微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用

19世紀(jì)中期，關(guān)系到法國經(jīng)濟(jì)命脈的釀造業(yè)曾一度遭受毀滅性的打擊。在生產(chǎn)過程中，出現(xiàn)了葡萄酒變酸、變味的怪事。經(jīng)過一番研究，法國科學(xué)家巴斯德發(fā)現(xiàn)，

導(dǎo)致生產(chǎn)失敗的根源在于發(fā)酵物中混入了雜菌。由此人們認(rèn)識到保持培養(yǎng)物純凈的

重要性。防止雜菌入侵，獲得純凈的培養(yǎng)物，是研究和應(yīng)用微生物的前提。在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物，

一方面需要為培養(yǎng)的微生物提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件，另一方面需要

確保無處不在的其他微生物無法混入。在課題1

中，我們將通過培養(yǎng)大腸桿菌(Escherichiacoli)

的實(shí)驗(yàn)，學(xué)習(xí)微生物培養(yǎng)的基本技術(shù)。課題背景一、基礎(chǔ)知識

(

一)培養(yǎng)基思考：

1、什么叫培養(yǎng)基?2、

培養(yǎng)基的基本成分有哪些?由什么物質(zhì)提供?3、

培養(yǎng)基種類有哪些?1、

培養(yǎng)基的概念人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配置出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)稱培養(yǎng)基。2、

培養(yǎng)基的基本成分一般的培養(yǎng)基均需要碳源、氮源、無機(jī)鹽和水等。碳

源

：CO?

、碳酸鹽等無機(jī)物，糖類(主要)、蛋白質(zhì)、脂肪酸等有機(jī)物氮

源：氮?dú)?、氨氣、氨鹽、硝酸鹽等無機(jī)物，蛋白胨、牛肉青等有機(jī)物培養(yǎng)基組分提供的主要營養(yǎng)牛肉膏5g碳源、磷酸鹽和維生素蛋白胨10g氮源和維生素NaCl5g無機(jī)鹽H?O定容至1000mL氫元素、氧元素一、基礎(chǔ)知識

(一)培養(yǎng)基1000mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成(天然培養(yǎng)基)一、基礎(chǔ)知識

(

一

)培養(yǎng)基思考：

培養(yǎng)基內(nèi)所需的其他條件有哪些?3、

培養(yǎng)基內(nèi)所需的其他條件(1)pH

值如：培養(yǎng)霉菌需酸性、培養(yǎng)細(xì)菌需中性或微堿性(2)特殊營養(yǎng)物質(zhì)一

生長因子(即細(xì)菌生長必需，而自身不能合成的化合物，如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)如：培養(yǎng)乳酸桿菌需要在培養(yǎng)基中添加維生素(3)氧氣的含量如：培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)需要提供無氧的條件碳源氮源生長因子概念凡能為微生物提供所需碳元素的營養(yǎng)物質(zhì)凡能為微生物提供所需氮元素的營養(yǎng)物質(zhì)微生物生長不可缺少的微量有機(jī)物來源無機(jī)碳源：CO?、NaHCO?

等；有機(jī)碳源：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等無機(jī)氮源：N?

、

氨

、銨鹽、硝酸鹽等；有機(jī)氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等酵母膏、蛋白胨、動(dòng)植物組織提取液最常用來源糖類，尤其是葡萄糖銨鹽、硝酸鹽維生素、氨基酸、堿基作用主要用于構(gòu)成微生物的細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物；異養(yǎng)微生物的主要能源物

質(zhì)主要用于合成蛋白質(zhì)，核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物酶和核酸的組成成分一、基礎(chǔ)知識

(一)培養(yǎng)基微生物所需的有機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)及其功能：

《優(yōu)》P

164、培養(yǎng)基的種類(1)按物理狀態(tài)分液體培養(yǎng)基：固體培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基：增菌純化，增菌動(dòng)力檢測，保種在液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上再添

加瓊脂。(2)按成分分合成培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基半天然培養(yǎng)基(3)按用途分選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基

基礎(chǔ)培養(yǎng)基一、基礎(chǔ)知識

(一)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途液體

培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基中未加任何凝固劑。在用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物時(shí)，通過振蕩或攪拌可以增加培養(yǎng)基的通氣量，同時(shí)使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)分布均勻。常用于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)，以及在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行微生物的基礎(chǔ)理論和應(yīng)用方面的研究。固體

