2019分子診斷檢驗(yàn)程序性能驗(yàn)證指南

分子診斷檢驗(yàn)程序性能驗(yàn)證指南第PAGE第10頁共11頁20190220190215日發(fā)布20190215日實(shí)施分子診斷檢驗(yàn)程序性能驗(yàn)證指南范圍本指南適用于申請(qǐng)認(rèn)可或已獲認(rèn)可的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室對(duì)分子診斷相關(guān)檢測(cè)程序PCRSanger(NGS)、原位雜交等，其他分子診斷使用的檢驗(yàn)程序/方法可參考使用。本文件適用于醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室采用的經(jīng)確認(rèn)的檢驗(yàn)程序。（規(guī)范性引用文件（部分）適用于本指南。WS/T420-2013《臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)商品定量試劑盒分析性能的驗(yàn)證》WS/T492-2016《臨床檢驗(yàn)定量測(cè)定項(xiàng)目精密度與正確度性能驗(yàn)證》WS/T505-2017《定性測(cè)定性能評(píng)價(jià)指南》YY/T1261-2015《HER2（熒光原位雜交法YY/T1459-2016《人類基因原位雜交檢測(cè)試劑盒》術(shù)語和定義對(duì)于本指南，GB/T29791.1-2013/ISO18113-1：2009）中的定義適用。下列術(shù)語和定義適用于本指南。可報(bào)告范圍reportablerange體外診斷醫(yī)療器械性能特征已被驗(yàn)證的測(cè)量區(qū)間。[GB/T29791.1-2013/ISO18113-1：20093.46注1]總則性能驗(yàn)證的時(shí)機(jī)檢驗(yàn)程序常規(guī)應(yīng)用前。于儀器主要部件故障，儀器搬遷，設(shè)施、環(huán)境的嚴(yán)重失控等。（）性能驗(yàn)證的參數(shù)PCRSanger二代基因測(cè)序(NGS)和原位雜交等。PCR量正確度、測(cè)量精密度（含測(cè)量重復(fù)性和測(cè)量中間精密度、測(cè)量不確定度、分析特異性（含抗干擾能力、分析靈敏度、檢出限和定量限、線性區(qū)間（可報(bào)告區(qū)間PCR擾能力、交叉反應(yīng)等。SangerNGS宜選用方法符合率。果檢驗(yàn)程序適用樣本類型包括除腫瘤組織/（如血漿同操作人員間的驗(yàn)證，驗(yàn)證程序可參照本指南相關(guān)內(nèi)容制定。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的預(yù)期用途以及生產(chǎn)制造商聲明，選擇對(duì)檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量有重要影響的參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證。不同技術(shù)平臺(tái)、樣本類型以及預(yù)期用途不同時(shí)，所需驗(yàn)證的性能指標(biāo)宜有所側(cè)重。性能驗(yàn)證的判斷標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)是廠商或研發(fā)者在試劑盒或檢測(cè)系統(tǒng)說明書中聲明的性能指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備一份樣本需進(jìn)行多次試驗(yàn)時(shí)，對(duì)樣本進(jìn)行分裝保存，避免反復(fù)凍融。量控制，確保檢測(cè)系統(tǒng)工作狀態(tài)正常。實(shí)驗(yàn)室設(shè)施及環(huán)境符合分析系統(tǒng)工作要求。儀器經(jīng)過校準(zhǔn)，各項(xiàng)性能指標(biāo)合格。試劑和校準(zhǔn)品滿足要求。負(fù)責(zé)實(shí)施性能驗(yàn)證的人員應(yīng)了解驗(yàn)證方案，制定驗(yàn)證計(jì)劃，并組織實(shí)施。涉及病理形態(tài)學(xué)的樣本（如組織、細(xì)胞學(xué)樣本等集。效率滿足要求。核酸提取效率的評(píng)價(jià)宜包括：核酸濃度、純度及完整性。性能驗(yàn)證要求規(guī)定的程序。定性項(xiàng)目的性能驗(yàn)證方法符合率驗(yàn)證要求方法、經(jīng)驗(yàn)證性能符合要求滿足臨床預(yù)期用途的方法（ISO15189實(shí)驗(yàn)室使用的相同檢測(cè)方法。驗(yàn)證方案5（/低擴(kuò)增的樣本，一般不少于10例樣本。注1：罕見或少見病種的項(xiàng)目，可酌情減少樣本例數(shù)。