微生物實(shí)驗(yàn)室病原微生物評(píng)估報(bào)告

文件排版存檔編號(hào)：[UYTR-OUPT28-KBNTL98-UYNN208]文件排版存檔編號(hào)：[UYTR-OUPT28-KBNTL98-UYNN208]微生物實(shí)驗(yàn)室病原微生物評(píng)估報(bào)告微生物實(shí)驗(yàn)室病原微生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告瑞昌市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科制

目錄檢驗(yàn)科實(shí)驗(yàn)活動(dòng)生物危害評(píng)估報(bào)告為保證實(shí)驗(yàn)室工作人員在工作中不被危害性生物及物品所侵害，保證危害性物品不外泄，對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作環(huán)境進(jìn)行評(píng)估，以鑒定生物安全防護(hù)等級(jí)，保證生物安全。一、危害程度分類(lèi)及生物安全防護(hù)水平評(píng)估本檢驗(yàn)科是為醫(yī)院診斷、預(yù)防、治療人體疾病或評(píng)估人體健康提供信息為目的，對(duì)來(lái)自人體的材料進(jìn)行臨床生物化學(xué)、臨床微生物、臨床免疫學(xué)、臨床血液、細(xì)胞遺傳學(xué)等檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室。生物源危害主要是由各種檢驗(yàn)標(biāo)本中的微生物，尤其是病原微生物引起的，包括細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)等，具有潛在危險(xiǎn)性，可能引起實(shí)驗(yàn)室感染；檢驗(yàn)科微生物室還進(jìn)行一定數(shù)量的各種條件致病性細(xì)菌及真菌的分離培養(yǎng)工作，工作過(guò)程存在病原微生物對(duì)實(shí)驗(yàn)人員、環(huán)境污染的風(fēng)險(xiǎn)；除之以外實(shí)驗(yàn)室還存在觸電、火災(zāi)、化學(xué)品腐蝕、偷盜等危險(xiǎn)。根據(jù)《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》，本檢驗(yàn)科不涉及《人間傳染的病原微生物名錄》中高致病性微生物的分離培養(yǎng)及高致病性微生物的菌、毒種的保藏，實(shí)驗(yàn)室采用一定防護(hù)措施就能控制感染或防范災(zāi)害，或者對(duì)相應(yīng)病原體存在有效的免疫方法。評(píng)估我檢驗(yàn)科生物安全防護(hù)水平按二級(jí)實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）生物安全要求。二、實(shí)驗(yàn)人員和實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)的一般要求1.吸煙危害評(píng)估及防護(hù)（1）實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)內(nèi)絕對(duì)禁止吸煙；（2）點(diǎn)燃的香煙是易燃液體的潛在火種；（3）香煙、雪茄或煙斗都是傳染細(xì)菌和接觸毒物的途徑。2.實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)食用食物、飲料及其它危害評(píng)估及防護(hù)（1）實(shí)驗(yàn)工作區(qū)內(nèi)不得有食物、飲料及存在“手－口”接觸可能的其它物質(zhì)（2）實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)內(nèi)的冰箱禁止存放食物。專(zhuān)用存放食物的冰箱應(yīng)放置在允許進(jìn)食、喝水的休息區(qū)內(nèi)。3.使用化妝品危害評(píng)估及防護(hù)實(shí)驗(yàn)工作區(qū)內(nèi)禁止使用化妝品進(jìn)行化妝，但允許并建議經(jīng)常洗手的實(shí)驗(yàn)人員使用護(hù)手霜。4.實(shí)驗(yàn)中眼睛和面部的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及防護(hù)（1）處理腐蝕性或毒性物質(zhì)時(shí)，須使用安全鏡、面罩或其它保護(hù)眼睛和面部的防護(hù)用品。（2）工作人員在實(shí)驗(yàn)室的危險(xiǎn)區(qū)內(nèi)不要佩戴隱形眼鏡，除非同時(shí)使用護(hù)目鏡或面罩。（3）使用、處理能夠通過(guò)粘膜和皮膚感染的試劑，或有可能發(fā)生試劑濺溢的情況時(shí)，必須佩帶護(hù)目鏡、面罩或面具式呼吸器。5.實(shí)驗(yàn)中服裝和個(gè)人防護(hù)裝備的一般要求（1）應(yīng)穿著符合實(shí)驗(yàn)室工作需要的服裝，工作服應(yīng)干凈、整潔。當(dāng)工作中有危險(xiǎn)物噴濺到身上的可能時(shí)，應(yīng)使用一次性塑料圍裙或防滲外罩。有時(shí)還需要佩戴其它防護(hù)裝備如：手套、護(hù)目鏡、披肩或面罩等。（2）采血員和其他需要接觸病員的工作人員，在接觸病員時(shí)需穿實(shí)驗(yàn)服或工作服。（3）個(gè)人防護(hù)服裝應(yīng)定期更換以保持清潔，遇被危險(xiǎn)物品嚴(yán)重污染，則應(yīng)立即更換。（4）不得在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)設(shè)值班床，嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)住宿。6.實(shí)驗(yàn)中足部防護(hù)的一般要求在工作區(qū)內(nèi)，應(yīng)穿舒適、防滑、并能保護(hù)整個(gè)腳面的鞋。在有可能發(fā)生液體濺溢的工作崗位，可加套一次性防滲漏鞋套。帆布鞋可吸收化學(xué)物品和有傳染性的液體，所以最好穿皮革或其它防滲漏的合成材料的鞋。7.實(shí)驗(yàn)中頭發(fā)和飾物的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及防護(hù)留長(zhǎng)發(fā)的工作人員應(yīng)將頭發(fā)盤(pán)在腦后，以防止頭發(fā)接觸到被污染物和避免人體脫屑落入工作區(qū)。頭發(fā)不得垂肩，應(yīng)與離心機(jī)、切片機(jī)等正在運(yùn)轉(zhuǎn)的器械保持一定距離8.實(shí)驗(yàn)中胡須的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及防護(hù)蓄有胡須的男性工作人員必須遵守上項(xiàng)（7）的規(guī)定。9.洗手的要求實(shí)驗(yàn)室工作人員在脫下手套后、離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室前、接觸患者前后、以及在進(jìn)食或吸煙前都應(yīng)該洗手。接觸血液、體液或其它污染物時(shí)，應(yīng)立即洗手。10.用口移液的危害評(píng)估及防護(hù)用口液移可導(dǎo)致多種病原體的實(shí)驗(yàn)室感染。所有實(shí)驗(yàn)室操作禁止用口液移，應(yīng)使用助吸器具。11.銳利物品的危害評(píng)估及防護(hù)謹(jǐn)慎處理針頭、解剖刀、和碎玻璃等銳利物品。使用后的針具不要折斷、彎曲、破損、重復(fù)使用或用手重裝在針管上。一次性注射器上的針頭用后不要取下。銳利物品應(yīng)立即放置在專(zhuān)用銳器盒內(nèi)，在完全裝滿(mǎn)之前或48小時(shí)之內(nèi)更換。12.隔離措施的要求接觸患者時(shí)，實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)遵守醫(yī)院的隔離措施。13.工作環(huán)境的要求（1）“清潔”區(qū)和“非清潔”區(qū)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體工作情況由主任選擇并確定“清潔”和“非清潔”工作區(qū)，在清潔區(qū)和非清潔區(qū)之間設(shè)“緩沖室”。被指定為“清潔”的區(qū)域，則應(yīng)努力保持清潔，如采取預(yù)防措施，防止電話(huà)、視頻顯示器終端、鍵盤(pán)、門(mén)柄及其它經(jīng)常被手或手上的手套觸摸的物品的污染，要求工作人員在觸摸設(shè)備（如計(jì)算機(jī)鍵盤(pán)及電話(huà)的保護(hù)罩等）前取下手套，制定儀器設(shè)備和工作面的常規(guī)消毒和清潔制度和對(duì)嚴(yán)重污染的緊急處理措施辦法。被指定為“非清潔”的區(qū)域，允許戴手套接觸所有物品（如電話(huà)、門(mén)柄、計(jì)算機(jī)終端和其它物品），所有這些物品的表面都認(rèn)為是不清潔的。未戴手套的人員如果使用該區(qū)域內(nèi)的電話(huà)、計(jì)算機(jī)終端或其它設(shè)備，應(yīng)該戴上手套，或在使用后立即徹底洗手。“清潔”和“非清潔”區(qū)都應(yīng)保持整潔。實(shí)驗(yàn)臺(tái)至少應(yīng)每天清潔、消毒一次，如有必要可以多次清洗、消毒。在處理濺溢的樣品或嚴(yán)重污染的工作面時(shí)，應(yīng)戴上手套和其它個(gè)人防護(hù)裝備、使用相應(yīng)合適的清潔劑清除所有的濺溢物。（2）冰箱、冷凍柜、水浴和離心機(jī)應(yīng)該定期清洗和消毒（時(shí)間由實(shí)驗(yàn)室主任來(lái)決定），在發(fā)生嚴(yán)重污染后應(yīng)立即進(jìn)行清洗和消毒。進(jìn)行清洗、消毒時(shí)要戴上手套，穿上工作服或其它合適的防護(hù)服。（3）外衣：外衣（實(shí)驗(yàn)服、工作服、和圍裙）應(yīng)懸掛在遠(yuǎn)離散熱器、蒸汽管道、供暖裝置、以及有明火的地方，不要掛在壓縮氣瓶或滅火器上，也不要掛在門(mén)的玻璃隔板上，妨礙視線(xiàn)?！扒鍧崱钡暮汀胺乔鍧崱钡膫€(gè)人防護(hù)服要分開(kāi)存放。（4）垃圾處理：每天至少清理垃圾一次。（5）裝飾：不得在電燈、燈座或儀器上進(jìn)行裝飾，更不要使用電子裝飾物、蠟燭、圣誕樹(shù)等有引起火災(zāi)危險(xiǎn)的裝飾品。（6）為便于清潔消毒，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不應(yīng)有織物裝飾的用具或椅子。（7）個(gè)人物品：實(shí)驗(yàn)工作區(qū)不得存放個(gè)人物品，如錢(qián)包、外套、皮靴、咖啡杯、運(yùn)動(dòng)服、預(yù)包裝的食品和藥品等。（8）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)配備應(yīng)急設(shè)備，如應(yīng)急洗眼裝置，酒精等消毒用品。（9）實(shí)驗(yàn)室應(yīng)安裝非手觸式洗手裝置。（10）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)安裝防蚊蠅裝置，應(yīng)定期投撒滅蟑螂、老鼠的藥物。（11）用后的廢棄物品：實(shí)驗(yàn)工作區(qū)內(nèi)的用后廢棄物品存量不要太大。具危險(xiǎn)性的液體如酸或堿性液體應(yīng)放在視平線(xiàn)以下。較大的廢棄物容器應(yīng)靠近地面存放。（12）出口通路：實(shí)驗(yàn)室的出口和通道必須保持暢通無(wú)阻，不準(zhǔn)堆放物品、垃圾、裝置、或設(shè)備。安全門(mén)必須保持暢通，不得堵塞。注意：無(wú)論任何時(shí)間、何種原因都不得阻塞通往滅火器、火警箱、防火毯、安全淋浴或出口的道路。14.使用玻璃器具的危害評(píng)估及防護(hù)操作玻璃器具時(shí)應(yīng)遵循下述安全規(guī)則：（1）不使用破裂或有缺口的玻璃器具。（2）不要用猛力取下玻璃試管上的塞子，粘緊的試管可用刀切開(kāi)分離。（3）接觸過(guò)傳染性物的玻璃器具，清洗之前，應(yīng)先行消毒。（4）破裂的玻璃器具和玻璃碎片應(yīng)丟棄在有專(zhuān)門(mén)標(biāo)記的、單獨(dú)的、不易刺破的容器里。（5）高熱操作玻璃器具時(shí)應(yīng)戴隔熱手套。（6）在不影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量的前提下，應(yīng)盡量減少使用玻璃器具。15.使用離心機(jī)的危害評(píng)估及防護(hù)感染途徑危害評(píng)估感染途徑危害評(píng)估感染途徑危害評(píng)估皮膚極少粘膜（眼結(jié)膜）可能呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）極少經(jīng)血（針刺傷、切割傷）極少經(jīng)血（蟲(chóng)媒介）極少（1）氣溶膠：離心過(guò)程中應(yīng)控制氣溶膠的產(chǎn)生在最低水平。（2）操作：離心機(jī)只有在蓋好蓋板后，才能啟動(dòng)。（3）傳染性物品：所有能夠產(chǎn)生氣溶膠進(jìn)行播散的生物制品或標(biāo)本，都應(yīng)使用密封的離心管，并在蓋緊的離心頭或轉(zhuǎn)頭中進(jìn)行。（4）為防止氣溶膠飛溢，應(yīng)在離心停止30分鐘后打開(kāi)離心物。（5）清洗：按照消毒隔離制度要求清洗離心機(jī)。（6）平衡：離心時(shí)應(yīng)保持合適的平衡，以保證離心的順利進(jìn)行。16．采集血樣的危害評(píng)估及防護(hù)感染途徑危害評(píng)估感染途徑危害評(píng)估感染途徑危害評(píng)估皮膚極少粘膜（眼結(jié)膜）極少呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）極少經(jīng)血（針刺傷、切割傷）可能經(jīng)血（蟲(chóng)媒介）極少盜竊可能化學(xué)腐蝕極少放射無(wú)（1）每天早晨用500mg/L的”84”消毒液擦拭抽血臺(tái)面及其它物表，并開(kāi)紫外燈消毒至少30分鐘，并做好記錄。（2）工人每天早晨更換消毒液，包括浸泡銳器、止血帶的消毒液和手消毒液。（3）工作人員必須穿工作服，戴好口罩、帽子、和手套。（4）使用合格的一次性用品。嚴(yán)禁使用包裝破損，超過(guò)有效期的一次性用品。（5）嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌技術(shù)操作規(guī)程、靜脈采血必須一人一針一管一巾一帶。微量采血應(yīng)做到一人一針一管一片，對(duì)每位病人操作前洗手或手消毒。（6）無(wú)菌物品如棉球需每天更換，開(kāi)啟后使用不得超過(guò)24小時(shí)。（7）工作人員需對(duì)銳器如采血針采取高度預(yù)防措施，用過(guò)的采血針需浸泡在含有消毒液的厚壁容器中。17.標(biāo)本(血清、血漿、全血、尿)上檢驗(yàn)分析儀檢測(cè)過(guò)程的危害評(píng)估及防護(hù)感染途徑危害評(píng)估感染途徑危害評(píng)估感染途徑危害評(píng)估皮膚極少粘膜（眼結(jié)膜）可能呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）極少經(jīng)血（針刺傷、切割傷）極少經(jīng)血（蟲(chóng)媒介）極少盜竊可能化學(xué)腐蝕無(wú)放射無(wú)（1）為了避免液滴和氣溶膠和擴(kuò)散，實(shí)驗(yàn)室儀器加樣、加液，清洗等過(guò)程應(yīng)在封閉罩內(nèi)進(jìn)行的。（2）實(shí)驗(yàn)中使后的比色盤(pán)，反應(yīng)杯等廢棄物應(yīng)當(dāng)收集在封閉的容器內(nèi)，集中處置。（3）在每一步完成后應(yīng)根據(jù)操作指南對(duì)對(duì)儀器進(jìn)行消毒。血液、體液污染物表時(shí)，應(yīng)立即消毒。（4）工作人員要戴手套進(jìn)行操作。18.標(biāo)本(血清、血漿、全血、尿、糞)手工檢測(cè)過(guò)程的危害評(píng)估及防護(hù)感染途徑危害評(píng)估感染途徑危害評(píng)估感染途徑危害評(píng)估皮膚可能粘膜（眼結(jié)膜）可能呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）可能經(jīng)血（針刺傷、切割傷）可能經(jīng)血（蟲(chóng)媒介）極少盜竊可能化學(xué)腐蝕可能放射無(wú)（1）每天早晨做好實(shí)驗(yàn)室的清潔消毒工作。（2）工作人員要戴口罩、手套進(jìn)行操作。（3）實(shí)驗(yàn)中使用的竹簽用后要用1000mg/L“84”消毒液浸泡。（4）廢棄的標(biāo)本連同試管、蓋帽要用1000mg/L“84”消毒液浸泡，由工人統(tǒng)一清潔后進(jìn)行無(wú)害化處理。（5）實(shí)驗(yàn)中使用的吸頭、一次性塑料杯用后要用1000mg/L“84”消毒液浸泡。（6）標(biāo)本污染物表時(shí)，應(yīng)立即消毒。（7）離心時(shí)，發(fā)生試管破裂或標(biāo)本濺出，由操作者負(fù)責(zé)用有效消毒劑對(duì)離心機(jī)內(nèi)部進(jìn)行及時(shí)消毒處置。19．微生物分離鑒定藥敏試驗(yàn)及基因擴(kuò)增試驗(yàn)活動(dòng)的危害評(píng)估及防護(hù)感染途徑危害評(píng)估感染途徑危害評(píng)估感染途徑危害評(píng)估皮膚可能粘膜（眼結(jié)膜）可能呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）可能經(jīng)血（針刺傷、切割傷）可能經(jīng)血（蟲(chóng)媒介）可能盜竊可能化學(xué)腐蝕極少放射無(wú)（1）每天早晨開(kāi)紫外燈消毒空氣至少30分鐘，同時(shí)做好各物表、儀器的清潔消毒工作。（2）實(shí)驗(yàn)人員要戴手套、帽子進(jìn)行操作。當(dāng)估計(jì)會(huì)出現(xiàn)微生物和危險(xiǎn)物濺出時(shí)要戴好眼罩或面罩。（3）操作中使用的接種環(huán)、鑷子等金屬物品要在酒精燈火焰上燒灼滅菌。（4）可能產(chǎn)生致病性微生物氣溶膠或出現(xiàn)濺出的操作如涂片、接種時(shí)，應(yīng)在生物安全柜內(nèi)操作，并使用個(gè)體防護(hù)設(shè)備。（5）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的各種標(biāo)本、菌種、培養(yǎng)基和其它廢棄物在運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室前必須滅活（高壓、浸泡），需運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室滅活的物品必須放在專(zhuān)用的密閉容器中。（6）操作過(guò)程中發(fā)生菌種污染物表時(shí)，應(yīng)馬上采取措施進(jìn)行物表消毒。（7）當(dāng)發(fā)生致病性微生物氣溶膠污染時(shí)，應(yīng)馬上進(jìn)行人員疏散，通知負(fù)責(zé)人到現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行指導(dǎo)消毒。（8）對(duì)菌種的保存應(yīng)嚴(yán)格遵守菌種保存制度，嚴(yán)禁擅自保存各種國(guó)家法定傳染病菌株或毒株。（9）實(shí)驗(yàn)人員離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室前要去除手套，確認(rèn)無(wú)污染或污染已排除，后方可洗手離去。（10）微生物、PCR實(shí)驗(yàn)室要設(shè)置紗窗、擋鼠板。三、特定實(shí)驗(yàn)活動(dòng)危害評(píng)估（見(jiàn)以下章節(jié)之各種病原體的危害評(píng)估）工作人員素質(zhì)本實(shí)驗(yàn)室共有技術(shù)人員20名，其中申請(qǐng)進(jìn)入BSL-2實(shí)驗(yàn)室20名。學(xué)士學(xué)位3名，3名曾經(jīng)從事微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，3名曾經(jīng)從事無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)經(jīng)歷，5名技術(shù)人員學(xué)習(xí)過(guò)生物安全手冊(cè)并通過(guò)定期培訓(xùn)及考核成績(jī)合格，經(jīng)體檢無(wú)現(xiàn)患嚴(yán)重疾病，本實(shí)驗(yàn)室除HBV攜帶者1名無(wú)其他患傳染性疾病的技術(shù)人員，健康狀態(tài)良好。五、評(píng)估結(jié)論本次評(píng)估本實(shí)驗(yàn)室共19項(xiàng)可能潛在危險(xiǎn)的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)，在實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)施過(guò)程中在無(wú)控制措施情況下可能產(chǎn)生的高危害度5項(xiàng)，中度14項(xiàng)，低度0項(xiàng)；對(duì)危害發(fā)生的可能性分析，實(shí)驗(yàn)危害較大可能發(fā)生的有0項(xiàng)，可能發(fā)生5項(xiàng)，較少可能發(fā)生14項(xiàng)；這些危害造成高度嚴(yán)重后果的5項(xiàng)，后果嚴(yán)重性中度的14項(xiàng)，后果嚴(yán)重性低度的0項(xiàng)。根據(jù)擬采取的預(yù)防控制措施后依然存在的殘留風(fēng)險(xiǎn)為高度0項(xiàng)，中度0項(xiàng)，低度危害19項(xiàng)。評(píng)估：瑞昌市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科評(píng)估人：審核：瑞昌市人民醫(yī)院生物安全管理委員會(huì)審核人：2016年4月2日金黃色葡萄球菌的生物危害評(píng)估報(bào)告一、金黃色葡萄球菌的傳播與致病

