零售藥店合理用藥情況調(diào)研報(bào)告及零排放豬舍基質(zhì)墊層微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記多樣性分析

PAGEPAGE1零售藥店合理用藥情況調(diào)研報(bào)告【摘要】目的:了解零售藥店合理用藥開(kāi)展情況，促進(jìn)高職藥學(xué)教育，提高藥學(xué)從業(yè)者的藥學(xué)服務(wù)水平。方法:通過(guò)調(diào)查問(wèn)卷的方式，分析不合理用藥的部分原因,就高職教育方面提出對(duì)策。結(jié)論:高職藥學(xué)教育要重視專業(yè)素質(zhì)的培養(yǎng)提高，使學(xué)生能盡快適應(yīng)崗位需要，指導(dǎo)患者安全有效用藥?！娟P(guān)鍵詞】高職教育藥學(xué)合理用藥零售藥店

隨著我國(guó)社會(huì)生活方式的演變和醫(yī)療保險(xiǎn)、醫(yī)藥分家、藥品的分類管理制度等一系列改革措施的出臺(tái),使得藥品市場(chǎng)展現(xiàn)出前所未有的活力,給廣大群眾購(gòu)藥提供了極大的方便,人們已逐漸形成“大病去醫(yī)院,小病上藥店”的保健觀念。藥品作為一種特殊的商品,其生產(chǎn)和經(jīng)營(yíng)有一定的特殊性，與之緊密聯(lián)系的藥學(xué)類的教育也顯示出獨(dú)特的重要性，如何能培養(yǎng)出高素質(zhì)的藥學(xué)工作人員是我們工作的重點(diǎn)。藥學(xué)人員是藥學(xué)服務(wù)的實(shí)施者,是合理用藥的宣傳員和執(zhí)行者,其自身業(yè)務(wù)水平的高低,直接影響到合理用藥工作開(kāi)展的廣度和深度,影響到所提供的藥學(xué)服務(wù)的質(zhì)量。但是在實(shí)際生活中，由于藥學(xué)人員自身專業(yè)素質(zhì)的局限和消費(fèi)者醫(yī)學(xué)知識(shí)的缺乏，在用藥安全方面還存在不少隱患。為此,我們采用問(wèn)卷調(diào)查的方式,通過(guò)對(duì)本地區(qū)零售藥店的考察,結(jié)合高職高專藥學(xué)類（藥品經(jīng)營(yíng)與管理和藥品生產(chǎn)）專業(yè)人才培養(yǎng)目標(biāo)，就零售藥店合理用藥中存在的問(wèn)題進(jìn)行分析并據(jù)此提出相對(duì)的建議，旨在讓藥學(xué)教育工作者高度重視藥學(xué)人員的專業(yè)素質(zhì)教育的培養(yǎng)。1方法1.1調(diào)查對(duì)象廣州市天河區(qū)部分零售藥店店員,共計(jì)40人。性別:男8人,女32人；年齡:20～45歲。1.2調(diào)查方法采用問(wèn)卷調(diào)查方式,無(wú)記名填寫。從合理用藥的基本概念、處方調(diào)配、專業(yè)知識(shí)及有關(guān)藥品法規(guī)知識(shí)等方面,并參考合理用藥調(diào)研的國(guó)際指標(biāo)[1],設(shè)計(jì)問(wèn)卷調(diào)查表(見(jiàn)表1)。1.3結(jié)果判定滿分為22分。按照得分程度劃分為:較好:>15分；較差:<9分；一般:9～15分。2結(jié)果2.1答題總體情況共收回問(wèn)卷調(diào)查表40份,較好的共計(jì)5人，占12.5%；較差的3人，占7.5%；一般的32人，占80%。合理用藥問(wèn)卷調(diào)查表題目(Q1～Q13)備選答案得分1您對(duì)于國(guó)家基本藥物:了解、不了解102您是否知道WHO倡導(dǎo)使用何種藥名:專利名、商品名、通用名0013您能否根據(jù)癥狀判斷常見(jiàn)疾病及推薦用藥:不能能014您知道哪些藥品的使用率是WHO提出控制的:抗生素、維生素、注射劑、營(yíng)養(yǎng)保健藥10105您是否了解全球有1/3的人是死于:戰(zhàn)亂、疾病、不合理用藥0016您對(duì)于同一種藥品傾向于使用:國(guó)產(chǎn)藥/進(jìn)口藥、單方/復(fù)方、口服/注射1/01/01/07您在調(diào)配處方時(shí)能夠?qū)彶槟男﹥?nèi)容:藥物書(shū)寫、配伍禁忌、相互作用1118您未向病人交待用藥注意事項(xiàng)的原因:時(shí)間不夠、業(yè)務(wù)水平有限、認(rèn)為無(wú)關(guān)緊要-0.5-0.5-19您對(duì)于藥品的使用說(shuō)明書(shū):不看、簡(jiǎn)單過(guò)目、認(rèn)真掌握00.5110您學(xué)習(xí)過(guò)下列哪些科目:藥效學(xué)、藥動(dòng)學(xué)、生物藥劑學(xué)、藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)、藥物流行病學(xué)1111111您對(duì)《藥品管理法》:不了解、部份了解、熟悉00.5112您經(jīng)常閱讀哪些藥學(xué)期刊:(每一種雜志記1分)11112.2答題具體情況2.2.1概念類題題目1-6屬于概念性問(wèn)題，有相當(dāng)一部分人對(duì)合理用藥相關(guān)概念認(rèn)識(shí)很模糊，具體情況見(jiàn)下：Q1:42%的人不了解什么是國(guó)家基本藥物。Q2:51%的人不了解WHO倡導(dǎo)使用通用名，大多數(shù)人(42%)選擇了專利名。Q3:48%的人不能根據(jù)患者癥狀判斷所患疾病，也不能給出用藥指導(dǎo)。Q4:58%的人回答錯(cuò)誤。其中54%的人不了解注射劑的使用率也是WHO提出控制的指標(biāo)。Q5:69%的人知道是死于不合理用藥。Q6:半數(shù)以上的人(54%)不能按照合理用藥的原則正確選擇藥物。其中21%的人選擇進(jìn)口藥,50%的人選擇復(fù)方制劑，8%的人選擇注射劑。2.2.2處方調(diào)配類題Q7:大部分表示能夠在調(diào)配處方時(shí)審查處方各項(xiàng)內(nèi)容,但因業(yè)務(wù)水平有限,真正能審查藥物配伍禁忌和相互作用的人還是為數(shù)甚少。Q8:用藥注意事項(xiàng)（老人、兒童藥物用量，服藥時(shí)間等）通常被忽略,部份原因是由于工作忙、時(shí)間緊,40%的人承認(rèn)業(yè)務(wù)水平有限,但有少數(shù)人(18%)卻認(rèn)為無(wú)關(guān)緊要。2.2.3學(xué)習(xí)類題Q9:絕大多數(shù)人對(duì)藥品使用說(shuō)明書(shū)只是簡(jiǎn)單過(guò)目。Q10:5門藥學(xué)科目中,72%的人僅學(xué)過(guò)3門以下的課程,幾乎所有人都未學(xué)過(guò)藥物流行病學(xué)和藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)等新興學(xué)科。Q11:對(duì)于《藥品管理法》,絕大多數(shù)人只限于部份了解而未認(rèn)真學(xué)習(xí)過(guò)。Q12:只有30%的人能夠經(jīng)常閱讀公開(kāi)出版的藥學(xué)期刊《廣東藥學(xué)》、《醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào)》等。3討論從以上的問(wèn)卷調(diào)查來(lái)看，藥學(xué)工作者首先在思想上沒(méi)有認(rèn)識(shí)到開(kāi)展藥學(xué)服務(wù)、指導(dǎo)合理用藥的重要性。其次，醫(yī)學(xué)和藥學(xué)理論知識(shí)不夠，不能合理推薦藥物。再者，大部分不注意知識(shí)更新，缺乏學(xué)習(xí)主動(dòng)性。針對(duì)這幾點(diǎn)問(wèn)題，在藥學(xué)類高職教育階段，筆者有以下幾方面建議，有助于改善提高藥學(xué)工作者的專業(yè)水平。3.1加強(qiáng)職業(yè)素質(zhì)教育，增強(qiáng)藥學(xué)服務(wù)意識(shí)零售藥店的傳統(tǒng)工作任務(wù)是以藥品為中心，僅僅專注于藥品的銷售，而忽視消費(fèi)者實(shí)際用藥的目的、過(guò)程、結(jié)果等，或把它當(dāng)作是醫(yī)院醫(yī)師的責(zé)任。而藥店要在激烈的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)中立于不敗之地，必須在服務(wù)環(huán)節(jié)上狠下工夫，藥學(xué)服務(wù)又是服務(wù)中的重頭戲[2]。