5體內(nèi)藥物分析z課件

體內(nèi)藥物分析BiopharmaceuticalanalysisChap.52/18/20241精選2021版課件第一節(jié)體內(nèi)藥物分析概述

——

藥物分析的重要分支學(xué)科 ——研究生物機(jī)體中外源性藥物及其代謝物

和內(nèi)源性活性物質(zhì)的質(zhì)與量的變化規(guī)律 ——綜合性較強(qiáng)的應(yīng)用學(xué)科——分析方法學(xué) ——治療藥物監(jiān)測研究的重要的實(shí)驗(yàn)手段2/18/20242精選2021版課件

藥物進(jìn)入體內(nèi)后

——經(jīng)過吸收、分布、代謝和排泄等動力學(xué)過程

——化學(xué)結(jié)構(gòu)和存在狀態(tài)都可能發(fā)生變化

——在不同個體中存在差異（個體差異）

——進(jìn)而直接影響到藥物在不同個體中的治療效應(yīng)和毒副作用需對生物體內(nèi)藥物及其代謝物進(jìn)行研究分析2/18/20243精選2021版課件狹義：利用現(xiàn)代分析儀器和分離手段對人和動物血液、尿和組織等樣品進(jìn)行定性定量的分析廣義：通過體內(nèi)藥物濃度的分析，了解藥物在體內(nèi)的數(shù)量和質(zhì)量的變化，獲得藥代動力學(xué)參數(shù)，為藥品的生產(chǎn)、臨床應(yīng)用作出評價體內(nèi)藥物分析的定義2/18/20244精選2021版課件一體內(nèi)藥物分析的性質(zhì)體內(nèi)藥物分析是一門研究生物機(jī)體中藥物及其代謝物和內(nèi)源性物質(zhì)的質(zhì)與量變化規(guī)律的分析方法學(xué)在探求科學(xué)用藥規(guī)律與安全、有效、合理用藥，在開發(fā)新藥、保障健康長壽方面具有重要作用2/18/20245精選2021版課件二體內(nèi)藥物分析的作用和意義通過檢測人（或動物）的體液或組織（生物樣本）中的藥物或特定代謝物的濃度，為臨床藥學(xué)研究提供必要的數(shù)據(jù)和相關(guān)信息2/18/20246精選2021版課件（一）在新藥評價和開發(fā)中的意義

大量事實(shí)證明，如無臨床藥理學(xué)和臨床藥學(xué)研究給新藥以確切的評價，要做到臨床安全、合理、有效地用藥將會遇到許多困難。因此，加強(qiáng)藥物在生物樣品內(nèi)作用機(jī)理的研究，以了解和闡明藥物藥物結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、劑型及生產(chǎn)工藝與藥物療效等關(guān)系，已成為評價藥品質(zhì)量的重要內(nèi)容和依據(jù)。體內(nèi)藥物分析的意義2/18/20247精選2021版課件1．全面質(zhì)量控制2．新藥報(bào)批3．為設(shè)計(jì)新藥提供信息①從代謝產(chǎn)物中開發(fā)新藥保泰松→羥基保泰松（作用強(qiáng)、副作用小）非那西丁→撲熱息痛②前藥設(shè)計(jì)③新劑型的研究，緩控釋、經(jīng)皮制劑等以上內(nèi)容必須通過測定體內(nèi)藥物濃度得以解決2/18/20248精選2021版課件（二）臨床合理用藥中的意義

1．血藥濃度與藥理作用2.影響血藥濃度的因素（1）機(jī)體因素a．生理因素年齡、性別、生理狀況b．病理因素c．遺傳因素（2）藥物因素a．劑型因素（生物利用度問題）b．藥物合并使用（酶抑、酶促）c．時間因素2/18/20249精選2021版課件（三）藥物中毒解救的意義藥物中毒的診斷和治療方案的確立（四）興奮劑檢測的意義包括麻醉藥精神藥品濫用，吸毒及運(yùn)動員違禁藥品檢測2/18/202410精選2021版課件3．從樣品的來源分1．從分析物分母體藥物代謝物內(nèi)源性物質(zhì)2．從生物樣品種類分均勻樣品非均勻樣品人體實(shí)驗(yàn)動物三體內(nèi)藥物分析的對象

