歷年部分真題整理-免疫微生物

朽木易折，金石可鏤。千里之行，始于足下。第頁/共頁免疫微生物名詞解釋2011異嗜性抗原：與種屬特異性無關，存在于人、動物、植物及微生物之間的共同抗原稱為異嗜性抗原，它們之間有廣泛的交錯反應性。APC：抗原遞呈細胞，指在免疫應答過程中能捕捉和處理抗原以及能把抗原遞呈給免疫活性細胞的一類免疫細胞。SPA：金黃色葡萄球菌A蛋白，是金黃色葡萄球菌的特異性表面抗原，能與多種哺乳動物IgG分子的Fc片結(jié)合，而其Fab片裸露于外，保持抗體活性，當此SPA-Ab與相應抗原結(jié)合時，就可產(chǎn)生凝集反應。細菌素：是某種細菌產(chǎn)生的一種具有殺菌作用的蛋白質(zhì)，只能作用于與它同種不同菌株的細菌以及與它親緣關系相近的細菌。亞病毒：含核酸或蛋白質(zhì)侵染因子的一類容易病毒，包括類病毒、擬病毒和朊病毒。莢膜：是某些細菌在一定的營養(yǎng)條件下向細胞外分泌的一層粘性物質(zhì)，用理化主意去除后并不影響細胞的生命活動。菌群失調(diào)：因為外界因素的影響，破壞了正常菌群中各種微生物之間的互相制約關系，而引起的疾病。變態(tài)反應：也叫超敏反應，指機體對某些抗原初次應答后，再次采納相同抗原刺激時，發(fā)生的一種以機體生理功能紊亂或組織細胞損傷為主的特異性免疫應答。滅活疫苗：選用免疫原性強的細菌、病毒等人工培養(yǎng)后，用物理的或化學的主意將病原微生物滅活后制成的疫苗。干擾素：細胞受病毒感染或干擾素誘生劑作用于細胞后產(chǎn)生的一組糖蛋白，可干擾病毒的感染和復制。立克次體：是一類細菌，但許多特征和病毒一樣，如不能在培養(yǎng)基上培養(yǎng)，只能在動物細胞內(nèi)寄生繁殖等。溶原性轉(zhuǎn)換：當噬菌體感染細菌時，宿主菌染色體獲得了噬菌體的DNA片段，使其成為溶源狀態(tài)時而使細菌獲得新的性狀。群體免疫力：指在動物群體中，因為存在著一定比例的免疫動物，使囫圇動物群體具有對某種疾病的抵御力。菌絲體：也稱為霉菌的菌落，是菌絲頂端延伸、分支，互相交錯成團形成的典型真菌營養(yǎng)體。淋巴細胞再循環(huán)：淋巴細胞在血液、淋巴液和淋巴器官之間反復循環(huán)，使帶有各種不同抗原受體的淋巴細胞不斷在體內(nèi)各處遨游，增強與抗原和抗原遞呈細胞接觸的機會，便于激發(fā)再次免疫應答。2013ID50：半數(shù)感染量，指能使實驗動物在接種后一定時限內(nèi)感染一半所需的微生物或毒素的量。TNF：腫瘤壞死因子，是一類能直接引起腫瘤組織出血壞死、造成腫瘤細胞死亡的細胞因子。O抗原：菌體抗原，指革蘭陰性細菌細胞壁上的側(cè)鏈多糖。IMViC：常用于鑒定腸道桿菌的生理生化特征的4個實驗，即:吲哚實驗、甲基紅實驗、VP實驗、枸櫞酸鹽實驗。CD：分化群，指對淋巴細胞分化過程中產(chǎn)生的表面抗原統(tǒng)一的命名。DI突變株：缺損型干擾突變株，大多數(shù)病毒均能產(chǎn)生DI突變株，這些突變株自身不能復制，惟獨在親本野生株作為輔助病毒存在時才干復制，但它又會干擾親本病毒的復制，導致后者數(shù)量減少。爆裂發(fā)酵(洶涌發(fā)酵)：在牛乳培養(yǎng)基中，產(chǎn)氣莢膜梭菌能發(fā)酵乳糖，使牛乳酸凝，同時產(chǎn)生大量氣體將凝塊破碎成多孔海綿狀，嚴重時被沖成數(shù)段，甚至噴到管外。