培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中加入一定量凝

固劑，使其成為固體狀態(tài)即為固體培養(yǎng)基。在實(shí)驗(yàn)室中，固體培養(yǎng)基一般是加入培養(yǎng)皿或試管中，制成培養(yǎng)微生物的平

板或斜面。固體培養(yǎng)基為微生物提供一個(gè)營養(yǎng)表面，單個(gè)微生物細(xì)胞在這個(gè)營養(yǎng)

表面進(jìn)行生長繁殖，可以形成單個(gè)菌落。固體培養(yǎng)基常用來進(jìn)行微生

物的分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)及菌種

保藏等。半固體

培養(yǎng)基培養(yǎng)基中凝固劑的含量比固體

培養(yǎng)基少，培養(yǎng)基中瓊脂含量

一

般為0.2%～0

.7%。常用來觀察微生物的運(yùn)動(dòng)特征、分

類鑒定等4、

培養(yǎng)基的種類(

1)按物理狀態(tài)分：

液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基(原因：培養(yǎng)基中凝固劑的有無及含量的多少)一、基礎(chǔ)知識

(一)培養(yǎng)基表面生長

均勻混濁生長

沉淀生長液體培養(yǎng)基：固體培養(yǎng)基：菌落無動(dòng)力

有動(dòng)力(彌散)

(是否運(yùn)動(dòng))半固體培養(yǎng)基：合成培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基定義根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。這類培養(yǎng)基含有化學(xué)成分還不清楚

或化學(xué)成分不恒定的天然有機(jī)物成分合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)。天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組織提取液(如雞胚和牛胚浸液)。優(yōu)點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相

對固定；成本低。營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好。缺點(diǎn)缺少某些成分，不能完全滿足體外細(xì)胞生長需要。來源受限；成分復(fù)雜，影響對某些實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析易發(fā)生支原體污染。4、

培養(yǎng)基的種類(

2)按成分來分：

天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。一、基礎(chǔ)知識

(

一)培養(yǎng)基一、基礎(chǔ)知識

(一)培養(yǎng)基4、

培養(yǎng)基的種類(

3

)

按用途來分：選擇培養(yǎng)基：加入某種化學(xué)物質(zhì)，從眾多微生物中分離出所需微生物鑒別培養(yǎng)基：加入某種試劑，鑒別不同種類的微生物幾種選擇培養(yǎng)基舉例：加入青霉素的培養(yǎng)基：

分離酵母菌、霉菌等真菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基：

分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基：

分離自養(yǎng)型微生物唯一碳源為纖維素的培養(yǎng)基：

分解纖維素的細(xì)菌加入氨芐青霉素的培養(yǎng)基：

分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞加入氨基嘌呤的培養(yǎng)基：

分離雜交瘤細(xì)胞一、基礎(chǔ)知識

(二)無菌技術(shù)思考：獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是什么?防止雜菌污染的操作技術(shù)叫什么?1、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵：

防止外來雜菌的入侵2、

無菌技術(shù)的概念：無菌技術(shù)泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法技術(shù)。3、

無菌技術(shù)包括的四個(gè)方面：

P15P15

旁欄思考：無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的?無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。一、基礎(chǔ)知識

(二)無菌技術(shù)超凈工作臺(tái)一、基礎(chǔ)知識

(二)無菌技術(shù)4、

消毒和滅菌(1)概念消毒：

使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表

面或內(nèi)部部分微生物(不包括芽孢和孢子)。對實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒；滅菌：

使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外的所有的微生物，包括芽孢和孢子)。4

將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌；V接種的過程要在酒精燈火焰附近進(jìn)行?！瘫苊庖呀?jīng)滅菌處理的材料用具與周圍物品接觸。玻璃刮鏟(涂抹平板)接種針(穿刺接種)接種環(huán)(劃線接種)類型適用范圍操作方法消

毒

方

法煮沸消毒法日常生活100

℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高溫的液體，如牛奶的消毒70～75℃煮30

min或80

℃煮15

min化學(xué)藥劑消毒生物活體、水源等擦拭等，如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源紫外線消毒房間、儀器設(shè)備紫外線照射30

min滅

菌

方

法灼燒滅菌接種工具、接種時(shí)用的試管口或瓶口等直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒干熱滅菌耐高溫、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿和金屬用具等物品放入干熱滅菌箱，160~

