畜禽羽（毛）中5種有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

1DB36/Txxxx-xxxx畜禽羽（毛）中5種有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了畜禽羽（毛）中毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷、氧樂果和三唑磷5種有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬、牛、羊、雞、鴨等畜禽羽（毛）中5種有機(jī)磷類農(nóng)藥毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷、氧樂果和三唑磷殘留量的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。3原理試樣經(jīng)甲酸-乙腈和水溶液渦旋、超聲提取，乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）和十八烷基硅烷（C18）分散凈化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，外標(biāo)法定量。4試劑和材料除非另有說(shuō)明，所有試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水標(biāo)準(zhǔn)。4.1.2甲酸：色譜純。2DB36/Txxxx-xxxx4.1.3乙腈：色譜純。4.1.4乙酸銨：色譜純。4.2標(biāo)準(zhǔn)品毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷、氧樂果和三唑磷標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，含量≥98.0%。4.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備4.3.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.0mg/mL）：分別準(zhǔn)確稱取適量毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷、氧樂果和三唑磷標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用乙腈配成1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，該溶液于-20℃下避光儲(chǔ)存，保存期1年。4.3.2標(biāo)準(zhǔn)中間液（10.0mg/L）：移取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（4.10）于10mL容量瓶中，用乙腈分別稀釋成質(zhì)量濃度為10.0mg/L的標(biāo)準(zhǔn)中間液，于-20℃下避光儲(chǔ)存，保存期6個(gè)月。4.3.3標(biāo)準(zhǔn)工作液（1.0mg/L）：取上述標(biāo)準(zhǔn)中間液（4.11）各1mL于10mL容量瓶中，用乙腈分別稀釋成質(zhì)量濃度為1.0mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液，該溶液于4℃下避光儲(chǔ)存，保存期3個(gè)月。4.4材料4.4.1乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）。4.4.2十八烷基硅烷（C18）。4.4.3十二烷基硫酸鈉（SDS）。4.4.4吐溫80。4.4.5微孔濾膜（水相）0.22μm。5儀器和設(shè)備5.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（配電噴霧離子源）。5.2電子分析天平：感量0.1mg。5.3高速冷凍離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥10000r/min。5.4渦旋混合器。5.5恒溫烘箱。5.6氮吹儀。6試樣制備與保存6.1試樣制備3DB36/Txxxx-xxxx取適量代表性試樣，用5%吐溫80或者1%十二烷基硫酸鈉溶液清洗羽（毛）30min，然后用蒸餾水漂洗3次至清洗干凈，于45℃的烘箱中烘干樣品，隨后剪碎成1-2mm。6.2試樣保存常溫下放干燥器中保存。7測(cè)定步驟準(zhǔn)確稱取100mg（精確至0.01mg）上述處理的羽（毛）樣品于15mL具塞離心管中，加入3mL2%甲酸-乙腈溶液和2mL水混合，渦旋1min，超聲20min，10000rpm下離心5min，取上清液備用。7.2凈化在上述上清液中加入100mgPSA和100mgC18吸附劑，渦旋1min，10000rpm下離心5min，上清液過(guò)0.22μm有機(jī)濾膜，進(jìn)樣測(cè)定。7.3色譜條件7.3.1液相色譜條件a）色譜柱：ZORBAXEclipsePlusC18（100mm×2.1mm，1.8μm）。b）流動(dòng)相：流動(dòng)相A為5mmol/L乙酸銨水溶液，流動(dòng)相B為5mmol/L乙酸銨甲醇溶液。c）流速：0.3mL/min。d）柱溫：35℃。e）進(jìn)樣量：10.0μL。f）流動(dòng)相和梯度洗脫條件見表1。表1梯度洗脫條件時(shí)間/min流動(dòng)相A/%流動(dòng)相B/%03.04982022984DB36/Txxxx-xxxx4.529869879827.3.2質(zhì)譜條件a）離子化模式：電噴霧電離正離子模式（ESI+）。b）毛細(xì)管電壓：3000v。c）干燥氣溫度：150℃。d）干燥氣流量：15L/min。e）霧化氣壓力：30psi。f）鞘氣溫度：300℃。g）鞘氣流量：12L/min。h）檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM），監(jiān)測(cè)條件見表2。表2多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）條件被測(cè)物名稱定性離子對(duì)定量離子對(duì)碎裂電壓碰撞能量/ev（m/z）（m/z）毒死蜱350.0/197.8350.0/96.8273.1/230.9350.0/197.838049水胺硫磷273.1/120.8142.0/94.1273.1/230.938030142.0/125.0214.0/125.0142.0/94.138020氧樂果214.0/155.0314.1/162.0214.0/125.0380520三唑磷314.1/96.9314.1/162.03805DB36/Txxxx-xxxx7.4基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線吸取一定量標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，用空白基質(zhì)提取液逐級(jí)稀釋成質(zhì)量濃度為1.0μg/kg、2.0μg/kg、5.0μg/kg、10.0μg/kg、20.0μg/kg、50.0μg/kg、100.0μg/kg的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定。