因此提高和加強(qiáng)藥學(xué)人員的服務(wù)意識(shí)和業(yè)務(wù)水平已刻不容緩,教師要在職業(yè)教育階段就培養(yǎng)學(xué)生的服務(wù)意識(shí)，強(qiáng)調(diào)藥學(xué)服務(wù)的重要性和必要性，增強(qiáng)開(kāi)展藥學(xué)服務(wù)的積極性和主動(dòng)性,努力為患者提供所需的藥學(xué)信息，而不是簡(jiǎn)單的機(jī)械的發(fā)藥，把藥物等同于一般的商品來(lái)銷售。3.2優(yōu)化課程設(shè)置藥學(xué)類專業(yè)涉及的學(xué)科范圍較廣,課程種類多而復(fù)雜，但是高等職業(yè)教育學(xué)制一般都是3年,如何在較短的時(shí)間內(nèi)合理地精選和安排課程，就成為藥學(xué)高職教育中關(guān)鍵的問(wèn)題。除了公共基礎(chǔ)課程外，在專業(yè)課程安排上，由于藥學(xué)類高職高專學(xué)生的就業(yè)崗位主要集中在藥品營(yíng)銷和藥品生產(chǎn)兩大領(lǐng)域，那么針對(duì)藥品經(jīng)營(yíng)者來(lái)說(shuō)，就要求他們必須掌握一定的醫(yī)學(xué)知識(shí)才能更好地開(kāi)展藥學(xué)服務(wù)，指導(dǎo)患者合理用藥。但是醫(yī)學(xué)知識(shí)內(nèi)容廣泛，知識(shí)學(xué)習(xí)不能過(guò)深過(guò)細(xì)，掌握必需、夠用這個(gè)原則即可。醫(yī)學(xué)課程主要以人體系統(tǒng)器官為邏輯軸線，對(duì)人體解剖學(xué)、組織學(xué)、生理學(xué)、病理學(xué)、診斷學(xué)、臨床疾病及治療學(xué)等內(nèi)容進(jìn)行課程重組。內(nèi)容安排兼顧基礎(chǔ)性、綜合性、先進(jìn)性和實(shí)用性。我院已經(jīng)在藥學(xué)系老師的組織下，對(duì)醫(yī)學(xué)課程進(jìn)行了優(yōu)化重組，開(kāi)發(fā)了新教材《實(shí)用醫(yī)學(xué)概要》，目前已經(jīng)投入使用，使用效果良好。醫(yī)學(xué)課程是進(jìn)行用藥指導(dǎo)的基礎(chǔ)，藥品經(jīng)營(yíng)者只有掌握了比較扎實(shí)的醫(yī)學(xué)知識(shí)，才能把疾病和用藥更好的聯(lián)系起來(lái)。對(duì)于藥品經(jīng)營(yíng)者來(lái)說(shuō)，醫(yī)學(xué)知識(shí)是基礎(chǔ)，藥品知識(shí)才是關(guān)鍵，藥理學(xué)、藥事管理與法規(guī)、臨床藥學(xué)、醫(yī)藥商品學(xué)等課程依據(jù)所屬專業(yè)不同，可以適當(dāng)安排兩門或者兩門以上的課程學(xué)習(xí)。藥理學(xué)是藥學(xué)工作者必須掌握的一面學(xué)科，但是對(duì)于高職學(xué)生來(lái)說(shuō)，藥理學(xué)理論性過(guò)強(qiáng)，因此在知識(shí)的深度上可以降低一些，但是對(duì)于基本藥物的基本的藥理作用和不良反應(yīng)，必須要求學(xué)生掌握。只有這樣，當(dāng)患者有藥物需求時(shí)，藥品經(jīng)營(yíng)者才能比較準(zhǔn)確地幫助患者明確常見(jiàn)疾病及推薦合適的藥物。筆者在調(diào)研過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)大部分藥店工作人員都能熟練掌握藥品的基本作用，但是在疾病的簡(jiǎn)單判斷上，由于臨床知識(shí)的缺乏，相當(dāng)一部分的回答不盡如人意。例如，一位患者眼部紅腫疼痛，要購(gòu)買眼藥水，問(wèn)遍店內(nèi)工作人員其所患的是什么眼病，但是無(wú)一人能夠判斷，只是含糊的推薦患者使用用氯霉素眼藥水。疾病不能明確就推薦藥物，也是不合理用藥的一種表現(xiàn)。3.3重視用藥指導(dǎo)合理用藥是以當(dāng)代藥物和疾病的系統(tǒng)知識(shí)及理論為基礎(chǔ),安全、有效、經(jīng)濟(jì)、適當(dāng)?shù)厥褂盟幬?表現(xiàn)在給藥過(guò)程的各個(gè)環(huán)節(jié),包括藥物選擇正確,藥品使用保證安全有效、價(jià)格合理、劑量適當(dāng),給藥途徑適宜,合并用藥合理,病人依從性良好等方面[3]。那么在藥學(xué)類的高職教育過(guò)程中，教師就一定要加強(qiáng)這一部分，不僅從理論上講授，還要給出大量的實(shí)例，引起學(xué)生重視。比如說(shuō)藥物使用方法不當(dāng)，最近熱議的有“尼美舒利”兒童退燒藥不良反應(yīng)事件，很大一部分原因是因?yàn)樗幬锊缓侠淼氖褂?，?dāng)然也有藥品管理上有疏漏，很多藥店沒(méi)有嚴(yán)格按照處方藥管理規(guī)定出售。在調(diào)查過(guò)程中，對(duì)于之前的濫用抗生素這個(gè)問(wèn)題，目前確實(shí)引起了足夠的重視，藥店工作人員在推薦用藥時(shí)也比較謹(jǐn)慎，但是在執(zhí)行處方藥管理規(guī)定上，還不夠嚴(yán)格。另外值得提出的是，對(duì)于特殊人群用藥，很多店員都沒(méi)有給患者說(shuō)明，如果有患者問(wèn)及，就拿著藥物說(shuō)明書(shū)現(xiàn)看。這個(gè)也是不安全用藥的很常見(jiàn)的原因。在指導(dǎo)合理用藥過(guò)程中，最重要的并且藥學(xué)工作者普遍感覺(jué)比較困難的是，藥物之間的相互作用和潛在的不良反應(yīng)，這點(diǎn)與藥學(xué)工作者的藥學(xué)知識(shí)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)關(guān)系密切。一些已經(jīng)明確的藥物相互作用和不良反應(yīng)，大部分都寫進(jìn)了書(shū)本，教師要在教學(xué)過(guò)程中把知識(shí)活化，案例教學(xué)，調(diào)動(dòng)學(xué)生的積極性來(lái)學(xué)習(xí)。課堂之外，還盡可能的利用校內(nèi)模擬藥店，通過(guò)實(shí)訓(xùn)培養(yǎng)學(xué)生的職業(yè)技能。除了基礎(chǔ)性的學(xué)習(xí)外，隨著醫(yī)藥技術(shù)的迅猛發(fā)展,新、特藥層出不窮,很多藥物之間的相互作用和不良反應(yīng)還未顯現(xiàn)，需要在使用過(guò)程中及時(shí)發(fā)現(xiàn)及時(shí)報(bào)告，這就涉及到知識(shí)更新的問(wèn)題，藥學(xué)工作者一定要注意不斷加強(qiáng)學(xué)習(xí)，多閱讀藥物方面的報(bào)紙書(shū)籍。在教學(xué)過(guò)程中，教師也要跟上藥物發(fā)展的步伐，及時(shí)學(xué)習(xí)，并不斷把這些信息傳遞給學(xué)生。鼓勵(lì)學(xué)生利用寒暑假時(shí)間參加社會(huì)實(shí)踐，可以更好地把理論和實(shí)踐結(jié)合起來(lái)。3.4加強(qiáng)師資隊(duì)伍建設(shè)指導(dǎo)合理用藥，提供藥學(xué)服務(wù)是一項(xiàng)知識(shí)寬廣、應(yīng)用性強(qiáng)的工作，內(nèi)容從基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)到臨床藥學(xué)，涉獵范圍既廣泛又深入，且要求有一定的臨床經(jīng)驗(yàn)。為此，我們應(yīng)該選擇有實(shí)際工作經(jīng)驗(yàn)的教師上課，同時(shí)在教學(xué)過(guò)程中不斷提高改進(jìn)其教學(xué)方法；讓教師定期到醫(yī)院、藥房及藥店輪訓(xùn)學(xué)習(xí)；積極開(kāi)展教研室內(nèi)部合理用藥討論會(huì),以便教師之間能夠及時(shí)交流用藥知識(shí),營(yíng)造濃厚的學(xué)術(shù)氛圍。除了要注重藥學(xué)及相關(guān)學(xué)科的知識(shí)更新外,還應(yīng)注意學(xué)習(xí)藥政法規(guī)及藥品使用管理中的各項(xiàng)規(guī)定,加強(qiáng)法制觀念,依法辦事。