jié)概述

四、微生物檢驗(一)檢驗程序

標本

直接檢查分離培養(yǎng)：選擇鑒別培養(yǎng)基（涂片、染色，鏡檢）（BAP、SS、EMB/MAC）

可疑菌落

TSIA或KIA/MIU

藥物敏感試驗鑒定（生化、血清學(xué)、補充試驗）

第一節(jié)概述

四、微生物檢驗(二)標本采集

1腸外標本

血液、體液、痰、傷口分泌物、尿液等

2腸道標本

早期新鮮糞便標本,膿血和粘液部2h

內(nèi)培養(yǎng).不能及時培養(yǎng),沾有標本的棉拭插入運送培養(yǎng)基，冷藏待檢.

第一節(jié)概述

(三)標本直接檢查

革蘭陰性桿菌形態(tài)及染色性無鑒別意義

第一節(jié)概述(四)分離培養(yǎng)鑒定

1分離培養(yǎng)

1)腸外標本:無菌部位標本用血瓊脂,血培養(yǎng)用肉湯增菌,混有雜菌標本用MAC、EMB

2)腸道標本:

常用MAC、SS.疑小腸結(jié)腸炎耶爾森菌感染可用CIN

第一節(jié)概述

（五）腸桿菌科細菌鑒定(1)鑒定步驟

1)與其它科屬革蘭陰性桿菌鑒別

根據(jù)O－F試驗、氧化酶試驗、菌體形態(tài)和有無鞭毛等試驗區(qū)分是否是腸桿菌科細菌。見下表

表腸桿菌科與其他科菌的區(qū)別

試驗?zāi)c桿菌科弧菌科非發(fā)酵菌巴斯德菌科葡萄糖ＦＦO／－F

氧化酶－＋＋*＋形態(tài)桿狀弧形桿狀球桿狀鞭毛周毛或無單毛單、叢毛、周毛、無無鞭毛

注:*不動桿菌、嗜麥芽黃單胞菌除外2腸桿菌科細菌鑒定氧化型發(fā)酵型產(chǎn)堿型2腸桿菌科細菌鑒定

2)腸桿菌科初步分群腸桿菌科分成三個類群(見下表)A苯丙氨酸陽性和葡萄糖酸鹽陰性類群B苯丙氨酸陰性和葡萄糖酸鹽陽性類群C苯丙氨酸陰性和葡萄糖酸鹽陰性類群

第一節(jié)概述（2）腸桿菌科細菌鑒定方法

1)常規(guī)生化鑒定使用主要的鑒定試驗如KIA、GAS、H2S、

MR、VP、IND、CIT、PAD、URE、MOT、LYS、ARG、

ORN、ONPG，根據(jù)試驗的陰陽性鑒別腸桿菌科主要菌種2)鑒定試劑盒:

質(zhì)量可靠、穩(wěn)定,鑒定能力強,與編碼鑒定技術(shù)結(jié)合,過程自動化

3)血清學(xué)鑒定:

腸桿菌科某些腹瀉病原菌鑒定除生化反應(yīng)符合外,尚須用特異性抗血清進行血清學(xué)分型鑒定后才能作出最終報告,作出最終鑒定

4)分子生物學(xué)鑒定使用分子生物學(xué)技術(shù)可將細菌鑒定到科、屬、種和血清型，甚至可區(qū)分致病菌株和非致病菌株

第一節(jié)概述(五)抗菌藥物敏感試驗

耐藥性問題嚴重.

天然耐藥與獲得性耐藥多重耐藥菌株出現(xiàn),根據(jù)藥敏感選用抗生素.

耐藥譜成為醫(yī)院感染流行病學(xué)調(diào)查標志

第一節(jié)概述

(六)抗體檢測用已知抗原檢測患者血清中相應(yīng)抗體肥達反應(yīng)

第二節(jié)埃希菌屬

一、分類二、臨床意義三、生物學(xué)特性四、微生物學(xué)檢驗

第二節(jié)埃希菌屬

一、分類埃希菌屬(Escherichia)包括5個種

①大腸埃希菌②蟑螂埃希菌③弗格森埃希菌④赫爾曼埃希菌⑤傷口埃希菌.最近還發(fā)現(xiàn)了—個新種,稱為不脫羧／凝聚埃希菌大腸埃希菌(E.coli)是腸道中革蘭陰性桿菌主要成員,也是最常見臨床分離菌之一，該菌常引起各種腸內(nèi)外感染,是腹瀉和泌尿道感染主要病原菌本菌屬細菌DNAG+Cmol％為48—52.本節(jié)以大腸埃希菌為代表敘述

