高效液相色譜分析法-課件

第七章

高效液相色譜法

Chapter7

HighPerformanceLiquidChromatography第一節(jié)概述一、高效液相色譜法固定相顆粒大小固定相顆粒直徑很小流動相輸送壓力樣品分離速度柱效高靈敏度高第一節(jié)概述一、高效液相色譜法采用顆粒極細、規(guī)那么均勻的固定相二、高效液相色譜別離理論可忽略影響高效液相色譜峰擴張的主要因素：A和Cu項a.采用適宜的流動相，控制相對較小的流動相流速；b.采用顆粒直徑極小的固定相；c.色譜柱填充均勻；d.減小固定相液膜厚度；第二節(jié)高效液相色譜儀第二節(jié)高效液相色譜儀一、高效液相色譜儀流程高壓輸液系統(tǒng)輔助設(shè)備進樣器色譜柱檢測器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)用一臺儀器展示說明各局部及其功能？第二節(jié)高效液相色譜儀一、高效液相色譜儀流程高壓輸液系統(tǒng)、進樣器、色譜柱、檢測器為色譜別離提供流速恒定的流動相梯度洗脫：在別離過程中，使流動相組成隨時間改變而改變。通過不斷改變色譜柱中流動相的極性、離子強度、pH等因素，使被測組分的相對保存值得以改變，提高別離效率。二、高效液相色譜儀組成1.高壓輸液系統(tǒng)第二節(jié)高效液相色譜儀一、高效液相色譜儀流程高壓輸液系統(tǒng)、進樣器、色譜柱、檢測器為色譜別離提供流速恒定的流動相二、高效液相色譜儀組成1.高壓輸液系統(tǒng)2.進樣器定量引入樣品第二節(jié)高效液相色譜儀一、高效液相色譜儀流程高壓輸液系統(tǒng)、進樣器、色譜柱、檢測器為色譜別離提供流速恒定的流動相二、高效液相色譜儀組成1.高壓輸液系統(tǒng)2.進樣器定量引入樣品3.別離系統(tǒng)-色譜柱實現(xiàn)樣品組分高效別離內(nèi)徑：4.6mm，長度：10-50cm填料直徑：5-10m第二節(jié)高效液相色譜儀一、高效液相色譜儀流程高壓輸液系統(tǒng)、進樣器、色譜柱、檢測器為色譜別離提供流速恒定的流動相二、高效液相色譜儀組成1.高壓輸液系統(tǒng)2.進樣器定量引入樣品3.別離系統(tǒng)-色譜柱實現(xiàn)樣品組分高效別離4.檢測器(系統(tǒng))將樣品組分的量定量轉(zhuǎn)化為電信號紫外-可見檢測器(UVD)折光檢測器(RID)熒光檢測器(FLD)電化學(xué)檢測器(ED)蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)第二節(jié)高效液相色譜儀一、高效液相色譜儀流程高壓輸液系統(tǒng)、進樣器、色譜柱、檢測器為色譜別離提供流速恒定的流動相二、高效液相色譜儀組成1.高壓輸液系統(tǒng)2.進樣器定量引入樣品3.別離系統(tǒng)-色譜柱實現(xiàn)樣品組分高效別離4.檢測器(系統(tǒng))將樣品組分的量定量轉(zhuǎn)化為電信號5.附屬系統(tǒng)脫氣裝置流動相過濾裝置第二節(jié)高效液相色譜儀一、高效液相色譜儀流程高壓輸液系統(tǒng)、進樣器、色譜柱、檢測器二、高效液相色譜儀組成三、常用檢測器1.紫外檢測器固定波長紫外檢測器可調(diào)波長紫外檢測器二極管陣列檢測器(PAD)用于有紫外-可見吸收的樣品組分的檢測第二節(jié)高效液相色譜儀一、高效液相色譜儀流程高壓輸液系統(tǒng)、進樣器、色譜柱、檢測器二、高效液相色譜儀組成三、常用檢測器1.