3.5開(kāi)展多種形式的社會(huì)服務(wù)高職藥學(xué)教育工作者在做好基礎(chǔ)教育的同時(shí)，應(yīng)利用自身優(yōu)勢(shì)，加強(qiáng)對(duì)在職人員的繼續(xù)教育,有針對(duì)性地制訂培訓(xùn)計(jì)劃,因地制宜創(chuàng)造條件,采用多種形式(如對(duì)外培訓(xùn)、函授等)提高藥學(xué)工作者的專業(yè)水平。定期組織為藥學(xué)工作者和學(xué)生作有關(guān)合理用藥新知識(shí)、新進(jìn)展的學(xué)術(shù)報(bào)告,更新其合理用藥的觀念,提高相關(guān)知識(shí)水平。3.6普及用藥常識(shí)隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和科學(xué)技術(shù)知識(shí)的普及,人們?cè)絹?lái)越重視自身的保健,自我藥療行為已成為醫(yī)療保健體系的重要組成部分，那么消費(fèi)者對(duì)于疾病和藥物療效的認(rèn)知就很重要。在學(xué)院范圍內(nèi)，除了對(duì)藥學(xué)類專業(yè)的學(xué)生進(jìn)行必要的專業(yè)教育外，教師可以開(kāi)設(shè)醫(yī)藥類的公共選修課，或者舉辦各種類型的講座，讓非本專業(yè)的學(xué)生能夠了解到這些知識(shí)。對(duì)外，可以進(jìn)行各種形式的用藥宣傳活動(dòng)，或是發(fā)放宣傳冊(cè)，或是搞一些宣傳展板，幫助消費(fèi)者盡可能多的了解用藥常識(shí)。安全用藥關(guān)系到人民群眾生命健康,作為藥學(xué)服務(wù)的直接實(shí)施者，藥學(xué)工作者所接受的教育至關(guān)重要。藥學(xué)高職教育工作者應(yīng)該從思想上積極轉(zhuǎn)換觀念，認(rèn)真探索行之有效的教學(xué)方法，使合理用藥的觀念深入人心，使學(xué)生能盡快適應(yīng)崗位需要，指導(dǎo)患者安全有效用藥。

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1引言日本生物發(fā)酵舍零排放養(yǎng)豬法是根據(jù)微生態(tài)理論和生物發(fā)酵理論，采用特殊工藝加工而成的飼料添加劑，在豬舍內(nèi)建立并全面鋪設(shè)一定厚度的谷殼、鋸末和飼料添加劑等混合有機(jī)物墊料，豬飼養(yǎng)在上面，其所排出的糞尿在豬棚內(nèi)經(jīng)微生物完全發(fā)酵迅速降解、消化，從而達(dá)到免沖洗豬欄、無(wú)臭味、零排放，從源頭實(shí)現(xiàn)環(huán)保、無(wú)公害養(yǎng)殖目的。其技術(shù)原理是將添加劑、鋸木屑、谷殼、米糠、生豬糞按一定比例摻拌均勻并調(diào)整水分堆積發(fā)酵使有益微生物菌群繁殖，經(jīng)充分發(fā)酵后，鋪墊豬舍（40-100公分），在墊料中形成以有益菌為強(qiáng)勢(shì)菌的生物發(fā)酵墊料，使豬舍中病原菌得以抑制，保證了生豬的健康生長(zhǎng)。該生物發(fā)酵墊料中的有益菌以生豬糞尿?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)保持運(yùn)行，調(diào)節(jié)養(yǎng)殖密度，使生豬糞尿得到充分分解并轉(zhuǎn)化為水分得到揮發(fā)，達(dá)到豬舍無(wú)臭、無(wú)排放的環(huán)保要求，豬舍墊料一次投入，可連續(xù)使用三年不用更換。采用生物發(fā)酵舍零排放養(yǎng)豬技術(shù)后，由于有機(jī)墊料里含有相當(dāng)活洛性的特殊有益微生物，有夠迅速有效地降解、消化豬的糞尿排泄物。不需要每天清掃豬欄，沖洗豬舍，于是沒(méi)有任何沖洗圈舍的污水，從而沒(méi)有任何廢棄物排放出養(yǎng)豬場(chǎng)豬舍，真正達(dá)到養(yǎng)豬零排放的目的。微生物群落在零排放豬舍中起到?jīng)Q定性的作用，然而，基質(zhì)墊層中的微生物群落動(dòng)態(tài)研究，顯得十分的薄弱，一方面是由于許多功能微生物無(wú)法人工培養(yǎng)，另一方面，用分離微生物的方法研究微生物群落動(dòng)態(tài)工作量繁重，因此，相關(guān)的研究未見(jiàn)報(bào)道。作者引入FAME譜圖分析方法，研究微生物脂肪酸生物標(biāo)記（biomarker）變化動(dòng)態(tài)，指示微生物群落的變化。該墊料在使用1年半后，形成可直接用于果樹(shù)、農(nóng)作物有機(jī)肥，達(dá)到循環(huán)利用、變廢為寶的效果，另外，由于生物發(fā)酵舍養(yǎng)豬技術(shù)不有需要用水沖豬舍、不需要每天清除豬糞；采用自動(dòng)給食、自動(dòng)飲水技術(shù)等眾多優(yōu)勢(shì)，達(dá)到了省工節(jié)本的目的。可節(jié)水90%以上，在規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)應(yīng)用這項(xiàng)技術(shù)，經(jīng)濟(jì)效益十分明顯。FAME譜圖分析方法的原理是基于脂類幾乎是所有生物細(xì)胞膜的重要組成部分[1～3]ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Fraterrigo</Author><Year>2006</Year><RecNum>53</RecNum><record><rec-number>53</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="fapdftxw19rrf3ez2en5p9amvewz0ax0fxee">53</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Fraterrigo,J.M.</author><author>Balser,T.C.</author><author>Turner,M.G.</author></authors></contributors><auth-address>DepartmentofZoology,UniversityofWisconsin,Madison,Wisconsin53706,USA.jmfrater@</auth-address><titles><title>Microbialcommunityvariationanditsrelationshipwithnitrogenmineralizationinhistoricallyalteredforests</title><secondary-title>Ecology</secondary-title></titles><pages>570-9</pages><volume>87</volume><number>3</number><keywords><keyword>*Agriculture</keyword><keyword>AppalachianRegion</keyword><keyword>Bacteria/growth&development</keyword><keyword>Biomass</keyword><keyword>Ecosystem</keyword><keyword>FattyAcids/analysis</keyword><keyword>Fungi/growth&development</keyword><keyword>Nitrogen/*metabolism</keyword><keyword>Phospholipids/analysis</keyword><keyword>Soil/*analysis</keyword><keyword>*SoilMicrobiology</keyword><keyword>Trees/*microbiology</keyword></keywords><dates><year>2006</year><pub-dates><date>Mar</date></pub-dates></dates><accession-num>16602287</accession-num><urls><related-urls><url>/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=16602287</url></related-urls></urls></record></Cite></EndNote>(Fraterrigo,Balseretal.2006),不同微生物體內(nèi)往往具有不同的磷脂脂肪酸組成和含量水平，其含量和結(jié)構(gòu)具有種屬特征或與其分類位置密切相關(guān)，能夠標(biāo)志某一類或某種特定微生物的存在，是一類最常見(jiàn)的生物標(biāo)記物。