第二節(jié)埃希菌屬

二、臨床意義

包括致病因素和所致疾病

(一)致病因素:侵襲力/內(nèi)毒素/腸毒素

1.侵襲力

本菌的K抗原和菌毛與侵襲力有關(guān).K抗原能抗吞噬,并有抵抗抗體和補體的作用.菌毛能幫助細菌粘附于粘膜表面.能使細菌在腸道內(nèi)定殖,產(chǎn)生毒素而引起相應(yīng)癥狀.有侵襲力菌株直接侵犯腸道粘膜上皮引起炎癥

第二節(jié)埃希菌屬

二、臨床意義(一)致病因素

2內(nèi)毒素

本菌細胞壁有內(nèi)毒素活性,具有內(nèi)毒素所特有的、相似的病理生理作用,如發(fā)熱、休克、DIC等.

3腸毒素

大腸埃希菌產(chǎn)生兩種腸毒素:一種是不耐熱腸毒素(LT),另一種是耐熱腸毒素(ST),LT和ST

均可使腸道細胞中cAMP的水平升高,引起腸液大量分泌而導(dǎo)致腹瀉.

第二節(jié)埃希菌屬

二、臨床意義(二)所致疾病包括腸道外感染和腸道內(nèi)感染

1.腸道外感染

正常情況下在腸道內(nèi)不致病,當(dāng)移位于腸外組織或器官,則引起腸外感染,病變以化膿性感染為主

大腸埃希菌是臨床分離革蘭陰性桿菌中最常見菌種,常引起人類泌尿系感染,腹腔內(nèi)膿腫、腸穿孔繼發(fā)腹膜炎、腸道手術(shù)后繼發(fā)感染或大面積灼傷創(chuàng)面感染。此外還可引起菌血癥、膽囊炎、肺炎及新生兒腦膜炎等.該菌對一般抗生素敏感,易產(chǎn)生超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBL),

導(dǎo)致對第三代頭孢菌素耐藥.

第二節(jié)埃希菌屬

二臨床意義

2產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBL)菌株

(1)定義

超廣譜β-內(nèi)酰胺酶是一種水解青霉素、頭孢菌素及單環(huán)β-內(nèi)酰胺類的酶，主要由克雷伯菌和大腸埃希菌、變形桿菌等細菌產(chǎn)生篩選試驗頭孢泊肟≤17mm(變形桿菌≤22mm)、頭孢他啶（10ug/片）抑菌圈≤22mm,頭孢曲松≤25mm

或氨曲南、頭孢噻肟（30ug/片）≤27mm的菌株確證試驗經(jīng)頭孢他啶(30ug/片)、頭孢他啶/克拉維酸（30/10ug）；頭孢噻肟(10ug/片)、頭孢噻肟/克拉維酸（30/10ug)二組,其結(jié)果為二組中任何一組藥物加克拉維酸與不加克拉維酸的抑菌圈相比，增大值≥5mm

時即判定為產(chǎn)ESBL菌株第二節(jié)埃希菌屬

二臨床意義

2產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBL)菌株

（2）特點

產(chǎn)ESBLs菌株在體外藥敏試驗中,對第三代頭孢菌素(如頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢噻肟)和單環(huán)β-內(nèi)酰胺類(如氨曲南)抑菌圈減小,但不一定在耐藥范圍(可表現(xiàn)為R、I、S),而臨床對β-內(nèi)酰胺類(青霉素、頭孢菌素或氨曲南)均耐藥,對碳青霉烯和頭霉素類敏感.

（3）產(chǎn)ESBLs菌感染治療原則

停用第三代頭孢菌素,采用碳青霉烯類抗生素、β-內(nèi)酰胺抗生素／酶抑制劑加阿米卡星或頭霉菌素類抗生素.

第二節(jié)埃希菌屬

二、臨床意義

(二)所致疾病

3腸道內(nèi)感染

大腸埃希菌是人和動物腸道正常菌叢成員,但其中有些菌株能引起輕微腹瀉至霍亂樣嚴重腹瀉,并能引起致死性并發(fā)癥如溶血性尿毒綜合征(HUS)根據(jù)其不同的血清型別、毒力和所致臨床癥狀的不同,可將致腹瀉的大腸埃希菌分為5類

第二節(jié)埃希菌屬3腸道內(nèi)感染(1)腸毒素型大腸埃希菌(enterotoxigenicE.Coli,ETEC)