170

℃加熱1～2

h高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿等，生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)室常用高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，100

kPa,溫度121℃,15～30

min一、基礎(chǔ)知識

(二)無菌技術(shù)(2)幾種消毒和滅菌方法及其適用范圍：理化因素的作用強(qiáng)度消滅微生物的范圍芽孢和孢子能

否被消滅消毒較為溫和物體表面或內(nèi)部一

部分微生物不能滅菌強(qiáng)烈物體內(nèi)外所有的微

生物能一、基礎(chǔ)知識

(二)無菌技術(shù)4、

消毒和滅菌(3)消毒與滅菌的比較：

《優(yōu)》P16二、實(shí)驗(yàn)操作

(一)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基思考：

(

1)用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基進(jìn)行大腸桿菌的純化培養(yǎng)，可分為哪兩個(gè)階段進(jìn)行?制備培養(yǎng)基、純化大腸桿菌(2)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟有哪些?1、

步驟：計(jì)算→稱量→溶化→滅菌→倒平板(1)計(jì)算：(2)稱量準(zhǔn)確稱取各種成分。注意事項(xiàng)：牛肉膏要放在稱量紙上稱量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，稱取時(shí)動(dòng)作要迅

速，稱后及時(shí)蓋上瓶蓋。物質(zhì)牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂水重量5g10g5g20g定溶至1000mL二、實(shí)驗(yàn)操作

(一)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1、

步驟：計(jì)算→稱量→溶化→滅菌→倒平板(3)溶化：先將生肉膏連同稱量紙一起放入燒杯，加少量水，加熱。當(dāng)牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻璃棒取出稱量紙。加入蛋白胨和氯化鈉，用玻璃棒攪拌使之溶解，再加入瓊脂，攪拌，

待完全溶解后，加自來水定溶至100mL。(4)滅菌：將配制好的培養(yǎng)基放到錐形瓶中(瓶口加棉塞，包上牛皮紙

)

,

放

入高壓滅菌鍋，

……。培養(yǎng)皿(5～8套，用幾層報(bào)紙包好)放入干熱滅菌箱內(nèi)，

……

。(5

)倒平板：

待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板。二、實(shí)驗(yàn)操作

(一)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1、步驟：計(jì)算→稱量→溶化→滅菌→倒平板1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)

基的溫度?2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰?3.

平板冷凝后，為什么要將平板倒置?4.

在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能

用來培養(yǎng)微生物嗎?為什么?3,用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10~20

mL)例入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。4.等待平板冷卻凝固，大約需5~

10

min。然后，將

平板倒過來放置，使皿蓋在下、皿底在上。1.將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基

的錐形瓶，左手拔出棉塞。2.右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過火焰。倒平板操作討論二、實(shí)驗(yàn)操作

(一)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基2、

注意的問題：

課本P17:

倒平板操作的討論題1、培養(yǎng)基滅菌后要冷卻到50℃時(shí)倒平板。用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度?用手觸摸錐形瓶，溫度下降到剛剛不燙手時(shí)即可開始倒平板。2、

為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰?通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3、平板冷凝后，為什么要將平板倒置?平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。4、在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎?為什么?空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。二、實(shí)驗(yàn)操作

(二)純化大腸桿菌一一平板劃線法1、微生物接種方法：常見的有：

平板劃線法和稀釋涂布平板法。(1)平板劃線法通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體稱菌落。連續(xù)劃線扇形劃線方格劃線交叉劃線二、實(shí)驗(yàn)操作

(二)純化大腸桿菌一一平板劃線法平板劃線法獲取的微生物經(jīng)恒溫培養(yǎng)后的生長情況二、實(shí)驗(yàn)操作

(二)純化大腸桿菌一一平板劃線法平板劃線法獲取的微生物經(jīng)恒溫培養(yǎng)后的生長情況用固體平板分離培養(yǎng)

獲得的不同細(xì)菌菌落3.將試管口通過

火焰。7.灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)城

劃線的末端開始往

第二區(qū)城內(nèi)劃線。重

復(fù)以上操作，在三、

四

、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一6.左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸人平板內(nèi)，劃三至五條平行1.將接種環(huán)放在火焰

上灼燒，直到接種環(huán)

燒紅。2.