毒力島：指病原菌的某個或某些毒力基因群，分子結(jié)構(gòu)與功能有別于細菌染色體，但位于細菌染色體中，因此稱之為“島”。生物安全：防止病原微生物及其他有害生物或物質(zhì)傳入實驗室，防止病原微生物等傳出實驗室，實驗室人員的自身安全防護。免疫應答：指動物機體免疫系統(tǒng)受到抗原物質(zhì)刺激后，免疫細胞對抗原分子的識別并產(chǎn)生一系列復雜的免疫連鎖反應和表現(xiàn)出特定的生物學效應的過程。超抗原：具有強大的刺激T細胞活化的能力，只須極低濃度即可誘發(fā)最大的免疫效應的一些細菌和病毒的抗原成分。人工主動免疫：指給動物接種疫苗等抗原物質(zhì)，刺激機體免疫系統(tǒng)發(fā)生免疫應答而產(chǎn)生的特異性免疫力?？乖模褐竿庠葱钥乖c抗原提呈細胞結(jié)合、內(nèi)化，形成內(nèi)體，在內(nèi)體或溶酶體中被蛋白酶降解成的多肽。免疫接種：指用人工主意將免疫原或免疫效應物質(zhì)輸入到機體內(nèi)，使機體通過人工自動免疫或人工被動免疫的主意獲得防治某種傳染病的能力。Colony：菌落，某個細菌在相宜其生長的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部，在相宜的條件下，經(jīng)過一定時光的培養(yǎng)，生長繁殖出龐大數(shù)量的菌體，形成一個肉眼可見的、有一定形態(tài)的自立群體，又稱克隆(clone)。2014Cytokine：細胞因子(CK)，是指由免疫細胞和某些非免疫細胞合成和分泌的一類高活性多功能小分子蛋白質(zhì)多肽，通過與細胞表面的相應受體結(jié)合，發(fā)揮生物學作用。庫姆斯實驗：抗球蛋白實驗(Coombs實驗)，橋梁凝集反應，用于檢測不徹低抗體。即不徹低抗體與抗原結(jié)合不浮上凝集反應，但參加抗球蛋白抗體后可以將兩個各銜接一方抗原表位的單價抗體再銜接起來，浮上凝集。Spore：芽孢，某些細菌在一定的環(huán)境條件下，能在菌體內(nèi)部形成一個圓形或卵圓形小體，是細菌的休眠形式。細胞傳代：原代培養(yǎng)形成的單層細胞匯集以后，需要舉行分離培養(yǎng)，否則細胞會因生成空間不足或因為細胞密度過大引起營養(yǎng)枯竭，都將影響細胞的生長，這一程序又稱為傳代培養(yǎng)。病毒性顆粒：也稱病毒粒子，指成熟的、具有侵染力的單個病毒。T細胞表位：蛋白質(zhì)抗原分子中被MHC分子結(jié)合、遞呈，由TCR所識別的肽段。B細胞表位：抗原分子中被BCR中的膜免疫球蛋白和抗體分子所識別的部位。準種：指由一種母序列和來自該序列的大量相關突變基因組所組成的病毒群體，是對病毒“種”概念的補充。MOI：感染比，指一個系統(tǒng)中感染病毒的細胞數(shù)與細胞總數(shù)之比。VirusReceptor：病毒受體，指能特異性地與病毒結(jié)合、介導病毒侵入并促進病毒感染的宿主細胞膜組分。2015原代細胞抗生素順序表位免疫記憶抗獨特型抗體Vi抗原PFUH-O變異火箭免疫電泳APCBCRTCID50菌群失調(diào)感染性核酸網(wǎng)狀體二、簡答題⑴請寫出下列物品最合適的滅菌主意。①接種針：燒灼滅菌法；②培養(yǎng)皿：高壓蒸汽滅菌法；③基礎培養(yǎng)基：間歇滅菌法；④細胞培養(yǎng)液：濾過除菌法；⑤超凈臺：紫外線；⑥外科手術器械：高壓蒸汽滅菌法。⑵簡述真菌性疾病的幾種形式。①致病性真菌感染；②條件致病性真菌感染；③真菌變態(tài)反應性疾??