2/18/202411精選2021版課件體內(nèi)藥物分析的對象研究對象

評價藥物的安全性（臨床前研究）—動物評價藥物的有效性（臨床研究）—人體（健康志愿者或患者）用藥的安全、有效與合理—人體（患者TDM）具體檢材

生物體的各種器官、組織和體液等2/18/202412精選2021版課件四體內(nèi)藥物分析的任務(wù)

1.分析方法學(xué)的研究和完善

——提供靈敏、專屬、準(zhǔn)確可靠的分析方法與最佳的分析條件（首要任務(wù)）2/18/202413精選2021版課件2.治療藥物監(jiān)測TDM，therapeuticalDrugMonitoring只有具有明確治療范圍，血藥濃度和藥效關(guān)系密切，且具有下列情況者，要求進(jìn)行藥濃檢測：有效血藥濃度范圍窄，劑量小，毒性大的藥物；藥代動力學(xué)個體差異大、藥理作用強(qiáng)、不易估計(jì)給藥后的血藥濃度藥物；2/18/202414精選2021版課件藥物的毒性反應(yīng)與該藥治療的疾病癥狀相似，難以判斷是劑量不足還是藥物毒性所致；聯(lián)合用藥時，由于藥物相互作用產(chǎn)生不良反應(yīng)，需要調(diào)整藥物劑量者；在短期內(nèi)難于判斷療效的藥物，預(yù)測藥物能否達(dá)到預(yù)防效果；判斷患者用藥的依從性等要求進(jìn)行藥物濃度檢測。TDM2/18/202415精選2021版課件

3.藥代動力學(xué)的研究

藥物動力學(xué)參數(shù)、生物利用度及血漿蛋白結(jié)合率等基本數(shù)據(jù)——為新藥研究、老藥再評價、TDM、藥物濫用、司法鑒定等提供準(zhǔn)確的體內(nèi)藥物濃度數(shù)據(jù)和合理解釋4.代謝分型的應(yīng)用5.內(nèi)源性物質(zhì)測定——為某些疾病的診斷及治療提供重要信息2/18/202416精選2021版課件五體內(nèi)藥物分析的特點(diǎn)——由分析對象的特點(diǎn)所決定

1．干擾物質(zhì)多，樣品一般均需經(jīng)過分離、凈化后才能進(jìn)行分析

——生物樣品中含有大量的內(nèi)源性物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、脂肪等，以及代謝物、結(jié)合物等干擾分析2．樣品量少、不能重復(fù)取樣

——生物樣品多數(shù)在特定條件下采集，無法再次取樣，且濃度低、變化幅度大——測定前需濃縮、富集以適應(yīng)分析方法要求

2/18/202417精選2021版課件3．被測藥物和代謝物的濃度或活性極低

——對方法的靈敏度及專屬性要求較高4．要求分析方法簡便、快速

——藥物濃度監(jiān)測和藥物濫用及毒物分析中5.工作量較大，隨著工作的深入開展，會成倍地甚或按指數(shù)級數(shù)6.測定數(shù)據(jù)的處理和闡明有時不太容易

2/18/202418精選2021版課件六體內(nèi)藥物分析的一般步驟

分析方法建立

分析方法的驗(yàn)證體內(nèi)藥物分析的實(shí)際應(yīng)用2/18/202419精選2021版課件（一）對分析方法的新要求藥物服用的劑量越來越小、體液中藥物濃度越來越低，對體內(nèi)藥物分析方法提出了新的要求：1.檢測方法的高靈敏度

——最低檢測量10-9~10-7g或10-15~10-12g2.分離方法的高選擇性、高專屬性

2/18/202420精選2021版課件1.色譜法——GC、HPLC、HPCE2.免疫分析法——RIA、EIA3.聯(lián)用技術(shù)——GC-MS、LC-MS為滿足各項(xiàng)要求，最常用的分析方法有2/18/202421精選2021版課件（二）體內(nèi)藥物分析的常用分析方法1.光譜法

