有助于潤(rùn)腸通便檢驗(yàn)方法

有助于潤(rùn)腸通便檢驗(yàn)方法1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)1.1小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)經(jīng)口灌胃給予造模藥物復(fù)方地芬諾酯或洛哌丁胺，建立小鼠小腸蠕動(dòng)抑制模型，計(jì)算一定時(shí)間內(nèi)小腸的墨汁推進(jìn)率，來判斷模型小鼠胃腸蠕動(dòng)功能。1.1.2儀器和材料1.1.2.1儀器和試劑手術(shù)剪、眼科鑷、直尺、注射器、天平、活性炭粉、阿拉伯樹膠、復(fù)方地芬諾酯或洛哌丁胺。1.1.2.2試劑配制1.1.2.2.1墨汁的配制：準(zhǔn)確稱取阿拉伯樹膠100g，加水800mL，煮沸至溶液透明，稱取活性碳（粉狀）50g加至上述溶液中煮沸三次，待溶液涼后加水定容到1000mL，于冰箱中4℃保存，用前搖勻。1.1.2.2.2復(fù)方地芬諾酯混懸液的配制：濃度為0.025%。復(fù)方地芬諾酯片，每片含復(fù)方地芬諾酯2.5mg，取復(fù)方地芬諾酯片25mg（10片用研缽研碎呈粉末后加水至100mL，臨用前配制。1.1.2.2.3洛哌丁胺溶液的配制洛哌丁胺劑量為2－4mg/kgBW。依據(jù)洛哌丁胺的實(shí)用劑量取用，按實(shí)驗(yàn)所需濃度配制，可加熱待溶質(zhì)完全溶解、充分搖勻后使用。1.1.3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用成年雄性小鼠，體重18－22g，每組10－15只。1.1.3.2劑量分組及受試樣品給予時(shí)間實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)劑量組，一個(gè)陰性對(duì)照組和一個(gè)模型對(duì)照組。以人體推薦量的10倍為其中的一個(gè)劑量組，另設(shè)二個(gè)劑量組，必要時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組。陰性對(duì)照組和模型對(duì)照組同樣途徑給蒸餾水。受試樣品給予時(shí)間7天，必要時(shí)可延長(zhǎng)至15天。1.1.3.3實(shí)驗(yàn)步驟1.1.3.3.1模型的建立給受試樣品7天后，各組小鼠禁食不禁水16小時(shí)。模型對(duì)照組和三個(gè)劑量組灌胃給予復(fù)方地芬諾酯（5mg/kgBW）或洛哌丁胺（2~4mg/kgBW空白對(duì)照組給蒸餾水。1.1.3.3.2指標(biāo)測(cè)定的方法給復(fù)方地芬諾酯或洛哌丁胺后0.5小時(shí)后，劑量組分別給予含相應(yīng)受試樣品的墨汁（含5%的活性炭粉、10%阿拉伯樹膠陰性和模型對(duì)照組給墨汁灌胃。25分鐘后立即脫頸椎處死動(dòng)物，打開腹腔分離腸系膜，剪取上端自幽門、下端至回盲部的腸管，置于托盤上，輕輕將小腸拉成直線，測(cè)量腸管長(zhǎng)度為“小腸總長(zhǎng)度”，從幽門至墨汁前沿為“墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度”。按下式計(jì)算墨汁推進(jìn)率：墨汁推進(jìn)率(%)=1.1.4數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定墨汁推進(jìn)率需進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，X＝Sin-1p，式中P為墨汁推進(jìn)率，用小數(shù)表示。在進(jìn)行方差分析時(shí)，需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。在模型成立的前提下，受試樣品組小鼠的墨汁推進(jìn)率顯著高于模型對(duì)照組的墨汁推進(jìn)率時(shí)，可判定該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。1.2排便時(shí)間、糞便粒數(shù)和糞便重量的測(cè)定經(jīng)口灌胃給予造模藥物復(fù)方地芬諾酯或洛哌丁胺，建立小鼠便秘模型，測(cè)定小鼠的首粒排黑便排便時(shí)間、5或6小時(shí)內(nèi)排便粒數(shù)和排便重量，來反映模型小鼠的排便情況。