；④真菌性中毒；⑤致腫瘤。⑶抗體有哪些免疫學功能？①中和作用；②免疫溶解作用；③免疫調(diào)理作用；④局部黏膜免疫作用；⑤免疫損傷作用；⑥抗體依賴性細胞介導性細胞毒性型；⑦對病原微生物生長的抑制作用。⑷真菌的分離鑒定。標本的采集與處理→顯微鏡檢查→分離培養(yǎng)→變態(tài)反應診斷→真菌毒素檢測⑸抗病毒免疫包括哪些因素？①非特異性免疫作用：⒈病毒感染細胞產(chǎn)生細胞因子的抗病毒作用，其中IFN是動物機體抗病毒抵御力的主要因子⒉NK細胞天然殺傷作用②特異性免疫作用：⒈病毒感染后的恢復主要依賴細胞免疫⒉預防再傳染主要依賴體液免疫⑹簡述朊病毒的結(jié)構(gòu)特點及其診斷主意。①結(jié)構(gòu)特點：一類不含核酸而僅由蛋白質(zhì)構(gòu)成的可自我復制并具感染性的因子②診斷主意：⒈臨床癥狀：共濟失調(diào)，震顫等；⒉遺傳背景：癢病，克雅氏綜合癥，致死性家族失眠癥；⒊腦組織的病理學檢查：淀粉樣斑塊，神經(jīng)元空斑；⒋免疫學主意(特異性抗體)：包括免疫組化，免疫印跡，雙抗體夾心ELISA等。⑺Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型變態(tài)反應均由抗體介導，簡述三者之間的主要區(qū)別。型別免疫類型損傷機制反應速度組織損傷Ⅰ型速發(fā)型體液免疫IgEIgE-肥大細胞結(jié)合再次入侵變應原導致肥大細胞，釋放生物活性介質(zhì)-組胺樣作用。數(shù)秒至30分鐘內(nèi)發(fā)生，隨后疾馳消除。無組織損傷Ⅱ型細胞毒型體液免疫IgGIgM抗體形成，作用于細胞表面抗原或結(jié)合的半抗原，補體、吞噬細胞、NK細胞協(xié)同作用。數(shù)小時細胞、組織損傷Ⅲ型免疫復合物型體液免疫IgGIgM抗原抗體復合物形成，在毛細血管周圍沉積激活補體，中性粒細胞聚攏，溶酶體酶釋放，組織損傷，血管炎癥。數(shù)小時血管炎⑻簡述分離與鑒定禽流感病毒(AIV)常用的實驗步驟及結(jié)果判斷標準。實驗步驟：①病料的采集和處理：采集病雞呼吸道分泌物、脾臟等有病變的組織器官，并舉行處理；②雞胚接種：將處理好的病料尿囊腔接種，看見胚體病變；③細菌檢查：收集死亡雞胚的尿囊液，劃線接種鮮血平板舉行細菌培養(yǎng)；④HA實驗和HI實驗：對死亡雞胚的尿囊液舉行HA實驗，結(jié)果為陽性者，應用AIV和NDV的單克隆抗體舉行HI實驗。結(jié)果：①接種雞胚的死亡及病變接種的雞胚在接種后42h死亡，胚體呈全身出血，四肢和頭部出血異常嚴重。②細菌檢查結(jié)果死亡胚體的尿囊液劃線接種的鮮血平板培養(yǎng)24h，無細菌生長。③HI實驗的結(jié)果凝集能被AIV的單克隆抗體所抑制，而不能被NDV的單克隆抗體所抑制。⑼克隆挑選學說是誰提出的，主要思想內(nèi)容是什么。抗原進入機體挑選的是事先存在于淋巴細胞膜表面的抗原受體(膜表面免疫球蛋白,SmIg)。動物體內(nèi)存在有無數(shù)多的淋巴細胞克隆(預計約107)，每個克隆表面都帶有特異性的SmIg，進入體內(nèi)的外來抗原或內(nèi)源性抗原可挑選性地激活帶有相應受體的淋巴細胞克隆，進而使其分化增殖，產(chǎn)生抗體。⑽抗原交錯性產(chǎn)生緣故。不同抗原物質(zhì)之間、不同種屬的微生物間、微生物與其它抗原物質(zhì)間，有相同或相似的抗原組成或結(jié)構(gòu)，也可能存在共同的抗原表位。