金黃色葡萄球菌在自然界中無(wú)處不在，在空氣、水、灰塵及人和動(dòng)物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的機(jī)會(huì)很多。金黃色葡萄球菌腸毒素是個(gè)世界性衛(wèi)生問(wèn)題，在美國(guó)由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒占整個(gè)細(xì)菌性食物中毒的33%，加拿大則更多，占45%，我國(guó)每年發(fā)生的此類(lèi)中毒事件也非常多。

金黃色葡萄球菌的流行病學(xué)一般有如下特點(diǎn)：季節(jié)分布，多見(jiàn)于春夏季；中毒食品種類(lèi)多，如奶、肉、蛋、魚(yú)及其制品。此外，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報(bào)道；上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%，所以人畜化膿性感染部位常成為污染源。

一般說(shuō)，金黃色葡萄球菌可通過(guò)以下途徑污染食品：食品加工人員、炊事員或銷(xiāo)售人員帶菌，造成食品污染；食品在加工前本身帶菌，或在加工過(guò)程中受到了污染，產(chǎn)生了腸毒素，引起食物中毒；熟食制品包裝不嚴(yán)，運(yùn)輸過(guò)程受到污染；奶?；蓟撔匀橄傺谆蚯菪缶植炕摃r(shí)，對(duì)肉體其他部位的污染。而腸毒素形成條件包括：存放溫度，在37℃內(nèi)，溫度越高，產(chǎn)毒時(shí)間越短；存放地點(diǎn)，通風(fēng)不良氧分壓低易形成腸毒素；食物種類(lèi)，含蛋白質(zhì)豐富，水分多，同時(shí)含一定量淀粉的食物，腸毒素易生成。

金黃色葡萄球菌是人類(lèi)化膿感染中最常見(jiàn)的病原菌，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。

葡萄球菌性菌血癥可發(fā)生于任何與血管內(nèi)導(dǎo)管或其他異物有關(guān)的局限性葡萄球菌膿腫或感染,它是嚴(yán)重?zé)齻∪怂劳龅某Ｒ?jiàn)原因。持續(xù)性發(fā)熱常見(jiàn),而且可伴有休克。

葡萄球菌性心內(nèi)膜炎特別好發(fā)于靜脈注射給藥者和裝有人工心臟瓣膜的病人。突然出現(xiàn)心臟雜音,膿毒性栓子和其他經(jīng)典體征便可作出可疑診斷,確診需依據(jù)超聲心動(dòng)圖和血培養(yǎng)。

葡萄球菌性骨髓炎主要見(jiàn)于兒童,可引起寒戰(zhàn),發(fā)熱和受累骨疼痛,繼之出現(xiàn)紅腫。關(guān)節(jié)周?chē)腥境Ｒ痍P(guān)節(jié)積液,提示為化膿性關(guān)節(jié)炎而不是骨髓炎。白細(xì)胞計(jì)數(shù)常＞15000/μl并且血培養(yǎng)常陽(yáng)性。X線(xiàn)變化在10~14日內(nèi)不明顯,骨質(zhì)疏松和骨皮質(zhì)反應(yīng)甚至更長(zhǎng)時(shí)間仍不能測(cè)出,而放射性核素骨掃描則常能較早出現(xiàn)異常。

現(xiàn)在葡萄球菌性小腸結(jié)腸炎很罕見(jiàn),但若住院病人出現(xiàn)發(fā)熱,腸梗阻,腹痛和腹脹,低血壓或腹瀉,特別是新近作過(guò)腹部手術(shù)或接受過(guò)抗生素者,可提示本病。若糞便鏡檢發(fā)現(xiàn)大片的嗜中性白細(xì)胞和革蘭氏陽(yáng)性球菌,則可能作出診斷,但必須排除產(chǎn)毒性艱難梭狀芽胞桿菌感染,這是抗生素相關(guān)性結(jié)腸炎最常見(jiàn)的原因。