注2：若弱陽性/低擴(kuò)增樣本不好獲取，可用適當(dāng)稀釋陽性樣本獲得類似的效果。注3：/表：方法符合率驗(yàn)證參比方法總數(shù)陽性陰性陽性aba+b候選方法陰性cdc+d總數(shù)a+cb+da+b+c+d陽性符合率=a/(a+c)×100%陰性符合率=d/(b+d)×100%總符合率=(a+d)/(a+b+c+d)×100%4.3。檢出限驗(yàn)證要求物質(zhì)時(shí)，或以定量形式表達(dá)定性結(jié)果時(shí)，應(yīng)進(jìn)行檢出限的驗(yàn)證。驗(yàn)證方案（系總核酸濃度和突變序列所占比例兩個(gè)方面進(jìn)行評(píng)價(jià)。520（54圍之內(nèi)。判斷標(biāo)準(zhǔn)如果是5次重復(fù)檢測(cè)，必須100%檢出靶核酸；如果是20次檢測(cè)，必須檢出至少18次靶核酸。示例和Sanger序 于因異如的測(cè)，均應(yīng)別行測(cè)的證確不變類各自檢限建使已知變度的包含有檢變類的經(jīng)福馬固石包埋細(xì)系合或床樣將稀釋至家明檢限度及于低該度一梯濃照家聲的序深度對(duì)系濃樣進(jìn)測(cè)（本數(shù)得于5個(gè)每樣檢濃不少于3個(gè)如果95%出濃以的樣檢到靠異則檢限證過。/（5490（6.1.5。交叉反應(yīng)驗(yàn)證要求因型的方法，應(yīng)在待測(cè)核酸濃度水平驗(yàn)證其它基因型對(duì)待測(cè)核酸測(cè)定的影響。驗(yàn)證方案對(duì)于病原體核酸檢測(cè)，取一定濃度與待測(cè)核酸可能存在交叉反應(yīng)的病原體加入樣本保存液或經(jīng)確認(rèn)為陰性的樣本中，與常規(guī)樣本一樣處理，至少重復(fù)檢測(cè)3（如測(cè)序等樣本，與常規(guī)樣本一樣處理，至少重復(fù)檢測(cè)3次。判斷標(biāo)準(zhǔn)抗干擾能力驗(yàn)證要求G（實(shí)際可能存在的干擾物質(zhì)及達(dá)到的濃度也應(yīng)評(píng)估抗凝劑和樣本保存液等對(duì)結(jié)果的影響。驗(yàn)證方案實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)實(shí)際情況選擇驗(yàn)證方案。（劑3對(duì)照組。分別在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中加入弱陽性樣本（量小于10%，與常規(guī)樣本3判斷標(biāo)準(zhǔn)方案1：弱陽性樣本檢測(cè)仍為弱陽性結(jié)果，則驗(yàn)證通過。證濃度下，干擾物質(zhì)對(duì)測(cè)定有顯著影響。原位雜交技術(shù)分析敏感性和特異性驗(yàn)證要求至少200個(gè)與探針特定對(duì)應(yīng)的基因組目標(biāo)序列應(yīng)被用來進(jìn)行分析敏感性和特異性驗(yàn)證。驗(yàn)證方案樣本至少來自5個(gè)不同個(gè)體，至少50個(gè)（用于驗(yàn)證遠(yuǎn)離著絲粒的探針）或100（用于驗(yàn)證近著絲粒探針胞進(jìn)行原位雜交檢測(cè)。判斷標(biāo)準(zhǔn)敏感性和特異性均不低于90%。定量項(xiàng)目性能驗(yàn)證分子診斷定量檢測(cè)項(xiàng)目的性能驗(yàn)證請(qǐng)參見CNAS-GL037《臨床化學(xué)定量檢驗(yàn)程序性能驗(yàn)證指南》。特定性能驗(yàn)證PCR分析系統(tǒng)的性能驗(yàn)證。核酸提取效率驗(yàn)證要求核酸提取效率包括核酸純度，核酸提取產(chǎn)率和完整性。驗(yàn)證方案聲明的可提取的核酸濃度。A260/2802入一定體積（小于總體積10%）已知濃度的待測(cè)核酸，另一份（B）加入同體積AB公式計(jì)算核酸提取得率，重復(fù)三次測(cè)定，計(jì)算平均值。核酸提取產(chǎn)率=

AB

×100%凝膠電泳，與待測(cè)核酸標(biāo)準(zhǔn)物比較。判斷標(biāo)準(zhǔn)DNA，A260/2801.7-1.9；RNA，A260/2801.8-2.0。核酸提取產(chǎn)率：核酸提取得率應(yīng)不低于廠家聲明或?qū)嶒?yàn)室制定的標(biāo)準(zhǔn)。c無明顯降解。擴(kuò)增效率驗(yàn)證驗(yàn)證要求致時(shí)，定量結(jié)果才準(zhǔn)確。如果懷疑PCR驗(yàn)證方案104-6Ct（K（EE=10-1/K-1判斷標(biāo)準(zhǔn)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品的擴(kuò)增效率均≥90%且≤110%。上機(jī)測(cè)序的性能驗(yàn)證驗(yàn)證要求保證測(cè)序結(jié)果的可靠性。驗(yàn)證方案DNA