實(shí)驗(yàn)四-肌肉組織氨基移換作用-紙層析課件

肌肉組織氨基移換作用

（紙層析法）1可編輯課件PPT一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解氨基移換作用的原理。2.熟悉紙層析法的基本原理。3.掌握紙層析法分離鑒定氨基酸的方法。2可編輯課件PPT氨基移換作用（轉(zhuǎn)氨基作用）在轉(zhuǎn)氨酶的作用下，某一氨基酸去掉α-氨基生成相應(yīng)的α-酮酸，而另一種α-酮酸得到此氨基生成相應(yīng)的氨基酸的過程。二、實(shí)驗(yàn)原理3可編輯課件PPT人體內(nèi)最重要的兩種轉(zhuǎn)氨酶：谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）/丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）/天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）谷氨酸+丙酮酸α-酮戊二酸+丙氨酸GPT谷氨酸+草酰乙酸α-酮戊二酸+天冬氨酸GOT4可編輯課件PPT正常人各組織中GPT及GOT活性(單位/克濕組織)血清轉(zhuǎn)氨酶活性，臨床上可作為疾病診斷和預(yù)后的指標(biāo)之一。組織GPTGOT組織GPTGOT肝44000142000胰腺200028000腎1900091000脾120014000心7100156000肺70010000骨骼肌480099000血清16205可編輯課件PPT谷氨酸丙酮酸α-酮戊二酸丙氨酸6可編輯課件PPT2.層析

層析系統(tǒng)通常都有兩個(gè)相組成：固定相和流動(dòng)相?；旌衔镌趯游鱿到y(tǒng)中的分離決定于該混合物的組分在這兩相中的分配情況，一般用分配系數(shù)來描述。常用的分配層析包括柱層析、紙層析、薄層層析。7可編輯課件PPT紙層析法固定相：吸附在濾紙纖維之間的水分流動(dòng)相：層析液水飽和酚分離原理：利用混合物各組分在固定相和流動(dòng)相中分配系數(shù)差異而分離谷氨酸：親水性氨基酸丙氨酸：疏水性氨基酸8可編輯課件PPT3.顯色反應(yīng)茚三酮與α-氨基酸反應(yīng)生成紫紅色化合物相對(duì)遷移率Rf9可編輯課件PPT三、實(shí)驗(yàn)步驟1、酶液的制備2、氨基移換反應(yīng)

加入物（ml）對(duì)照管測(cè)定管

肌勻漿10滴10滴煮沸5min37℃5min0.1mol/L丙氨酸溶液0.5ml0.5ml0.1mol/Lα-酮戊二酸溶液0.5ml0.5ml0.01mol/L磷酸鹽緩沖液1.5ml1.5ml混勻，37℃50min

煮沸5min10可編輯課件PPT3、層析圓濾紙上標(biāo)記點(diǎn)樣制作濾紙芯濾紙芯插入圓濾紙組裝層析裝置11可編輯課件PPT4、顯色把層析后的濾紙取下，吹風(fēng)機(jī)吹干后，用噴霧器均勻噴灑0.5％茚三酮溶液，再用吹風(fēng)機(jī)吹干。12可編輯課件PPT四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算各個(gè)色斑的Rf值

分析色斑的成分以及是否發(fā)