1.2.2儀器和材料1.2.2.1儀器和試劑眼科鑷、注射器、分析天平、活性炭粉、阿拉伯樹膠、復(fù)方地芬諾酯、洛哌丁胺。1.2.2.2試劑配制1.2.2.2.1墨汁的配制：同小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)。1.2.2.2.2復(fù)方地芬諾酯混懸液的配制：濃度為0.05%。復(fù)方地芬諾酯片，每片含2.5mg復(fù)方地芬諾酯。取復(fù)方地芬諾酯片50mg（20片用研缽研碎后加蒸餾水至100mL，臨用前配制。1.1.2.2.3洛哌丁胺溶液的配制：洛哌丁胺劑量為4－7mg/kgBW。依據(jù)洛哌丁胺的實(shí)用劑量取用，按實(shí)驗(yàn)所需濃度配制，可加熱待溶質(zhì)完全溶解、充分搖勻后使用。1.2.3實(shí)驗(yàn)方法1.2.3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用成年雄性小鼠，體重18－22g，每組10－15只。1.2.3.2劑量分組及受試樣品給予時(shí)間實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)劑量組，一個(gè)陰性對(duì)照組和一個(gè)模型對(duì)照組。以人體推薦量的10倍為其中的一個(gè)劑量組，另設(shè)二個(gè)劑量組，必要時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組。陰性對(duì)照組和模型對(duì)照組同樣途徑給蒸餾水。受試樣品給予時(shí)間7天，必要時(shí)可適當(dāng)延長(zhǎng)至15天。1.2.3.3實(shí)驗(yàn)步驟1.2.3.3.1模型的建立給受試樣品7天后，各組小鼠禁食不禁水16小時(shí)。陰性對(duì)照組給蒸餾水，模型對(duì)照組和三個(gè)劑量組灌胃給予復(fù)方地芬諾酯（10mg/kgBW）或洛哌丁胺（4~7mg/kg1.2.3.3.2指標(biāo)測(cè)定的具體方法給復(fù)方地芬諾酯或洛哌丁胺0.5小時(shí)后，陰性對(duì)照組和模型對(duì)照組小鼠用墨汁灌胃，劑量組給予含受試樣品的墨汁，動(dòng)物均單籠飼養(yǎng)，正常飲水進(jìn)食。從灌墨汁開始，記錄每只動(dòng)物首粒排黑便時(shí)間、5或6小時(shí)內(nèi)排黑便粒數(shù)及重量。1.2.4數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定資料可用方差分析，需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。在小腸便秘模型成立的前提下，受試樣品組小鼠的首粒排黑便時(shí)間明顯短于模型對(duì)照組，即可判定該項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果陽(yáng)性。5或6小時(shí)內(nèi)排黑便粒數(shù)明顯高于模型對(duì)照組，可判定該項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果陽(yáng)性。5或6小時(shí)內(nèi)排黑便重量明顯高于模型對(duì)照組，可判定該項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果陽(yáng)性。1.2.5結(jié)果判定5或6小時(shí)內(nèi)排糞便重量和糞便粒數(shù)任一項(xiàng)結(jié)果陽(yáng)性，同時(shí)小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)和排便時(shí)間任一項(xiàng)結(jié)果陽(yáng)性，可判定該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。1.2.6注意事項(xiàng)1.2.6.1實(shí)驗(yàn)中應(yīng)將復(fù)方地芬諾酯懸液不斷振蕩，以保持其濃度均一。洛哌丁胺溶液在4℃保存有時(shí)會(huì)出現(xiàn)結(jié)晶，放置室溫一段時(shí)間或加熱后可溶解。1.2.6.2墨汁配制時(shí)待阿拉伯膠加熱透明后再加入碳末。1.2.6.3應(yīng)去除小鼠排出第一粒黑便前的糞便。