金黃色葡萄球菌的致病力強(qiáng)弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶：a.溶血毒素：外毒素，分α、β、γ、δ四種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；b.殺白細(xì)胞素：可破壞人的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；c.血漿凝固酶：當(dāng)金黃色葡萄球菌侵入人體時(shí)，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細(xì)胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化與此酶有關(guān)；d.脫氧核糖核酸酶：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的脫氧核糖核酸酶能耐受高溫，可用來(lái)作為依據(jù)鑒定金黃色葡萄球菌；e.腸毒素：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生數(shù)種引起急性胃腸炎的蛋白質(zhì)性腸毒素，分為A、B、C、D、E及F五種血清型。腸毒素可耐受100°C煮沸30分鐘而不被破壞。它引起的食物中毒癥狀是嘔吐和腹瀉。此外，金黃色葡萄球菌還產(chǎn)生溶表皮素、明膠酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。

二、金黃色葡萄球菌的生物學(xué)特性

典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑μm左右，顯微鏡下呈單個(gè)、成雙以及排列成葡萄串狀。金黃色葡萄球菌屬于葡萄球菌屬，無(wú)芽胞、鞭毛，大多數(shù)無(wú)莢膜，革蘭氏染色陽(yáng)性衰老、死亡和被白細(xì)胞吞噬后的菌體革蘭染色呈陰性。金黃色葡萄球菌營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，需氧或兼性厭氧，最適生長(zhǎng)溫度35~37℃、最適生長(zhǎng)~。

金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10-15%NaCl肉湯中生長(zhǎng)。可分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應(yīng)陽(yáng)性，VP反應(yīng)弱陽(yáng)性。許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。

金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抵抗力，對(duì)磺胺類(lèi)藥物敏感性低，但對(duì)青霉素、紅霉素等高度敏感。

三、金黃色葡萄球菌的檢測(cè)與診斷

1.標(biāo)本采集：采自不同感染部位的各種標(biāo)本，包括血液、腦脊液、穿刺液；痰液、膿液、創(chuàng)傷分泌物、尿液、糞便和嘔吐物等。

2.直接涂片鏡檢：直接涂片檢查在正常情況下呈無(wú)菌狀態(tài)的體液標(biāo)本如血液、腦脊液、穿刺液等，若有檢出革蘭氏陽(yáng)性，顯微鏡下呈葡萄狀排列、無(wú)芽胞、莢膜，直徑μm的球菌。即具有重要的臨床價(jià)值。

3.分離培養(yǎng)：可以選用普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板、血平板和高鹽甘露醇平板，血平板用葡萄糖肉湯增菌培養(yǎng)基。該菌在普通肉湯中呈均勻迅速混濁生長(zhǎng)；若接種于瓊脂平板上35℃過(guò)夜后可形成直徑約2~3mm的厚菌落、濕潤(rùn)有光澤、呈金黃色不透明圓形凸起。若接種于血平板，菌落周?chē)尚纬擅黠@的透明的β—溶血環(huán)。在高甘露醇平板上金黃色葡萄球菌生成淡橙黃色菌落，以此可與其他凝固酶陰性的葡萄球菌相鑒別。

4.鑒別實(shí)驗(yàn)

（1）血漿凝固酶試驗(yàn)：血漿凝固酶是金黃色葡萄球菌所產(chǎn)生的，與其致病力有關(guān)的一種侵襲性酶，其作用是使血漿中的纖維蛋白在菌體表面沉積和凝固以阻礙吞噬細(xì)胞的吞噬。血漿凝固酶分為結(jié)合型和游離型。前者結(jié)合在細(xì)菌的細(xì)胞壁上，能直接作用于血漿中的纖維蛋白原，使之轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，環(huán)繞菌體而形成凝塊。而游離型血漿凝固酶則在產(chǎn)生后被分泌到菌體外，不能直接作用于纖維蛋白原，但可以激活血漿凝血酶原，使之轉(zhuǎn)化成凝血酶，后者再作用于纖維蛋白原使其轉(zhuǎn)化為纖維蛋白。具體的測(cè)量方法也因此分為玻片法和試管法兩種。

玻片法:將待試菌落乳化于玻片上的鹽水中，經(jīng)10~20S證實(shí)無(wú)自凝后，用接種環(huán)取人或兔血漿一環(huán)，與乳化菌液混合，出現(xiàn)凝集者為陽(yáng)性，另設(shè)生理鹽水為陰性對(duì)照。

試管法:吸取兔血漿與金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯24小時(shí)培養(yǎng)物充分混勻，置37℃培養(yǎng)，每隔半小時(shí)觀(guān)察一次，連續(xù)觀(guān)察6小時(shí)，出現(xiàn)凝固，即將小試管傾斜或倒置時(shí)，內(nèi)容物不流動(dòng)，判為陽(yáng)性。

（2）耐熱核酸酶試驗(yàn)：將24小時(shí)肉湯培養(yǎng)物沸水浴處理15min，用接種環(huán)劃線(xiàn)刺種于甲苯胺蘭-DNA平板，35℃培養(yǎng)24小時(shí)，在刺種線(xiàn)周?chē)霈F(xiàn)淡粉色者為陽(yáng)性。本試驗(yàn)金黃色葡萄球菌為陽(yáng)性。

（3）甘露醇發(fā)酵實(shí)驗(yàn)金黃色葡萄球菌可發(fā)酵甘露醇。

（4）Staphaurex膠乳凝集實(shí)驗(yàn)是鑒定金黃色葡萄球菌的一種快速、簡(jiǎn)便的商品化直接凝集試驗(yàn)。其基本原理是在紙片上滴加包被有纖維蛋白原和IgG抗體的聚苯乙烯膠乳，然后用接種環(huán)挑取待鑒定菌株的新鮮培養(yǎng)物加入混勻，若出現(xiàn)凝集塊現(xiàn)象即為陽(yáng)性。

5.生化鑒定如上述，注意與其他凝固酶陽(yáng)性的葡萄球菌的鑒別要點(diǎn)：PYR（吡咯烷酮-β-萘基酰胺試驗(yàn)陰性；VP試驗(yàn)陽(yáng)性；鳥(niǎo)氨酸脫羧酶試驗(yàn)陰性。

6.免疫學(xué)方法用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和對(duì)流免疫電泳方法可檢測(cè)金葡菌的磷壁酸抗體。

7.分子生物學(xué)方法包括PFGE脈沖場(chǎng)凝膠電泳以及酶切圖譜分析等。

四、金黃色葡萄球菌的防治及生物安全防護(hù)

一、細(xì)菌的防治

金黃色葡萄球菌的控制主要包括：

1）防止金黃色葡萄球菌污染食品，防止帶菌人群對(duì)各種食物的污染：定期對(duì)生產(chǎn)加工人員進(jìn)行健康檢查，患局部化膿性感染（如疥瘡、手指化膿等）、上呼吸道感染（如鼻竇炎、化膿性肺炎、口腔疾病等）的人員要暫時(shí)停止其工作或調(diào)換崗位。防止金黃色葡萄球菌對(duì)奶及其制品的污染：如牛奶廠(chǎng)要定期檢查奶牛的乳房，不能擠用患化膿性乳腺炎的牛奶；奶擠出后，要迅速冷至-10℃以下，以防毒素生成、細(xì)菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶為原料，注意低溫保存。對(duì)肉制品加工廠(chǎng)，患局部化膿感染的禽、畜尸體應(yīng)除去病變部位，經(jīng)高溫或其他適當(dāng)方式處理后進(jìn)行加工生產(chǎn)。

2）防止金黃色葡萄球菌腸毒素的生成應(yīng)在低溫和通風(fēng)良好的條件下貯藏食物，以防腸毒素形成；在氣溫高的春夏季，食物置冷藏或通風(fēng)陰涼地方也不應(yīng)超過(guò)6小時(shí)，并且食用前要徹底加熱。

3）無(wú)菌措施(如檢查病人前后徹底洗手和消毒合用的器械)至關(guān)重要。已被感染的病人應(yīng)與其他易感病人隔離,患有活動(dòng)性葡萄球菌感染,即使是局部性的感染(如癤)的醫(yī)護(hù)人員,在其感染治愈前不得接觸病人或器械。無(wú)癥狀的鼻腔帶菌者,除非所帶菌株十分危險(xiǎn)或被懷疑為暴發(fā)流行的傳染源,一般不必隔離。

治療包括膿腫引流,抗生素(重癥病人需腸外給藥)和全身支持療法。培養(yǎng)標(biāo)本應(yīng)在開(kāi)始治療前或更換抗生素之前獲取?？股氐倪x擇和劑量取決于感染的部位,疾病的嚴(yán)重程度和細(xì)菌對(duì)藥物的敏感性。

醫(yī)院獲得的葡萄球菌和大多數(shù)社區(qū)獲得的菌株,通常對(duì)青霉素G,氨芐青霉素和抗假單胞菌青霉素有耐藥性。大多數(shù)菌株對(duì)耐青霉素酶青霉素(甲氧苯青霉素,苯甲異惡唑青霉素,乙氧萘青霉素,鄰氯青霉素,雙氯青霉素),頭孢菌素(頭孢菌素Ⅰ,頭孢唑啉,頭孢菌素Ⅳ,頭孢拉定,頭孢羥唑,頭孢西丁和第三代頭孢菌素),卡巴培南類(lèi)(亞胺培南,美羅匹寧),慶大霉素,萬(wàn)古霉素,替考拉寧,林可霉素和氯林可霉素,是敏感的。雖然頭孢菌素和萬(wàn)古霉素都有效,但通常首選一種耐青霉素酶的青霉素。很多葡萄球菌菌株對(duì)紅霉素,四環(huán)素類(lèi)藥物,氨基糖苷類(lèi),桿菌肽和氯霉素也敏感,但因有更好更安全的藥可用,故很少使用氯霉素和桿菌肽。

目前耐甲氧苯青霉素金黃色葡萄球菌(MRSA)菌株日益增多，這種細(xì)菌雖可從社區(qū)獲得感染的病人中分離得到,但多數(shù)是從感染的靜脈吸毒者和重癥監(jiān)護(hù)室的病人中分離獲得。MRSA菌株通常對(duì)耐β-內(nèi)酰胺酶青霉素,頭孢菌素和卡巴培南類(lèi)有耐藥性。這些細(xì)菌對(duì)氨基糖苷類(lèi)和大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)(紅霉素,克拉霉素,阿齊霉素,林可霉素和氯林可霉素)的耐藥性也很普遍。雖然亞胺培南-西拉司丁或喹諾酮類(lèi)對(duì)某些MRSA感染是有效的,但靜脈注射萬(wàn)古霉素為首選。腎功能正常成人的通用劑量是每6小時(shí)靜脈注射500mg或每12小時(shí)靜滴注1000mg,至少在1小時(shí)內(nèi)滴完。腎功能受損時(shí),劑量應(yīng)根據(jù)血清中藥物的濃度加以調(diào)整,療程視感染部位及病人的反應(yīng)而定,但一般為2~4周。某些嚴(yán)重的或有并發(fā)癥的感染,可能需要靜脈給藥治療6~8周,然后再口服治療1個(gè)月或更長(zhǎng)時(shí)間?？捎糜谔娲f(wàn)古霉素治療MRSA感染的藥物有：TMP-SMZ,成人劑量為T(mén)MP10~15mg/加SMZ50~75mg/,分劑口服或腸外給藥,每次間隔8小時(shí)或12小時(shí),連續(xù)2~4周；利福平(600mg/d)口服或腸外給藥；腸外給亞胺培南-西拉司丁(500mg每6小時(shí)1次)或美羅匹寧~每8小時(shí)1次。但利福平不要單獨(dú)應(yīng)用,因?yàn)榧?xì)菌很易產(chǎn)生抗藥性。在治療異物相關(guān)性MRSA感染或漿膜腔MRSA感染時(shí),利福平和氨基糖苷類(lèi)是有用的輔助藥物。鄰氯青霉素,雙氯青霉素,TMP-SMZ,環(huán)丙沙星及局部用莫匹羅星(mupirocin)可用于治療MRSA帶菌狀態(tài),但MRSA對(duì)這些藥物可產(chǎn)生抗藥性。抗萬(wàn)古霉素的腸球菌(VRE)菌株的流行日益增加,這種菌株在實(shí)驗(yàn)室中可將引起抗萬(wàn)古霉素的基因轉(zhuǎn)為凝固酶陽(yáng)性的金黃色葡萄球菌菌株,而在感染的病人中則轉(zhuǎn)變?yōu)槟堂戈幮云咸亚蚓蛛x株。可是這些葡萄球菌很容易對(duì)治療這類(lèi)感染的其他藥物產(chǎn)生抗藥性。桿菌肽,若有的話(huà),可試用于治療抗萬(wàn)古霉素的葡萄球菌感染。對(duì)這些病人應(yīng)嚴(yán)格隔離,以防他們的細(xì)菌傳播。

