尿沉渣分析儀課件

UF-100尿沉渣分析儀的原理與干化學

法結(jié)果的分析及注意事項

二、UF-100原理：應用熒光染色劑將尿沉渣中不同物質(zhì)的細胞核或細胞膜進行分別染色后，利用最先進的流式細胞儀原理和技術(shù)，根據(jù)熒光、激光散射強度、散射波幅度及細胞大小的不同和細胞通過時產(chǎn)生的電阻抗分別落在不同的區(qū)域，來識別和計數(shù)尿內(nèi)細胞定量數(shù)據(jù)，并打印出RBC和WBC的直方圖。染色性9-氮雜菲（Phenanthridine）染色DNA和RNA發(fā)射熒光為:橙色對死細胞胞膜穿透性強羰花青（Carbocyanine）細胞膜、核膜以及線粒體等膜性物質(zhì)被染色發(fā)射熒光為：綠色尿沉渣全自動分析(UF-100尿沉渣分析儀介紹)一、特點：

簡化操作流程，提高分析效率，降低勞動強度。結(jié)果準確，重復性好，提供定量數(shù)據(jù)，進行有效篩選，可檢測各種有形成份信息，有效協(xié)助血尿來源的鑒別診斷。

UF-100為臨床檢驗的常規(guī)分析,為體檢和疾病的篩選提供了較為全面﹑快速﹑準確而靈活方便的分析手段,檢測重復性好,結(jié)果可靠,減少人為的誤差,報告以每微升含有多少個細胞,通過觀察尿中細胞數(shù)量可以幫助了解相關(guān)疾病(如腎炎﹑膀胱炎﹑腎結(jié)石﹑腎結(jié)核)等的診斷和鑒別診斷,通過觀察這種病人尿中紅細胞數(shù)量的變化,可了解病人的療效觀察。

由于紅細胞在尿液中直徑大約8um,沒有細胞核及線粒體,所以熒光強度很弱,紅細胞在尿液標本中大小不均,部分溶解成小紅細胞碎片,或者在腎臟疾病時排除的紅細胞也大小不等,因此紅細胞前向散射光強度差異較大。一般來看,熒光幾乎極低和散射光大小不等都可為紅細胞。該儀器除給出尿紅細胞數(shù)量(每微升的細胞數(shù)和每高倍視野的平均細胞數(shù))參數(shù)外,還可報告尿中細胞其他參數(shù)。如均一性紅細胞(IsomorphicRBC)的百分比,非均一性紅細胞(Dysmorphic)的百分比,非溶血性紅細胞的數(shù)(Non–IysedRBC#)和百分比(Non–IysedRBC%)。如尿內(nèi)紅細胞多時,化驗單上提示:新版本RBC—InfoMicyocytic

小紅細胞

Normocytic

正常紅細胞

Non—Classified不典型紅細胞1紅細胞及其相關(guān)參數(shù)的臨床意義①紅細胞數(shù)量變化的臨床意義:顯微鏡計數(shù)法,正常成人尿中紅細胞約為<100萬/24小時;UF-100儀器法參考值為男性0~12/ul,女性0~24/ul;離心后為0~偶見/HPF,如每高倍視野均可見1~2個為增多,≥3個/HPF為鏡下血尿。通過動態(tài)觀察病人尿紅細胞數(shù)量變化,可了解病人治療的效果。

