HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題課件

HPLC的使用、維護(hù)及方法學(xué)的建立HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題HPLC基本原理和特點(diǎn)液相色譜儀器部件實(shí)驗(yàn)操作與應(yīng)用日常維護(hù)方法學(xué)的建立2HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題基本原理和特點(diǎn)基本原理：溶于流動(dòng)相(mobilephase)中的各組分經(jīng)過固定相時(shí)，由于與固定相(stationaryphase)發(fā)生作用(吸附，分配，離子吸引，排阻，親和)的大小，強(qiáng)弱不同，在固定相中滯留時(shí)間不同，從而先后從固定相中流出。特點(diǎn)：分離效率高、分析速度快、應(yīng)用范圍廣、操作自動(dòng)化。HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題HPLC的分類按固定相和流動(dòng)相的極性不同可分為正相色譜法(NPC)和反相色譜法(RPC)。

正相色譜法：采用極性固定相（如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相）；流動(dòng)相為相對(duì)非極性的疏水性溶劑（如正已烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃等以調(diào)節(jié)組分的保留時(shí)間。常用于分離中等極性和極性較強(qiáng)的化合物。

反相色譜法：一般用非極性固定相（如C18、C8）；流動(dòng)相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機(jī)溶劑，極性物質(zhì)先出。HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題高效液相色譜儀組成輸液系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)分離系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng)HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題溶劑

色譜泵自動(dòng)進(jìn)樣器

HPLC色譜柱檢測(cè)器廢液數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)液相色譜流程圖HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題一些商品化儀器脫氣裝置四元泵柱溫箱樣品盤檢測(cè)器流動(dòng)相HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題溶劑

棕色玻璃瓶會(huì)避免藻類的生長(zhǎng)。

經(jīng)常過濾溶劑以免其中微粒永久性阻塞毛細(xì)管。HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題啟動(dòng)液相色譜儀器的流程開啟HPLC系統(tǒng)各個(gè)設(shè)備的電源打開泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、檢測(cè)器電源，打開計(jì)算機(jī)啟動(dòng)“1260聯(lián)機(jī)工作站”，待工作站圖形顏色為綠色—表明儀器已就緒。排氣泡打開排氣閥，將流速調(diào)至5ml/min，排氣5min；待流速降為0，擰緊排氣閥。80%甲醇（過濾、超聲15min）沖洗系統(tǒng)使用80%的甲醇溶液沖洗系統(tǒng)至少30min，流速為1ml/min，待基線平穩(wěn)即可進(jìn)行下一步操作。注意：觀察柱壓是否穩(wěn)定，若不穩(wěn)定出現(xiàn)大幅度柱壓下降現(xiàn)象，很有可能是系統(tǒng)發(fā)生漏液，優(yōu)先排查色譜柱的連接處是否漏液，其次是排氣閥處，最后是觀察其他管道連接處；若流動(dòng)相中含有離子，80%甲醇沖洗系統(tǒng)之后，使用10%甲醇繼續(xù)沖洗系統(tǒng)至少30min。否則，會(huì)有離子析出，堵塞管路。柱壓應(yīng)小于10bar，如若過大，應(yīng)更換溶劑出口過濾白頭HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題啟動(dòng)液相色譜儀器的流程流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)流動(dòng)相配制后，先使用過濾裝置過濾，然后超聲15min，排除氣泡干擾。流速1ml/min，使用流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)至少30min，待基線平穩(wěn)即可進(jìn)行下一步操作。進(jìn)樣測(cè)定具體操作如下：點(diǎn)擊“序列”-“序列表”-輸入相關(guān)信息確定（樣品瓶、樣品名稱、方法名稱-TEST、進(jìn)樣次數(shù)、進(jìn)樣量）-“開始序列”。待進(jìn)樣結(jié)束后，進(jìn)行下一步操作。注意：在進(jìn)樣前，最好用100%甲醇進(jìn)行洗針，以防進(jìn)樣針中殘留的其它樣品影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。水相走A、D泵，有機(jī)相走B、C泵，可防止緩沖鹽析出HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題啟動(dòng)液相色譜儀器的流程80%甲醇沖洗系統(tǒng)使用80%的甲醇溶液沖洗系統(tǒng)至少30min，流速為1ml/min，待基線平穩(wěn)，將流速降為0，即可進(jìn)行下一步操作。注意：若流動(dòng)相中含有離子，先使用10%甲醇沖洗系統(tǒng)至少30min，后使用80%甲醇沖洗系統(tǒng)。關(guān)閉系統(tǒng)點(diǎn)擊工作站右下角“關(guān)閉”按鈕，待儀器顯示未就緒，關(guān)閉1260（聯(lián)機(jī)），關(guān)閉電腦，關(guān)閉液相各模塊電源。拔掉總電源即結(jié)束。HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題流動(dòng)相的選擇甲醇質(zhì)子化溶劑[氫鍵供給者]洗脫能力較乙腈弱粘度較乙腈高低紫外波長(zhǎng)下有吸收乙腈非質(zhì)子化溶劑[氫鍵接受者]洗脫能力較甲醇強(qiáng)粘度較甲醇低低紫外波長(zhǎng)下透光性好HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題常用溶劑的極性及截止波長(zhǎng)反相液相色譜，若希望出峰時(shí)間早，可以增加流動(dòng)相中有機(jī)相的比例；若希望出峰時(shí)間晚，可以增加流動(dòng)相中水相比例（有機(jī)相一般不低于5%）。甲醇的極限波長(zhǎng)為210