分光光度法、紫外光度法、熒光光度法

特點(diǎn)：操作簡便，所需儀器一般臨床實(shí)驗(yàn)室都具備，檢測成本低，便于推廣適于對治療血藥濃度水平較高，經(jīng)適當(dāng)處理方法用光譜法能滿足臨床需要的藥物如阿司匹林、對乙酰氨基酚、氨茶堿、苯妥英鈉、苯巴比妥鈉等2/18/202422精選2021版課件

氣相色譜法(GC)和高效液相色譜法(HPLC)

特點(diǎn)：特異性、靈敏度和重復(fù)性均好，并可一次同時完成同一樣本中多種藥物及其代謝物檢測聯(lián)用技術(shù)

如

GC-質(zhì)譜、HPLC-質(zhì)譜聯(lián)機(jī)檢測，更拓展了這類分析手段的性能2.色譜法2/18/202423精選2021版課件3.免疫化學(xué)法主要有放射免疫法(RIA)、熒光免疫法(FIA)和酶免疫法(EIA)根據(jù)抗原-抗體反應(yīng)的特異性，應(yīng)用免疫化學(xué)法檢測半抗原或抗原性藥物，TDM應(yīng)用的免疫化學(xué)法一般都采用競爭性免疫分析只有具備完全或半抗原性的藥物，并能制備特異性抗體，才可用免疫化學(xué)法進(jìn)行TDM2/18/202424精選2021版課件

特點(diǎn)：免疫化學(xué)法靈敏度極高，大多可達(dá)ng甚至pg檢測水平，可滿足所有藥物TDM的要求；所需標(biāo)本量少，預(yù)處理及測定操作簡便，并可制成商品化試劑盒；可利用一般生化、熒光自動分析儀進(jìn)行自動化操作在體內(nèi)幾乎不發(fā)生代謝轉(zhuǎn)化而以原型排泄的藥物，較少代謝物干擾，尤其適用于免疫法檢測，如慶大霉素等氨基甙類抗生素2/18/202425精選2021版課件在體藥物分析示意圖微透析系統(tǒng)活體實(shí)驗(yàn)動物微透析探針管子微注射器灌注液微注射泵檢測系統(tǒng)分析儀器2/18/202426精選2021版課件治療藥物監(jiān)測（therapeuticdrugmonitoring，TDM）是自本世紀(jì)60年代起，在臨床藥理學(xué)、藥代動力學(xué)和臨床化學(xué)基礎(chǔ)上，結(jié)合現(xiàn)代分析檢測技術(shù)，形成和發(fā)展的一門應(yīng)用性邊緣學(xué)科第二節(jié)治療藥物監(jiān)測2/18/202427精選2021版課件