紫外檢測器具有紫外吸收組分檢測2.折光檢測器偏轉(zhuǎn)式示差折光檢測器通用檢測器靈敏度低對溫度變化敏感第二節(jié)高效液相色譜儀一、高效液相色譜儀流程高壓輸液系統(tǒng)、進樣器、色譜柱、檢測器二、高效液相色譜儀組成三、常用檢測器1.紫外檢測器具有紫外吸收組分檢測2.折光檢測器通用檢測器3.熒光檢測器具有熒光組分檢測第二節(jié)高效液相色譜儀一、高效液相色譜儀流程高壓輸液系統(tǒng)、進樣器、色譜柱、檢測器二、高效液相色譜儀組成三、常用檢測器1.紫外檢測器具有紫外吸收組分檢測2.折光檢測器通用檢測器3.熒光檢測器具有熒光組分檢測4.電化學(xué)檢測器具有電響應(yīng)組分檢測5.蒸發(fā)光散射檢測器通用檢測器6.質(zhì)譜檢測器通用檢測器第三節(jié)高效液相色譜法的主要類型一、液-液分配色譜法不同組分在固定相和流動相中分配系數(shù)不同擔(dān)體+固定液非極性、弱極性化合物極性化合物流動相極性小于固定相極性1.別離原理2.固定相3.流動相正相色譜流動相極性大于固定相極性反相色譜4.別離對象正相色譜反相色譜第三節(jié)高效液相色譜法的主要類型一、液-液分配色譜法不同組分與固定相和流動相的作用力不同鍵合在載體(硅膠)外表非極性、弱極性化合物極性化合物1.別離原理2.固定相3.流動相正相色譜反相色譜4.別離對象正相色譜反相色譜二、化學(xué)鍵合相色譜法固定相直接鍵合在擔(dān)體外表烷基、氨基、氰基、羥基烴類+氯仿、醇水、甲醇、乙腈第三節(jié)高效液相色譜法的主要類型一、液-液分配色譜法固定相的吸附能力和流動相的溶解能力的差異固體吸附劑各類化合物1.別離原理2.固定相3.流動相4.別離對象二、化學(xué)鍵合相色譜法硅膠、氧化鋁、聚酰胺等根據(jù)樣品組分極性選擇分配系數(shù)差異正相：極性物質(zhì)反相：非極性物質(zhì)分子間作用力差異正、反相色譜三、液-固吸附色譜法第三節(jié)高效液相色譜法的主要類型一、液-液分配色譜法不同待測離子與固定相的離子交換能力的差異離子交換樹脂各類可電離的化合物1.別離原理2.固定相3.流動相4.別離對象二、化學(xué)鍵合相色譜法各種離子交換樹脂結(jié)構(gòu)及性質(zhì)？具有一定鹽濃度的pH緩沖溶液分配系數(shù)差異正相：極性物質(zhì)反相：非極性物質(zhì)分子間作用力差異正、反相色譜三、液-固吸附色譜法四、離子交換色譜法固定相為離子交換樹脂固定相吸附能力及流動相溶解能力各類化合物第三節(jié)高效液相色譜法的主要類型一、液-液分配色譜法待測物分子大小(尺寸、形狀)不同凝膠高分子化合物1.別離原理2.固定相3.流動相4.別離對象二、化學(xué)鍵合相色譜法葡聚糖、瓊脂糖、聚苯乙烯、硅膠等分配系數(shù)差異正相：極性物質(zhì)反相：非極性物質(zhì)分子間作用力差異正、反相色譜三、液-固吸附色譜法四、離子交換色譜法固定相吸附能力及流動相溶解能力各類化合物固定相的離子交換能力可電離化合物五、尺寸排阻色譜法凝膠(滲透)色譜法四氫呋喃、甲苯、氯仿、二甲基甲酰胺(DMF)、水第三節(jié)高效液相色譜法的主要類型一、液-液分配色譜法二、化學(xué)鍵合相色譜法分配系數(shù)差異正相：極性物質(zhì)反相：非極性物質(zhì)分子間作用