nm，因此，檢測(cè)波長(zhǎng)較小時(shí)，應(yīng)該選用乙腈而非甲醇；樣品稀釋最好選用流動(dòng)相，可以避免溶劑峰的干擾。

溶劑水甲醇乙醇異丙醇乙腈四氫呋喃極性常數(shù)1.000.950.880.820.650.57截止波長(zhǎng)170210210210190210流動(dòng)相的選擇80%甲醇沖系統(tǒng)基線不平HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題為了得到較好的分離效果，可以在流動(dòng)相中加入一些少量的有機(jī)溶劑，如三乙胺來調(diào)節(jié)峰形變“瘦”，減少拖尾現(xiàn)象。加入緩沖鹽，調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值或離子強(qiáng)度，以改變組分的保留時(shí)間達(dá)到分離效果等。

一般情況下，大家如要建立色譜條件，應(yīng)先去查詢《中國(guó)藥典》及文獻(xiàn)資料，再進(jìn)行適當(dāng)?shù)男薷?。流?dòng)相的調(diào)節(jié)HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題過濾：0.45um或更小孔徑濾膜目的：除去溶劑中的微小顆粒，避免堵塞色譜柱，尤其是使用無機(jī)鹽配制的緩沖液。注意：不同的試劑分別過濾，過濾后再混合；濾膜的選擇，不要混用；要現(xiàn)用現(xiàn)處理，尤其是水和緩沖液脫氣：除去流動(dòng)相中溶解或因混合而產(chǎn)生的氣泡氣泡對(duì)測(cè)定的影響：泵中氣泡使液流波動(dòng)，改變保留時(shí)間和峰面積柱中氣泡使流動(dòng)相繞流，峰變形檢測(cè)器中的氣泡產(chǎn)生基線波動(dòng)

流動(dòng)相的處理HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題流動(dòng)相的保存有機(jī)溶劑流動(dòng)相：