TDM

對臨床藥物治療的指導(dǎo)，主要是指設(shè)計(jì)或調(diào)整合理的給藥方案，同時為藥物過量中毒的診斷和處理提供有價值的實(shí)驗(yàn)依據(jù)近年來國外又將其統(tǒng)稱為臨床藥代動力學(xué)監(jiān)測（ClinicalPharmacokineticMornitoring,CPM）2/18/202428精選2021版課件通過靈敏可靠的方法，檢測病人血液或體液中的藥物濃度，獲取有關(guān)藥動學(xué)參數(shù)，應(yīng)用藥代動力學(xué)理論，指導(dǎo)臨床合理用藥方案的制定和調(diào)整，以及藥物中毒的診斷和治療，以保證藥物治療的有效性和安全性，實(shí)現(xiàn)合理的給藥方案個體化一治療藥物監(jiān)測的主要任務(wù)2/18/202429精選2021版課件①治療藥物監(jiān)測的核心目的是實(shí)現(xiàn)合理的給藥方案個體化②協(xié)助診斷和處理藥物過量中毒，及進(jìn)行其臨床藥理學(xué)研究③了解患者是否遵醫(yī)囑用藥，提高用藥依從性二治療藥物監(jiān)測的目的2/18/202430精選2021版課件①血藥濃度結(jié)果用于調(diào)整劑量，設(shè)計(jì)個體化給藥方案②一般只監(jiān)測一次血藥濃度，不測藥物經(jīng)時變化濃度③監(jiān)測方法要求快速、簡便、準(zhǔn)確，以適應(yīng)臨床需求治療藥物監(jiān)測與臨床藥代動力學(xué)研究的區(qū)別2/18/202431精選2021版課件治療藥物監(jiān)測（TDM）利用各種分析技術(shù)測定血漿或組織中藥物的濃度，并根據(jù)藥代動力學(xué)的原理和公式來指導(dǎo)個體化給藥方案，以提高療效，避免或減少毒副作用的發(fā)生；為藥物過量中毒的診斷和處理提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)三治療藥物監(jiān)測的意義2/18/202432精選2021版課件據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）及我國衛(wèi)生部藥物不良反應(yīng)監(jiān)測中心的統(tǒng)計(jì)資料均顯示，因用藥不當(dāng)而致死者遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于同期死于各種傳染病的人數(shù)。而用藥不當(dāng)死亡者中，大多是劑量不當(dāng)所致。隨著醫(yī)療技術(shù)整體水平的提高，在TDM指導(dǎo)下制定和調(diào)整個體化的合理用藥方案，是藥物治療學(xué)發(fā)展的必然趨勢

2/18/202433精選2021版課件臨床治療中的常規(guī)血藥濃度監(jiān)測是指測定規(guī)律服用某藥物5個半衰期后已達(dá)穩(wěn)定的血藥濃度

用一般劑量或超過一般劑量仍不能控制病情時，通過監(jiān)測可以了解病人是否規(guī)律用藥、代謝率是否加快、有無耐藥現(xiàn)象等

四何時需要進(jìn)行治療藥物監(jiān)測2/18/202434精選2021版課件聯(lián)合應(yīng)用藥物，有可能影響藥物代謝時或需要了解藥物間的相互作用時伴發(fā)其他疾病(如肝、腎、胃、腸道疾病和低蛋白血癥)時

藥物的有效血藥濃度范圍狹窄（代表藥物地高辛、奎尼丁等），在臨床上不易區(qū)分毒性反應(yīng)和確定劑量時，特別是有效量和中毒量接近的藥物，通過測定可以及時調(diào)整藥量

2/18/202435精選2021版課件某些藥物的毒副作用表現(xiàn)與某些疾病本身的癥狀相似，不能明確辯別時（如地高辛、速尿等）長期用藥的患者，依從性差；或產(chǎn)生耐藥性；以及原因不明的藥效變化時

出現(xiàn)特殊的癥狀和反應(yīng)，懷疑是藥物中毒時

2/18/202436精選2021版課件以下情況下無需TDM監(jiān)測藥物本身具有客觀有效的效應(yīng)指標(biāo)時血藥濃度不能預(yù)測藥理作用強(qiáng)度時有效血藥濃度范圍寬的藥物，一般也不需要做TDM2/18/202437精選2021版課件患者接受監(jiān)測品種的藥物治療時，是否需要監(jiān)測血藥濃度，應(yīng)根據(jù)臨床具體情況判斷。藥師應(yīng)協(xié)助臨床嚴(yán)格把握TDM適應(yīng)癥，避免不必要的TDM申請五進(jìn)行治療藥物監(jiān)測應(yīng)注意的問題1．嚴(yán)格把握TDM適應(yīng)癥，避免不必要的血藥濃度測定2/18/202438精選2021版課件

2．快速提供準(zhǔn)確的血藥濃度測定結(jié)果3．直接面對臨床開展TDM工作藥師往往同時承擔(dān)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員、臨床藥師的雙重任務(wù)，在做好實(shí)驗(yàn)室工作的同時，應(yīng)深入臨床，開展血藥濃度的解釋、利用工作