⑾衣原體發(fā)育周期特點。元體→吸附→吞噬體→在吞噬體內(nèi)形成網(wǎng)狀體→二分裂繁殖→形成包容體→在包容體內(nèi)成熟為元體→釋放⑿請列舉三位免疫學領域的聞名學者，并說明他們的主要貢獻。①法國科學家巴斯德研制勝利禽霍亂、炭疽與狂犬病弱毒疫苗。②澳大利亞科學家伯內(nèi)特提出克隆挑選學說。③英國科學家波特提出免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)模型。⒀細菌基因轉(zhuǎn)移和重組方式有哪些，各自特點。轉(zhuǎn)化：受體菌直接攝取供體菌游離DNA片段獲得新的性狀。要求細菌細胞必須處于感觸態(tài)，并具有攝取外源性DNA的能力。轉(zhuǎn)導：以溫暖噬菌體為媒介，把供體菌的DNA小片段轉(zhuǎn)移到受體菌中，通過交換與整合，使受體菌獲得供體菌的部分遺傳性狀。溶源性轉(zhuǎn)換：當噬菌體感染細菌時，宿主菌染色體獲得了噬菌體的DNA片段，使其成為溶源狀態(tài)時而使細菌獲得新的性狀。接合：兩個細菌細胞通過性菌毛互相接觸,由一個供體菌(雄性菌)直接將遺傳物質(zhì)DNA輸入另一個受體菌(雌性菌),并與受體菌DNA整合引起的基因轉(zhuǎn)移，稱為接合。具有方向性。原生質(zhì)體融合：使遺傳性狀不同的兩細菌的原生質(zhì)體融合而發(fā)生遺傳重組，以產(chǎn)生同時帶有雙親性狀的、遺傳性穩(wěn)定的融合子。⒁病毒增殖方式。①吸附：病毒與宿主細胞接觸，先是靜電結(jié)合，再是病毒表面位點與宿主細胞膜上的相應受體結(jié)合。②穿入和脫殼：病毒吸附在宿主細胞膜上后，可通過多種穿入方式進入細胞：⒈通過細胞膜吞入形成內(nèi)吞小體，再脫殼；⒉與細胞膜發(fā)生膜融合，病毒的核衣殼直接進入細胞漿內(nèi)；⒊核膜脫殼：細胞吞飲，釋放入胞漿；病毒基因組通過核孔復合物進入細胞核內(nèi)；⒋有的病毒表面有位點與細胞受體結(jié)合后，由細胞表面的酶類協(xié)助病毒脫殼，使病毒核酸直接進入宿主細胞內(nèi)。③生物合成：病毒成分的合成，是在病毒基因指令下，利用細胞生物合成的場所和原材料舉行合成的過程，包括：病毒核酸的復制和病毒蛋白質(zhì)的合成。④組裝與釋放：⒈組裝：病毒核酸進入衣殼形成殘破的病毒粒子；⒉釋放：a.無囊膜病毒：通過極迅速度的合成造成病毒粒子在胞漿中大量積聚，以致細胞脹破，釋放出病毒；b.有囊膜病毒：釋放過程中病毒可以從細胞膜或核膜上以出芽方式獲得囊膜。⒂帶現(xiàn)象及緣故。帶現(xiàn)象：因反應體系中抗原過多或抗體過多而浮上抑制可見反應的現(xiàn)象稱為帶現(xiàn)象。緣故：大多數(shù)抗體為二價，大多數(shù)抗原為多價，惟獨兩者比例適當初，才干形成彼此銜接的大復合物；而抗原過多或抗體過多時，形成的單個復合物不能被肉眼所見。(格子學說)⒃淋巴細胞再循環(huán)過程、意義。淋巴細胞在血液、淋巴液和淋巴器官之間反復循環(huán)，使帶有各種不同抗原受體的淋巴細胞不斷在體內(nèi)各處遨游，增強與抗原和抗原遞呈細胞接觸的機會；便于激發(fā)再次免疫應答。⒄簡述細胞因子的主要生物學作用。①參加免疫應答與免疫調(diào)節(jié)；②刺激造血功能；③在神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡中作為免疫細胞的遞質(zhì)。