二、細(xì)菌的生物安全防護(hù)

根據(jù)《病原微生物生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的微生物名錄（待頒布）金黃色葡萄球菌屬于三類(lèi)，BSL-2。相關(guān)的防護(hù)事宜包括：

（1）操作要求

1、實(shí)驗(yàn)時(shí)，未經(jīng)實(shí)驗(yàn)室主任同意，限制或禁止進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。

2、不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專(zhuān)用櫥柜或冰箱中。

3、所有的操作過(guò)程應(yīng)盡量細(xì)心，避免產(chǎn)生和濺出氣溶膠。

4、對(duì)于污染的銳器，必須時(shí)刻保持高度的警惕，包括針、注射器、玻片、加樣器等。

5、注射和吸取感染材料時(shí)，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭是一體的）。用過(guò)的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄前進(jìn)行人工處理，要不將之小心放入不會(huì)被刺穿的、用于收集廢棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅(jiān)壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓殺菌。

6、打碎的器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在倒掉前，應(yīng)按照相關(guān)的規(guī)定進(jìn)行消毒。

7、所有的培養(yǎng)物、儲(chǔ)存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行的消毒方法進(jìn)行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近實(shí)驗(yàn)室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室。離開(kāi)該系統(tǒng)進(jìn)行消毒的物料，在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝，其包裝應(yīng)符合有關(guān)的法規(guī)。

8、濺出或偶然事件中，明顯暴露于傳染源時(shí)，要立即向?qū)嶒?yàn)室主任報(bào)告。進(jìn)行適當(dāng)?shù)尼t(yī)學(xué)評(píng)估、觀(guān)察、治療，保留書(shū)面記錄。

9、按日常程序、在有關(guān)傳染源的工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或?yàn)⒊龊?、或受到其他傳染源污染后，?shí)驗(yàn)室設(shè)備和工作臺(tái)面應(yīng)當(dāng)使用有效的消毒劑消毒。污染的設(shè)備在送去修理、維護(hù)前，要按照相關(guān)的規(guī)定消毒；在離開(kāi)設(shè)施轉(zhuǎn)移前，要按照相關(guān)的規(guī)定打包運(yùn)輸。

（2）安全設(shè)備

1、正確使用和保養(yǎng)生物安全柜、最好是二級(jí)生物安全柜、或其他合適的人員防護(hù)設(shè)施、或物理遏制裝置。

2、確定可能形成傳染性氣溶膠或?yàn)R出物的實(shí)驗(yàn)過(guò)程，包括離心、研磨、勻漿、劇烈震蕩或混勻、超聲波破裂、開(kāi)啟裝有傳染源的容器、采集感染標(biāo)本等。

3、涉及高濃度或大體積的傳染源時(shí)，若選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心機(jī)，若轉(zhuǎn)頭或安全罩僅在生物安全柜中打開(kāi)，則可在開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室內(nèi)離心。

4、當(dāng)必須在生物安全柜外處理標(biāo)本時(shí)，需采取面部保護(hù)措施（跟鏡、口罩、面罩、或其他防濺裝置），以免傳染源或其他有害物濺或?yàn)⒌矫嫔稀?/p>

5、在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，必須使用專(zhuān)用的防護(hù)性外衣、大褂、罩衫或制服。人員到非實(shí)驗(yàn)室區(qū)域時(shí)，防護(hù)服必須留在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。防護(hù)服可以在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)處理，也可以在洗衣房中洗滌，但不能帶回家中。

6、可能接觸潛在傳染源、被污染的表面或設(shè)備時(shí)，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重復(fù)使用，不能用于接觸“潔凈”的表面（鍵盤(pán)、電話(huà)等），也不應(yīng)當(dāng)戴著到實(shí)驗(yàn)室外。要備有帶滑石粉的乳膠手套。脫掉手套后，要洗手。淋病奈瑟菌的生物危害評(píng)估報(bào)告一、淋病奈瑟菌的傳播與致病

淋病奈瑟菌又稱(chēng)淋球菌，是淋病的病原菌，人類(lèi)是本菌的唯一天然宿主和傳染源。淋病是淋菌性尿道炎的簡(jiǎn)稱(chēng)，是由淋球菌引起的泌尿生殖系統(tǒng)化膿性炎性疾病，它是人類(lèi)很古老的，也是當(dāng)前世界范圍內(nèi)流行非常廣泛的一種性傳播疾病。

淋病患者是主要傳染源，有癥狀或無(wú)癥狀的患者均可通過(guò)性接觸傳播，其中輕癥或無(wú)癥狀的淋病患者是重要的傳染源。其傳播途徑主要包括性交傳染，還可通過(guò)非性接觸傳播，如通過(guò)接觸患者分泌物污染的用品（衣褲、床上用品、毛巾、浴盆、馬桶等）間接感染；孕婦淋病患者當(dāng)羊膜破裂，可繼發(fā)羊膜腔內(nèi)及胎兒感染；新生兒經(jīng)過(guò)患淋病的母體產(chǎn)道時(shí)?？梢鹆芫匝垩祝涣硗馍锌赏ㄟ^(guò)醫(yī)護(hù)人員的手和器具引起醫(yī)源性感染。

本病最初多侵犯尿道、宮頸內(nèi)膜，繼而可波及前列腺、精囊、副睪、子宮內(nèi)膜及輸卵管。有時(shí)肛門(mén)、直腸、咽粘膜、眼結(jié)膜也可受染。尚可經(jīng)血行播散引起菌血癥、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎及腦膜炎，可引起死亡或不育、不孕、失明及尿道狹窄等后果。由于本病潛伏期短、傳染性強(qiáng)、后果嚴(yán)重，因此它是我國(guó)當(dāng)前重點(diǎn)防治的性病之一。

二、淋病奈瑟菌的生物學(xué)特性

淋病奈瑟菌屬奈瑟菌屬，鏡下呈腎形，常成雙排列，鄰近面扁平或稍凹，像兩瓣黃豆對(duì)在一起，大小μm×μm。革蘭氏染色陰性，呈粉紅色，美藍(lán)染色呈藍(lán)色。急性炎癥期細(xì)菌多在患者分泌物的少部分中性粒細(xì)胞的胞漿中，慢性期則多在細(xì)胞外，且有些可呈單個(gè)球形或四聯(lián)狀。人工培養(yǎng)后形態(tài)亦常呈球形、單個(gè)、成雙或四聯(lián)排列。

淋球菌適于潮濕（相對(duì)溫度80％～85％）、溫暖（℃～℃）、中性偏堿（～）、含5％～10％二氧化碳的條件下生長(zhǎng)。最怕干燥，在完全干燥環(huán)境下只能存活1～2小時(shí)，對(duì)溫度變化敏感，超過(guò)38℃或低于30℃則不能生長(zhǎng)，在培養(yǎng)基上室溫放置1～2天即可死亡，在39℃存活13小時(shí)，42℃存活15分鐘，50℃存活5分鐘。如在不完全干燥的衣褲、被褥、毛巾、玩具上則可存活18～24小時(shí)。一般消毒劑容易將它殺滅，在1:4000硝酸銀溶液中7分鐘死亡，1％石炭酸溶液中3分鐘內(nèi)死亡。？

淋球菌較為嬌嫩，酶系統(tǒng)不完整，初代培養(yǎng)普通培養(yǎng)基不易成功，需在含有動(dòng)物蛋白的培養(yǎng)基上，且含有二氧化碳的條件下才能生長(zhǎng)。淋球菌在血瓊脂培養(yǎng)基孵育24小時(shí)后，可形成直徑～1mm的圓形稍隆起，濕潤(rùn)光滑，半透明，邊緣呈花瓣?duì)?，有粘性的露滴狀菌。?/p>

淋球菌的生化反應(yīng)不發(fā)達(dá)，只分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解麥芽糖及蔗糖。藉助上述生化特性亦可與腦膜炎球菌及其他奈瑟菌相鑒別。淋球菌能產(chǎn)生氧化酶和過(guò)氧化氫酶，在診斷上有一定意義。

三、淋病奈瑟菌的實(shí)驗(yàn)室檢查及其診斷

細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)室檢查及其它檢查

（1）涂片檢查：取患者尿道分泌物或?qū)m頸分泌物，作革蘭氏染色，在多形核白細(xì)胞內(nèi)找到革蘭氏陰性雙球菌。涂片對(duì)有大量膿性分泌物的單純淋菌性前尿道炎患者，此法陽(yáng)性率在90%左右，可以初步診斷。女性宮頸分泌物中雜菌多，敏感性和特異性較差，陽(yáng)性率僅為50-60%，且有假陽(yáng)性，因此世界衛(wèi)生組織推薦用培養(yǎng)法檢查女病人。慢性淋病由于分泌物中淋球菌較少，陽(yáng)性率低，因此要取前列腺按摩液，以提高檢出率。咽部涂片發(fā)現(xiàn)革蘭氏陰性雙球菌不能診斷淋病，因?yàn)槠渌紊鷮僭谘什渴钦５木?。另外?duì)癥狀不典型的涂片陽(yáng)性應(yīng)作進(jìn)一步檢查。

（2）培養(yǎng)檢查：淋球菌培養(yǎng)是診斷的重要佐證，培養(yǎng)法對(duì)癥狀很輕或無(wú)癥狀的男性、女性病人都是較敏感的方法，只要培養(yǎng)陽(yáng)性就可確診，在基因診斷問(wèn)世以前，培養(yǎng)是世界衛(wèi)生組織推薦的篩選淋病的唯一方法。

目前國(guó)外推薦選擇培養(yǎng)基有改良的Thayer-Martin（TM）培養(yǎng)基和NewYorkCity（NYC）培養(yǎng)基。國(guó)內(nèi)采用巧克力瓊脂或血瓊脂培養(yǎng)基，均含有抗生素，可選擇地抑制許多其他細(xì)菌生長(zhǎng)。在36℃，70%濕度，含5%-10%CO2（燭缸）環(huán)境中培養(yǎng)，24-48小時(shí)觀(guān)察結(jié)果。培養(yǎng)后還需進(jìn)行菌落形態(tài)，革蘭氏染色，氧化酶試驗(yàn)和糖發(fā)酵試驗(yàn)等鑒定。培養(yǎng)陽(yáng)性率男性80%-95%，女性80-90%。培養(yǎng)后需根據(jù)菌落形態(tài)、革蘭染色、氧化酶試驗(yàn)和糖發(fā)酵試驗(yàn)做出鑒定。培養(yǎng)陽(yáng)性率男性為80％～95％，女性為80％～90％。

（3）抗原檢測(cè)

1．固相酶免疫試驗(yàn)（EIA）：可用來(lái)檢測(cè)臨床標(biāo)本中的淋球菌抗原，在流行率很高的地區(qū)而又不能作培養(yǎng)或標(biāo)本需長(zhǎng)時(shí)間遠(yuǎn)送時(shí)使用，可以在婦女人群中用來(lái)診斷淋球菌感染。

2．直接免疫熒光試驗(yàn)：通過(guò)檢測(cè)淋球菌外膜蛋白I的單克隆抗體作直接免疫熒光試驗(yàn)。但目前在男女二性標(biāo)本的敏感不高，特異性差，加之實(shí)驗(yàn)人員的判斷水平，故該實(shí)驗(yàn)尚不能推薦用來(lái)診斷淋球菌感染。

（4）基因診斷

1．淋球菌的基因探針診斷:淋球菌的基因探針診斷，所用的探針有：質(zhì)粒DNA探針，染色體基因探針和rRNA基因探針。

2、淋球菌的基因擴(kuò)增檢測(cè)PCR技術(shù)和連接酶鏈反應(yīng)的出現(xiàn)進(jìn)一步提高了檢測(cè)淋球菌的靈敏性，它具有快速、靈敏、特異、簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)，可以直接檢測(cè)臨床標(biāo)本中極微量的病原體。

（5）藥敏試驗(yàn)對(duì)培養(yǎng)陽(yáng)性者可進(jìn)一步用紙片擴(kuò)散法做藥敏試驗(yàn)，或用瓊脂平皿稀釋法測(cè)定藥物最小抑菌濃度（MIC），以及用紙片酸度定量法檢測(cè)β－內(nèi)酰胺酶（使用WhatmanI號(hào)濾紙PP-NG菌株能使其顏色由藍(lán)變黃，陽(yáng)性為PPNG，陰性為N-PPNG），以確定淋球菌對(duì)抗生素的敏感性，合理選擇用藥。