②利用紅細胞形態(tài)來鑒別血尿來源：1979年Birch和Fairley首先用相差顯微鏡觀察紅細胞形態(tài)變化，把血尿分為腎小球源性血尿(簡稱腎性)和非腎小球源性(簡稱非腎性)血尿兩大類,這種分類方法以后得到了許多學者的贊同。這種分類方法主要是根據(jù)紅細胞形態(tài)的變化,將均一性的紅細胞(紅細胞形態(tài)基本與正常紅細胞相似)歸為非腎性血尿,非均一性的紅細胞(紅細胞形態(tài)大小不等)歸為腎性血尿。但在顯微鏡檢查法是通過人眼觀察單個紅細胞的形態(tài),需要熟練的技術(shù)并受主觀因素的影響。Shichiri和叢玉隆等報道用尿液分析儀測量尿紅細胞體積來鑒別血尿來源,認為較顯微鏡法準確,但此法容易將與紅細胞體積相等或較小的成份(如細菌和結(jié)晶)誤認為紅細胞。特別是霉菌,因為尿液放置時間較長時,細菌生長快,霉菌個體與小紅細胞相似,所以在UF-100尿沉渣儀器中誤認是紅細胞,計數(shù)就多,這方面的文章最近有報導。

干化學法檢測尿中紅細胞:主要是紅細胞或紅細胞破碎后HB,HB中的亞鐵血紅素有類似過氧化物酶活性,催化分解過氧化物釋放新生態(tài)氧使鄰甲苯胺氧化顯色,此法可測定完整紅細胞,破碎紅細胞中的游離血紅蛋白及肌紅蛋白三部分。其顏色深淺與血紅蛋白含量有關(guān)。

試帶法對血紅蛋白檢測靈敏度約為0.015~0.03mg/dl,對紅細胞檢測靈敏度約為5~15個/ul。新鮮未離心尿,計數(shù)板法紅細胞為10×106/L時,試帶法的分析靈敏度為70~80%。與計數(shù)板法相比,若尿中紅細胞溶解,則試帶法紅細胞分析特異度降低。白細胞:

觀察尿液內(nèi)白細胞數(shù)量可幫助有關(guān)疾病(如泌尿系感染.膀胱炎.結(jié)核等)的診斷與鑒別診斷,通過動態(tài)觀察這些病人尿內(nèi)白細胞數(shù)量變化,來確定病人的療效觀察和愈后。白細胞在尿液內(nèi)分布直徑大約10um,稍比紅細胞大,前向散射光強度比紅細胞稍大一些,但白細胞含有細胞核而紅細胞無細胞核,因此它有高強度的前向熒光,就能將白細胞與紅細胞區(qū)別開來,白細胞出現(xiàn)在散射圖的正中央。白細胞也像紅細胞那樣有很多形狀，當白細胞存活時，白細胞會呈現(xiàn)前向散射光強和前向熒光弱；當白細胞受損害或死亡時，會呈現(xiàn)前向散射光弱和前向熒光強。利用白細胞激光散射強度和熒光強度的技術(shù)識別白細胞高活性和低活性的不同程度,來進一步對急性感染和慢性感染,以及恢復期作出判斷。

泌尿系感染時,在尿液中往往同時存在白細胞和細菌。因此,檢查尿液中白細胞和細菌存在,是診斷泌尿系感染的重要指標.另外用白細胞數(shù)來判斷急、慢性泌尿系感染,結(jié)果顯示:急性泌尿感染白細胞數(shù)>60/uL,而白細胞前向散射光強度強和熒光弱;慢性泌尿系感染白細胞>10/uL,而白細胞前向散射光強度弱和熒光強度強,大多數(shù)是受損害和死亡的白細胞。干化學法:

根據(jù)嗜中性粒細胞中含有的特異性脂酶,水解試紙條中吡咯氨酸脂為吡咯氨酸,再與重氮物發(fā)生重氮反應而顯色。干化學法和顯微鏡檢查法也能測定白細胞數(shù),但干化學法粗糙,不能準確反映數(shù)量變化,顯微鏡的報告法(每高倍視野XX∽XX個白細胞)或滿視野/HPF,不能將治療前后白細胞數(shù)量變化反應出來,使用UF-100尿沉渣儀能夠觀察到這種數(shù)量微弱變化,指導臨床進一步的用藥治療。在化驗單上有時出現(xiàn)干化學法白細胞數(shù)少,而尿沉渣白細胞計數(shù)多,這是因為干化學法測定的白細胞特異性脂酶,由于白細胞吞噬細菌時,白細胞核內(nèi)含有溶菌酶,溶菌酶殺滅細菌時,大部分白細胞變成了膿球,所以干化學法測定數(shù)少,而尿沉渣計數(shù)多,白細胞雖然變成膿球,但白細胞的形狀還存在,計數(shù)時仍然計數(shù),如果是過敏性或變態(tài)反應性引起的腎炎,尿沉渣中的細胞,多是淋巴細胞或嗜酸性粒細胞。干化學法:10~20個/uL少、50~75個/uL+、100~150個/uL++、150~250個/uL+++、500個/uL++++、