⒅B細胞的功能。B細胞在抗原刺激下可分化為漿細胞，漿細胞可合成和分泌抗體，主要執(zhí)行機體的體液免疫。⒆評估免疫檢測主意的兩個指標，和計算公式。特異性=真陰性/(真陰性+假陽性)×100%，指用該實驗檢查非患畜時浮上陰性結(jié)果的可能性。敏感性=真陽性/(真陽性+假陰性)×100%，指用該實驗檢查某病畜時浮上陽性結(jié)果的可能性。⒇細菌生長曲線的描述，意義①趕緊期：是細菌初到新環(huán)境的適應期。此時菌體增大、代謝活躍、合成所需酶系統(tǒng)。RNA含量顯然增多，DNA無變化，此時細菌數(shù)并不增強。l-4h。②對數(shù)期：細菌疾馳分裂繁殖，活菌數(shù)以幾何級數(shù)增長，生長曲線近斜線。該期病原菌致病力最強，其形態(tài)染色及生理均較典型，對抗菌藥物敏感。6-10h。③穩(wěn)定期：因營養(yǎng)消耗、代謝產(chǎn)物蓄積等，此時新繁殖的活菌與死菌平衡，活菌數(shù)最多。該期形態(tài)染色不特異。產(chǎn)生毒素等代謝產(chǎn)物。普通8h。④衰亡期：細菌死亡速度加大，繁殖速度變小。如不移植到新培養(yǎng)基，總算可所有死亡。此期菌體變形或自溶，染色不典型。(21)革蘭染色的原理，意義。原理：G+菌：肽聚糖含量高，交聯(lián)度大，當乙醇脫色時，肽聚糖因脫水而孔徑縮小，故結(jié)晶紫-碘復合物被阻留在細胞內(nèi)，細胞仍呈紫色；G-菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮，因其含脂量高，乙醇將脂溶解，縫隙加大，酒精將細胞脫色，細胞無色，沙黃復染后呈紅色。意義：可將細菌鑒別為革蘭陽性菌(G+)和革蘭陰性菌(G-)兩大類。(22)證實抗體是免疫球蛋白。①選三只SPF小鼠，分離記A、B、C；②采取A的血清，B、C免疫肺炎雙球菌莢膜多糖；③10日后采取B、C血清；④在C血清中參加肺炎雙球菌莢膜多糖后離心取上清液；⑤對三個血清舉行電泳；⑥A條帶正常，B條帶γ-球蛋白增多，C條帶γ-球蛋白減少。(23)IgG的理化特性、生理特性IgG是動物血清中含量最高的免疫球蛋白，介導體液免疫的主要抗體，多以單體形式存在。IgG主要由脾臟和淋巴結(jié)中的漿細胞產(chǎn)生，大部分存在于血漿中，其余存在于組織液和淋巴液中。IgG在動物體內(nèi)持續(xù)時光長，可發(fā)揮抗菌，抗病毒，抗毒素等免疫學活性，并具有抗腫瘤作用--腫瘤特異性抗原的IgG抗體的Fc片段可與巨噬細胞，K細胞等表面的Fc受體結(jié)合，從而在腫瘤細胞與這些效應細胞之間起著搭橋作用，引起抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用(ADCC)而殺傷腫瘤細胞等靶細胞。IgG是唯一可通過人(和兔)胎盤的抗體，因此在新生兒的抗感染中起著十分重要的作用。IgG是引起II型、III型變態(tài)反應及自身免疫病的抗體。1.馬動脈炎病毒，埃博拉病毒，變形桿菌，非洲豬瘟，鵝細小病毒寫出屬名2.鏈球菌三種溶血特點3.Ig畫圖功能區(qū)4.佐劑作用原理和用途5.抗細菌感染6.青霉素過敏機制7.朊病毒微生物學診斷8.間接ELISA9.巴氏桿菌診斷三、論述題⑴某禽場發(fā)生病毒疫病，分離檢測流程主意。