短串聯(lián)重復(fù)序列基因分型法鑒定人源細(xì)胞系技術(shù)規(guī)范

1GB/T27025-2008檢測和校準(zhǔn)ANSI/ATCCASN-0002-2011AuthenticationofHumanCellLines:Standard短串聯(lián)重復(fù)序列ShortTande2指利用生物學(xué)檢測方法測定個體DNA序列，并將其與其他個體的DNA序列或參考DNATCC：美國模式培養(yǎng)物保藏所（AmericanTypeCDSMZ：德國微生物菌種保藏中心（DeutscheSammlungvonMikroorganismenund35.2.2DNA樣本包裝：基因組DNA應(yīng)保存于含有DNA儲存液的1.5mL離心管中，采用石蠟封口擴(kuò)增，也可采用經(jīng)過質(zhì)量檢驗合格的商業(yè)化STR細(xì)胞鑒定試劑盒，按照試劑盒說明書進(jìn)行4b)PCR擴(kuò)增過程設(shè)置陰性對照組、樣本檢測組和陽性對照組。陰性對照組采用無菌水c)準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)上樣體系：將a)中的各組PCR擴(kuò)增產(chǎn)物及DNA片段標(biāo)準(zhǔn)品分別加入b)的分裝混合將毛細(xì)管電泳基因分析儀檢測所得的STR遺傳圖譜數(shù)據(jù)與國際細(xì)胞系認(rèn)證委員會推薦的ATCC（美國模式培養(yǎng)物保藏所：/STR_Database.aspx）的人源細(xì)胞系a)根據(jù)相對分子質(zhì)量內(nèi)標(biāo)獲得PCR擴(kuò)增產(chǎn)物大?。▔A基數(shù)），計算出每b)當(dāng)STR位點的兩個等位基因含有相同的重復(fù)次數(shù)時，圖譜僅出現(xiàn)1個等位基因峰；時經(jīng)過重復(fù)檢測試驗排除PCR擴(kuò)增體系或引物結(jié)合區(qū)點突變等的干擾因素，判定受檢細(xì)胞系a)在檢測有效的前提下，受檢細(xì)胞系的STR位點基因分型數(shù)據(jù)與其對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)STR基因分型5數(shù)據(jù)進(jìn)行比對，若兩者的匹配率不低于80b)在檢測有效的前提下，受檢細(xì)胞系的STR位點基因分型數(shù)據(jù)與其對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)STR基因分型c)在檢測有效的前提下，受檢細(xì)胞系的STR位點基因分型數(shù)據(jù)與其對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)STR基因分型10.1檢測技術(shù)人員應(yīng)由具備分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)教育背景，10.2檢測技術(shù)人員的職責(zé)是接收到樣本后，按要求對樣本進(jìn)行分類標(biāo)注，遵循GB/T10.3檢測實驗過程設(shè)立陰性、陽性對照，確保每次檢測的質(zhì)量。6質(zhì)量控制細(xì)胞基因約DNA樣本是否符合質(zhì)量控制要求 否是質(zhì)量控制細(xì)胞基因約DNA樣本是否符合質(zhì)量控制要求 否是拒收、登記通知重新采樣是否符合接收要求拒收、登記通知重新采樣細(xì)胞基因維DNA樣本細(xì)胞基因DNA提取重新取樣或者重新提取是STR基因位點PCR擴(kuò)增STR遺傳圖譜分型STR檢測結(jié)果定檢測報告7一、基本信息二、檢測結(jié)果2）STR數(shù)據(jù)…n%…7X…2.根據(jù)細(xì)胞研究應(yīng)用對細(xì)胞系鑒