四、淋病的預(yù)防

淋病奈瑟菌的預(yù)防要點(diǎn)如下：

1.避免婚外性行為。

2.在性生活中提倡使用避孕套等理化屏障，以防止淋球菌感染。

3.預(yù)防性使用抗生素可減少感染的危險(xiǎn)，可應(yīng)用于已知與淋病患者有性接觸者。

4.按淋病治療方案對(duì)病人進(jìn)行合理治療，徹底消滅傳染源。

5.對(duì)性伴侶應(yīng)進(jìn)行檢查和治療。

6.患者宜注意個(gè)人衛(wèi)生與隔離，不與家人、小孩（尤其女孩）同床、共浴。

7.執(zhí)行對(duì)新生兒硝酸銀溶液或紅霉素溶液預(yù)防滴眼的規(guī)定，防止新生兒淋病性眼炎發(fā)生。

8.病人需經(jīng)徹底治愈后，方可結(jié)婚、生育和安排工作。

五、淋病奈瑟菌的生物安全防護(hù)

根據(jù)《病原微生物生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的微生物名錄（待頒布）霍亂弧菌屬于三類(lèi)，BSL-2。相關(guān)的防護(hù)事宜包括：

（1）操作要求

1、實(shí)驗(yàn)時(shí)，未經(jīng)實(shí)驗(yàn)室主任同意，限制或禁止進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。

2、不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專(zhuān)用櫥柜或冰箱中。

3、對(duì)于污染的銳器，必須時(shí)刻保持高度的警惕，包括針、注射器、玻片、加樣器等。

4、注射和吸取感染材料時(shí)，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭是一體的）。用過(guò)的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄前進(jìn)行人工處理，要不將之小心放入不會(huì)被刺穿的、用于收集廢棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅(jiān)壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓殺菌。

5、打碎的器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在倒掉前，應(yīng)按照相關(guān)的規(guī)定進(jìn)行消毒。

6、所有的培養(yǎng)物、儲(chǔ)存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行的消毒方法進(jìn)行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近實(shí)驗(yàn)室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室。離開(kāi)該系統(tǒng)進(jìn)行消毒的物料，在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝，其包裝應(yīng)符合有關(guān)的法規(guī)。

7、濺出或偶然事件中，明顯暴露于傳染源時(shí)，要立即向?qū)嶒?yàn)室主任報(bào)告。進(jìn)行適當(dāng)?shù)尼t(yī)學(xué)評(píng)估、觀(guān)察、治療，保留書(shū)面記錄。

8、按日常程序、在有關(guān)傳染源的工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或?yàn)⒊龊?、或受到其他傳染源污染后，?shí)驗(yàn)室設(shè)備和工作臺(tái)面應(yīng)當(dāng)使用有效的消毒劑消毒。污染的設(shè)備在送去修理、維護(hù)前，要按照相關(guān)的規(guī)定消毒；在離開(kāi)設(shè)施轉(zhuǎn)移前，要按照相關(guān)的規(guī)定打包運(yùn)輸。

（2）安全設(shè)備

1、正確使用和保養(yǎng)生物安全柜、最好是二級(jí)生物安全柜、或其他合適的人員防護(hù)設(shè)施、或物理遏制裝置。

2、確定可能形成傳染性濺出物的實(shí)驗(yàn)過(guò)程，包括離心、研磨、勻漿、劇烈震蕩或混勻、超聲波破裂、開(kāi)啟裝有傳染源的容器、采集感染標(biāo)本等。

3、涉及高濃度或大體積的傳染源時(shí)，若選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心機(jī)，若轉(zhuǎn)頭或安全罩僅在生物安全柜中打開(kāi)，則可在開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室內(nèi)離心。

4、當(dāng)必須在生物安全柜外處理標(biāo)本時(shí)，需采取面部保護(hù)措施（跟鏡、口罩、面罩、或其他防濺裝置），以免傳染源或其他有害物濺或?yàn)⒌矫嫔稀?/p>

5、在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，必須使用專(zhuān)用的防護(hù)性外衣、大褂、罩衫或制服。人員到非實(shí)驗(yàn)室區(qū)域時(shí)，防護(hù)服必須留在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。防護(hù)服可以在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)處理，也可以在洗衣房中洗滌，但不能帶回家中。

6、可能接觸潛在傳染源、被污染的表面或設(shè)備時(shí)，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重復(fù)使用，不能用于接觸“潔凈”的表面（鍵盤(pán)、電話(huà)等），也不應(yīng)當(dāng)戴著到實(shí)驗(yàn)室外。要備有帶滑石粉的乳膠手套。脫掉手套后，要洗手。結(jié)核桿菌的生物危害評(píng)估報(bào)告一、結(jié)核桿菌的傳播與致病結(jié)核桿菌通常指結(jié)核分枝桿菌和牛分枝桿菌，其中結(jié)核分枝桿菌（Mycobacteriumtuberculosis）是引起人類(lèi)結(jié)核病的主要病原體。

結(jié)核分枝桿菌的主要傳染途徑是經(jīng)呼吸道傳播，由排菌的肺結(jié)核病人在咳嗽、噴嚏或大聲說(shuō)話(huà)時(shí)隨呼吸道分泌物排出到空氣中，或排菌的肺結(jié)核病人隨地吐痰通過(guò)再生氣溶膠(塵埃)，攜帶結(jié)核桿菌，飛揚(yáng)在空氣中，被健康的人吸入后發(fā)生感染和發(fā)病，因此排菌的肺結(jié)核患者(尤其是痰涂片陽(yáng)性未經(jīng)治療者)是結(jié)核病的主要傳染源。一般結(jié)核病患者痰中結(jié)核桿菌越多，傳播的危險(xiǎn)性越大?；颊吲懦龅娘w沫在1-10微米者，在空氣中漂浮時(shí)間長(zhǎng)，傳染性越大?；颊卟∽兒桶Y狀越嚴(yán)重，傳染性也越大。周?chē)巳号c患者接觸越密切者，受感染的機(jī)會(huì)越多。與患者同處于空氣不流通的室內(nèi)的密切接觸者，受感染的可能性增大。未受結(jié)核感染的人是結(jié)核病易感人群，由于結(jié)核病是人畜共患病，哺乳類(lèi)動(dòng)物如牛、鹿、猴、豬、貓、狗等也都可以患結(jié)核病。

感染結(jié)核桿菌后，終身都有可能發(fā)病，發(fā)病時(shí)間因人而異，一般2個(gè)月～20年才發(fā)病。典型肺結(jié)核起病緩慢，病程較長(zhǎng)，有低熱、倦怠、食欲不振、咳嗽及少量咯血。但多數(shù)患者病灶輕微，無(wú)顯著癥狀。（1）癥狀①全身癥狀表現(xiàn)為午后低熱、乏力、食欲不振、消瘦、盜汗等。②呼吸系統(tǒng)癥狀通常為干咳或帶少量黏液痰；繼發(fā)感染時(shí)，痰呈粘液膿性。約1/3患者有不同程度咯血，咯血后常有低熱。大咯血時(shí)可發(fā)生失血性休克，偶因血塊阻塞大氣道引起窒息。病灶炎癥累及壁層胸膜時(shí)，相應(yīng)胸壁有刺痛，一般多不劇烈，隨呼吸及咳嗽而加重。若并發(fā)氣胸或大量胸腔積液，呼吸困難癥狀尤為嚴(yán)重。（2）體征早期病灶小或位于肺組織深部，多無(wú)異常體征。若病變范圍較大，患側(cè)肺部呼吸運(yùn)動(dòng)減弱，叩診呈濁音，聽(tīng)診時(shí)呼吸音減低，或?yàn)橹夤芊闻莺粑?。因肺結(jié)核好發(fā)于肺上葉尖后段及下葉背段，故鎖骨上下、肩胛區(qū)叩診略濁，咳嗽后偶可聞及濕啰音，對(duì)診斷有參考意義。肺部病變發(fā)生廣泛纖維化或胸膜粘連增厚時(shí)，患側(cè)胸廓常呈下陷、肋間隙變窄、氣管移位與叩濁，對(duì)側(cè)可有代償性肺氣腫征。

二、結(jié)核桿菌的生物學(xué)特性

從分類(lèi)學(xué)上看結(jié)核桿菌屬于裂殖菌綱、放線(xiàn)菌目、分枝桿菌科、分枝桿菌屬。

結(jié)核分枝桿菌正常典型的形態(tài)是直或稍彎曲、兩端鈍圓的桿菌，菌體長(zhǎng)1-4納米，寬納米，無(wú)芽胞、無(wú)莢膜、無(wú)鞭毛，生長(zhǎng)發(fā)育期間有分枝生長(zhǎng)傾向。鏡下常呈單個(gè)散在或呈“人、V、T、Y”形排列，菌體多時(shí)細(xì)菌扭集一起呈繩索狀、束狀或叢狀。此外結(jié)核桿菌菌體還具有多形態(tài)特征，受不良生長(zhǎng)條件的影響可分別表現(xiàn)為桿菌型(基本形態(tài))、濾過(guò)型、顆粒型和球菌型(L型)4種不同的類(lèi)型。

分枝桿菌生長(zhǎng)緩慢，在人工培養(yǎng)基內(nèi)繁殖一代約需15-20小時(shí)，一般需2-4周或更長(zhǎng)時(shí)間始見(jiàn)菌落生長(zhǎng)，甚至有極少數(shù)生長(zhǎng)極為緩慢者需8周以上才開(kāi)始有菌落生長(zhǎng)。它為專(zhuān)性需氧菌，生長(zhǎng)的溫度范圍是35-40℃，pH。培養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)要求較高且特殊，培養(yǎng)基需含雞蛋、血清、氨基酸、甘油等營(yíng)養(yǎng)豐富的復(fù)雜有機(jī)物及少量無(wú)機(jī)鹽類(lèi)。而且結(jié)核桿菌隨著環(huán)境的改變易發(fā)生菌落形態(tài)、毒力、L型及藥物耐藥性變異，如在人工培養(yǎng)基上反復(fù)連續(xù)傳代，可產(chǎn)生變異而致毒力降低，

三、結(jié)核桿菌的檢測(cè)與診斷

（1）細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)室檢查及其它檢查

①結(jié)核菌檢查：是確診肺結(jié)核最特異性的方法，痰中找到結(jié)核菌為確診肺結(jié)核的主要依據(jù)。涂片抗酸染色鏡檢快速簡(jiǎn)便。在我國(guó)非典型分枝桿菌尚屬少見(jiàn)，故抗酸桿菌陽(yáng)性，肺結(jié)核診斷基本即可成立。痰菌陽(yáng)性表明其病灶是開(kāi)放性的，具有傳染性。培養(yǎng)法更為精確，尚可作藥物敏感試驗(yàn)與菌型鑒定。但結(jié)核菌生長(zhǎng)緩慢，培養(yǎng)較為費(fèi)時(shí)，但精確可靠，特異性高。若涂片陰性或診斷有疑問(wèn)時(shí)，培養(yǎng)尤其重要；而且，培養(yǎng)后可做藥物敏感性測(cè)定，指導(dǎo)臨床用藥。PCR技術(shù)檢測(cè)結(jié)核菌DNA快速、簡(jiǎn)便，并可鑒定菌型，不足之處是可能出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性。

②影像學(xué)檢查：胸部X線(xiàn)檢查可以發(fā)現(xiàn)肺內(nèi)病變的部位、范圍、有無(wú)空洞或空洞大小、洞壁厚薄等。X線(xiàn)對(duì)各類(lèi)結(jié)核病的透過(guò)度不同，通過(guò)X線(xiàn)檢查能大致估計(jì)結(jié)核病灶的病理性質(zhì)，并能早期發(fā)現(xiàn)肺結(jié)核，以及判斷病情發(fā)展及治療效果，有助于決定治療方案。肺結(jié)核的常見(jiàn)X線(xiàn)表現(xiàn)包括：纖維鈣化的硬結(jié)病灶、浸潤(rùn)性病灶以及干酪樣病灶等。胸部CT檢查對(duì)于發(fā)現(xiàn)微小或隱蔽性病變，了解病變范圍及病變鑒別等方面均有幫助。