以農(nóng)藥定量離子峰面積為縱坐標(biāo)、農(nóng)藥基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。7.5定性及定量7.5.1保留時(shí)間被測(cè)試樣中目標(biāo)農(nóng)藥色譜峰的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時(shí)間相比較，相對(duì)誤差應(yīng)在±2.5%之內(nèi)。7.5.2定量離子、定性離子及子離子豐度比在相同實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行樣品測(cè)定時(shí)，如果檢出的色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)品一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜中，目標(biāo)化合物質(zhì)譜定量和定性離子均出現(xiàn)，而且同一檢測(cè)批次，樣品中目標(biāo)化合物的定性離子和定量離子的相對(duì)豐度比與質(zhì)量濃度相當(dāng)?shù)幕|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液相比，其允許偏差不超過(guò)表3規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對(duì)應(yīng)的待測(cè)物。表3定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度最大允許偏差相對(duì)豐度（基峰）>50%>20%-50%>10%至20%≤10%允許的最大偏差±20%±25%±30%±50%7.5.3試樣溶液的測(cè)定將基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和試樣溶液依次注入液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中，保留時(shí)間和定性離子定性，測(cè)得定量離子峰面積，待測(cè)樣液中農(nóng)藥的響應(yīng)值在儀器檢測(cè)的定量測(cè)定線性范圍之內(nèi)，超過(guò)線性范圍時(shí)應(yīng)根據(jù)測(cè)定濃度進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)稀釋后再進(jìn)行分析。7.6回收率陰性樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照7.1-7.2操作，測(cè)定后計(jì)算樣品添加回收率。8結(jié)果與計(jì)算6DB36/Txxxx-xxxx試樣中毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷、氧樂果和三唑磷的殘留量按式（1）計(jì)算，計(jì)算結(jié)果需扣除空Xi式中：Xi——樣品中目標(biāo)化合物的殘留量(μg/kg)；Cs——目標(biāo)化合物標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度(μg/L)；As——目標(biāo)化合物標(biāo)準(zhǔn)工作液的峰面積；Ai——樣品中目標(biāo)化合物的峰面積；V——樣品提取液體積(mL)；m——樣品稱樣量(g)。9檢測(cè)方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度本方法的檢出限：毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷為0.5μg/kg，氧樂果和三唑磷為0.4μg/kg。本方法的定量限范圍為1.3μg/kg-2.0μg/kg。9.2準(zhǔn)確度本方法在2μg/kg～50μg/kg添加濃度水平上的回收率為67.8%～106.2%。9.3精密度本方法相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤6.9%。7CountsCounts13451345DB36/Txxxx-xxxxCountsCounts13451345附錄A（資料性附錄色譜圖）毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷、氧樂果和三唑磷的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)色譜圖（圖A.1、A.2、A.3分別是混合標(biāo)準(zhǔn)品、空白豬毛中添加混合標(biāo)準(zhǔn)品以及空白牛毛中添加混合標(biāo)準(zhǔn)品，添加濃度10μg/kg）6000005000004000003000002000001000000231540.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.0AcquisitionTime(min)2AcquisitionTime(min)20.00.5AcquisitionTime(min)其中：1為甲胺磷；2為氧化樂果；3為水胺硫磷；4為三唑磷；5為毒死蜱8DB36/Txxxx-xxxx附錄B（資料性附錄）回收率毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷、氧樂果和三唑磷添加濃度及平均回收率結(jié)果，見表B.1和B.2。表B.1空白豬毛樣品中5種違禁農(nóng)藥添加濃度及平均回收率（N=6）化合物添加濃度(μg/kg)平均回收率/%相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）/%2.076.15.4毒死蜱50.02.069.767.890.17.75.33.0水胺硫磷50.02.085.280.991.27.96.85.550.02.098.694.768.73.52.26.2氧樂果50.02.070.580.086.25.87.93.6三唑磷50.086.185.49DB36/Txxxx-xxxx表B.2空白牛毛樣品中5種違禁農(nóng)藥添加濃度及平均回收率（N=6）化合物添加量(μg/kg)平均回收率/%相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）/%2.070.29.6毒死蜱50.02.071.266.377.95.94.57.1水胺硫磷50.02.072.784.791.58.95.850.02.093.399.991.36.96.2氧樂果50.02.087.881.58.35.57.0三唑磷50.083.987.45.3DB36/Txxxx-xxxx