月季的花藥培養(yǎng)li

談?wù)勀銓υ录镜恼J識A：高桿a：矮桿B：抗病A：感病高桿抗病矮桿感病↓F1：高桿抗病AaBb單倍體：ABAbaBab↓↓↓↓花藥培養(yǎng)↓↓↓↓↓秋水仙素↓二倍體：（純合可育）高桿抗病AABB高桿感病AAbb矮桿抗病aaBB矮桿感病aabb單倍體育種原理遺傳圖解↓U不再發(fā)生性狀分離，明顯縮短育種年限P：×♂♀AABBaabb

花粉：（配子）ABAbaBab↓花的結(jié)構(gòu)花托花萼花瓣雄蕊花藥花絲雌蕊柱頭花柱子房花絲花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉（一）被子植物的花粉發(fā)育1雄蕊一、基礎(chǔ)知識2花粉的概念:由花粉母細胞經(jīng)過減數(shù)分裂形成的單倍體的生殖細胞.（一）被子植物的花粉發(fā)育減數(shù)分裂細胞生長小孢子母細胞或花粉母細胞2N4個小孢子N四分體時期1個小孢子N單核居中期單核靠邊期N單核花粉粒有絲分裂有絲分裂精子（花粉或花粉細胞）營養(yǎng)細胞核雙核花粉粒N×2三核花粉粒N×3營養(yǎng)細胞生殖細胞注意：①“此”四分體非“彼”四分體：“此”：是指被子植物花粉發(fā)育過程中，四個小孢子連在一起；“彼”：是指減數(shù)分裂過程中同源染色體兩兩聯(lián)會后，每個四分體含有四條姐妹染色單體。②正確認識營養(yǎng)細胞和精子的關(guān)系：

精子就處在營養(yǎng)細胞的原生質(zhì)中，營養(yǎng)細胞為花粉管的形成提供營養(yǎng)物質(zhì)。（一）被子植物的花粉發(fā)育減數(shù)分裂細胞生長小孢子母細胞或花粉母細胞2N4個小孢子N四分體時期1個小孢子N單核居中期單核靠邊期N單核花粉粒有絲分裂有絲分裂精子（花粉或花粉細胞）營養(yǎng)細胞核雙核花粉粒N×2三核花粉粒N×3注意：①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細胞核和生殖細胞核。（精子在花粉管中形成）4個小孢子減數(shù)分裂有絲分裂4個花粉管細胞核4個生殖細胞核有絲分裂8個精子1花粉母細胞③②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖細胞進行一次有絲分裂，形成兩個精子，這樣的花粉在成熟時，含有一個花粉管細胞核和兩個精子。不是所有植物都形成三核花粉粒2NNNN（二）產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑①②移栽花藥中的花粉胚狀體脫分化愈傷組織花藥中的花粉脫分化分化叢芽再分化叢芽誘導(dǎo)生根體細胞胚（胚狀體）：在組織培養(yǎng)過程中，某些細胞在形態(tài)上轉(zhuǎn)變?yōu)榕c合子發(fā)育成的胚非常相似的結(jié)構(gòu)，發(fā)育過程亦與合子胚類似原因：培養(yǎng)基中的激素種類及濃度配比1、材料的選擇不同植物的誘導(dǎo)成功率不同.

同一植物的不同生理狀況也對誘導(dǎo)成功率有直接的影響.（一般選月季的初花期）合適的花粉發(fā)育期（單核居中期與靠邊期之間）2、培養(yǎng)基的組成（MS培養(yǎng)基+不同比例的植物生長調(diào)節(jié)激素）此外，植株生長條件、材料低溫預(yù)處理、接種密度等(三)、影響花藥培養(yǎng)的主要因素注意：選擇最合適的花粉發(fā)育時期:單核期①不選擇單核期之前花藥原因：花藥質(zhì)地幼嫩，容易破碎；②不選擇單核期之后花藥原因：花瓣開始松動，給材料消毒帶來困難困難；③挑選單核期花藥方法：應(yīng)當選擇完全未開放的花蕾，微生物少，易消毒。實驗操作一、材料的選取二、材料的消毒三、接種和培養(yǎng)（一）材料選取