室溫下密封，避光保存緩沖鹽流動(dòng)相：

當(dāng)日現(xiàn)配現(xiàn)用：低溫下密封保存，一般不超過3天防止微生物生長(zhǎng)有機(jī)溶劑與水（緩沖鹽）混配的流動(dòng)相：低溫密封保存防止有機(jī)相的揮發(fā)HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題梯度洗脫梯度洗脫是指在一個(gè)分析周期中，按一定的程序連續(xù)改變流動(dòng)相中溶劑的組成（如溶劑的極性、離子強(qiáng)度、pH值等）和配比，使樣品中的各個(gè)組分都能在適宜的條件下得到分離。是分析復(fù)雜混合物特別是分離保留性能相差較大的混合物的極為重要的手段。優(yōu)點(diǎn)：改善峰形，提高柱效縮短分析時(shí)間強(qiáng)保留成分不易殘留在柱上缺點(diǎn)：會(huì)引起基線漂移有時(shí)重現(xiàn)性差故需嚴(yán)格控制梯度洗脫的實(shí)驗(yàn)條件。能等度洗脫絕不選擇梯度洗脫HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題維護(hù)流程圖吸濾頭單向閥柱塞密封圈線路過濾器進(jìn)樣器檢測(cè)器HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題檢查溶劑過濾器－查看過濾器是否變色－臨時(shí)取下過濾器，檢查柱前壓力是否正常清潔溶劑過濾器將堵塞的溶劑過濾器從瓶頭組件中拿下。先用水沖洗殘留之溶劑然后將過濾器放在裝有濃硝酸（35％）的燒杯里浸一小時(shí)，不要使用超聲波清洗用二次蒸餾水徹底沖洗過濾器，將過濾器重新裝好。建議定期清洗溶劑過濾器及溶劑瓶，每三個(gè)月至少清洗一次。日常維護(hù)HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題日常維護(hù)嚴(yán)重污染的溶劑出口過濾芯HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題日常維護(hù)溶劑出口過濾白頭HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題日常維護(hù)泵的保養(yǎng)：使用流動(dòng)相盡量要清潔；進(jìn)液處的砂芯過濾頭要經(jīng)常清洗；流動(dòng)相交換時(shí)要防止沉淀；避免泵內(nèi)堵塞或有氣泡；每次分析結(jié)束后，要反復(fù)沖洗進(jìn)樣口，防止樣品的交叉污染；燈的保養(yǎng)：在分析前、柱平衡得差不多時(shí)，打開檢測(cè)器；在分析完成后，馬上關(guān)閉檢測(cè)器HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題柱的保養(yǎng)：柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震動(dòng)；使用預(yù)柱，保護(hù)柱堵了，異丙醇超聲清洗保護(hù)柱柱芯即可；當(dāng)柱子和色譜儀聯(lián)結(jié)時(shí)，閥件或管路一定要清洗干凈；要注意流動(dòng)相的脫氣；避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相；進(jìn)樣樣品要提純；嚴(yán)格控制進(jìn)樣量；每天分析工作結(jié)束后，要清洗進(jìn)樣閥中殘留的樣品；每天分析測(cè)定結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣砬逑粗?；若分析柱長(zhǎng)期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機(jī)溶劑保存并封閉；（用20%甲醇溶液清洗10個(gè)柱體積，保存在90%的甲醇溶液中）日常維護(hù)HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題HPLC分析方法的建立及驗(yàn)證目的：證明采用的方法適合于相應(yīng)檢測(cè)的要求。方法驗(yàn)證是實(shí)驗(yàn)室針對(duì)特定方法的研究過程，通過設(shè)計(jì)方案，有步驟、系統(tǒng)地收集、處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，最終形成文件，以證明所用試驗(yàn)方法準(zhǔn)確、靈敏、專屬并重現(xiàn)。同一分析方法用于不同的檢測(cè)項(xiàng)目會(huì)有不同的驗(yàn)證要求。驗(yàn)證內(nèi)容：專屬性、線性范圍、靈敏度（檢測(cè)限、定量限）、準(zhǔn)確度、精密度（重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性）、耐用性HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題分析方法的建立及驗(yàn)證專屬性系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測(cè)定出被測(cè)物的特性。線性系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度(一般對(duì)照品稀釋成7個(gè)濃度，每個(gè)濃度進(jìn)樣3次，計(jì)算其線性方程和相關(guān)系數(shù)，其值不應(yīng)低于0.99）。范圍系指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間（原料藥和制劑含量測(cè)定，范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的80%～120%）。

HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題分析方法的建立及驗(yàn)證靈敏度是信號(hào)與噪音的比值；即峰高與基線噪音的比值（S/N）檢測(cè)限（LOD）：S/N=2~4定量限（LOQ）：S/N=8~10好的信噪比有利于：更好的色譜峰確認(rèn)更好的定量更好地完成色譜峰純度/均一性 6:1NSHPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題分析方法的建立及驗(yàn)證準(zhǔn)確度：用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。1、原料藥含量測(cè)定：回收率（%）=測(cè)得量/加入量×100%--空白基質(zhì)中加入藥品2、制劑的含量測(cè)定：標(biāo)準(zhǔn)加樣回收---已知濃度樣品中加入藥品

