高效液相色譜儀驗證

中心化驗室高效液相色譜儀驗證一）驗證方案二）驗證報告藥業(yè)有限公司

中心化驗室型高效液相色譜儀驗證方案SOP-YZ-???)制定日期審查日期制定日期審查日期審核日期批準日期方案審查人方案審核人方案批準人藥業(yè)有限公司目錄1、概述2、驗證目的3、驗證實施小組成員及有關責任4、驗證文件5、合格標準6、驗證方法和步驟7、驗證結果分析和綜合評價8、最終評價9、驗證周期10、驗證記錄1、概述高效液相色譜法(HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC)是一種現(xiàn)代液相色譜法，其基本方法是用高壓輸液泵將流動相泵入到裝有填充劑的色譜柱,注入的供試品被流動相帶入柱內進行分離后,各成分先后進入檢測器,用記錄儀或數(shù)據(jù)處理裝置記錄色譜圖并進行數(shù)據(jù)處理,得到測定結果。由于應用了各種特性的微粒填料和加壓的液體流動相,本法具有分離性能高、分析速度快的特點。高效液相色譜儀由輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。其中LC-2010和Agilentll00型為單泵型，LC-20AB型為雙泵型高效液相色譜儀。2、驗證目的檢查并確認高效液相色譜儀運行性能符合要求。3、 驗證實施小組成員及有關責任驗證實施小組組長???負責協(xié)調及異常情況的處理；操作員??????負責驗證的具體操作工作；QA???負責監(jiān)督實施本方案。4、 主要驗證文件高效液相色譜法(SOP-ZL-???)、中華人民共和國國家計量檢定規(guī)程液相色譜儀(JJG705-2002)、UV-VIS檢測器SPD-20A/SPD-20AV說明書、溶液傳輸單元LC-20AB說明書、中華人民共和國藥典2005年版二部、LC-2010A/2010C操作說明書安裝手冊和維修手冊。5、 合格標準驗證部件驗證項目合格標準輸液泵流量設定值誤差SS0.5ml/min:V5%；1.0ml/min:<3%；2.0ml/min:<2%流量穩(wěn)定性誤差SR0.5ml/min:<3%；1.0ml/min:<2%；2.0ml/min:<2%柱溫箱柱箱溫度設定值誤差ATS<±2°C柱箱控溫穩(wěn)定性TCW1°C自動進樣器進樣量準確度誤差W±2%檢測器基線噪聲W2X10-5AU最小檢測濃度W1X10-7g/mL(萘的甲醇溶液)基線漂移W5X10-4AU/h整機性能定性測量重復性誤差RSDW0.5%定量測量重復性誤差RSDW1.0%6、驗證方法和步驟驗證方法整個驗證過程分為單個部件的驗證和整機驗證。驗證時一般先驗證泵、柱溫箱、自動進樣器的性能，接著是檢測器的性能，最后是整機的性能驗證。驗證步驟6.2.1輸液泵泵流量設定值誤差S、流量穩(wěn)定性誤差S的檢定SR將儀器的輸液系統(tǒng)，進樣器、色譜柱和檢測器聯(lián)接好，以甲醇為流動相，流量設為1.0mL/min,按說明書啟動儀器，待壓力平穩(wěn)后保持10分鐘，按表1設定流量，待流速穩(wěn)定后，在流動相排出口用事先清洗稱重過的容量瓶收集流動相，同時用秒表計時，準確地收集，稱重。按式(1)、式(2)計算S和S。SR表1流量設定值(mL/min)0.51.02.0測量次數(shù)333流動相收集時間(min)1055S=（F—F）/FX100%……（1）S mSSS=(F—F)/FX100%……(2)Rmaxmin式中：S——流量設定值誤差(％)；SS——流量穩(wěn)定性誤差(％)；RF=(W—W)/p?t,流量實測值(mL/min)；m2 1 TW——容量瓶+流動相的重量(g)；2W——容量瓶的重量(g)；1F——流量設定值(mL/min)；Sp——實驗溫度下流動相的密度(g/cm3)；Tt 收集流動相的時間(min)；F——同一組測量中流量最大值(mL/min)；maxF——同一組測量中流量最小值(mL/min)；minF 同一組測量值的算術平均值(mL/min)。輸液泵泵流量設定值誤差S、流量穩(wěn)定性誤差S的檢定記錄見附錄一SR6.2.2柱溫箱柱箱溫度設定值誤差△T和控溫穩(wěn)定性T的檢定SC將數(shù)字溫度計探頭固定在柱溫箱內，選擇35°C和45°C進行檢定。按儀器說明書操作,通電升溫,待溫度穩(wěn)定后,記下溫度計讀數(shù)并開始計時,以后每隔10min記錄一次讀數(shù)，共計7次,求出平均值。平均值與設定值之差為厶T,S7次讀數(shù)中最大值與最小值之差為控溫穩(wěn)定性T。C柱溫箱柱箱溫度設定值誤差△T和控溫穩(wěn)定性T的檢定原始記錄見附錄二。SC自動進樣器進樣量準確度誤差的檢定取1.5ml進樣瓶裝入1ml水，用天平精密稱定其重量，然后置于自動進樣器上讓其進樣10次，每次50p1。進樣完成后再精密稱定其重量，由重量差計算進樣量準確度。自動進樣器進樣量準確度誤差的檢定原始記錄見附錄三。檢測器的檢定檢測器基線噪聲和基線漂移的測定取C色譜柱，以100%甲醇為流動相，流量為1.0m1/min,檢測器波長設18定為254nm，開機預熱，待儀器穩(wěn)定后(約60min)記錄基線60min，從30min內基線上讀出噪音值；從60min基線上讀出基線漂移值。檢測器最小檢測濃度的測定取C色譜柱，以100%甲醇為流動相，流量為1.0m1/min，檢測器波長設18定為254nm,開機預熱，待儀器穩(wěn)定后取lX10-7g/m1的萘/甲醇溶液進樣20p1，記錄色譜圖，由色譜峰峰高和基線噪聲峰峰高計算最小檢測濃度C。公式如下:LC=(2XNXC)/HLd式中C——最小檢測濃度，g/m1；LN——基線噪聲峰峰高，mm；dC——標準溶液濃度，g/ml；H——標準溶液峰峰高，mm。檢測器的檢定原始記錄見附錄四。整機性能的檢定取C色譜柱，以100%甲醇為流動相，流量為1.0m1/min，檢測器波長設18定為254nm（當選用萘時）或272nm（當選用咖啡因時），柱溫設定為40°C。開機預熱待儀器穩(wěn)定后取0.1mg/ml的萘/甲醇溶液或0.02mg/ml的咖啡因甲醇溶液進樣10p1,連續(xù)進樣6次，記錄其峰面積和保留時間，以保留時間計算其定性測量重復性誤差，以峰面積計算其定量測定重復性誤差。整機性能的檢定原始記錄見附錄五。7、驗證結果分析和綜合評價驗證部件驗證項目合格標準驗證結果結論輸液泵流量設定值誤差SS0.5m1/min:V5%1.0m1/min:V3%2.0m1/min:<2%流量穩(wěn)定性誤差SR0.5m1/min:<3%；1.0m1/min:<2%；2.0m1/min:<2%柱溫箱柱箱溫度設定值誤差卜Ts<±2C柱箱控溫穩(wěn)定性TCW1C自動進樣器進樣量準確度誤差W±2%檢測器基線噪聲W2X10-5AU最小檢測濃度<1X10-7g/mL（萘的甲醇溶液）基線漂移W5X10-4AU/h整機性能定性測量重復性誤差RSDW0.5%定量測量重復性誤差RSDW1.0%驗證小組簽名人員日期部門8、最終批準批準人：批準日期：年月日9、驗證周期10、驗證記錄輸液泵泵流量設定值誤差s、流量穩(wěn)定性誤差s的檢定記錄SR柱溫箱柱箱溫度設定值誤差AT和控溫穩(wěn)定性T的檢定原始記錄sC自動進樣器進樣量準確度誤差的檢定原始記錄(4)檢測器的檢定原始記錄(5)整機性能的檢定原始記錄