③結(jié)核菌素試驗(yàn)：是診斷結(jié)核感染的參考指標(biāo)。使用的變應(yīng)原有舊結(jié)核菌素（oldtuberculin,OT）和結(jié)核菌素的純化蛋白衍化物（purifiedproteinderivative,PPD），現(xiàn)臨床多用PPD。皮內(nèi)注射（5IU），硬結(jié)平均直徑≥5mm為陽(yáng)性反應(yīng)。結(jié)核菌素試驗(yàn)有助于判斷有無(wú)結(jié)核菌感染。若呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，常表示為活動(dòng)性結(jié)核病。結(jié)核菌素試驗(yàn)陽(yáng)性反應(yīng)僅表示曾有結(jié)核感染，并不一定現(xiàn)在患病。結(jié)核菌素試驗(yàn)陰性反應(yīng)除表示沒(méi)有結(jié)核菌感染外，尚需考慮以下情況：結(jié)核菌在感染4～8周后才建立充分變態(tài)反應(yīng)，在這之前，結(jié)核菌素試驗(yàn)可呈陰性；應(yīng)用糖皮質(zhì)激素等免疫抑制劑，或營(yíng)養(yǎng)不良、麻疹、百日咳等患者，結(jié)核菌素反應(yīng)亦可暫時(shí)消失。

④其它檢查結(jié)核病患者血像通常無(wú)改變，嚴(yán)重病例常有繼發(fā)性貧血，急性粟粒型肺結(jié)核時(shí)白細(xì)胞總數(shù)減低或出現(xiàn)類(lèi)白血病反應(yīng)。血沉增快常見(jiàn)于活動(dòng)性肺結(jié)核。用ELISA法檢測(cè)患者血清中特異性抗體，可對(duì)無(wú)痰或痰菌陰性者和肺外結(jié)核的診斷提供參考。纖支鏡檢查對(duì)于發(fā)現(xiàn)氣管內(nèi)膜結(jié)核、了解有無(wú)腫瘤、吸取分泌物、解除阻塞或作病原菌及脫落細(xì)胞檢查，以及取活組織作病理檢查等，均有重要診斷價(jià)值。淺表淋巴結(jié)活檢，有助于結(jié)核的鑒別診斷。

（2）診斷和鑒別診斷

痰結(jié)核菌檢查不僅是診斷肺結(jié)核的主要依據(jù)，亦是考核療效、隨訪(fǎng)病情的重要指標(biāo)。X線(xiàn)檢查是診斷肺結(jié)核的必要手段，對(duì)早期診斷、確定病變部位、范圍、性質(zhì)、了解其演變及選擇治療等均具有重要價(jià)值。在臨床診斷中，我國(guó)現(xiàn)用的分類(lèi)法包括四部分，即肺結(jié)核類(lèi)型、病變范圍及空洞部位、痰菌檢查、活動(dòng)性及轉(zhuǎn)歸。肺結(jié)核分為五型：Ⅰ型為原發(fā)型肺結(jié)核；Ⅱ型為血行播散型肺結(jié)核；Ⅲ型為浸潤(rùn)型肺結(jié)核；Ⅳ型為慢性纖維空洞型肺結(jié)核；Ⅴ型為結(jié)核性胸膜炎。還應(yīng)注意將結(jié)核病與肺癌、肺炎、支氣管擴(kuò)張、慢性支氣管哮喘和其它發(fā)熱性疾病如傷寒、敗血癥、白血病、縱隔淋巴瘤及結(jié)節(jié)病等進(jìn)行鑒別。

四、結(jié)核桿菌的防治及生物安全防護(hù)

細(xì)菌的防治

根據(jù)《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》和《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》中的有關(guān)規(guī)定，結(jié)核病屬于乙類(lèi)傳染病，按照乙類(lèi)傳染病進(jìn)行預(yù)防控制。

在結(jié)核病的預(yù)防方面要針對(duì)傳染源、傳播途徑、易感人群三個(gè)環(huán)節(jié)，采取以管理和控制傳染源為主的綜合性防治措施，努力做到“早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告、早治療”，以利于控制和管理傳染源。臨床上肺結(jié)核化學(xué)治療的原則是早期、規(guī)律、全程、適量、聯(lián)合。整個(gè)治療方案分強(qiáng)化和鞏固兩個(gè)階段。我國(guó)結(jié)核病防治規(guī)劃指南規(guī)定采用統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)治療方案。

表1國(guó)家防癆規(guī)劃的結(jié)核病化療方案

療程化療方案

6個(gè)月2RHZ/4RH？

2ERHZ/4RH或4R2H2

2SRHZ/4RH或4R2H2

8個(gè)月2SRHZ/6TH或6EH

2SRHZ/6S2H2Z2

R代表利福平，H代表異煙肼，Z代表吡嗪酰胺，E代表乙胺丁醇，S代表鏈霉素，

T代表丙硫異煙胺。下標(biāo)數(shù)字表示每日用藥次數(shù)；其余數(shù)字表示用藥月數(shù)，斜線(xiàn)前數(shù)字表示前2個(gè)月，斜線(xiàn)后字表示后幾個(gè)月。

對(duì)復(fù)治病例，一般可用以下幾種方案：①2S(E)RHZ/4RH(E)，督促化療，保證規(guī)律用藥。②初治規(guī)則治療失敗的患者，可用2S3H3Z3E3/6H3R3E3；③慢性排菌者可用敏感的一線(xiàn)藥與二線(xiàn)藥聯(lián)用，應(yīng)嚴(yán)密觀(guān)察藥物不良反應(yīng)，療程以6～12個(gè)月為宜。

對(duì)毒性癥狀嚴(yán)重者，可加用糖皮質(zhì)激素，以減輕炎癥及過(guò)敏反應(yīng)，促進(jìn)滲液吸收，減少纖維組織形成及胸膜粘連。對(duì)咯血患者，應(yīng)對(duì)癥治療，包括休息、止咳、鎮(zhèn)靜以及應(yīng)用止血藥如安絡(luò)血等。

五、細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)

根據(jù)《病原微生物生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的微生物名錄（待頒布）結(jié)核桿菌屬于二類(lèi)，BSL-3。WHO將結(jié)核桿菌生物危害等級(jí)定為Ⅲ級(jí)。所有參與結(jié)核桿菌防治和研究的實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)室人員都必須遵守《結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》和《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程》。

（1）安全防護(hù)

大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室獲得性結(jié)核病是由于處理感染者標(biāo)本引起——可從痰、尿、組織、大便和其它體液標(biāo)本中分離到結(jié)核桿菌。處理標(biāo)本或培養(yǎng)物時(shí)產(chǎn)生氣溶膠是實(shí)驗(yàn)室獲得性結(jié)核病的最重要危險(xiǎn)因素，也可通過(guò)損傷的皮膚接觸感染。因此首先應(yīng)樹(shù)立全程防護(hù)的觀(guān)念，全面加強(qiáng)從事結(jié)核桿菌科研、檢測(cè)、試劑和疫苗生產(chǎn)機(jī)構(gòu)的生物安全管理。嚴(yán)格限定有資質(zhì)開(kāi)展研究的實(shí)驗(yàn)室和研究者。建立健全傳染病病原管理組織；制訂和完善傳染病實(shí)驗(yàn)室生物安全的技術(shù)操作規(guī)范；加強(qiáng)可能暴露于結(jié)核桿菌或潛在感染性材料的相關(guān)業(yè)務(wù)人員生物安全知識(shí)培訓(xùn)和風(fēng)險(xiǎn)和意識(shí)教育；切實(shí)落實(shí)各項(xiàng)管理制度，預(yù)防和控制實(shí)驗(yàn)室等渠道造成結(jié)核桿菌感染和傳播；加強(qiáng)部門(mén)間溝通與合作，加強(qiáng)對(duì)高暴露實(shí)驗(yàn)室工作人員的監(jiān)測(cè)工作，并保證他們能及時(shí)被發(fā)現(xiàn)與治療。當(dāng)進(jìn)行大量活菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，所有操作應(yīng)在BSL-3級(jí)實(shí)驗(yàn)室生物安全柜中進(jìn)行。為防止實(shí)驗(yàn)過(guò)程產(chǎn)生的氣溶膠導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)室感染，所有操作應(yīng)使用三級(jí)生物安全防護(hù)。在具體的操作過(guò)程中包括標(biāo)本留取、運(yùn)送、處理以及廢物處置等程序都應(yīng)防止感染性氣溶膠的產(chǎn)生。病人留取標(biāo)本應(yīng)在獨(dú)立的房間，應(yīng)定時(shí)作好房間消毒，保持通風(fēng)。標(biāo)本應(yīng)留取在封閉的器皿內(nèi)送檢。檢驗(yàn)人員應(yīng)穿戴防護(hù)服、口罩、手套等防護(hù)裝備，嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程，實(shí)驗(yàn)室空氣、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面應(yīng)定時(shí)消毒。痰、尿標(biāo)本找抗酸桿菌，應(yīng)先高壓滅菌后，再涂片染色。尤其是痰標(biāo)本進(jìn)行涂片制作時(shí)，在打開(kāi)標(biāo)本容器、涂片、加熱固定時(shí)容易產(chǎn)生氣溶膠，為防止實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的氣溶膠導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室感染，所有操作應(yīng)在二級(jí)生物安全柜中進(jìn)行，并使用二級(jí)生物安全防護(hù)。痰標(biāo)本培養(yǎng)時(shí)，在標(biāo)本進(jìn)行前處理高速振蕩混合和離心、培養(yǎng)液或上清液的傾倒、轉(zhuǎn)移和接種等操作過(guò)程有產(chǎn)生氣溶膠和意外濺灑的可能，為防止實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的氣溶膠等導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室感染，所有操作應(yīng)在二級(jí)生物安全柜中進(jìn)行，并使用二級(jí)生物安全防護(hù)。藥物敏感性測(cè)定時(shí)，在磨菌、滴加菌液、接種培養(yǎng)物、燒灼接種環(huán)等操作過(guò)程有產(chǎn)生氣溶膠和意外濺灑的可能，實(shí)驗(yàn)者有可能直接大劑量暴露細(xì)菌。因此該項(xiàng)操作一定在BSL-3級(jí)實(shí)驗(yàn)室完成，且最好實(shí)驗(yàn)室內(nèi)要有負(fù)壓。并且操作者著二級(jí)生物防護(hù)用品。

（2）意外事故的處理

結(jié)核桿菌的滅活方式有化學(xué)的和物理的方法。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中：

1)如標(biāo)本或標(biāo)本的前消化處理液被打翻污染操作臺(tái)或地面，應(yīng)以吸滿(mǎn)75%已乙醇溶液的衛(wèi)生紙覆蓋污染區(qū)，15分鐘以后衛(wèi)生紙方可移去；

2)如污染物濺落到身體表面，或有割傷、刺傷、燒傷、燙傷等情況發(fā)生，應(yīng)立即停止實(shí)驗(yàn)工作進(jìn)行緊急處理：更換被污染的實(shí)驗(yàn)服裝，皮膚表面用消毒液清洗，傷口以碘酒及酒精消毒，眼睛用無(wú)菌生理鹽水沖洗；

3)如果發(fā)生菌液溢出、帶菌的培養(yǎng)管破碎等，造成中、小面積污染?？捎帽任廴久娣e大25%以上的紗布覆蓋污染區(qū)域，邊緣用脫脂棉圍住，向紗布傾倒5%苯酚溶液或75%的乙醇溶液，浸泡2小時(shí)以上(其間適量添加溶液防止干燥)，再經(jīng)紫外燈近距離(1米內(nèi))照射2小時(shí)以上；被污染的器械、容器等立即浸泡于75%乙醇溶液中2小時(shí)以上，實(shí)驗(yàn)完成后再進(jìn)行高壓消毒處理；

4)如果發(fā)生氣溶膠污染或大面積污染，應(yīng)立即停止實(shí)驗(yàn)并關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室，對(duì)實(shí)驗(yàn)區(qū)域和實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行紫外燈照射消毒過(guò)夜；第二天對(duì)污染區(qū)域進(jìn)行24小時(shí)封閉空氣熏蒸消毒(乙醛消毒法：5ml乙醛+2g高錳酸鉀/平方米空間)，直接被污染的區(qū)域可參照第3)條進(jìn)行處理。

（3）實(shí)驗(yàn)室人員的防護(hù)