是嬰糼兒和旅行者腹瀉的重要病原菌，該菌產(chǎn)生兩種腸毒素即耐熱腸毒素(ST)和不耐熱腸毒素(LT).引起輕度腹瀉至嚴重的霍亂樣水樣腹瀉(2)腸致病性大腸埃希菌(enteropathogenicE.Coli,EPEC)

是世界各地嬰兒腹瀉重要病原菌，不產(chǎn)生腸毒素，也無侵襲力，吸附于腸上皮細胞，在局部定居后形成微菌落，造成局部損害，血清型如055、0111等，

第二節(jié)埃希菌屬

3腸道內(nèi)感染(3)腸侵襲型大腸埃希菌(EIEC)：主要侵犯較大兒童和成人，不產(chǎn)生腸毒素，但有侵襲力，類似于志賀菌，侵犯腸粘膜上皮細胞生長繁殖，死亡后產(chǎn)生內(nèi)毒素，使細胞破壞，形成炎癥和潰瘍，引起腹瀉，病變類似菌痢，出現(xiàn)膿血粘液便，有里急后重。(4)腸出血型大腸埃希菌(EHEC)

最常見的血清型為O157H7，寄生于牛等動物的腸道中，隨糞便排出，污染環(huán)境及食物，多為水源性或食源性感染，通過糞-口途徑傳播。致病因子是該菌菌毛和其產(chǎn)生的Vero

毒素，后者可使結(jié)腸上皮細胞壞死脫落、腸道出血、腎遠曲小管和集合管變性、血小板聚集與損傷內(nèi)皮細胞，引起出血性結(jié)腸炎，溶血性尿毒綜合征(HUS)，血栓性血小板減少性紫癜和急性腎衰竭，尤其是前者最多見。5歲以下兒童易感。(5)腸凝聚型大腸埃希菌(EaggEC)：

代表一群不產(chǎn)生LT或ST,不能用O：H血清分型,可粘附于

Hep-2和HeLa細胞的菌株.與世界各地慢性腹瀉有關(guān)

第二節(jié)埃希菌屬

三生物學(xué)特性

(一)形態(tài)結(jié)構(gòu)（圖）G-直短桿狀,大小1.1-1.51μm×2.0-6.0μm

多數(shù)有鞭毛,能運動.某些菌株尤其是引起腸外感染的菌株有莢膜(微莢膜)和周身菌毛.

大腸埃希菌革蘭染色

第二節(jié)埃希菌屬2抗原成分

⑴O抗原是多糖磷脂復(fù)合物(LPS),

耐熱,加熱100℃不能滅活，已有171種是血清學(xué)分型的基礎(chǔ)。

⑵H抗原是不耐熱的蛋白質(zhì)，已知有56種，均為單相菌株。⑶K抗原是多糖莢膜抗原,

對熱穩(wěn)定,能阻止O凝集血清型別按O：K：H的順序以數(shù)字表示。

O111：K58：H2

第二節(jié)埃希菌屬3培養(yǎng)特性兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，在普通瓊脂上生長良好，形成較大圓形、光滑、濕潤、灰白色的菌落，

第二節(jié)埃希菌屬在腸道選擇培養(yǎng)基上可發(fā)酵乳糖形成有色菌落.

第二節(jié)埃希菌屬KIA上斜面和底層均產(chǎn)酸、產(chǎn)氣,H2S陰性(AA+-)MIU培養(yǎng)基上反應(yīng)結(jié)果為++—

第二節(jié)埃希菌屬

大腸埃希菌IMViC試驗（＋＋－－）

右側(cè)為對照（－－＋＋）

第二節(jié)埃希菌屬

四、微生物檢驗（一)腸道外感染標本1.檢驗程序2.標本采集3.直接涂片染色檢查4.分離培養(yǎng)鑒定(二)腸道內(nèi)感染標本第二節(jié)埃希菌屬（一)腸道外感染標本1.檢驗程序

第二節(jié)埃希菌屬

四、微生物檢驗（一)腸道外感染標本

2.標本采集(血、尿、體液、膿、痰、分泌物）

血液標本以無菌操作技術(shù)采集靜脈血5ml注入血液培養(yǎng)瓶(見下圖)。痰標本取清晨口腔清潔后從深部咳出痰液。膿、分泌物等標本用無菌棉拭子直接采取。

3.直接涂片染色檢查

除血液標本外，膿、痰、分泌物等標本均作涂片染色檢查。尿液和各種體液離心后取沉淀物作涂片,可見G-短桿菌。

血液增菌培養(yǎng)

第二節(jié)埃希菌屬

四微生物檢驗

(1)腸道外感染標本4.分離培養(yǎng)鑒定

1)分離培養(yǎng)