①活病毒標本的采集和運送；②標本的處理，將組織標本中的病毒游離出來和除菌；③標本的接種；④病毒增殖的判斷：細胞病變、病毒間的干擾現(xiàn)象、細胞代謝改變、血細胞吸附等；⑤新分離病毒的理化性質(zhì)測定；⑥血清學檢測或鑒定。⑵列舉與細菌致病性有關的因素，分析構(gòu)成細菌侵襲力的物質(zhì)基礎。①致病性組成：⒈侵襲力：菌毛、莢膜、侵襲性酶⒉毒素：內(nèi)毒素、外毒素②侵襲力的物質(zhì)基礎：⒈菌體的表面結(jié)構(gòu)：a.與黏附有關的結(jié)構(gòu)：革蘭陰性菌的菌毛、某些外膜蛋白、革蘭陽性菌的的脂磷壁酸等；b.莢膜：莢膜多糖具有黏附作用、抗吞噬作用、抗體內(nèi)有害物質(zhì)的損傷。⒉侵襲性酶：由細菌侵襲基因編碼產(chǎn)生，如溶血素、透明質(zhì)酸酶、鏈激酶、膠原酶、壞死因子等。⑶試述腸道病毒的共同特點。腸道病毒顆粒小，呈20面體，直徑24-30nm，不含類脂體，核心有單鏈RNA，耐乙醚和其它脂溶劑，耐酸，對各種抗生素﹑抗病毒藥﹑去污劑有抵御作用。多數(shù)病毒在細胞培養(yǎng)中產(chǎn)生細胞病變。腸道病毒通常寄生于腸道，僅于少數(shù)情況下，進入血流或神經(jīng)組織。腸病毒具高傳染性，大部分的腸病毒僅引起輕微的臨床癥如發(fā)燒、惡心等。⑷某雞場近兩個月發(fā)生雞呼吸艱難、產(chǎn)蛋下降，試分析可能造成該結(jié)果的病毒及簡述各自的鑒別診斷主意。⑸細菌形態(tài)看見需要注重哪些問題，如何在光學顯微鏡下迅速鑒別大腸桿菌、炭疽桿菌、結(jié)核分枝桿菌。⑹設計題：請自選材料建立一種檢測豬繁殖與呼吸障礙綜合癥病毒抗體的間接ELISA主意。(說明原理、實驗步驟及結(jié)果判定主意)?！緦嶒炘怼堪芽乖蚩贵w在不損壞其免疫活性的條件下預先結(jié)合到某種固相載體表面；測定時，將待檢樣品和酶標記物按一定程序反應形成復合物，并參加酶作用的底物；反應終止時，按照定性或定量分析有色產(chǎn)物的量來決定待檢樣品中的抗原或抗體的含量。【實驗步驟】⑴包被：用包被緩沖液將PRRS病毒抗原稀釋到5μg/mL，在96孔酶標板上每孔加100μL，4℃過夜；⑵洗滌：甩去包被緩沖液，用PBST液洗滌3次，拍干；⑶封閉：每孔參加300μL稀釋液，37℃溫水浴孵育30分鐘；⑷洗滌：同⑵；⑸加樣：設陰性、陽性對照各2孔，樣品孔4個；陰性、陽性對照孔分離加陰性、陽性對照血清100μL；樣品孔每孔先加樣品稀釋液100μL；37℃溫水浴孵育30分鐘；⑹洗滌：同⑵；⑺每孔加辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG抗體100μL；37℃溫水浴孵育30分鐘；⑻洗滌：同⑵；⑼顯色：每孔加100μL清新配置的底物溶液；常溫下避光放置5分鐘；⑽終止反應：每孔加終止液50μl；⑾ELISA測定儀測定各孔OD值?！窘Y(jié)果判定】⑴若樣本的OD值超過規(guī)定吸收值則判定為陽性（規(guī)定吸收值=陰性血清吸收值+2）；⑵樣本的OD值與陰性血清OD值之比大于或等于1.5、2或3倍，即判為陽性。⑺多克隆抗體、單克隆抗體、基因工程抗體的制備過程、主要用途、各自優(yōu)缺點。①多克隆抗體：⒈制備：抗原制備→動物免疫→測定血清抗體效價→血清分離與保存→多抗純化→多抗的標記⒉用途：a.用于血清學實驗；b.制作防治制劑②單克隆抗體：⒈制備：小鼠骨髓瘤細胞↘經(jīng)抗原免疫后的小鼠脾細胞→→雜交瘤細胞→雜交瘤陽性克隆的篩選與