力差異正、反相色譜三、液-固吸附色譜法四、離子交換色譜法固定相吸附能力及流動相溶解能力各類化合物固定相的離子交換能力可電離化合物五、尺寸排阻色譜法待測物分子大小大分子化合物六、親和色譜法樣品大分子與固定相外表存在特異性親和力一、高效液相色譜法和經(jīng)典液相色譜法比照第五節(jié)色譜分析方法的選擇采用顆粒極細、規(guī)那么均勻的固定相，傳質(zhì)阻力小，別離效率高經(jīng)典液相色譜高效液相色譜色譜柱：柱長10~200cm，內(nèi)徑10~50mm色譜柱：柱長10~25cm，內(nèi)徑2~10mm常壓或減壓高壓：40~50MPa填料顆粒大：75~600m（200~30目）填料顆粒小：2~50m（2500~300目）柱效低：20~50塊塔板/m柱效高：40000~60000塊塔板/m分析速度慢：1~20h分析速度快：0.05~1.0h色譜柱只用一次色譜柱可重復(fù)多次使用不能在線檢測能在線檢測高壓、固定相顆粒細小，柱效高，分析速度快。主要用于分析一、高效液相色譜法和經(jīng)典液相色譜法比照第五節(jié)色譜分析方法的選擇二、高效液相色譜法和氣相色譜法比照流動相選擇范圍別離過程樣品狀態(tài)色譜柱柱溫別離對象性質(zhì)流動相不同高壓、固定相顆粒細小，柱效高，分析速度快。主要用于分析目的一、高效液相色譜法和經(jīng)典液相色譜法比照第五節(jié)色譜分析方法的選擇二、高效液相色譜法和氣相色譜法比照高壓、固定相顆粒細小，柱效高，分析速度快。主要用于分析目的流動相及選擇范圍、樣品狀態(tài)、色譜柱溫、別離對象氣相色譜高效液相色譜只能分析揮發(fā)性物質(zhì)（約20%的物質(zhì)）幾乎可以分析各種物質(zhì)不能用于熱不穩(wěn)定物質(zhì)的分析可以用于熱不穩(wěn)定物質(zhì)的分析用毛細管柱色譜可得到很高的柱效色譜柱不能很長，柱效不會很高有很靈敏的檢測器（ECD）和較靈敏的通用檢測器（FID,TCD)有靈敏度較高的通用檢測器（ELSD）流動相為惰性氣體，與組分無作用流動相為不同極性液體，與組分作用運行和操作容易，運行成本低運行和操作較難，運行成本高儀器制造難度較小儀器制造難度較大一、高效液相色譜法和經(jīng)典液相色譜法比照第五節(jié)色譜分析方法的選擇二、高效液相色譜法和氣相色譜法比照高壓、固定相顆粒細小，柱效高，分析速度快。分析目的流動相及選擇范圍、樣品狀態(tài)、色譜柱溫、別離對象三、色譜分析方法選擇制備液相色譜分析氣相、高效液相色譜1.基于用途2.基于樣品根據(jù)樣品分子量大小及性質(zhì)選擇樣品分子量較大尺寸排阻色譜樣品溶于水、可離解離子交換色譜樣品溶于水、不離解分配色譜、尺寸排阻色譜樣品蒸氣壓較大氣相色譜樣品不溶于水液相吸附色譜、分配色譜、尺寸排阻色譜實例？1.什么是高效液相色譜法？HPLC高效的原因是什么？2.與經(jīng)典液相色譜相比，高效液相色譜法有何特點？3.與氣相色譜相比，高效液相色譜法有何特點？4.高效液相色譜儀有哪幾局部組成？各有何功能？5.什么是梯度洗脫？梯度洗脫有何優(yōu)點？6.高效液相色譜檢測器主要有哪幾種？各適用于何種樣品檢測？7.高效液相色譜常用的流動相有哪些？8.高效液相色譜法可分為哪幾類？各自的別離原理如何？9.何為正相色譜？適用于何種樣品別離分析？判斷組分流出順序10.何為反相色譜？適用于何種樣品別離分析？判斷組分流出順序11.