數(shù)據(jù)要求：在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。例如，設(shè)計(jì)3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備3份供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定。HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題分析方法的建立及驗(yàn)證絕對(duì)回收率=提取回收率/（1－基質(zhì)效應(yīng)），HPLC中基質(zhì)效應(yīng)為01.絕對(duì)回收率=提取回收率=萃取回收率，是用藥品加血漿經(jīng)萃取處理后的進(jìn)樣峰面積除以該藥品溶液直接進(jìn)樣峰面積的比值，一般來說，該比值不可能超過100%，能做到80%就不錯(cuò)了。以前國(guó)家對(duì)絕對(duì)提取率還有些要求，現(xiàn)在隨著lc-ms的應(yīng)用，最低定量限已經(jīng)能做到很低，也就不需要再對(duì)絕對(duì)回收率提具體要求，只要相對(duì)回收率滿意就可以。--生物樣品：用于篩選提取溶劑，可以低但要穩(wěn)定

2.相對(duì)回收率=方法學(xué)回收率，是血漿處理后的進(jìn)樣峰面積代入血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算所得濃度除以真實(shí)血樣濃度.該比值在100%左右.一般要求高、中濃度點(diǎn)在15%以內(nèi)，低濃度點(diǎn)可適當(dāng)放寬。--內(nèi)標(biāo)的相對(duì)回收率值與絕對(duì)回收率要求類似

(1)舉例：10ngA藥加入1ml空白血漿（10ng/ml），經(jīng)萃取處理后用0.5ml流動(dòng)相復(fù)溶，進(jìn)樣所得峰面積8000;配制對(duì)照溶液（濃度10ng/0.5ml=20ng/ml），進(jìn)樣所得峰面積假設(shè)為10000.那么萃取回收率為8000/10000=80%.

(2)舉例：上述經(jīng)萃取處理的血漿溶液（10ng/ml）峰面積8000，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，假如計(jì)算所得濃度為8.5ng/ml,相對(duì)回收率則為8.5/10=85%.HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題分析方法的建立及驗(yàn)證精密度：在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻供試品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度，一般用SD、RSD表示。1、重復(fù)性：在較短的時(shí)間間隔內(nèi)，在相同的操作條件下，由同一分析人員連續(xù)測(cè)定所得結(jié)果的精密度，也就是日內(nèi)（批內(nèi)）精密度（RSD限度：生物制品5％，藥品2％）2、中間精密度：同一實(shí)驗(yàn)室不同時(shí)間不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定所得結(jié)果之間的精密度。其中，由同一分析人員用同一設(shè)備在不同時(shí)間測(cè)定所得結(jié)果通常稱為日間（批間）精密度(RSD限度:生物制品15％，藥品5％)3、重現(xiàn)性：不同實(shí)驗(yàn)室不同分析人員測(cè)定結(jié)果之間的精密度（基本不做）制備3個(gè)不同濃度的樣品，每個(gè)濃度各3份（對(duì)照品）100%水平的供試品溶液，至少測(cè)定6次的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題分析方法的建立及驗(yàn)證耐用性系指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度，為使方法可用于常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。典型的變動(dòng)因素有：被測(cè)溶液的穩(wěn)定性、樣品的提取次數(shù)、時(shí)間等；液相色譜法中典型的變動(dòng)因素有：流動(dòng)相的組成和pH值、不同廠牌或不同批號(hào)的同類型色譜柱、柱溫、流速等。穩(wěn)定性考察：取同一份供試品溶液，分別于不同時(shí)間進(jìn)樣測(cè)定（如0、2、4、6、8、10、12、24h）。注意：大多文獻(xiàn)中所提及的重復(fù)性考察并不在驗(yàn)證范圍內(nèi)，但較為常用重復(fù)性考察：取同一批號(hào)供試品,按供試品溶液制備方法制備6份供試液，進(jìn)行含量測(cè)定。HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題分析方法的建立及驗(yàn)證HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題HPLC故障診斷HPLC靈敏度不夠：1樣品量不足，增加樣品量2樣品未從柱子流出，可根據(jù)樣品理化性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子3樣品與檢測(cè)器不匹配，可根據(jù)樣品理化性質(zhì)調(diào)整波長(zhǎng)或改換檢測(cè)器