血液標本接種肉湯增菌培養(yǎng),待生長后移種血平板。體液標本取離心沉淀物接種于血平板。尿液標本應(yīng)同時作菌落計數(shù)。膿、痰和分泌物標本可直接接種于血平板。35℃孵育18～24h后觀察菌落形態(tài)。

第二節(jié)埃希菌屬

四微生物檢驗

(1)腸道外感染標本

3分離培養(yǎng)鑒定

(2)鑒定

鑒別培養(yǎng)基上挑選有色菌落(EMB上扁平、粉紅色有金屬光澤，MAC上紅色，SS上紅色，XLD上為不透明黃色）用生化反應(yīng)、血清學(xué)試驗鑒定到屬和種。

典型的生化反應(yīng)特征

TSIA(三糖鐵)產(chǎn)酸／產(chǎn)酸產(chǎn)氣，

CIT(枸櫞酸鹽)陰性,URE(脲酶)陰性,IND(吲哚)陽性,MOT(動力)+／-,ORN(鳥氨酸)+／-。(見下表)

第二節(jié)埃希菌屬1.首先培養(yǎng)物涂片革蘭染色，如為革蘭陰性桿菌，按下表鑒定是否為腸桿菌科細菌

第二節(jié)埃希菌屬2.用苯丙氨酸脫氨酶和葡萄糖酸鹽利用試驗對鑒定的細菌分群

表苯丙氨酸、葡萄糖酸鹽陰性各屬鑒別

試驗埃希菌屬志賀菌屬沙門菌屬枸櫞酸桿菌屬愛德華菌屬耶爾森菌屬

H2S－－＋／－＋／－＋－動力＋－＋＋＋－*

枸櫞酸鹽－－＋／－＋－－靛基質(zhì)＋－／＋－－／＋＋－／＋賴氨酸＋／－－＋－－＋／－尿素－－－＋／－－＋／－

注:*30℃以下培養(yǎng)有動力

表埃希菌屬內(nèi)各菌種的鑒別

生化反應(yīng)大腸赫爾曼弗格森蟑螂傷口

IND(吲哚)+++--MR+++++VP-----CIT(枸櫞酸鹽)--(-)d-LYS(賴氨酸)+-+

++ARG(-)---dORN(鳥氨酸)d+++-ONPG+++-+

糖類發(fā)酵：乳糖+d--(-)

山梨醇+----

甘露醇+++-+

側(cè)金盞花醇--+--

纖維二糖-++-+

黃色色素-+--d

第二節(jié)埃希菌屬

四、微生物檢驗

(2)腸道內(nèi)感染標本

引起腹瀉ETEC、EPEC、EIEC和EHEC

具有與腸道外感染的大腸埃希菌相似的生物學(xué)特性，但分別具有特殊的血清型、腸毒素或毒力因子

1)標本采集

腹瀉和食物中毒患者糞便和殘留食物，肛拭標本

第二節(jié)埃希菌屬

四、微生物檢驗

(二)腸道內(nèi)感染標本

2分離培養(yǎng)鑒定

1)分離培養(yǎng)

接種腸道選擇鑒別培養(yǎng)基

2)鑒定

1)ETEC

A:標本：水樣便

B：生化反應(yīng)符合大腸埃希菌特征

C：血清學(xué)鑒定符合ETEC血清型：如，O6：

K15：H16，O8：K40：H9等

D：檢出大腸埃希菌不耐熱腸毒素和耐熱腸毒素

第二節(jié)埃希菌屬

2)EPECA：標本：嬰糼兒水樣或蛋花樣便

B：生化反應(yīng)符合大腸埃希菌特征

C：血清學(xué)鑒定符合EPEC血清型，如O55,O111,O20,O26等

3)EIEC

A：標本：細菌性痢疾樣便

B：生化反應(yīng)：不發(fā)酵乳糖或遲緩發(fā)酵乳糖，不產(chǎn)氣，除

O124外無動力，酒石酸鹽陰性，賴氨酸陰性

C：血清學(xué)鑒定符合EIEC血清型，如O152，O124等

D：豚鼠眼結(jié)膜試驗＋

第二節(jié)埃希菌屬

4)EHEC

A：早期為水樣便，后為血便

B：生化反應(yīng)：遲緩發(fā)酵山梨醇，在山梨醇麥康凱瓊脂平板上菌落呈無色

C：血清學(xué)鑒定：其血清型為O157:H7或O26：

K62:H11D：產(chǎn)生Vero細胞毒素

O157：H7大腸埃希菌

在山梨醇麥康凱瓊脂生長情況O157：H7大腸埃希菌

在麥康凱(左)和山梨醇麥康凱(右)上生長情況

第三節(jié)沙門菌屬沙門菌屬可從人和世界各地的各種動物中分離得到，有許多血清型，致病性具有種系特異性，人是傷寒和副傷寒A、B、C沙門菌的天然宿主，有些專對動物致病，有些對人和動物都致病。可致多種感染，輕者為自愈性胃腸炎,重者可引起致死性傷寒。傷寒和副傷寒A、B引起胃腸炎、菌血癥和腸熱癥；豬霍亂沙門菌引起胃腸炎和敗血癥，兒童多見。