從事結(jié)核桿菌檢測(cè)、研究的實(shí)驗(yàn)室工作人員必須在身體狀況良好的情況下，才能進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作，出現(xiàn)下列情況，不能進(jìn)入：身體出現(xiàn)開(kāi)放性損傷；患發(fā)熱性疾??；感冒、上呼吸道感染、或其他導(dǎo)致抵抗力下降的情況；妊娠、已經(jīng)在實(shí)驗(yàn)室控制區(qū)域內(nèi)連續(xù)工作4h以上，或其他原因造成的疲勞狀態(tài)。

從事結(jié)核桿菌檢測(cè)工作人員可間隔數(shù)年接種卡介苗一次。若操作者或其所在實(shí)驗(yàn)室的工作人員在此期間出現(xiàn)與被操作病原微生物導(dǎo)致疾病類(lèi)似的癥狀或者體征時(shí)，例如發(fā)熱、盜汗、咳嗽、咳痰、咯血或痰中帶血等癥狀，則應(yīng)被視為可能發(fā)生實(shí)驗(yàn)室感染。應(yīng)立即報(bào)告實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人，采取早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告、早治療以控制管理傳染源為主的綜合性防治措施。蠟樣芽胞桿菌的生物危害評(píng)估報(bào)告一、細(xì)菌的傳播與致病

蠟樣芽胞桿菌在自然界分布廣泛，常存在于土壤、灰塵和污水中，植物和許多生熟食品中常見(jiàn)。已從多種食品中分離出該菌，包括肉、乳制品、蔬菜、魚(yú)、土豆、糊、醬油、布丁、炒米飯以及各種甜點(diǎn)等。在美國(guó)，炒米飯是引發(fā)蠟樣芽胞桿菌嘔吐型食物中毒的主要原因；在歐洲大都由甜點(diǎn)、肉餅、色拉和奶、肉類(lèi)食品引起；在我國(guó)則主要與受污染的米飯或淀粉類(lèi)制品有關(guān)。

1950年Hauge在對(duì)挪威奧斯陸某醫(yī)院職工和病員進(jìn)食甜食后引起的食物中毒研究中，首次明確指出蠟樣芽胞桿菌的致病作用。蠟樣芽胞桿菌作為一種食源性疾病的報(bào)導(dǎo)較多，在各種食品中的檢出率也較高，如1982年犬飼等對(duì)日本名古屋所采1641份食品樣品中，有193份檢出了該菌、陽(yáng)性率為%；1984年我國(guó)有關(guān)單位對(duì)南京市所采211份食品樣品中，有81份檢出了該菌，陽(yáng)性率為%。

蠟樣芽胞桿菌食物中毒通常以夏秋季（6-10月）最高。引起中毒的食品常于食前由于保存溫度不當(dāng)，放置時(shí)間較長(zhǎng)或食品經(jīng)加熱而殘存的芽胞以生長(zhǎng)繁殖的條件，因而導(dǎo)致中毒。中毒的發(fā)病率較高，一般為60-100%。但也有在可疑食品中找不到蠟樣芽胞桿菌而引起食物中毒的情況，一般認(rèn)為是由于蠟桿芽胞桿菌產(chǎn)生的熱穩(wěn)定毒素所致。當(dāng)攝入的食品其蠟樣芽胞桿菌數(shù)量達(dá)>106/克時(shí)?？蓪?dǎo)致食物中毒。蠟樣芽胞桿菌食物中毒在臨床上可分為嘔吐型和腹瀉型兩類(lèi)。嘔吐型的潛伏期為小時(shí)，中毒癥狀以惡心、嘔吐為主，偶而有腹痙攣或腹瀉等癥狀，病程不超過(guò)24小時(shí)，這種類(lèi)型的癥狀類(lèi)似于由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒。腹瀉型的潛伏期為6-15小時(shí)，癥狀以水瀉、腹痙攣、腹痛為主，有時(shí)會(huì)有惡心等癥狀，病程約24小時(shí)，這種類(lèi)型的癥狀類(lèi)似于產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的食物中毒。嚴(yán)重者還可導(dǎo)致敗血癥。

蠟樣芽胞桿菌引起食物中毒是由于該菌可產(chǎn)生腸毒素。它產(chǎn)生兩種性質(zhì)不同的代謝物，引起腹瀉型綜合癥的是一種大分子量蛋白；而引起嘔吐型綜合癥的被認(rèn)為是一種小分子量、熱穩(wěn)定的多肽。致嘔吐型綜合癥的腸毒素至今尚未提純，致腹瀉型綜合癥的腸毒素已提純，其純化的腸毒素分子量為×103。致腹瀉的腸毒素能使小白鼠致死。

二、細(xì)菌的生物學(xué)特性

蠟樣芽胞桿菌分類(lèi)為芽胞桿菌屬的第I群，該群有22個(gè)種。根據(jù)營(yíng)養(yǎng)型菌細(xì)胞的寬度分為兩類(lèi)，蠟樣芽胞桿菌、蕈狀芽胞桿菌、蘇云金芽胞桿菌、炭疽芽胞桿菌和巨大芽胞桿菌屬“大細(xì)胞菌種”。

蠟樣芽胞桿菌為革蘭氏陽(yáng)性大桿菌，大小為×3-5μm，需氧或兼性需氧，生長(zhǎng)6h即可形成原形芽胞，芽胞位于菌體的中心或次末端不突出菌體，菌體兩端較平整，多數(shù)呈鏈狀排列，與炭疽桿菌相似。引起食物中毒的菌株多為周鞭毛，有動(dòng)力無(wú)莢膜。它的生長(zhǎng)溫度為25-37℃，最佳溫度30-35℃。在肉湯中生長(zhǎng)混濁有菌膜或壁環(huán)，振搖易乳化。在普通瓊脂上生成的菌落較大，直徑3-10mm，灰白色、不透明，表面粗糙似毛玻璃狀或融蠟狀，邊緣常呈擴(kuò)展?fàn)罟识妹?。偶有產(chǎn)生黃綠色色素，在血瓊脂平板上呈草綠色溶血。在甘露醇、卵黃多粘菌素（MYP）平板上，呈伊紅粉色菌落。能分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、水楊素等，VP實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性，可液化明膠，卵磷脂酶陽(yáng)性，但多次傳代后，其生化特性?？筛淖?。

此外蠟桿芽胞桿菌耐熱，其食物中毒菌株中的游離芽胞能耐受100℃30分鐘，而干熱滅菌需120℃60分鐘才能殺死。本菌對(duì)氯霉素、紅霉素和慶大霉素敏感，對(duì)青霉素、磺胺類(lèi)和呋喃類(lèi)耐藥。

三、細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)室檢查及其它檢查

1.標(biāo)本收集采集可疑食物或收集糞便和嘔吐物進(jìn)行直接涂片染色鏡檢和其他操作。

2.活菌計(jì)數(shù)無(wú)菌操作稱(chēng)取樣品50g放入滅菌攪拌缸內(nèi)。加Butterfield磷酸鹽緩沖稀釋液450mL，以高速（）均質(zhì)2min。用上述1:10稀釋液，連續(xù)稀釋供蠟樣芽胞桿菌計(jì)數(shù)。移取10mL均質(zhì)樣液（1:10稀釋?zhuān)┘拥?0mL空白液中，從10-2到10-6制備一系列稀釋液，充分混勻，并繼續(xù)稀釋直到10-6為止。取樣品的各個(gè)稀釋液（包括1:10）接種2只MYP（甘露醇一卵黃多粘菌素瓊脂）平板，用滅菌玻璃棒在每只平板表面涂布均勻。將平板置30℃培養(yǎng)24小時(shí)，并檢查菌落周?chē)谐恋砣φ?，表示產(chǎn)生卵磷脂酶。蠟樣芽胞桿菌菌落通常是粉紅色，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)則更明顯。如果上述反應(yīng)不清晰，應(yīng)將平板再培養(yǎng)24小時(shí)后計(jì)數(shù)，從MYP平板上挑取典型菌落5個(gè)或更多，移種到營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上供蠟樣芽胞桿菌證實(shí)試驗(yàn)用。

技術(shù)被推薦用于食品中低于10個(gè)/g蠟樣芽胞桿菌的檢驗(yàn)。某些不適合用平板計(jì)數(shù)法的脫水淀粉類(lèi)食品也可用此法檢驗(yàn)。在胰酪胨大豆多粘菌素肉湯中接種3管MPN系列，10-1、10-2、10-3的稀釋液各接種1mL于3管。將培養(yǎng)管置30℃培養(yǎng)48±2小時(shí)，檢查生長(zhǎng)密集、典型的蠟樣芽胞桿菌。將陽(yáng)性管培養(yǎng)物劃線(xiàn)接種于MYP平板，于30℃培養(yǎng)24-48小時(shí)。以下步驟同2。

4.分離培養(yǎng)將可疑食物置無(wú)菌乳缽中，加適量生理鹽水研磨后，劃線(xiàn)接種于普通瓊脂平板或血瓊脂平板，若為嘔吐物可直接劃線(xiàn)接種于上述平板，于37℃培養(yǎng)，

5.若有類(lèi)似蠟樣芽胞桿菌的菌落出現(xiàn)再進(jìn)一步分離純化以及進(jìn)行生化反應(yīng)。

6.蠟樣芽胞桿菌的證實(shí)試驗(yàn)蠟樣芽胞桿菌的分離物應(yīng)符合下述條件：1)革蘭氏陽(yáng)性產(chǎn)芽胞大桿菌，其芽胞不突出體外；2）在MYP瓊脂上產(chǎn)生卵磷脂酶而不發(fā)酵甘露醇；3）厭氧培養(yǎng)生長(zhǎng)，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸；4）還原硝酸鹽；5）VP陽(yáng)性；6）分介L(zhǎng)-酪氨酸；7）在含%溶菌酶的培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)。

7.蠟樣芽胞桿菌群的鑒別試驗(yàn)要鑒別典型蠟樣芽胞桿菌和蠟樣芽胞桿菌群的其它種還需進(jìn)一步進(jìn)行下述試驗(yàn)：1）動(dòng)力試驗(yàn)；2）根狀生長(zhǎng)試驗(yàn)；3）溶菌活性試驗(yàn)；4）蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗(yàn)：蠟樣芽胞桿菌有動(dòng)力、強(qiáng)溶血、不形成根狀菌落，或不產(chǎn)生蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶。而且蠟樣芽胞桿菌在4℃、、鹽濃度18%的條件下仍能存活或生長(zhǎng)。通過(guò)高溫殺菌或適當(dāng)?shù)睦洳乜梢钥刂葡灅友堪麠U菌的增殖。

8.血清學(xué)分型、噬菌體分型。

四、細(xì)菌的防治

蠟樣芽胞桿菌所引起的食物中毒多因食品在食用前保存溫度較高（20℃以上）和放置時(shí)間較長(zhǎng)，故對(duì)中毒的預(yù)防包括：由于蠟樣芽胞桿菌在15℃以下不繁殖，剩飯、剩菜應(yīng)放在低溫保存。該菌污染的食品一般無(wú)腐敗變質(zhì)的異味，不易被發(fā)覺(jué)。因此，剩飯、剩菜在食用前一定要再加熱。注意食品的貯藏和個(gè)人衛(wèi)生，防止塵土、昆蟲(chóng)及其他不潔物污染食品。若一旦發(fā)生了中毒，則立即停止食用可疑污染的食品，多飲水。一般不需要使用抗生素治療。腹瀉較重者可到醫(yī)院就診。

五、細(xì)菌的生物安全防護(hù)

根據(jù)《病原微生物生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的微生物名錄（待頒布）蠟樣芽胞桿菌屬于三類(lèi)，BSL-2。

（1）操作要求

1、實(shí)驗(yàn)時(shí)，未經(jīng)實(shí)驗(yàn)室主任同意，限制或禁止進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。

2、不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專(zhuān)用櫥柜或冰箱中。

3、所有的操作過(guò)程應(yīng)盡量細(xì)心，避免產(chǎn)生和濺出氣溶膠。

4、對(duì)于污染的銳器，必須時(shí)刻保持高度的警惕，包括針、注射器、玻片、加樣器等。

5、注射和吸取感染材料時(shí)，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭是一體的）。用過(guò)的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄前進(jìn)行人工處理，要不將之小心放入不會(huì)被刺穿的、用于收集廢棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅(jiān)壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓殺菌。

6、打碎的器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在倒掉前，應(yīng)按照相關(guān)的規(guī)定進(jìn)行消毒。

7、所有的培養(yǎng)物、儲(chǔ)存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行的消毒方法進(jìn)行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近實(shí)驗(yàn)室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室。離開(kāi)該系統(tǒng)進(jìn)行消毒的物料，在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝，其包裝應(yīng)符合有關(guān)的法規(guī)。