尿沉渣報告方式對照表

報告結(jié)果陰性偶見1＋2＋3＋4＋

RBC/HPF00~23~1011~30>30滿視野

WBC/HPF00~34~1011~30>30滿視野上皮細胞/HPF0男0~34~1011~30>30滿視野女0~56~10

管型/LPF00~11~56~1011~30>30

正常參考值紅細胞0~3/HPF,白細胞0~5/HPF,尿結(jié)晶和鹽類數(shù)量,以每高倍視野+2+3+4+報告。管型(透明管型)低倍視野0~1/全片?，F(xiàn)代臨床檢驗學2000年出版.上皮細胞:

上皮細胞由泌尿道上皮脫落而來,種類較多,大小不等。因為上皮細胞體積大,散射光程度強,都含有細胞核,線粒體等,熒光程度也比較強。儀器除了給出上皮細胞數(shù)量參數(shù)外,還標出小圓上皮細胞(SRC),并在第二個屏幕上顯示每微升小圓細胞數(shù)。正常尿液中可見少量上皮細胞,主要是鱗狀上皮細胞和移行上皮細胞,如果數(shù)量增多,可見小圓上皮細胞,可認為泌尿道炎癥的表現(xiàn)。小圓上皮細胞:

來自腎小管上皮或移行上皮的底層,通常不見于尿中。其中細胞呈多邊形,核較大,核大者來自腎小管,稱腎小管上皮細胞或腎細胞;依形態(tài)又稱多邊形細胞。此細胞與白細胞相似,但較白細胞略大(大1/3左右),(直徑一般不超過15um),含一大而明顯的核,漿中常見脂肪滴和小空泡,此細胞出現(xiàn)或增多,表示腎小管有病變,多見于急性腎小球腎炎,如成堆出現(xiàn),常表示腎小管有壞死性病變。

572例健康人群尿樣RBC、WBC、EC、CAST參考范圍(個/um95%可信界線)