第三節(jié)沙門菌屬一、分類二、臨床意義三、生物學(xué)特性四、微生物學(xué)檢驗

第三節(jié)沙門菌屬

一分類

沙門菌屬是腸桿菌科中最復(fù)雜的菌屬。

根據(jù)O抗原分群，再根據(jù)H抗原分血清型，將沙門菌屬分為6個亞屬(亞屬1-6，其中亞屬3再分為3a和3b,見表7。8)

絕大多數(shù)(99％)沙門菌的臨床分離株是亞屬

1中的菌種。

本屬細菌DNAG+C含量為50％-53％。

表沙門菌屬的6個亞屬和代表菌種

亞屬代表菌種亞屬1(豬霍亂)傷寒沙門菌S．typhi

豬霍亂沙門菌S.choleraesuis

副傷寒沙門菌S.paratyphi

雞沙門菌Sgallinarum

亞屬2(薩拉姆)薩拉姆沙門菌S.salamae

亞屬3a(亞利桑那)亞利桑那沙門菌S.arizonae

亞屬3b(第亞利桑那)第亞利桑那沙門菌S.diarizonae

亞屬4(豪頓)豪頓沙門菌S.houtenae

亞屬5(邦戈)邦戈沙門菌S.bingori

亞屬6(腸)腸沙門菌S.enterica

第三節(jié)沙門菌屬

二臨床意義致病因素和所致疾病(一)致病因素

侵襲力/內(nèi)毒素/腸毒素

1.侵襲力

有Vi抗原的具有侵襲力，穿過小腸上皮到達固有層，被吞噬細胞吞噬后，由于Vi抗原的保護,反而在細胞內(nèi)繁殖，并隨吞噬細胞至機體其他部位。

第三節(jié)沙門菌屬

二臨床意義(一)致病因素

2.內(nèi)毒素

有較強的內(nèi)毒素，可引起發(fā)熱,白細胞改變，中毒性休克，并能激活補體,導(dǎo)致一系列病理生理變化。

3.腸毒素

某些沙門菌(如鼠傷寒沙門菌)能產(chǎn)生類似大腸埃希菌的腸毒素。

第三節(jié)沙門菌屬(二)所致疾病沙門氏菌主要通過污染食品和水源經(jīng)口感染，引起人和動物的沙門菌病，主要有胃腸炎、菌血癥、腸熱癥、攜帶者4種類型。1.胃腸炎

此型最為常見,引起輕型或爆發(fā)型腹瀉,

伴有低熱,惡心和嘔吐.2.菌血癥或敗血癥

以豬霍亂沙門菌感染為多,無明顯的胃腸炎癥狀,表現(xiàn)為高熱、寒戰(zhàn)等.常伴有局部病灶如膽囊炎、骨髓炎等.往往出現(xiàn)血培養(yǎng)陽性而糞便培養(yǎng)陰性的結(jié)果.

第三節(jié)沙門菌屬3.腸熱癥

即指傷寒和副傷寒.最典型的是由傷寒沙門菌引起的傷寒,表現(xiàn)為發(fā)熱、頭痛、腹瀉、腹痛并可引起呼吸系統(tǒng)、肝脾和神經(jīng)系統(tǒng)的致命性損傷,血培養(yǎng)或肥達反應(yīng)陽性.

傷寒發(fā)病過程:細菌經(jīng)口感染,穿過小腸上皮進入粘膜下組織,被吞噬細胞吞噬,不被消滅反在吞噬細胞內(nèi)繁殖,隨吞噬細胞經(jīng)淋巴管到達淋巴結(jié),在淋巴結(jié)內(nèi)大量繁殖后,經(jīng)胸導(dǎo)管進入血流(第一次菌血癥).此時病人在臨床上出現(xiàn)發(fā)熱、不適等癥狀

