乳酸液相含量檢測(cè)方法

乳酸含量檢測(cè)方法（高效液相色譜法）儀器設(shè)備高效液相色譜儀（配紫外檢測(cè)器）色譜柱（C18）柱溫箱超聲波清洗器分析天平：感量0.0001gPH計(jì)微孔濾膜：0.45μm微孔濾膜：0.45μm(有機(jī)系）一次性無菌注射器（帶針）：1mL微量進(jìn)樣器：100μL離心管：2mL離心管架燒杯：100mL玻璃棒萬用電爐容量瓶（50mL、100mL）刻度吸管（5mL、10mL、15mL、20mL）注射器（20mL）帶有進(jìn)樣閥清洗頭試劑2.1磷酸：色譜純2.2乙腈：色譜純2.30.1%磷酸：精確吸取1mL磷酸，用高純水定容至1000mL2.4流動(dòng)相：0.1%磷酸溶液：乙腈=2.5：97.5（體積比）2.550%濃硫酸：濃硫酸：水=1:1（濃硫酸緩慢注入水中，并用玻璃棒引流，并不斷攪動(dòng)）2.60.5mol/L氫氧化鈉：吸取27mL氫氧化鈉飽和溶液，用水定容至1000mL2.7高純水（注：使用高效液相色譜儀的過程中，所用的水都是高純水）操作液相條件3.1流速：1.0mL/min;3.2檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm;3.3柱溫：30℃3.4進(jìn)樣量：20μL操作方法4.1標(biāo)準(zhǔn)品/樣品處理方法精確稱取0.4g乳酸標(biāo)準(zhǔn)品/樣品于100mL的燒杯中，向燒杯中加20mL的高純水將標(biāo)準(zhǔn)品溶解，然后再加10mL0.5mol/L的氫氧化鈉，用玻璃棒攪拌均勻，并沖洗玻璃棒。然后放到萬用電爐上進(jìn)行加熱待溶液煮沸后開始計(jì)時(shí)5min，冷卻后用50%的硫酸調(diào)節(jié)PH值為2.2-2.5，然后將溶液轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，用高純水少量多次沖洗燒杯，將沖洗液一并移入到容量瓶中，最后用高純水定容到100mL.此時(shí)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為2mg/mL（標(biāo)準(zhǔn)品1）4.2樣品處理方法用電子天平稱取0.4g左右的樣品100mL的燒杯中，向燒杯中加20mL的高純水將樣品溶解，然后再加10mL0.5mol/L的氫氧化鈉，用玻璃棒攪拌均勻并沖洗玻璃棒。然后放到萬用電爐上進(jìn)行加熱待溶液煮沸后開始計(jì)時(shí)5min，冷卻后用50%的硫酸調(diào)節(jié)PH值為2.2-2.5，然后將溶液轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，用高純水少量多次沖洗燒杯，將沖洗液一并移入到容量瓶中，最后用高純水定容到100mL.4.3系統(tǒng)設(shè)置4.3.1依據(jù)檢測(cè)條件設(shè)置高效液相，并將清洗瓶?jī)?nèi)的高純水置換（清洗瓶?jī)?nèi)的高純水必須是過濾并經(jīng)過超聲清洗的）4.3.2流動(dòng)相（2.4）用微孔濾膜（1.7有機(jī)系）過濾后，然后用超聲清洗器（1.4）超聲20min；4.3.3用過濾并超聲清洗后的流動(dòng)相平衡高效液相系統(tǒng)20min（不接柱子C18);觀察輸送流動(dòng)相的管路中是否有氣泡，如果有氣泡要及時(shí)把氣泡排出。（排氣泡方法：打開放空閥，按儀器前面板的“沖洗”功能鍵，用大流量沖洗系統(tǒng)直到流出的液體連續(xù)，證明氣泡已經(jīng)排除）4.3.4設(shè)置柱溫箱（1.3）溫度為30℃，連接C18柱子，觀察柱子兩端是否漏液，如果不漏液，將柱子放置到柱溫箱中。并觀察高壓恒流泵的壓力，一般在18mpa左右為正常壓力。繼續(xù)用流動(dòng)相平衡系統(tǒng)和C18柱20min4.3.5跑基線（依據(jù)液相系統(tǒng)操作），直到基線成一條直線4.4進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)樣從標(biāo)準(zhǔn)品1中各吸取15mL，20mL，25mL，30mL溶液分別定容至50mL,（此時(shí)溶液濃度分別為0.6mg/mL（標(biāo)準(zhǔn)品2）0.8mg/mL（標(biāo)準(zhǔn)品3）1.0mg/mL（標(biāo)準(zhǔn)品4）1.2mg/mL（標(biāo)準(zhǔn)品5）)，將5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品分別過濾至5個(gè)離心管（1.11）中并棄去初濾液。（將微孔濾膜（1.8）套在一次性無菌注射器（1.9）上進(jìn)行過濾），用微量進(jìn)樣器（1.10）分別吸取5個(gè)離心管中溶液上機(jī)檢測(cè)，進(jìn)樣量為30μL，以峰高為縱坐標(biāo)，樣品濃度為橫坐標(biāo)，作出直線方程。4.5進(jìn)樣品樣先用一次性無菌注射器（1.9）吸取定容至100mL的樣品溶液，經(jīng)微孔濾膜（1.8）過濾至離心管（1.11）中并棄去初濾液，用微量進(jìn)樣器（1.10）吸取離心管中樣品溶液上機(jī)檢測(cè)，進(jìn)樣量為30μL，記錄峰高值帶入直線方程中，求出濃度計(jì)算公式C×100C×100×標(biāo)準(zhǔn)品純度×100%m×1000m×