水產(chǎn)品中鎮(zhèn)靜劑類藥物殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

1水產(chǎn)品中鎮(zhèn)靜劑類藥物殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中13種鎮(zhèn)靜劑類藥物殘留量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于淡水蝦、淡水魚、海水蝦、海水魚4類水產(chǎn)品中13種鎮(zhèn)靜劑類藥物殘留量的測定，其它動(dòng)物類食品可參照執(zhí)行。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3原理用乙腈提取試樣中的鎮(zhèn)靜劑類藥物，然后用QuEChERS吸附劑凈化提取液，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，外標(biāo)法定量。4試劑和材料除非另有說明，在分析中僅使用分析純試劑，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。4.1試劑4.1.1乙腈：色譜純。4.1.2甲醇：色譜純。4.1.3甲酸銨：色譜純。4.1.4甲酸：色譜純。4.1.5無水硫酸鈉：分析純，500℃灼燒4h，置于干燥器內(nèi)備用。4.1.6N-丙基乙二胺吸附劑（PSA）：40μm~60μm粒徑范圍，100?平均孔徑。4.1.7十八烷基鍵合硅膠吸附劑（C18）：40μm~60μm粒徑范圍，60?平均孔徑。4.1.850%甲醇-水溶液：量取50mL甲醇（4.1.2）于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，混勻。4.1.9甲酸銨溶液（2mmol/L）：稱取甲酸銨（4.1.3）0.126g（精確至0.001g），加少量水溶解后，用水定容至1000mL，搖勻備用。4.1.10含0.1%甲酸的2mmol/L甲酸銨溶液：準(zhǔn)確吸取甲酸（4.1.4）1mL，加甲酸銨溶液（4.1.9）稀釋并定容至刻度，搖勻，過濾。4.1.11含0.1%甲酸的甲醇溶液：準(zhǔn)確吸取甲酸（4.1.4）1mL，置于1000mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻備用。24.1.12QuEChERS離心管：準(zhǔn)確稱取100mgPSA（4.1.6）、40mgC18（4.1.7）和500mg無水硫酸鈉（4.1.5），儲(chǔ)存于15mL具螺旋蓋聚丙烯離心管中，旋緊蓋塞，置于干燥器內(nèi)備用。4.1.13微孔濾膜：0.22μm，尼龍膜。4.2標(biāo)準(zhǔn)品13種標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對分子量見附錄A表A.1，純度均≥95%。4.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制4.3.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：分別準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)品（4.2）100.0mg（精確至0.0001g），用甲醇溶解并定容至100mL，此溶液濃度均為1mg/mL。4℃避光密封保存，有效期6個(gè)月。4.3.2混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：將13種鎮(zhèn)靜劑類藥物標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（4.3.1）用甲醇稀釋成10μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，4℃避光密封保存，有效期1個(gè)月。4.3.3空白基質(zhì)溶液：稱取空白試樣，按照6.2規(guī)定的樣品預(yù)處理方法操作制備。4.3.4基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：用空白基質(zhì)溶液（4.3.3）將標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（4.3.2）稀釋成適合濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。5儀器5.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。5.3離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于8000r/min。5.4渦旋振蕩器。5.5超聲波清洗器。5.6旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。5.7均質(zhì)機(jī)。6分析步驟6.1試樣制備淡水魚、淡水蝦、海水魚及海水蝦：取樣本，先將魚體、蝦體表面雜質(zhì)洗凈，魚去鱗、去皮，取肌肉部分；蝦去殼、頭，取可食部分；試樣經(jīng)均質(zhì)混勻，-18℃以下冷凍保存，備用。6.2試樣前處理取試樣，常溫自然解凍后，稱取5.0g試樣（精確至0.01g）于50mL離心管中，加入20mL乙腈上清液轉(zhuǎn)至另一50mL離心管中；殘?jiān)性偌尤?0mL乙腈重復(fù)提取一次，合并兩次上清液。精密量取提取液4mL置于QuEChERS離心管（4.1.12）中，劇烈振蕩1min，8000r/min離心5min，移取全部上清液于10mL試管中，于40℃下氮吹近干，加入1mL50%甲醇-水溶液（4.1.8）溶解殘?jiān)?，過0.22μm微孔濾膜（4.1.13），供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀分析。6.3測定6.3.1液相色譜分離條件3a）色譜柱：ACQUITYUPLCHSST3，2.1×100mm（i.d.1.8μm，或性能相當(dāng)者。b）流動(dòng)相：A：含0.1%甲酸的2mmol/L甲酸銨溶液（4.1.2B：含0.1%甲酸的甲醇溶液（4.1.2）。c）柱溫：35℃。d）流速：0.35mL/min。e）進(jìn)樣量：3μL。f）梯度洗脫程序見表格1。表1梯度洗脫程序6.3.2質(zhì)譜參考條件b）掃描方式：正離子掃描。c）離子源溫度：400℃。