2、通過鏡檢來確定是否處于適宜的發(fā)育期。方法：醋酸洋紅法(將染色體染成紅色)

焙花青-鉻礬法(花粉細胞核染成藍黑色)。1、從花藥看：月季的初花期從花粉看：單核期

從花蕾看：完全未開放的

花藥（載玻片上）→1%的醋酸洋紅1滴→用鑷柄將花藥搗碎，蓋上蓋玻片→鏡檢（花粉粒的細胞核被染成紅色）花藥（在卡諾氏固定液中處理20min）→取出，置于載玻片上→焙花青－鉻礬溶液染色→蓋上蓋玻片→鏡檢（花粉粒的細胞核被染成藍黑色）月季花藥培養(yǎng)時的花粉粒最好是（）

A、四分體時期B、二核或三核花粉粒

C、單核期C（二）材料的消毒5、無菌水沖洗3～5次

花藥的外面有花萼、花瓣保護，通常處于無菌狀態(tài)1、花蕾用體積分數(shù)為70%的酒精浸泡30秒2、無菌水清洗3、無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分4、放入質(zhì)量分數(shù)為0.1%的氯化汞溶液中2～4分鐘（質(zhì)量分數(shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難？答：花瓣松動后，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來困難。

為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難？討論：（三）接種和培養(yǎng)

1滅菌后花蕾，要在

下除去萼片和花瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。

3通常每瓶接種花藥

，溫度控制在

左右，

。幼小植株形成后才

。

2在剝離花藥時，要盡量

（否則接種后，容易從受傷部位產(chǎn)生二倍體的愈傷組織），同時還要徹底

，因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。一般經(jīng)過20-30天培養(yǎng)后，會發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長出愈傷組織或釋放出胚狀體。將愈傷組織及時轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進一步分化出再生植株。

4進一步鑒定和篩選：常常會出現(xiàn)染色體倍性的變化無菌條件不損傷花藥去除花絲7-10個25℃不需要光照需要光照主要原因是花粉管核和生殖核融合造成的植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的比較項目植物組織培養(yǎng)花藥培養(yǎng)技術(shù)相同點1培養(yǎng)基配制方法、無菌技術(shù)及接種操作等基本相同。2都經(jīng)過了脫分化不同點1離體培養(yǎng)的外植體為體細胞。2有絲分裂的過程，染色體數(shù)量不變。1花粉是生殖細胞，得到的單倍體植株，弱小且高度不育。2秋水仙素處理，染色體加倍，恢復(fù)正常的染色體數(shù)，為純種。2.培養(yǎng)基的組成在1000mLMS培養(yǎng)基配方中添加2.4—D0.4mg

KT0.2mg

IAA4mg調(diào)節(jié)PH至5.8。課堂小結(jié)：一、花藥培養(yǎng)與單倍體育種之間的關(guān)系；、被子植物花粉的發(fā)育；、產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑；四、影響花藥培養(yǎng)的因素。反饋練習(xí)：（1）一個小孢子母細胞經(jīng)減數(shù)分裂產(chǎn)生4個小孢子，由一個小孢子到形成兩個精子，其間經(jīng)過的分裂次數(shù)及分裂方式為(

)A．一、有絲分裂 B．二、減數(shù)分裂C．二、有絲分裂 D．三、有絲分裂（2）基因型為AaBb的一個小孢子母細胞經(jīng)分裂形成的一個花粉粒中的一個花粉管細胞核和兩個精子，其基因型分別是(

)A．AB、Ab、Ab B．AB、AB、ABC．AB、aB、aB D．a(chǎn)B、ab、abCB注意：③不是所有