但是古生菌不能使用FAME譜圖進(jìn)行分析,因?yàn)樗臉O性脂質(zhì)是以醚而不是酯鍵的形式出現(xiàn)[4]ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Steger</Author><Year>2003</Year><RecNum>168</RecNum><record><rec-number>168</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="fapdftxw19rrf3ez2en5p9amvewz0ax0fxee">168</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Steger,K.</author><author>Jarvis,A.</author><author>Smars,S.</author><author>Sundh,I.</author></authors></contributors><auth-address>DepartmentofMicrobiology,SwedishUniversityofAgriculturalSciences,Box7025,SE-75007Uppsala,Sweden.kristin.steger@mikrob.slu.se</auth-address><titles><title>Comparisonofsignaturelipidmethodstodeterminemicrobialcommunitystructureincompost</title><secondary-title>JMicrobiolMethods</secondary-title></titles><pages>371-82</pages><volume>55</volume><number>2</number><keywords><keyword>Biodegradation,Environmental</keyword><keyword>Bioreactors</keyword><keyword>FattyAcids/*analysis/metabolism</keyword><keyword>GasChromatography-MassSpectrometry</keyword><keyword>Phospholipids/*analysis/metabolism</keyword><keyword>RefuseDisposal/*methods</keyword><keyword>Soil/*analysis</keyword><keyword>*SoilMicrobiology</keyword></keywords><dates><year>2003</year><pub-dates><date>Nov</date></pub-dates></dates><accession-num>14529958</accession-num><urls><related-urls><url>/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=14529958</url></related-urls></urls></record></Cite></EndNote>(Steger,Jarvisetal.2003)。此外,磷脂不能作為細(xì)胞的貯存物質(zhì),一旦生物細(xì)胞死亡，其中的磷脂化合物就會(huì)馬上消失,因此，磷脂脂肪酸可以代表微生物群落中“存活”的那部分群體[5]ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Masood</Author><Year>2005</Year><RecNum>709</RecNum><record><rec-number>709</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="fapdftxw19rrf3ez2en5p9amvewz0ax0fxee">709</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Masood,A.</author><author>Stark,K.D.</author><author>Salem,N.,Jr.</author></authors></contributors><auth-address>LaboratoryofMembraneBiochemistryandBiophysics,NationalInstitutesonAlcoholAbuseandAlcoholism,NationalInstitutesofHealth,Rockville,MD,USA.</auth-address><titles><title>Asimplifiedandefficientmethodfortheanalysisoffattyacidmethylesterssuitableforlargeclinicalstudies</title><secondary-title>JLipidRes</secondary-title></titles><pages>2299-305</pages><volume>46</volume><number>10</number><keywords><keyword>Chemistry,Clinical/methods</keyword><keyword>Chromatography,Gas/*methods</keyword><keyword>Esters/*analysis/chemistry</keyword><keyword>FattyAcids/*analysis</keyword><keyword>Humans</keyword></keywords><dates><year>2005</year><pub-dates><date>Oct</date></pub-dates></dates><accession-num>16061957</accession-num><urls><related-urls><url>/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=16061957</url></related-urls></urls></record></Cite></EndNote>(Masood,Starketal.2005)。目前所知道的微生物已經(jīng)超過(guò)了十萬(wàn)種，這還是一個(gè)正在急劇擴(kuò)大著的數(shù)字。快速、準(zhǔn)確鑒定微生物日益成為臨床、環(huán)境和工業(yè)領(lǐng)域的迫切需要。通常把鑒定微生物的技術(shù)分成四個(gè)不同的水平：①細(xì)胞的形態(tài)和習(xí)性水平②細(xì)胞組分水平③蛋白質(zhì)水平④基因或DNA水平[6]ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Webster</Author><Year>2006</Year><RecNum>186</RecNum><record><rec-number>186</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="fapdftxw19rrf3ez2en5p9amvewz0ax0fxee">186</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Webster,G.</author><author>Watt,L.C.</author><author>Rinna,J.</author><author>Fry,J.C.</author><author>Evershed,R.P.</author><author>Parkes,R.J.</author><author>Weightman,A.J.