4檢測(cè)池中有氣泡，排氣5流動(dòng)相流量不合適，調(diào)整流速即可在一定范圍內(nèi)，柱溫越高或流速越大，峰高越大，峰寬越小，峰面積不變，保留時(shí)間變?。ú贿m于熱不穩(wěn)定樣品）。常用柱溫：25℃、30℃常用流速：1ml/minHPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題HPLC故障診斷系統(tǒng)壓力過高。1首先擰開排液閥，以純水作流動(dòng)相并設(shè)流速為5ml/min若壓力超過10bar，應(yīng)先更換排液閥的慮芯。2若排液閥的慮芯沒有堵塞，卸下色譜柱，然后用一兩通代替色譜柱，以水作流動(dòng)相設(shè)流速為1ml/min。通常壓力不會(huì)超過20bar,否則系統(tǒng)可能有堵塞。3若上述的壓力超過20bar,我們可按照從后到前的原則，也就是說先卸下進(jìn)流動(dòng)池的連接管接頭，開泵后，若壓力正常則流動(dòng)池堵塞若仍不正?？蓪⑦@段管另一端也卸下，開泵后再觀察壓力情況。同樣道理，我們就可以找到堵塞的地方。容易堵塞的地方：流動(dòng)池入口管；自動(dòng)進(jìn)樣器的針及針座；柱溫箱HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題HPLC故障診斷系統(tǒng)壓力過低，不穩(wěn)定或沒液流。首先擰開排液閥，設(shè)流速1~2ml/min后開泵，觀察有無液流，若有再仔細(xì)觀察液流是否有倒吸現(xiàn)象如不能確定可用量筒測(cè)量流速的準(zhǔn)確性。如上述無液流，或流速不準(zhǔn)多數(shù)為主動(dòng)閥閥芯或主動(dòng)閥故障，或泵有嚴(yán)重漏液。怎樣是大致判斷主動(dòng)閥抑或其閥芯故障？可用以下方法：當(dāng)泵運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)用手指輕捏主動(dòng)主體，正常的主動(dòng)閥能感到有節(jié)奏的脈動(dòng)，如果沒有，主動(dòng)閥有問題。如果有則可以將主動(dòng)閥閥芯取出進(jìn)行超聲波清洗，如仍有問題，可更換閥芯。注意，千萬不要把整個(gè)主動(dòng)閥放入超聲波清洗這樣會(huì)損壞主動(dòng)閥。若上述流速準(zhǔn)確但擰緊排液閥后壓力不穩(wěn)定，請(qǐng)仔細(xì)檢查有無漏液。(通常漏液地方：各接口包括色譜柱，泵，進(jìn)樣閥等)。HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題HPLC故障診斷保留時(shí)間不穩(wěn)定。首先觀察保留時(shí)間是否有規(guī)律的變化，并同時(shí)觀察壓力是否穩(wěn)定

若壓力穩(wěn)定而保留時(shí)間呈有規(guī)律變化，多數(shù)是色譜柱未平衡好，特別是含有鹽的流動(dòng)相，需較長(zhǎng)的時(shí)間去平衡。

若壓力穩(wěn)定而保留時(shí)間無規(guī)律變化，請(qǐng)檢查溶劑過濾頭及真空腔是否有堵塞。再平衡色譜柱足夠時(shí)間，如仍然不佳，可更換一色譜柱。

若壓力不穩(wěn)定，請(qǐng)檢查造成壓力不穩(wěn)定的因素，如：漏液，排液時(shí)間不足夠，鹽濃度過高導(dǎo)致鹽析，主動(dòng)閥比例閥內(nèi)漏，等。HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題HPLC故障診斷峰面積重現(xiàn)性不好。首先觀察壓力是否穩(wěn)定，以及觀察峰面積變化是否有規(guī)律。

若壓力不穩(wěn)定，請(qǐng)檢查造成壓力不穩(wěn)定的因素，如：漏液，排液時(shí)間不足夠，鹽濃度過高導(dǎo)致鹽析，主動(dòng)閥比例閥內(nèi)漏，等。

若壓力穩(wěn)定但峰面積呈無規(guī)律變化，請(qǐng)檢查樣品是否足夠，確認(rèn)樣品的穩(wěn)定性，必要時(shí)重新配制。檢查進(jìn)樣閥是否漏液。等。若壓力穩(wěn)定且峰面積呈規(guī)律變化，多數(shù)為色譜柱未平衡好。

雙峰：進(jìn)樣量過大？預(yù)柱有氣泡？---純甲醇超聲拖尾峰：流動(dòng)相中添加三乙胺等減尾劑峰展寬：流動(dòng)相粘度過高？----提高柱溫峰前延：柱溫低HPLC安捷倫高效液相使用維護(hù)常見問題HPLC故障診斷基線不穩(wěn)定?；€漂移：色譜柱未平