4．具體工作中熟練運(yùn)用專業(yè)技能2/18/202439精選2021版課件六監(jiān)測的藥物種類

1）強(qiáng)心苷類 2）抗心律失常藥 3）抗癲癇藥 4）三環(huán)類抗抑郁藥、抗狂躁藥 5）抗哮喘藥 6）氨基糖苷類及其他抗生素、抗腫瘤藥 7）免疫抑制劑及抗風(fēng)濕藥等

需要指出的是，濫用TDM將造成不必要的浪費(fèi)，應(yīng)根據(jù)監(jiān)測的原則和臨床指征，確定有無必要進(jìn)行常規(guī)化監(jiān)測2/18/202440精選2021版課件需進(jìn)行TDM的主要藥物分類

藥品強(qiáng)心甙地高辛、洋地黃毒苷抗心律失常藥利多卡因、普魯卡因胺、奎尼丁、乙胺碘呋酮、因卡胺、異丙吡胺等抗癲癇藥苯妥英銨、苯巴比妥、乙琥胺、卡馬西平、丙戊酸鈉β受體阻斷劑普萘洛爾、美托洛爾、阿替洛爾平喘藥氨茶堿抗抑郁藥丙咪嗪、阿米替林、去甲替林等抗躁狂癥藥碳酸鋰解熱鎮(zhèn)痛藥阿司匹林、對乙酰氨基酚抗生素慶大霉素、鏈霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素、氯霉素等抗惡性腫瘤藥甲氯蝶呤等免疫抑制劑環(huán)孢素利尿藥呋塞米（速尿）2/18/202441精選2021版課件七治療藥物監(jiān)測與體內(nèi)藥物分析的關(guān)系治療藥物監(jiān)測的要求促進(jìn)了體內(nèi)藥物分析學(xué)科的發(fā)展體內(nèi)藥物分析學(xué)為治療藥物監(jiān)測提供分析方法和技術(shù)支持體內(nèi)藥物分析的發(fā)展和技術(shù)進(jìn)步反過來促進(jìn)了治療藥物監(jiān)測的發(fā)展和完善2/18/202442精選2021版課件一、生物樣品的種類、采集和制備

血液(血漿、血清)—體現(xiàn)藥物濃度和治療作用之間的關(guān)系——最常用的生物樣本

生物樣品臟器組織體液血液、尿液、唾液、毛發(fā)、乳汁、精液、腦脊液、淚液、膽汁、胃液、胰液、淋巴液、糞便等第三節(jié)生物樣品的預(yù)處理2/18/202443精選2021版課件（一）樣品的采集1．血樣血樣濃度與作用點(diǎn)的濃度密切相關(guān)，可以反映靶器官的濃度。血細(xì)胞血漿（plasma）血小板血清（serum）血細(xì)胞測定血樣中平均分布于細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的藥濃抗凝自然全血血液2/18/202444精選2021版課件

血樣主要應(yīng)用于：

藥物動力學(xué)生物利用度臨床治療藥物濃度監(jiān)測第三章生物樣品與樣品制備第一節(jié)生物樣品的種類采集血樣的應(yīng)用2/18/202445精選2021版課件2．尿樣

目的：藥物劑量回收，藥物清除率，生物利用度和，預(yù)測藥物代謝過程、類型體內(nèi)藥物清除主要是通過尿液排出，藥物以原型、Ⅰ相及Ⅱ相代謝物等多種形式排出

特點(diǎn)：濃度高，易于收集，體內(nèi)代謝研究，應(yīng)水解分離2/18/202446精選2021版課件3．唾液一些藥物的唾液藥濃(S)與血漿游離藥濃(P)密切相關(guān)，因此： —TDM中利用對S的測定代替對P的監(jiān)測 —藥代動力學(xué)的研究