在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打

開棉塞。4.將已冷卻的接種環(huán)

伸入菌液中，沾取一環(huán)5.

將試管口通過火焰，并

塞上棉塞。8.

將平板倒

置，放入培養(yǎng)

箱中培養(yǎng)。區(qū)的劃線與第一

區(qū)相連。線，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基。平板劃線操作二、實(shí)驗(yàn)操作

(二)純化大腸桿菌一一平板劃線法課本P18

平板劃線法的討論題1、

為什么在操作的第一步以及劃線之前都要灼燒接種環(huán)?在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎?為什么?第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源

于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)

菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后仍然要灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。課本P18

平板劃線法的討論題2、在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線?以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3、

在做第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線?劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。二、實(shí)驗(yàn)操作(二)純化大腸桿菌一一平板劃線法二、實(shí)驗(yàn)操作

(二)純化大腸桿菌一一稀釋涂布平板法1、

微生物接種方法：(2)稀釋涂布平板法概念：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。步驟：操作過程分兩個(gè)步驟，即系列稀釋操作和涂布平板操作(1)將分別盛有9mL水的試管滅菌并編號。(2)用移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液，注入第二支試管中，輕壓橡皮頭，吹吸三次使之充分混勻。(3

)從101倍稀釋的試管中吸取1mL

稀釋液，注入第三支試管中，重復(fù)步驟2,直至到第六支試管。二、實(shí)驗(yàn)操作

(二)純化大腸桿菌一一稀釋涂布平板法步驟1:系列稀釋操作1mL

1mL

1mL

1mL

1mL1mLymL稀釋液9mL稀釋液9mL稀釋液9mL稀

釋

液9mL稀釋液9mL稀釋液菌液1041061011021031052.

取少量菌液(不超過0.1mL),

滴加到培養(yǎng)基表面。3.將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8~10s。涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作?應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合

注意：

1.將涂布器末端浸在盛有體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精的燒杯中。取出時(shí)，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。2.操作中一定要注意防火!不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精。二、實(shí)驗(yàn)操作

(二)純化大腸桿菌一一稀釋涂布平板法適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。4.

用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表

面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使涂布均勻。步驟中

2材:擇涂布平板操作1.將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。討論涂布器注意：將接種后和未接種

(作為

對照組)的培養(yǎng)

基均放到37℃的

恒溫箱中，培養(yǎng)

12～24h后進(jìn)行

觀察并記錄結(jié)果。二、實(shí)驗(yàn)操作

(二)純化大腸桿菌一一稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法獲取的菌落1、未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長?如果有菌落生長，說明了什么?未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。2、在接種大腸桿菌的培養(yǎng)基上，能否觀察到獨(dú)立的菌落?它們的

大小、形狀、顏色相似嗎?如果接種成功的話，在培養(yǎng)基的表面可觀察到大小、形狀、顏色相似的菌落。3、培養(yǎng)12h和24h后，觀察到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同嗎?如果不同，請分

析產(chǎn)生差異的原因?培養(yǎng)12

h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同。隨著

時(shí)間的延長、菌落的不斷生長，使菌落不斷增大。4、如果在培養(yǎng)基上觀察到不同形態(tài)的菌落，請分析其可能的原因。無菌操作未達(dá)到要求：可能是培養(yǎng)基滅菌不徹底；可能是接種

時(shí)發(fā)生了污染；也可能是在培養(yǎng)的過程中受到了污染。三、結(jié)果分析與評價(jià)基上，培養(yǎng)成菌落后，置于4℃的冰箱中保存(每隔3～6個(gè)月要重新接種培養(yǎng)后

再保存)。(二)甘油管長期保藏在3mL

的甘油瓶中加入1mL

的甘油，高壓滅菌。將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，充分混

合后，置于一20℃的冷凍箱中保存。四、課題延伸一一菌種的保藏(一)試管低溫臨時(shí)保藏將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)1、

器具的滅菌2、

培養(yǎng)基的配制3、

培養(yǎng)基的滅菌

4、

倒平板5、

微生物接種6、

恒溫箱中培養(yǎng)7、

菌種的保存請你總結(jié)：微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的基本操作程序1.將分別盛有9mL

水的6支試管滅

10102101

10