d）干燥氣：10.0L/min。e）霧化氣：3.0L/min。f）毛細(xì)管電壓：4000V。g）加熱氣流量：10.0L/minh）檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。i）定性離子對和定量離子對等詳細(xì)儀器條件見表格2。4表214種鎮(zhèn)靜劑的質(zhì)譜參數(shù)Q1/V碰撞能量/eVQ3/V6.3.3液相色譜-質(zhì)譜測定根據(jù)試樣中被測物的藥物含量，選取響應(yīng)值相近的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（4.3.4）同時(shí)進(jìn)行分析?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)工作液和待測液中各種藥物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器響應(yīng)范圍內(nèi)。如果含量超過標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，應(yīng)用50%甲醇-水溶液（4.1.8）稀釋到合適濃度后分析。在上述儀器條件下，13種化合物多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）質(zhì)譜圖參見附錄B圖B.1。6.4空白試驗(yàn)除不加試料外，均按上述操作步驟進(jìn)行。7結(jié)果計(jì)算和表述7.1定性標(biāo)準(zhǔn)在相同試驗(yàn)條件下，試樣中待測物質(zhì)的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中對應(yīng)的保留時(shí)間偏差在±2.5%之內(nèi)；且試樣中定性、定量離子的相對豐度比與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液中對應(yīng)的定性、定量離子的相對豐度比進(jìn)行比較，若偏差不超過表3規(guī)定的范圍，可判定為試樣中含有對應(yīng)的待測物。5表3定性確證時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差>50>20-50>10-207.2定量測定采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。由按式（1）或儀器數(shù)據(jù)處理軟件計(jì)算獲得：式中：——試樣中各待測物的含量，單位為微克每千克(μg/kg）；——試樣中各待測物峰面積對應(yīng)的濃度，單位為微克每升(μg/L）；A——試樣溶液中被測物的色譜峰面積；——基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中被測物的色譜峰面積；——試樣溶液最終定容體積，單位為毫升（mL）；——試樣溶液所代表試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。計(jì)算結(jié)果應(yīng)扣除空白值，保留3位有效數(shù)字8精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的15%。9準(zhǔn)確度本方法對水產(chǎn)品中13種鎮(zhèn)靜劑類藥物加標(biāo)濃度為0.5~5μg/kg時(shí)，回收率在70~120%之間。10定量限本方法對水產(chǎn)品中地西泮、氯丙嗪、安眠酮、艾司唑侖、硝西泮、普魯卡因、氯硝西泮、勞拉西泮、奧沙西泮、阿普唑侖、三唑侖、咪達(dá)唑侖、氯氮卓的定量限均為0.500μg/kg。6附錄A（資料性附錄）表A.1鎮(zhèn)靜劑類化合物標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對分子量1C16H13ClN2O2C17H19ClN2S3C16H14N2O4C16H11ClN45NitrazepamC15H11N3O36C13H20N2O27C15H10ClN3O38C15H10Cl2N2O29C15H11ClN2O2C17H13ClN4C17H12Cl2N4C18H13ClFN3C16H14ClN3O 附錄B（資料性附錄）1:1:阿普唑侖309.10>281.00(+)CE:-26.01:阿普唑侖309.10>274.10(+)CE:-26.0阿普唑侖-14.0-25.0::2:氯氮卓300.05>283.05(+)CE-14.0-25.0:: 2:氯氮卓300.05>227.00(+)CE 氯氮卓3:氯硝西泮316.00>240.90(+)CE:-34.03:氯硝西泮316.00>240.90(+)CE:-34.03:氯硝西泮316.00>213.80(+)CE:-38.0 CE38.0氯硝西泮 4:地西泮285.10>257.10(+)CE:-21.0 4:地西泮285.10>222.10(+)CE:-27.0 地西泮85:艾司唑侖295.10>267.00(+)CE:-25.05:艾司唑95>27.CE5.5:艾司唑侖295.10>267.00(+)CE:-25.05:艾司唑侖295.10>192.00(+)CE:-23.05:艾司唑侖295.10>192.00(+)CE:-23.0 艾司唑侖三唑侖7:勞拉西泮7:勞拉西泮321.10>302.90(+)CE:-14.07:勞拉西泮321.10>275.00(+)CE:-22.0勞拉西泮8:咪達(dá)唑侖326.10>291.00(+)CE:-27.08:咪達(dá)唑侖326.10>243.90(+)CE:-24.08:咪達(dá)唑侖326.10>291.00(+)CE:-27.08:咪達(dá)唑侖326.10>243.90(+)CE:-24.0 咪達(dá)唑侖 9:硝西泮282.10>254.00(+)CE:-19.0 9:硝西泮282.10>236.00(+)CE:-24.0 硝西泮10:奧沙西泮287.00>241.00(+)CE:-21.010:奧沙西泮287.00>162.90(+)CE:-37.01奧沙西泮287.00>241.00(+)CE:-21.010:奧沙西泮287.00>241.00(+)CE:-21.010:奧沙西泮287.00>162.90(+)CE:-37.010奧沙西泮287.00>12.90(+)CE:-37.0 奧沙西泮13:安眠酮13:安眠酮251.00>132.00(+)CE:-23.013:安眠酮251.00>91.10(+)CE:-20.0