第三節(jié)沙門菌屬隨后,細菌隨血流播散至肝、脾、膽囊、腎和骨髓等實質(zhì)器官中,繼續(xù)大量繁殖,再次進入血流(第二次菌血癥)并隨血液擴散至全身各器官及皮膚,病人出現(xiàn)持續(xù)高熱、肝脾腫大、皮疹和全身(內(nèi)毒素)中毒癥狀.膽囊中細菌隨膽汁進入腸腔,經(jīng)糞便排出,腎中細菌隨尿排出體外本病潛伏期7～20天,典型病程3～4周,發(fā)病2周后機體出現(xiàn)免疫反應(yīng),通過特異抗體和致敏淋巴細胞消滅細菌,使疾病好轉(zhuǎn),同時可引起遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng),導(dǎo)致腸壁孤立和集合淋巴結(jié)壞死和潰瘍甚至造成腸穿孔危及生命.4.攜帶者傷寒沙門菌感染過后約3％患者可成為攜帶者在其糞便中可持續(xù)排菌長達1年或1年以上.

第三節(jié)沙門菌屬三生物學(xué)特性

1.形態(tài)染色

G-桿菌細長，

0.7-1.5μm

ｘ2.0-5.0μm

有鞭毛,無芽胞和莢膜。

(見左圖)

第三節(jié)沙門菌屬(二)抗原成分

本菌屬抗原結(jié)構(gòu)主要有3種,即菌體(O)抗原、鞭毛抗原(H)抗原及表面(Vi抗原)1.O抗原

為多糖-類脂-蛋白質(zhì)復(fù)合物,具耐熱,能耐受100℃2.5hO抗原共有58種,以阿拉伯?dāng)?shù)字排序

O抗原是分群的依據(jù).每個沙門菌血清型可含一種或數(shù)種

O抗原.含有共同O抗原血清型歸為一個群,如O2群

(A),O4群(B),O6群（C),O50群(Z)

其刺激機體產(chǎn)生的抗體以IgM為主,與相應(yīng)的抗血清反應(yīng)時呈顆粒狀凝集.

第三節(jié)沙門菌屬(二)抗原成分

2H抗原

為不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)抗原,加熱或用乙醇處理均被破壞.沙門菌H抗原有兩相第一相特異性較高稱特異相,用小寫英文字母a,b,c…z表示.第二相抗原為沙門菌所共有,稱非特異相,直接用1,2,3表示.同時有第一相和第二相H抗原的細菌稱雙相菌僅有一相者稱單相菌.H抗原是定型的依據(jù).其刺激機體產(chǎn)生的抗體以IgG為主,與相應(yīng)的抗血清呈絮狀反應(yīng).

第三節(jié)沙門菌屬3表面抗原

沙門菌屬已證實表面抗原有Vi抗原、M抗原和5抗原三種：

1)Vi抗原是一種不耐熱酸性多糖聚合物,60℃30min或經(jīng)石炭酸處理即被破壞,經(jīng)人工培養(yǎng)基傳代后也易喪失.新分離的傷寒及副傷寒丙沙門菌常帶有此抗原.Vi抗原位于菌體最表層,有抗吞噬及保護細菌免受相應(yīng)抗體和補體的溶菌作用.Vi抗原存在時可阻止O抗原與相應(yīng)抗體發(fā)生凝集,故在沙門菌血清學(xué)鑒定時,先加熱破壞Vi抗原之后,O抗原才得以與相應(yīng)抗O血清發(fā)生凝集.

第三節(jié)沙門菌屬3表面抗原

2)M抗原又稱粘液抗原.多種沙門菌均可產(chǎn)生M抗原M抗原存在時亦可阻止O抗原與相應(yīng)抗體發(fā)生凝集,同樣可用加熱的方法加以破壞.

3)5抗原過去認為5抗原是一種O抗原.與O抗原區(qū)別是可被1mol／L鹽酸所破壞,與O抗原不同,仍屬表面抗原.

第三節(jié)沙門菌屬(三)變異性

1S-R變異

經(jīng)人工培養(yǎng)、傳代后菌體表面特異多糖抗原喪失菌落由光滑(S)型變成粗糙(R)型,為S-R變異,在生理鹽水中可出現(xiàn)自凝.

2H-O變異

是指有鞭毛沙門菌失去鞭毛的變異.3位相變異

具有雙相H抗原沙門菌變成只有一相H抗原單相菌,稱位相變異.沙門菌血清學(xué)分型時,如遇到單相菌,特別是只有第二相抗原時,需反復(fù)分離誘導(dǎo)出第一相抗原方可作出鑒定.

4V-W變異

是指沙門菌失去Vi抗原變異.具有Vi抗原沙門菌稱V型菌;Vi抗原部分喪失,稱VW型菌;Ⅵ抗原完全喪失,稱W型菌.