</author></authors></contributors><auth-address>CardiffSchoolofBiosciences,CardiffUniversity,MainBuilding,ParkPlace,Cardiff,WalesCF103TL,UK.websterg@cardiff.ac.uk</auth-address><titles><title>Acomparisonofstable-isotopeprobingofDNAandphospholipidfattyacidstostudyprokaryoticfunctionaldiversityinsulfate-reducingmarinesedimentenrichmentslurries</title><secondary-title>EnvironMicrobiol</secondary-title></titles><pages>1575-89</pages><volume>8</volume><number>9</number><keywords><keyword>DNAFingerprinting/methods</keyword><keyword>DNA,Bacterial/isolation&purification</keyword><keyword>FattyAcids</keyword><keyword>Genes,Bacterial/genetics</keyword><keyword>GeologicSediments/*microbiology</keyword><keyword>IsotopeLabeling/methods</keyword><keyword>MolecularSequenceData</keyword><keyword>Phospholipids/chemistry</keyword><keyword>Phylogeny</keyword><keyword>RNA,Ribosomal,16S/genetics</keyword><keyword>Sulfates/metabolism</keyword><keyword>Sulfur-ReducingBacteria/*classification/genetics/metabolism</keyword></keywords><dates><year>2006</year><pub-dates><date>Sep</date></pub-dates></dates><accession-num>16913918</accession-num><urls><related-urls><url>/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=16913918</url></related-urls></urls></record></Cite></EndNote>(Webster,Wattetal.2006)。。在微生物分類學(xué)發(fā)展的早期，主要的分類鑒定指標(biāo)尚停留在細(xì)胞的形態(tài)和習(xí)性水平，從本世紀(jì)60年代起，后三個(gè)水平的分類鑒定理論和技術(shù)開(kāi)始發(fā)展。脂類是最常見(jiàn)的生物標(biāo)志物，現(xiàn)代微生物學(xué)研究表明：微生物細(xì)胞結(jié)構(gòu)中普遍含有的脂肪酸成分與微生物DNA具有高度的同源性，各種微生物具有其特征性的細(xì)胞脂肪酸指紋圖譜[7]ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Neufeld</Author><Year>2007</Year><RecNum>118</RecNum><record><rec-number>118</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="fapdftxw19rrf3ez2en5p9amvewz0ax0fxee">118</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Neufeld,J.D.</author><author>Dumont,M.G.</author><author>Vohra,J.</author><author>Murrell,J.C.</author></authors></contributors><auth-address>DepartmentofBiologicalSciences,UniversityofWarwick,Coventry,CV47AL,UK.</auth-address><titles><title>Methodologicalconsiderationsfortheuseofstableisotopeprobinginmicrobialecology</title><secondary-title>MicrobEcol</secondary-title></titles><pages>435-42</pages><volume>53</volume><number>3</number><keywords><keyword>Biodiversity</keyword><keyword>CarbonIsotopes/diagnosticuse</keyword><keyword>DNA/analysis/isolation&purification</keyword><keyword>*EnvironmentalMicrobiology</keyword><keyword>FattyAcids/analysis</keyword><keyword>IsotopeLabeling/*methods</keyword><keyword>RNA/analysis</keyword><keyword>SensitivityandSpecificity</keyword></keywords><dates><year>2007</year><pub-dates><date>Apr</date></pub-dates></dates><accession-num>17072677</accession-num><urls><related-urls><url>/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=17072677</url></related-urls></urls></record></Cite></EndNote>(Neufeld,Dumontetal.2007)，脂類作為標(biāo)志物用于細(xì)菌鑒定早在6O年代就開(kāi)始了。利用GC或GC-MS分析微生物細(xì)胞的脂肪酸分布，是從細(xì)胞組分水平上鑒定微生物的重要內(nèi)容，開(kāi)辟了一個(gè)微生物檢測(cè)和鑒定的新途徑[8]ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Winding</Author><Year>2005</Year><RecNum>192</RecNum><record><rec-number>192</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="fapdftxw19rrf3ez2en5p9amvewz0ax0fxee">192</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Winding,A.</author><author>Hund-Rinke,K.</author><author>Rutgers,M.</author></authors></contributors><auth-address>DepartmentofEnvironmentalChemistryandMicrobiology,NationalEnvironmentalResearchInstitute(NERI),Frederiksborgvej399,P.O.Box358,4000Roskilde,Denmark.aw@dmu.dk</auth-address><titles><title>Theuseofmicroorganismsinecologicalsoilclassificationandassessmentconcepts</title><secondary-title>EcotoxicolEnvironSaf</secondary-title></titles><pages>230-48</pages><volume>62</volume><number>2</number><keywords><keyword>Bacteria</keyword><keyword>Biomass</keyword><keyword>CarbonDioxide/metabolism</keyword><keyword>Ecology</keyword><keyword>EnvironmentalMonitoring/*methods</keyword><keyword>Fungi</keyword><keyword>Mycorrhizae</keyword><keyword>Nitrogen/metabolism</keyword><keyword>Oxygen/metabolism</keyword><keyword>*Soil</keyword><keyword>*SoilMicrobiology</keyword></keywords><dates><year>2005</year><pub-dates><date>Oct</date></pub-dates></dates><accession-num>15925407</accession-num><urls><related-urls><url>/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=15925407</url></related-urls></urls></record></Cite></EndNote>(Winding,Hund-Rinkeetal.2005)。