附錄 S R 液相色譜儀型號： 泵型號： 流動相： 色譜柱： 檢定日期： 檢FS0.5ml/min1.0ml/min第一次第二次第三次第一次第二次第三次第W1W2tTPtF=(W—W)/p?tm 2 1 TS=(F—F)/FX100%S m S S平均SSF=(F+F+F)/3ml m2 m3FmaxFminS=(F—F)/FX100%R max min此項檢定結論：附錄二柱溫箱柱箱溫度設定值誤差△T和控溫穩(wěn)定性T的檢定原始記錄SC液相色譜儀型號： 柱溫箱型號： 數(shù)字溫度儀型號：T設定35°C45C時間讀數(shù)時間讀數(shù)穩(wěn)定時第1次第2次第3次第4次第5次第6次第7次T平均T最大T最小ATs=T平均-T設定T=T-TC 最大 最小此項檢定結論：附錄三液相色譜儀型號： 自動進樣器型號： TOC\o"1-5"\h\z進樣前進樣瓶加水的總重：W= g；1 進樣后進樣瓶加水的總重：W= g；2 檢定溫度： °C,水的密度p g/ml；X100%進樣量準確度誤差二[(W「W2)-(50X10X10-3Xp)]/(50X10X10-3XpX100%此項檢定結論：附錄四檢測器的檢定原始記錄液相色譜儀型號： 檢測器型號： 流動相： 流速： 色譜柱： 萘甲醇標準溶液濃度C： 配