收集方法離心收集2/18/202447精選2021版課件（二）樣品的貯藏1．血樣（血漿、血清）及時分離→冷藏，-70℃加入穩(wěn)定劑NaF2．尿樣①尿中水、無機(jī)鹽、尿素等細(xì)菌的生長，4℃保存②加入防腐劑a．1%甲苯b．飽和氯仿c．pH改變3．唾液：同血樣2/18/202448精選2021版課件二、生物樣品的預(yù)處理（一）預(yù)處理的目的①存在形式的多樣性游離結(jié)合代謝物②濃度低，雜質(zhì)多（分離濃縮）③出現(xiàn)渾濁和沉淀④與試劑起反應(yīng)⑤影響色譜柱壽命2/18/202449精選2021版課件（二）處理方法選擇的一般原則1．藥物理化性質(zhì)pKa親脂性揮發(fā)性溶解度光譜特征穩(wěn)定性2．濃度范圍靈敏的方法3．測定的目的定性定量母體代謝4．生物樣品的種類5．樣品處理與分析方法的選擇①專一性②靈敏性2/18/202450精選2021版課件（三）生物樣品去蛋白處理1．加入與水能混溶的有機(jī)溶劑及中性鹽甲醇乙腈甲醇1:2乙腈1:1.5（NH4）2SO4NaCl2．加入酸性沉淀劑三氯醋酸高氯酸苦味酸等使蛋白質(zhì)分子的陽離子形成不溶性鹽而↓，pH低于等電點(diǎn)2/18/202451精選2021版課件3．組織酶消化法加入酶使蛋白質(zhì)水解優(yōu)點(diǎn)：①平衡條件下進(jìn)行，可避免反應(yīng)和降解②可改善對蛋白結(jié)合率強(qiáng)的藥物的回收率③不產(chǎn)生乳化4．其他加熱超濾2/18/202452精選2021版課件（四）生物樣品中綴合物水解1．酸水解2．酶水解β-葡萄糖醛酸苷酶芳基硫酸酯酶混合酶pH4.5-7.037℃3．溶劑解某些藥物的硫酸酯，往往加入率取溶劑時發(fā)生分解，同時提取有機(jī)溶劑中2/18/202453精選2021版課件（五）生物樣品的萃取1．液-液萃?。?）優(yōu)點(diǎn)：①與雜質(zhì)分離②簡便③濃集④提取率高（2）提取率：在有機(jī)相與水相中的溶解度的比值分配系數(shù)，一般少量多次，對生物樣品一般一次萃取，>70%重現(xiàn)性2/18/202454精選2021版課件（3）影響提取率的因素①pH堿性藥物在堿性pH酸性酸性pH②提取溶劑相似相溶原理沸點(diǎn)低，不影響檢測,性質(zhì)穩(wěn)定，不起化學(xué)反應(yīng)③離子強(qiáng)度加入中性鹽增加離子強(qiáng)度，與水結(jié)合強(qiáng)，便于有機(jī)溶劑提取2/18/202455精選2021版課件（4）離子對提取對于離子性特強(qiáng)，水溶性極大的藥物，可采用離子對提?、僭恝趹?yīng)用陰離子：COOH+SO3H-反離子四丁基銨陽離子：NH2+反離子烷基或芳基磺酸鹽（5）提取技術(shù)一般在試管中進(jìn)行,有機(jī)相與水相比1:1或2:12/18/202456精選2021版課件（6）乳化問題措施①輕緩振搖②含有分散度大或不溶物應(yīng)過濾掉③避免在高pH條件下，從水中提取藥物④避免使用易發(fā)生乳化的溶劑⑤萃取劑水中加入少量NaCl2/18/202457精選2021版課件破乳方法①機(jī)械法②加入少量高級脂肪醇改變表面張力③改善混合溶劑比例，增加分散相分?jǐn)?shù)（7）藥物的吸附①玻璃容器吸附1%三甲一氯硅烷10%二甲二氯硅烷②血漿2/18/202458精選2021版課件2．液固萃取固相萃取[solidphaseextractionSPE]針管式抽空減壓加壓過濾2/18/202459精選2021版課件（1）固相萃取步驟①固相選擇樣品1ml1ml規(guī)格固相1~25ml3ml規(guī)格固相②固相處理反相C18固定相的6~10倍體積甲醇洗柱，使溶劑化；6~10倍水緩沖服液沖洗達(dá)分離狀態(tài)③上樣④分離用適當(dāng)?shù)娜跞軇┫礈煜慈ルs質(zhì)，通N2干燥固相⑤洗脫待測物改變pH或極性2/18/202460精選2021版課件（2）影響固相萃取的因素①流速流速快，按觸不充分，樣品流失回收率低柱處理5~10ml·min-1洗脫0.2~1ml·min-1（〈300mg〉2~5ml·min-1（>300mg）②裝樣過載突破性試驗(yàn)已知濃度樣品液小體積上柱→洗脫回收百分率加大體積→洗脫回收百分率繪圖當(dāng)回收率下降時為過載2/18/202461精選2021版課件（六）生物樣品的組分濃集（七）衍生化處理GC衍生化HPLC衍生化2/18/202462精選2021版課件第四節(jié)體內(nèi)藥物分析方法的建立與評價一、分析方法靈敏度專屬性光譜法++剛開始應(yīng)用較多雙波長，導(dǎo)數(shù)色譜法++++++HPLCGC免疫法++++++免疫交叉反應(yīng)，重現(xiàn)性差根據(jù)藥物理化性質(zhì)，結(jié)構(gòu)特征，藥物濃度，干擾成分大小，實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/18/202463精選2021版課件二、分析方法的設(shè)計(jì)依據(jù)方法的建立原始方法改進(jìn)→創(chuàng)新創(chuàng)立方法2/18/202464精選2021版課件1．做好文獻(xiàn)總結(jié)2．充分了解藥物特征及體內(nèi)狀況pH、親脂性、溶解度、極性、光譜特征、藥動學(xué)參數(shù)、體內(nèi)代謝情況3．明確測定目的、要求目的藥濃監(jiān)測藥代動力學(xué)研究母體藥物和代謝物4．結(jié)合實(shí)驗(yàn)室條件設(shè)備條件預(yù)處理方法2/18/202465精選2021版課件三、分析方法的建立1．純品進(jìn)行測定確定線性范圍、靈敏度、反應(yīng)條件（pH、t、T）2．空白樣品測定確定空白樣品是否有干擾3．以水代替空白樣品，加標(biāo)準(zhǔn)液后測定了解提取率、檢測濃度確定萃取條件、pH、揮發(fā)濃縮等4．空白樣品加入標(biāo)準(zhǔn)液測定標(biāo)準(zhǔn)曲線建立回歸方程回收率5．實(shí)驗(yàn)樣品測定2/18/202466精選2021版課件四、分析方法的評價可行性和可靠性