磷脂脂肪酸PLlFAs(phospholipidsfattyacid,磷脂脂肪酸PlFAs)法是一種可用于定性和定量分析土壤微生物復(fù)雜微生物群落多樣性的方法[9-11]ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Torneman</Author><Year>2007</Year><RecNum>175</RecNum><record><rec-number>175</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="fapdftxw19rrf3ez2en5p9amvewz0ax0fxee">175</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Torneman,N.</author><author>Yang,X.</author><author>Baath,E.</author><author>Bengtsson,G.</author></authors></contributors><titles><title>SpatialCovariationofMicrobialCommunityCompositionandPolycyclicAromaticHydrocarbonConcentrationinaCreosotePollutedSoil</title><secondary-title>EnvironToxicolChem</secondary-title></titles><pages>1</pages><dates><year>2007</year><pub-dates><date>Dec17</date></pub-dates></dates><accession-num>18085835</accession-num><urls><related-urls><url>/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=18085835</url></related-urls></urls></record></Cite></EndNote>(Torneman,Yangetal.2007)?磷脂是所有生活細(xì)胞的細(xì)胞膜的基本組分，具有結(jié)構(gòu)多樣性和高的生物學(xué)特異性，是特別有效的生物標(biāo)記物。本研究應(yīng)用PlFAs法分析零排放豬場(chǎng)豬舍基質(zhì)墊層微生物群落磷脂脂肪酸生物標(biāo)記特征,并結(jié)合Shannon-wiener(H1)?豐富度指數(shù)(S)和Pielou均勻度(J)等多樣性指數(shù)測(cè)定度方法,進(jìn)行微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記總量的比較、微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記的檢測(cè)和聚類分析、微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記多樣性指數(shù)、基質(zhì)墊層微生物脂肪酸生物標(biāo)記特征指數(shù)B的分析，基質(zhì)墊層耗氧細(xì)菌和厭氧細(xì)菌脂肪酸生物標(biāo)記發(fā)酵指數(shù)F的分析，揭示養(yǎng)豬糞便排放過(guò)程，基質(zhì)墊層微生物變化的特點(diǎn)，從而了解微生物群落的變化，找出零排放豬場(chǎng)豬舍基質(zhì)墊層糞便分解功能的微生物指標(biāo)，作為監(jiān)控零排放豬場(chǎng)豬舍基質(zhì)墊層功能發(fā)揮的標(biāo)準(zhǔn)。2材料與方法2.1基質(zhì)墊層微生物群落取樣零排放豬場(chǎng)豬舍基質(zhì)墊層微生物群落取樣于寧德地區(qū)農(nóng)科所養(yǎng)殖場(chǎng)，基質(zhì)墊層用日本洛東微生物菌種（福州洛東公司生產(chǎn)）處理兩個(gè)月，零排放I號(hào)菌種（研究者自行研制）處理一個(gè)月，兩個(gè)欄緊靠著，基質(zhì)墊層高度80cm，養(yǎng)豬分別在前者60和后者30天后進(jìn)行取樣；取樣層分為第一層第1層（0-20cm）、第二層第2層（20-40cm）、第三層第3層（40-60cm）、第四層第4層（60-80cm）；取樣方法為五點(diǎn)取樣，每層的樣本充分混合后取出小樣進(jìn)行微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記分析。2.2微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記的檢測(cè)ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Margesin</Author><Year>2007</Year><RecNum>109</RecNum><record><rec-number>109</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="fapdftxw19rrf3ez2en5p9amvewz0ax0fxee">109</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Margesin,R.</author><author>Hammerle,M.</author><author>Tscherko,D.</author></authors></contributors><auth-address>InstituteofMicrobiology,LeopoldFranzensUniversity,Technikerstrasse25,A-6020Innsbruck,Austria.Rosa.Margesin@uibk.ac.at</auth-address><titles><title>Microbialactivityandcommunitycompositionduringbioremediationofdiesel-oil-contaminatedsoil:effectsofhydrocarbonconcentration,fertilizers,andincubationtime</title><secondary-title>MicrobEcol</secondary-title></titles><pages>259-69</pages><volume>53</volume><number>2</number><keywords><keyword>Biodegradation,Environmental</keyword><keyword>ColonyCount,Microbial</keyword><keyword>Dihydropyridines</keyword><keyword>*EnvironmentalMonitoring</keyword><keyword>FattyAcids/metabolism</keyword><keyword>Fertilizers/analysis</keyword><keyword>*Gasoline/analysis</keyword><keyword>Gram-NegativeBacteria/growth&development/isolation&</keyword><keyword>purification/*metabolism</keyword><keyword>Hydrocarbons/analysis</keyword><keyword>Lipase/metabolism</keyword><keyword>Petroleum/analysis/metabolism</keyword><keyword>Phospholipids/metabolism</keyword><keyword>*SoilMicrobiology</keyword><keyword>SoilPollutants/*metabolism</keyword><keyword>SpeciesSpecificity</keyword><keyword>TimeFactors</keyword></keywords><dates><year>2007</year><pub-dates><date>Feb</date></pub-dates></dates><accession-num>17265002</accession-num><urls><related-urls><url>/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=17265002</url></related-urls></urls></record></Cite></EndNote>(Margesin,Hammerleetal.2007)PLFAs的提取方法參考Frostegard[12]和Kourtev[13]略做修改。脂肪酸提取步驟：1）脂肪酸的釋放和甲酯化，取10g土樣于50ml離心管中，加入20ml0.2mol/L的KOH甲醇溶液，斡旋震蕩５min，并于37度水浴溫?。県，每10min斡旋樣品一次。2）中和溶液pH值：加入3ml溶1.0mol/L的醋酸溶液，充分搖勻。3）脂肪酸的萃取：加入10ml正已烷，充分搖勻，2000r離心15min，取上層正己烷相于干凈玻璃試管中，吹干，溶劑揮發(fā)。4）在玻璃試管中加入0.6ml體積比為1:1的正已烷:甲基丁基醚溶液中，充分溶解３-５min，轉(zhuǎn)入GC小瓶，用于脂肪酸測(cè)定。溶液配制：溶液1，0.2MKOH甲醇溶液。溶液2，1.0MHAc溶液。溶液3，正己烷。溶液4，正己烷:甲基叔丁基醚1:1?脂肪酸提取步驟：1）脂肪酸的釋放和甲酯化，取10g土樣于50ml離心管中，加入20ml溶液１，斡旋震蕩５min，并于37度水浴溫?。県，每10min斡旋樣品一次。中和溶液pH：加入3ml溶液２，充分搖勻。脂肪酸的萃?。杭尤?0ml溶液３，充分搖勻，2000r離心15min，取上層正己烷相于干凈玻璃試管中，吹干，溶劑揮發(fā)。在玻璃試管中加入0.6ml溶液４，充分溶解３-５min，轉(zhuǎn)入GC小瓶，用于脂肪酸測(cè)定。樣品脂肪酸成份檢測(cè)及成份分析參照Margesin等[14]。脂肪酸成份檢測(cè)：用微生物自動(dòng)分析儀（SherlockMIS美國(guó)MIDI公司生產(chǎn)）分析微生物脂肪酸生物標(biāo)記，在下述氣相色譜條件下平行分析脂肪酸甲酯混合物標(biāo)樣和待檢樣本：二階程序升高柱溫，170℃起始，經(jīng)5℃/min升至260℃，而后經(jīng)40℃/min升至310℃，維持90S；汽化室溫度250℃；檢測(cè)器溫度300℃；載氣為H2(2ml/min)，進(jìn)樣模式為分流進(jìn)樣，分流比為100:1；輔助氣：Air（350ml/min），H2（30ml/min）；尾吹氣為N2(30ml/min)；柱前壓l0.00psi(1Psi=6.895kPa)；進(jìn)樣量lμl。脂肪酸成份分析：系統(tǒng)根據(jù)各組分保留時(shí)間計(jì)算等鏈長(zhǎng)(ECl)值確定目標(biāo)組分的存在、采用峰面積歸一化法計(jì)算各組分的相對(duì)含量，再將二者與系統(tǒng)譜庫(kù)中的標(biāo)準(zhǔn)菌株數(shù)值匹配計(jì)算相似度(similarityindex，SI)，從而給出一種或幾種可能的菌種鑒定結(jié)果。一般以最高SI的菌種名稱作為鑒定結(jié)果，但當(dāng)其報(bào)告的幾個(gè)菌種的SI比較接近時(shí)，則根據(jù)色譜圖特征及菌落生長(zhǎng)特性進(jìn)行綜合判斷。以脂肪酸混合標(biāo)樣校正保留時(shí)間。2.3微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記總量的比較將兩個(gè)微生物菌種處理的基質(zhì)墊層各層微生物脂肪酸生物標(biāo)記分別計(jì)算總和，以微生物脂肪酸生物標(biāo)記總和代表微生物群落總量，作圖比較不同菌種處理的基質(zhì)墊層各層微生物群落總量的變化，分析處理的效果。2.4微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記的檢測(cè)將樣本微生物脂肪酸生物標(biāo)記（PFlAs）分析的結(jié)果，以處理層次為指標(biāo)，以脂肪酸生物標(biāo)記為樣本，構(gòu)建表格，總體分析各脂肪酸生物標(biāo)記（PFlAs）在各處理基質(zhì)墊層中的分布。2.5微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記的聚類分析將樣本微生物脂肪酸生物標(biāo)記（PFlAs）分析的結(jié)果，以處理層次為指標(biāo)，以脂肪酸生物標(biāo)記為樣本，構(gòu)建矩陣，將數(shù)據(jù)進(jìn)行中心化處理，蘭氏歐氏距離為聚類尺度，用類平均法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行系統(tǒng)聚類，分析各類的特點(diǎn)。2.6微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記多樣性指數(shù)引入群落生態(tài)學(xué)Pielou均勻度指數(shù)（J），對(duì)微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記在不同處理各層次分布的均勻度進(jìn)行分析，均勻度指數(shù)越高，表明微生物生物標(biāo)記（PFlAs）在基質(zhì)墊層各層次分布的頻次較高，分布較為均勻，其計(jì)算公式為：J=-∑PilnPi/lnS式中S為群落中的脂肪酸的總種類數(shù)。引入群落生態(tài)學(xué)多樣性指數(shù)香農(nóng)指數(shù)（H），對(duì)微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記在不同處理各層次分布的多樣性指數(shù)進(jìn)行分析，多樣性指數(shù)高，表明微生物生物標(biāo)記（PFlAs）在基質(zhì)墊層各層次分布的總量較高，分布的格局較復(fù)雜，Shannon-wiener多樣性指數(shù)（H1）的計(jì)算公式為：H=-∑PilnPi式中，Pi=Ni/N，Ni為處理i的特征脂肪酸個(gè)數(shù)，N為該試驗(yàn)中總特征脂肪酸個(gè)數(shù)。S為特征脂肪酸i在供測(cè)土樣中出現(xiàn)的次數(shù)，即豐富度指數(shù)。2.7不同基質(zhì)墊層特征微生物脂肪酸生物標(biāo)記特征指數(shù)（B）的分析選用微生物脂肪酸生物標(biāo)記16:00代表細(xì)菌數(shù)量，18:3ω6c(6,9,12)代表真菌數(shù)量，20:4ω6,9,12,15c代表原生生物數(shù)量，TBSA10Me18:0代表放線菌數(shù)量，比較分析基質(zhì)墊層各層次微生物分布的情況。構(gòu)建生物標(biāo)記特征指數(shù)，細(xì)菌用16:00代表，真菌用18:3ω6c(6,9,12)代表，原生動(dòng)物用20:4ω6,9,12,15c代表，放線菌用TBSA10Me18:0代表，生物標(biāo)記特征指數(shù)（B）公式為：特征指數(shù)B越小，表明細(xì)菌和真菌的含量相對(duì)較少。2.8不同基質(zhì)墊層耗氧細(xì)菌和厭氧細(xì)菌脂肪酸生物標(biāo)記發(fā)酵指數(shù)F的分析選用微生物脂肪酸生物標(biāo)記17:0ISO代表耗氧細(xì)菌，18:1ω7c代表厭氧細(xì)菌，計(jì)算耗氧細(xì)菌/厭氧細(xì)菌的比例，分析基質(zhì)墊層各層次耗氧細(xì)菌和厭氧細(xì)菌分布的情況。