RBCWBCECCAST

NXS95%XS95%XS95%XS95%

男3616.073.860~116.474.610~125.173.720~70.390.270~1

女2118.946.120~199.326.990~218.337.540~200.410.250~1

標本對結(jié)果的影響尿液標本必須新鮮,留尿后盡量立既測定,以免紅細胞,白細胞破壞,導致干化學與鏡檢法人為實驗誤差。干化學法即能測定完整的細胞成份,又能測定因細胞破壞胞漿內(nèi)涵物來辨別細胞的有無(通過特異或非特異性酯酶檢測白細胞,通過血紅蛋白的過氧化物酶反應檢測紅細胞),因此報告時要了解臨床診斷,綜合分析,排除相互結(jié)果的干擾。某些腎病患者的終尿,由于各種原因使細胞裂解,可導致儀器法與目測法的差異。⒈對干擾物對紅.白細胞測定的影響白細胞試驗的干擾干化學法檢測尿內(nèi)白細胞的原理,位于粒細胞漿內(nèi)含有酯酶,可作為試劑帶膜塊中的吲哚酚酯。操作時應注意:⑴應了解此法只能測定粒細胞,不與淋巴細胞反應,在腎移植病人發(fā)生排異反應尿中以淋巴細胞為主時,會出現(xiàn)陰性結(jié)果,此類病人不應用干化學法檢查,應該以顯微鏡檢查法為準。⑵尿液中污染甲醛,或高濃度膽紅素,或使用某些藥物(如呋喃旦啶)時,可產(chǎn)生假陽性;尿蛋白≥5g/L,或尿液中含有大劑量先鋒Ⅳ、慶大霉素等藥物時,可使結(jié)果偏低或出現(xiàn)假陰性。2.對紅細胞試驗的干擾尿液中含有對熱不穩(wěn)定酶、肌紅蛋白或菌尿,可引起干化學法測定尿紅細胞呈假陽性;易使檢測紅細胞出現(xiàn)假陽性的原因主要是熱不穩(wěn)定過氧化物酶的干擾。尿液大量維生素C的存在,可競爭性抑制反應致使干化學法產(chǎn)生假陰性,應注意細胞破壞造成的“假陰性”現(xiàn)象。所述“假陽性”、“假陰性”現(xiàn)象,是以顯微鏡檢查為基礎的。由于干化學法是檢測細胞胞漿內(nèi)涵物來辨別細胞的有無(通過特異或非特異性酯酶檢測白細胞,通過血紅蛋白的過氧化物酶反應檢測紅細胞),在實際工作中可能存在下列問題:①由于尿液在膀胱貯存時間過長或標本放置時間延長,導致白細胞破壞,酯酶釋放到尿液中,造成干化學法陽性、鏡檢陰性的所為“假陽性”現(xiàn)象。②腎病患者的紅細胞在腎臟或泌尿道破壞,或尿比重過低、尿PH偏高,均易造成紅細胞破壞,血紅蛋白放出并出現(xiàn)在尿中,造成所謂紅細胞干化學檢查的“假陽性”現(xiàn)象。因此在干化學法結(jié)果與顯微鏡下所見出現(xiàn)矛盾時,要結(jié)合臨床綜合分析,甚至要動態(tài)觀察,切不一概否定干化學法結(jié)果。鏡檢法與干化學法的相應關(guān)系有作者報道干化學與鏡檢兩種方法檢查尿紅細胞實驗結(jié)果的對應關(guān)系,發(fā)現(xiàn)這兩種方法雖然結(jié)果沒有明顯的對應關(guān)系,但每一等級尿分析儀結(jié)果對應鏡檢紅細胞計數(shù)有較好的百分比范圍,特別是干化學“neg”檔,<3/HP占100%,紅細胞<10/ul,鏡檢正常占99.82%。鑒于此種現(xiàn)象,認為在排除上述病理或其他干擾因素存在下,儀器結(jié)果為“紅細胞≤10ul”時,可以省略顯微鏡檢查,而其他檔次(25/ul、50/ul、150/ul、250/ul、)均有較大的交叉,必須鏡檢。原理不同,報告方式是兩種不同的概念,很難找出兩者的對應關(guān)系,迄今還沒有一種直接的換算方式,有文章報道計算板計數(shù)與儀器結(jié)果的內(nèi)在關(guān)系,Alwall報道每高倍視野白細胞數(shù)大約是儀器法報告(WBC/ul)數(shù)的11%;Loosyt等指出,白細胞/ul是白細胞/高倍視野的10.8倍,叢玉隆的實驗結(jié)果是8.7倍。因此儀器法白細胞檢測只是一個篩選實驗,決不可代替顯微鏡檢查。干化學結(jié)果異常,鏡檢結(jié)果正常,視為假陽性;反之干化學結(jié)果正常,鏡檢結(jié)果異常,視為假陰性.由于過篩的目的是篩出正常,鏡檢病理性標本,因為過篩的原則是不能出現(xiàn)假陰性,否則就要漏診。干化學結(jié)果假陽性的標本經(jīng)過鏡檢后即可得到糾正。雖然假陽性不如假陰性那么重要,但假陽性結(jié)果過多,達不到過篩的目的。尿沉渣檢查標準化

塑料離心管離心后需要搖勻的尿液量離心條件的標準化(時間和速度)用標準刻度離心管倒入混勻后的尿液10毫升,用回轉(zhuǎn)半徑15CM的標準離心機,速度1500r/min,離心5min.