1．準(zhǔn)確度accuracy

測定結(jié)果與真實(shí)性的差異用回收率表示①接近100%②相對恒定2/18/202467精選2021版課件①絕對回收率也稱萃取回收率、提取回收率測定血漿樣品中藥物濃度/相同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液=絕對回收率考慮3個濃度（高、中、低）分布在標(biāo)準(zhǔn)曲線成上、中、下一般要求絕對回收率在≥70%一般方法 HPLC內(nèi)標(biāo)內(nèi)標(biāo)法時注意：藥物與內(nèi)標(biāo)用各自外標(biāo)法測定回收率應(yīng)相近，差值<10%2/18/202468精選2021版課件②相對回收率方法回收率藥物系列濃度+血樣→標(biāo)準(zhǔn)曲線取高、中、低三濃度加入到空白血漿中，處理后測定，與加入標(biāo)準(zhǔn)量相比，得方法回收率，測定值<15%，定量限<20%注意問題：a．加入藥量與實(shí)際測定值相近b．加入物與實(shí)際存在狀態(tài)相近c(diǎn)．空白試驗(yàn)與已確定方法進(jìn)行比較2/18/202469精選2021版課件2．精密度precision

①標(biāo)準(zhǔn)差SD②相對標(biāo)準(zhǔn)