用17:0ISO代表耗氧細(xì)菌，用18:1ω7c代表厭氧細(xì)菌，構(gòu)建發(fā)酵指數(shù)F，公式為：3結(jié)果與分析3.1微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記的比較試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1。脂肪酸生物標(biāo)記總量代表著微生物的總含量。日本洛東微生物菌種處理組和零排放I號(hào)菌種處理組各層微生物脂肪酸生物標(biāo)記含量變化趨勢(shì)相近，兩個(gè)處理的第二層第2層微生物含量最低，其余較高；前者的各層微生物脂肪酸生物標(biāo)記含量比后者略高。日本洛東微生物菌種處理組第一層第1層為268249、第二層第2層為133483、第三層第3層為270406、第四層第4層為271520；零排放I號(hào)菌種處理組203721、第二層第2層184572、第三層第3層220481、第四層第4層236522。日本洛東微生物菌種零排放I號(hào)菌種圖1不同微生物菌種處理組各層脂肪酸生物標(biāo)記總量變化3.2微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記在基質(zhì)墊層中的分布試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。從不同微生物菌種處理組基質(zhì)墊層的不同層次中分析出37個(gè)脂肪酸生物標(biāo)記，指示著不同類群的微生物，包括細(xì)菌、真菌、放線菌、原生生物等。不同脂肪酸生物標(biāo)記在基質(zhì)墊層的各層次的分部有幾種類型：（1）生物標(biāo)記數(shù)量小，在各層中的分布不完全，如11:0ISO3OH指示著耗氧細(xì)菌，數(shù)量在220以下，在洛東微生物菌種處理組僅分布在第二層第2層（20-40cm）,其余層次沒(méi)有分布，零排放I號(hào)微生物菌種處理組分布在第一、二、三層次，第四層第4層次沒(méi)有分布；（2）生物標(biāo)記數(shù)量小，在各層次的分布為完全分布，如12:00指示著細(xì)菌，數(shù)量在576-1329之間，在兩種微生物菌種處理的基質(zhì)墊層的各層完全分布；（3）生物標(biāo)記數(shù)量大，在各層次的分布不完全，如17:0ISO3OH指示著耗氧細(xì)菌，數(shù)量在1854-10315之間，在洛東微生物菌種處理組各層次中僅在第二、三層中分布，零排放I號(hào)微生物菌種處理組各層次中在第一、三、四層中分布，第二層第2層沒(méi)有分布；（4）生物標(biāo)記數(shù)量大，在各層次的分布為完全分布，如18:1ω9c指示著細(xì)菌，數(shù)量在31320-107126之間，在兩種微生物菌種處理的基質(zhì)墊層的各層完全分布。表1不同微生物菌種處理組脂肪酸生物標(biāo)記在各層的分布生物標(biāo)記序號(hào)/代碼/指示微生物種類洛東微生物菌種處理組零排放I號(hào)微生物菌種處理組第一層第1層第二層第2層第三層第3層第四層第4層第一層第1層第二層第2層第三層第3層第四層第4層11:0ISO1. O9022000149193139011:0ISO3OH2. O10441038303650060912:003. O117797067815761329115595796812:03OH4. O135780547048042155636813:0ISO5. O224270366036526343330314:006. O243518176532312105358635193664344414:0ISO7. O26182660314391021148113141450121115:0ANTEISO8. O3314518448395684518110921081012235926815:0ISO9. O341547952261249484371277511449131801128815:0ISO3OH10. O35332152133011301256433312378259015:1ISOG11. O3815310134351844953158254816:0012. O42細(xì)菌592613237860500667355123548358561785661516:010methyl13. O43硫酸鹽還原細(xì)菌9400275592319427000680316:0ANTEISO14. O4610414369097435775101091114316:0ISO15. O4710313506785565281708166967885738716:0Nalcohol16. O49544064661048573856086816:1ω5c17. O56甲烷氧化菌1806016651985123201287217016:1ω9c18. O59001027000756017:0019. O603213179330582820289627783312329017:010methyl20. O611252818117756550637854359317:0ANTEISO21. O637216246150272967485547535438471517:0CYClO22. O645972218548562938579942415849580117:0ISO23. O65耗氧細(xì)菌4989198644092745366639664032369517:0ISO3OH24. O66018541031507664064171102017:1ω8c25. O712375110423992779183914711813190817:1ω9cISO26. O1200000449253705119018:0027. O7392406890103538698782072718510869318:0ISO28. O2006078279448504271517443674408633218:010MeTBSA29. O122放線菌3572129832311541243523422518412718:1ω7c11methyl30. O54779182463360024280404418:1ω7c31. O87厭氧細(xì)菌16247672216772137581129212713125031136118:1ω9c32. O885311335554592591071263498231320409815074018:3ω6c(6,9,12)33. O92真菌2252151230472010181716911916222219:0ω8cCYClO34. O971145361371100011264827466018947776220:0035. O1001462173412571159117711221384120320:1ω9c36. O1047101291114711817388690020:4ω6,9,12,15c37. O199原生動(dòng)物954313665926244130501603346034333.3微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記的聚類分析分析結(jié)果見(jiàn)圖2。當(dāng)λ1=6.791時(shí)，可將基質(zhì)墊層的微生物脂肪酸生物標(biāo)記分為23類，第一類類型Ⅰ中含有脂肪酸生物標(biāo)記15:0ANTEISO（耗氧細(xì)菌）、18:00（細(xì)菌）、15:0ISO（耗氧細(xì)菌）、16:0ISO（耗氧細(xì)菌）、18:1ω7c（厭氧細(xì)菌）、16:00（細(xì)菌）和、18:1ω9c（細(xì)菌），其特征為生物標(biāo)記含量高，數(shù)量在67475-431260之間，同時(shí)在不同層次基質(zhì)墊層中皆為完全分布、微生物都是細(xì)菌；。第二類型Ⅱ中含有脂肪酸生物標(biāo)記17:0CYClO、19:0ω8cCYClO、17:0ISO3OH和18:1ω7c11methyl，其特征是生物標(biāo)記含量中等，17:0CYClO和19:0ω8cCYClO兩種脂肪酸標(biāo)記在不同層次基質(zhì)墊層中完全分布，17:0ISO3OH和18:1ω7c11methyl兩種脂肪酸標(biāo)記在不同層次基質(zhì)墊層中不完全分布；類Ⅲ為其余的脂肪酸生物標(biāo)記，數(shù)量差異較大，但都在60000以下，在基質(zhì)墊層中分布的形式多樣化，有完全分布和不完全分布，微生物中含有細(xì)菌、真菌、放線菌、原生生物等。圖2基質(zhì)墊層微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記的聚類分析3.4微生物群落脂肪酸生物