第三節(jié)沙門菌屬(四)培養(yǎng)特性兼性厭氧,營養(yǎng)要求不高最適生長溫度35℃～37℃,最適pH為6.8～7.8.在普通營養(yǎng)瓊脂上菌落為圓形光滑、濕潤、半透明、邊緣整齊,有時出現(xiàn)粗糙型菌落.

第三節(jié)沙門菌屬在腸道選擇培養(yǎng)基上菌落小至中等,透明或半透明,乳糖不發(fā)酵,產(chǎn)生硫化氫菌株,在SS瓊脂上形成中心黑色菌落.

MACSS

第三節(jié)沙門菌屬(五)抵抗力

不強,加熱60℃1h或65℃15～20min

即被殺死.

在水中能存活2～3周,糞便中可存活

1～2個月.

對膽鹽和煌綠等有抵抗力.用于制備沙門菌選擇培養(yǎng)基第三節(jié)沙門菌屬

四微生物檢驗(一)檢驗程序(二)標本采集（三）標本直接檢查(四)分離培養(yǎng)與鑒定(五)抗體檢測(肥達反應(yīng))

第三節(jié)沙門菌屬(一)檢驗程序第三節(jié)沙門菌屬

四微生物檢驗

(二)標本采集

根據(jù)疾病類型、病情和病程不同分別采集不同標本.傷寒沙門菌分離培養(yǎng)原則于發(fā)病第1周取血,第2、3周取糞便做培養(yǎng)分離率高,第3周也可取尿液培養(yǎng),全病程均可作骨髓培養(yǎng).血清學(xué)診斷應(yīng)在病程的不同時期分別采集2～3份標本.

(三)標本直接檢查1.顯微鏡檢查革蘭陰性桿菌.2.抗原檢測將病人標本或肉湯增菌培養(yǎng)物直接用商品膠乳凝集試劑進行試驗,可快速檢出沙門菌.

第三節(jié)沙門菌屬(四)分離培養(yǎng)與鑒定

1分離培養(yǎng)

常規(guī)的腸道選擇鑒別培養(yǎng)基能有效分離沙門菌,常用腸道鑒別培養(yǎng)基(MAC或EMB)、選擇培養(yǎng)基(SS等)和強選擇培養(yǎng)基(孔雀綠和亞硫酸鉍瓊脂等).孔雀綠瓊脂對分離除傷寒、副傷寒沙門菌以外沙門菌種有很好效果,而亞硫酸鉍瓊脂對分離傷寒沙門菌有很好效果.強選擇培養(yǎng)基僅適用于暴發(fā)流行時.在菌量較少情況下,可在初次分離時加用亞硒酸鹽或GN(Gramnegative)增菌肉湯促進沙門菌生長.但一般不作為常規(guī)使用,可在暴發(fā)流行或篩選帶菌者時使用.

第三節(jié)沙門菌屬1.分離培養(yǎng)

1)血液和骨髓液

血液5ml或骨髓液0.5ml加入50ml膽汁葡萄糖肉湯或胰酶消化大豆蛋白肉湯中,35℃～37℃孵育,若有生長則移種至血瓊脂平板和SS培養(yǎng)基中.

2)糞便或肛拭

床邊接種,或用卡-布運送培養(yǎng)基.

3)尿液和體液

無菌采集中段尿、膽汁、腦脊液、胸腹水等經(jīng)3000轉(zhuǎn)／min離心沉淀后接種于增菌液、血瓊脂和腸道選擇培養(yǎng)基.

4)食物等固體物質(zhì)

磨碎后加10倍無菌生理鹽水混勻,接種于增菌液和腸道選擇培養(yǎng)基.

第三節(jié)沙門菌屬2鑒定1)生化鑒定:菌落特點沙門菌菌落

EMB上無色或不透明琥珀色;MAC上較小,無色透明;SS上不透明或透明,

無色或中央為黑色的菌落;XLD上呈紅色或中央XLD

為黑色的菌落(見下)

第三節(jié)沙門菌屬2鑒定1)生化鑒定:生化反應(yīng)常用三糖鐵瓊脂(TSIA)來初步鑒定.本菌在TSIA上典型生化模式為:堿/酸,葡萄糖產(chǎn)氣,硫化氫陽性(K/A++).少數(shù)菌株為乳糖發(fā)酵型,呈A/A+-,這些菌株硫化氫往往陰性.