尿沉渣量及傾棄方式要一致,尿沉渣的殘留量應為0.2毫升,輕輕搖動離心管,使尿沉渣有形成分混勻.采混合后尿沉渣1滴置于載玻片上，用蓋玻片覆蓋尿沉渣后鏡檢。

因此，在世界上許多國家開始采用尿沉渣定量分析板來定量分析尿沉渣。以××/μl

的形式來報告實驗結(jié)果，國內(nèi)某些大醫(yī)院開始使用引有意大利生產(chǎn)的尿沉渣定量分析板（FAST-READ10）。該系統(tǒng)結(jié)構(gòu)為每塊分析板有10個統(tǒng)一厚度(0.1mm)的計算池,每一個計算池內(nèi)有固定體積為1μl

的計算區(qū)(計算區(qū)劃分為10個大方格,每個大方格分9個小方格).該系統(tǒng)的操作完全同玻片法,不同的是該法是定量計數(shù)每μl

的紅細胞﹑白細胞、上皮細胞和管型的數(shù)量。

使用固定的檢驗尿沉渣量和使用標準的玻片及覆蓋玻片.

計算和報告尿沉渣中各種有形成分,XX/HPF或XX/ml.舉例:

高倍鏡視野的直徑=0.35mm,

高倍鏡視野的面積=0.096mm2

蓋玻片的面積(22mmX22mm)=484mm2

換算系數(shù)

HPF體積=0.18μl

1/HPF=1(0.18μl)=(1/0.18)/μl=5.56/μl

LPF體積=2.9μl

1/LPF=1/(2.9μl)=(1/2.9)/μl=0.34/μl

收集標本注意事項:⑴我們工作人員應指導病人正確留取尿標本的方法。⑵:容器應清潔干燥。⑶:女性病人應避免在月經(jīng)期留取尿標本,防止混入陰道分泌物,男性病人則要避免前列腺液或精液混入,女性病人必要時沖洗外陰后留取中段尿或?qū)?。?新生兒及嬰兒在收取尿標本時,應注意用0.1%新潔爾滅消毒尿?qū)虻揽诩皶幉咳缓髮⑶鍧嵉臉吮颈o貼尿道口收取標本,或采取特殘留尿方式。⑸:標本留取后應立即送檢,不能立即送檢的標本應妥善保存,在2小時內(nèi)送化驗室檢測。⑹:應根據(jù)不同實驗室要求留取不同種類的尿液標本及不同取樣方式。每次收集尿標本量不少于20-50ml,以備標本的復查檢測。

標本保存尿標本留取后到檢驗應在2小時內(nèi)完成,最遲不宜超過2小時。否則,可引起如下的變化:1.尿液排出放置一定時間后,可導致細胞和管型發(fā)生變形.變質(zhì);2.細菌在尿中生長繁殖,分解尿素產(chǎn)生氨,使尿液PH上升,在堿性環(huán)境中有形成份更易分解破壞。

3.細菌和真菌分解葡萄糖,使病理性糖尿減弱或消失;4.菌體干擾病理性蛋白尿的檢驗;5.尿中某些化學成份(如尿膽原)因尿久置而變性,分解;6.尿中鹽類成份因尿久置而析出結(jié)晶,干擾鏡檢。如尿標本不能及時檢驗,可按下述方法進行保存。

(1)冰箱冷藏此為較好的保存尿液方法,能抑制微生物生長,維持尿液PH恒定,可保持尿中有形成份的形態(tài)基本不變(但堿性尿中的有形成份仍可發(fā)生變化).冷藏時間不宜超過8小時,冷藏與防腐劑聯(lián)用,效果更好。有時,冷藏可使尿液析出尿酸鹽,磷酸鹽的沉淀。(2)加入防腐劑①甲苯:于尿液中加入適量(1-2ml/100ml尿)甲苯,使其呈薄膜狀覆蓋于尿液表面,