1.3糞便性狀感官描述2人體試食試驗(yàn)2.1納入受試者標(biāo)準(zhǔn)2.1.1排便次數(shù)減少和糞便硬度增加者。2.1.2大便一周少于3次者。2.1.3無器質(zhì)性便秘者。2.1.4習(xí)慣性便秘者。2.2受試者排除標(biāo)準(zhǔn)2.2.1不能經(jīng)口進(jìn)食者或不能按規(guī)定服用受試樣品者。2.2.2主訴不清者。2.2.3體質(zhì)虛弱無法進(jìn)行試驗(yàn)者。2.2.430天內(nèi)進(jìn)行過外科手術(shù)引起便秘癥狀發(fā)生者。2.2.5因嚴(yán)重器質(zhì)病變引起的近期排便困難者（結(jié)腸癌，嚴(yán)重的腸炎、腸梗阻，炎癥性腸病等）2.2.6便秘困難并伴有疼痛者。2.2.730天內(nèi)發(fā)生過急性胃腸道疾病者。2.2.8孕期及經(jīng)期婦女。2.2.9合并有心血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重全身疾病患者。2.2.10有其它伴隨疾病正在治療者。2.2.11短期內(nèi)服用與受試功能有關(guān)的物品，影響到對(duì)結(jié)果的判斷者。2.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)及分組要求采用自身和組間對(duì)照兩種試驗(yàn)設(shè)計(jì)。按受試者的便秘癥狀（排便次數(shù)、糞便性狀、癥狀持續(xù)時(shí)間等）隨機(jī)分為試食組和對(duì)照組，盡可能考慮到影響結(jié)果的主要因素如年齡、性別、日常飲食、便秘原因等，進(jìn)行均衡性檢驗(yàn)，以保證組間的可比性。每組受試者不少于50例。2.4受試樣品的劑量和使用方法試食組按推薦服用方法、服用量服用受試產(chǎn)品，對(duì)照組可服用安慰劑或采用空白對(duì)照，也可服用具有同樣作用的陽(yáng)性物。按盲法進(jìn)行試食試驗(yàn)。受試樣品給予時(shí)間7天，必要時(shí)可以延長(zhǎng)至15天。試驗(yàn)期間不改變?cè)瓉淼娘嬍沉?xí)慣，正常飲食。2.5觀察指標(biāo)：2.5.1安全性指標(biāo)2.5.1.1一般狀況包括精神、睡眠、飲食、大小便、血壓等2.5.1.2血、尿、便常規(guī)檢查2.5.1.3肝、腎功能檢查2.5.1.4胸片、心電圖、腹部部B超（在試驗(yàn)開始前檢查一次）2.5.2功效性指標(biāo)每日對(duì)受試者進(jìn)行詢問并記錄，同時(shí)記錄受試者服用受試樣品前6天及試驗(yàn)時(shí)的情況。2.5.2.1每日排便次數(shù)記錄受試者試食前后排便次數(shù)的變化。2.5.2.2排便狀況根據(jù)排便困難程度（腹痛或肛門燒灼感、下墜感、不適感，有否便頻但排便困難而量少等癥狀）分為I-IV級(jí)，統(tǒng)計(jì)積分值。I級(jí)（0分排便正常II級(jí)（1分僅有下墜感、不適感II級(jí)（2分下墜感、不適感明顯，或有便頻但排便困難而量少，較少出現(xiàn)腹痛或肛門燒灼感IV級(jí)（3分經(jīng)常出現(xiàn)腹痛或肛門燒灼感，影響排便2.5.2.3糞便性狀根據(jù)布里斯托（Bristol）糞便性狀分類法將糞便性狀分為I－III級(jí)。I級(jí)（0分像香腸或蛇，平滑而且軟；像香腸，但在它的表面有裂痕；軟的團(tuán)塊，有明顯的邊緣（容易排出）II級(jí)（1分香腸形狀，但有團(tuán)塊；松散的塊狀，邊緣粗糙，像泥漿狀的糞便III級(jí)（2分分離的硬團(tuán)，像果核（不易排出）2.5.2.4日常飲食情況：纖維素類食物的比例。2.5.2.5記錄有無不良反應(yīng)（惡心、脹氣、腹瀉、腹痛及糞便異常等）。2.6數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定試驗(yàn)數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，可用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。凡自身對(duì)照資料可以采用配對(duì)t檢驗(yàn)，兩組均數(shù)比較采用成組t檢驗(yàn)，后者需進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，對(duì)非正態(tài)分布或方差不齊的