第三節(jié)沙門菌屬

沙門菌基本生化反應(yīng)特征TSIA(三糖鐵)產(chǎn)堿/產(chǎn)酸或產(chǎn)堿/產(chǎn)酸產(chǎn)氣,H2S陽性CIT(枸櫞酸鹽)陽或陰性、URE(脲酶)陰性,IND(吲哚)陰性,MOT(動力)陽性,VP陰性,ORN(鳥氨酸)陽性.

MIU凡臨床分離菌乳糖、吲哚陽性,或脲酶陽性者,均不考慮為沙門菌.

第三節(jié)沙門菌屬

沙門菌生化特征例外情況見于：副傷寒A、豬霍亂沙門菌可出現(xiàn)LYS(賴氨酸)陰性傷寒、雞沙門菌可出現(xiàn)GLU(葡萄糖)不產(chǎn)氣副傷寒A沙門菌可出現(xiàn)H2S陰性雞瘟沙門菌、雞沙門菌可出現(xiàn)MOT陰性豬霍亂沙門菌、傷寒沙門菌可出現(xiàn)CIT陰性傷寒副傷寒A和非傷寒沙門菌生化反應(yīng)見下表

表傷寒、副傷寒A和非傷寒沙門菌的生化反應(yīng)

試驗非傷寒沙門菌傷寒副傷寒A

TSIA(三糖鐵)K/AGK/AK/AGH2S(TSIA)++W-/+WIND(吲哚)---CIT(Simmons)+--URE(脲酶)---LYS(賴氨酸)++-ARG(精氨酸)+d(+)ORN(鳥氨酸)+-+MOT(動力)+++MUC(黏液酸鹽)+--MAL(丙二酸鹽)---TAR(酒石酸鹽)++-KCN生長---GLU(葡萄糖)AGAAGLAC(乳糖)---SAL(水楊苷)---DUL(衛(wèi)矛醇)AG-AG2d

SOR(山梨醇)AGAAGONPG---

注：K：產(chǎn)堿；A：產(chǎn)酸；AG：產(chǎn)酸產(chǎn)氣；十：90％—100％菌株陽性（+）:76％-89％陽性；d：26％—75％陽性;+w:弱陽性;2d二日后出現(xiàn)弱陽性

第三節(jié)沙門菌屬

表腸桿菌科與其他科菌的區(qū)別

試驗?zāi)c桿菌科弧菌科非發(fā)酵菌巴斯德菌科

葡萄糖ＦＦO／－F

氧化酶－＋＋*＋形態(tài)桿狀弧形桿狀球桿狀鞭毛周毛或無單毛單、叢毛、周毛、無無鞭毛

注:*不動桿菌、嗜麥芽黃單胞菌除外

第三節(jié)沙門菌屬

第三節(jié)沙門菌屬

表苯丙氨酸、葡萄糖酸鹽陰性各屬鑒別

試驗埃希菌屬志賀菌屬沙門菌屬枸櫞酸桿菌屬愛德華菌屬耶爾森菌屬

H2S－－＋／－＋／－＋－動力＋－＋＋＋－*

枸櫞酸鹽－－＋／－＋－－靛基質(zhì)＋－／＋－－／＋＋－／＋賴氨酸＋／－－＋－－＋／－尿素－－－＋／－－＋／－

注:*30℃以下培養(yǎng)有動力

第三節(jié)沙門菌屬2)血清學(xué)分型:多數(shù)實驗室先用A-F多價O抗血清對沙門菌分離株進行血清學(xué)凝集,95％以上沙門菌臨床分離株都屬A-F群.多價抗血清凝集后再分別用代表每個血清群的O單價因子血清(A群為O2,B群為O4,C群為O6,D群為O9,E群為O3,F群為O11)定群.O分群之后再用H因子血清檢查第一相和第二相H抗原綜合O、H及vi因子血清結(jié)果,按下表定沙門菌血清型有5種重要的臨床分離株:甲型副傷寒沙門菌、鼠傷寒沙門菌、乙型副傷寒沙門菌、豬霍亂沙門菌和傷寒沙門菌分別屬于A、B、B、C1和D血清群.

表沙門菌屬常見菌型(血清型)診斷抗原表

組菌名O抗原H抗原第一相第二相

A甲型副傷寒1,2,12a-

B乙型副傷寒1,4,5,12b1,2

德而比1,4,12f,g-

海登堡4,5,12r1,2

鼠傷寒1,4,5,12i1,2

斯坦利4,5C1豬霍亂(副傷寒C)6,7c1,5

希氏6,7,Vic1,5

孔成道夫6,7-1,5

湯卜遜6,7k1,5

波茨坦6,71,ve,n,z15C2紐波特6,8e,h1,2

病牛6,8r1,5D傷寒9,12(Vi)d-

仙臺1,9,12