8、濺出或偶然事件中，明顯暴露于傳染源時(shí)，要立即向?qū)嶒?yàn)室主任報(bào)告。進(jìn)行適當(dāng)?shù)尼t(yī)學(xué)評(píng)估、觀(guān)察、治療，保留書(shū)面記錄。

9、按日常程序、在有關(guān)傳染源的工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或?yàn)⒊龊?、或受到其他傳染源污染后，?shí)驗(yàn)室設(shè)備和工作臺(tái)面應(yīng)當(dāng)使用有效的消毒劑消毒。污染的設(shè)備在送去修理、維護(hù)前，要按照相關(guān)的規(guī)定消毒；在離開(kāi)設(shè)施轉(zhuǎn)移前，要按照相關(guān)的規(guī)定打包運(yùn)輸。

（2）安全設(shè)備

1、正確使用和保養(yǎng)生物安全柜、最好是二級(jí)生物安全柜、或其他合適的人員防護(hù)設(shè)施、或物理遏制裝置。

2、確定可能形成傳染性氣溶膠或?yàn)R出物的實(shí)驗(yàn)過(guò)程，包括離心、研磨、勻漿、劇烈震蕩或混勻、超聲波破裂、開(kāi)啟裝有傳染源的容器、采集感染標(biāo)本等。

3、涉及高濃度或大體積的傳染源時(shí)，若選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心機(jī)，若轉(zhuǎn)頭或安全罩僅在生物安全柜中打開(kāi)，則可在開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室內(nèi)離心。

4、當(dāng)必須在生物安全柜外處理標(biāo)本時(shí)，需采取面部保護(hù)措施（跟鏡、口罩、面罩、或其他防濺裝置），以免傳染源或其他有害物濺或?yàn)⒌矫嫔稀?/p>

5、在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，必須使用專(zhuān)用的防護(hù)性外衣、大褂、罩衫或制服。人員到非實(shí)驗(yàn)室區(qū)域時(shí)，防護(hù)服必須留在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。防護(hù)服可以在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)處理，也可以在洗衣房中洗滌，但不能帶回家中。

6、可能接觸潛在傳染源、被污染的表面或設(shè)備時(shí)，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重復(fù)使用，不能用于接觸“潔凈”的表面（鍵盤(pán)、電話(huà)等），也不應(yīng)當(dāng)戴著到實(shí)驗(yàn)室外。要備有帶滑石粉的乳膠手套。脫掉手套后，要洗手。

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假結(jié)核棒狀桿菌廣泛分布于自然界的水和土壤中，是一種條件致病菌。主要引起家畜（羊、馬）的慢性淋巴淋巴管炎，偶爾也會(huì)引起人的淋巴結(jié)炎、肺炎等疾病。

二、細(xì)菌的生物學(xué)特性

假結(jié)核棒狀桿菌屬于棒狀桿菌屬，是一種兼性厭氧，沒(méi)有芽胞、沒(méi)有莢膜，抗酸陰性的革蘭陽(yáng)性桿菌。細(xì)菌末端膨大呈棒狀，菌體有時(shí)成單或成雙。有時(shí)菌體染色不均勻呈柵欄狀排列。它沒(méi)有動(dòng)力，但觸酶呈陽(yáng)性、尿素陽(yáng)性。

所使用的培養(yǎng)基包括血和亞碲酸鉀，比如Hoyle亞碲酸鹽培養(yǎng)基是一種很好的選擇性鑒別培養(yǎng)基。假結(jié)核棒狀桿菌可以在血平板上產(chǎn)生輕微的溶血。

三、細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)室檢查及其它檢查

1.鏡下形態(tài)：革蘭染色呈革蘭陽(yáng)性桿菌、多型性、錐形或棒狀的細(xì)菌末端略有彎曲。菌體單個(gè)或成雙，時(shí)常呈“v”型。有些菌體染色微弱或不均勻，呈珠狀。2.分離培養(yǎng):血平板－皮膚拭子培養(yǎng)：5-10％CO235-37℃40-48h；喉拭子培養(yǎng)：厭氧，35-37℃16-24h；菌落周?chē)形⑿〉腂溶血環(huán)；

Hoyle亞碲酸鹽培養(yǎng)基：35-37℃16-48h：灰色/黑色,非常干燥的透明菌落。

3.生化試驗(yàn)：硝酸鹽陰性；尿素陽(yáng)性；

4.PCR是一種快速的試驗(yàn)，可以在接受到菌株后3-4小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。

5.毒素確診試驗(yàn)還要結(jié)合毒素的表型試驗(yàn)。

6.如果初步試驗(yàn)結(jié)果提示有假結(jié)核棒狀桿菌，需要結(jié)合臨床癥狀考慮結(jié)果。

四、細(xì)菌的生物安全防護(hù)

根據(jù)《病原微生物生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的假結(jié)核棒狀桿菌屬于三類(lèi)，BSL-2。實(shí)驗(yàn)室在處理過(guò)程中可能會(huì)產(chǎn)生氣溶膠，所以懷疑假結(jié)核棒狀桿菌的菌株必須在生物安全柜內(nèi)處理。對(duì)于尿素試驗(yàn)認(rèn)為使用尿素斜面比使用尿素液體培養(yǎng)基安全。在運(yùn)送時(shí)還應(yīng)當(dāng)遵守郵政局的危險(xiǎn)品運(yùn)送手冊(cè)，如果以上的初步試驗(yàn)提示該菌株是假結(jié)核棒狀桿菌,需立即通知上級(jí)相關(guān)單位,并根據(jù)實(shí)驗(yàn)室安全手冊(cè)進(jìn)行隔離。

志賀氏菌屬的生物危害評(píng)估報(bào)告一、細(xì)菌的傳播與致病志賀菌屬是主要的腸道病原菌之一，也是引起人類(lèi)細(xì)菌性痢疾的病原體。本屬細(xì)菌分布于全世界,是炎癥性痢疾的典型病原菌,很多地區(qū)5%~10%的腹瀉性疾病是由該菌屬所致。弗氏志賀菌和宋內(nèi)志賀菌比鮑氏志賀菌和毒力特別強(qiáng)的痢疾志賀菌分布更廣。美國(guó)猶他州所有臨床實(shí)驗(yàn)室工作者志賀菌病的年發(fā)病率為1000，而臨床微生物學(xué)工作者的年發(fā)病率為1000。在英國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室，沙門(mén)菌病和志賀菌病的年發(fā)病率分別為1000和1000，大多數(shù)感染者為微生物學(xué)工作者。感染者和恢復(fù)期帶菌者的排泄物是傳染源,經(jīng)糞-口途徑直接傳播,經(jīng)污染的食物或物體可間接傳播。蒼蠅可作為機(jī)械性媒介,水源性傳播不常見(jiàn)。衛(wèi)生條件差的擁擠人群中最易發(fā)生流行,流行區(qū)的幼兒志賀菌病特別常見(jiàn),而成人得病較輕。恢復(fù)期和亞臨床帶菌者是重要傳染源,但真正的長(zhǎng)期帶菌者罕見(jiàn)。感染很少或不誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫性,因此同一菌種的再感染是可能的。志賀菌可穿入低位腸段的粘膜,引起粘液分泌,充血,白細(xì)胞浸潤(rùn),水腫,并常有表淺粘膜潰瘍。志賀菌感染相關(guān)的水瀉由內(nèi)毒素介導(dǎo)所致,因這種內(nèi)毒素可引起腸道分泌增多。由志賀菌感染所導(dǎo)致的癥狀包括：（1）急性細(xì)菌性痢疾經(jīng)潛伏期1~4日,幼兒的起病突然,表現(xiàn)為發(fā)熱,煩躁不安,嗜睡,厭食,惡心或嘔吐,腹瀉,腹痛和腹脹以及里急后重。3日內(nèi)大便中出現(xiàn)血液,膿液和粘液.大便次數(shù)可增加到≥20次/d,體重下降和失水嚴(yán)重。若不治療,患兒可在12日內(nèi)死亡；若患兒存活,則在第2周急性癥狀消退.成人可表現(xiàn)為無(wú)發(fā)熱的非血性,非粘液性腹瀉,很少有或完全沒(méi)有里急后重.但其最初的癥狀可為發(fā)作性腹絞痛,急于排便,起初排出成形大便并在排便后可緩解腹痛.以后反復(fù)發(fā)作,并且日趨嚴(yán)重和頻繁.腹瀉變得明顯,系軟便或含有粘液,膿及常有血液的水瀉。嚴(yán)重的里急后重可造成直腸脫垂和大便失禁。成人患病?？勺杂狠p者4~8日,重者3~6周。伴有循環(huán)虛脫的明顯脫水和電解質(zhì)喪失及死亡主要發(fā)生于＜2歲的嬰兒和衰弱的成人；（2）慢性細(xì)菌性痢疾主要是因急性菌痢治療不徹底，造成反復(fù)發(fā)作遷延不愈，病程超過(guò)兩個(gè)月以上者；若是有病史、無(wú)癥狀，結(jié)腸鏡檢或糞便培養(yǎng)陽(yáng)性者稱(chēng)為隱匿型菌痢，在流行病學(xué)上亦具有重要的意義；（3）攜帶者是指恢復(fù)期帶菌、慢性帶菌者和健康帶菌者三種類(lèi)型，尤其是健康帶菌者是主要的傳染源。除此以外，還可發(fā)生繼發(fā)性細(xì)菌感染,特別是衰弱和脫水的病人。嚴(yán)重的粘膜潰瘍可引起明顯的急性失血.其他并發(fā)癥雖不多見(jiàn),但可有中毒性神經(jīng)炎,關(guān)節(jié)炎,心肌炎和罕見(jiàn)的腸穿孔。小兒志賀菌病可并發(fā)溶血性尿毒癥綜合征。本病不會(huì)變成慢性,也不會(huì)成為潰瘍性結(jié)腸炎的病因?qū)W因素。但有HLA-B27基因型的病人在志賀菌病后常常比較容易發(fā)生關(guān)節(jié)炎或明顯的Reiter綜合征。二、細(xì)菌的生物學(xué)特性志賀菌（Shigella）隸屬于腸桿菌科，分為A,B,C,D4個(gè)亞群——A群痢疾志賀菌、B群福氏志賀菌、C群鮑特志賀菌和D群宋內(nèi)志賀菌，而各亞群又可分各種血清決定型。它們均為革蘭氏陰性桿菌，菌體短小、無(wú)芽胞無(wú)鞭毛，有菌毛，在胞質(zhì)中存在著大小兩種質(zhì)粒，與該菌的侵襲性和耐藥性有關(guān)。志賀菌為兼性厭氧菌，對(duì)理化因素的抵抗力較弱，對(duì)酸敏感，在1%的石炭酸中15~30min可被殺死，因此運(yùn)輸時(shí)必須采用含有緩沖劑的培養(yǎng)基。它們最適的生長(zhǎng)溫度為37℃，pH為~，對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求不高，可在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。在腸道培養(yǎng)基上可形成不發(fā)酵乳糖的無(wú)色半透明菌落，而宋內(nèi)志賀菌還常形成粗糙型的菌落，也因此可發(fā)生S-R變異。志賀菌屬?zèng)]有H抗原，但有O抗原以及部分菌種的K抗原。O抗原可耐熱，100℃60min不被破壞，它是分類(lèi)的依據(jù)，具有群特異性以及型特異性?xún)煞N抗原。正是依據(jù)O抗原的不同以及生化反應(yīng)的結(jié)果將志賀菌分成了4個(gè)血清群和32個(gè)血清型；而K抗原存在于A群和C群的全部菌型以及B群種的部分菌種中，不耐熱，對(duì)分類(lèi)無(wú)意義，但它的存在將阻斷O抗原與相應(yīng)抗血清的凝集作用，故可先以100℃60min破壞之。志賀菌的致病因素主要有：1.菌毛的侵襲作用；2.內(nèi)毒素：各群志賀菌都能形成強(qiáng)烈的內(nèi)毒素，其作用機(jī)制包括：破壞腸粘膜上皮,造成粘膜下層炎癥,并有毛細(xì)血管血栓形成,以致壞死,脫落,形成潰瘍,出現(xiàn)粘液膿血便；使腸壁通透性增高,促進(jìn)毒素吸收,引起一系列毒血癥的癥狀,如發(fā)熱,神志障礙,甚至中毒性休克；作用于腸壁植物神經(jīng),使腸蠕動(dòng)失調(diào)并痙攣,尤以直腸括約肌受累明顯,因而發(fā)生腹痛,腹瀉,里急后重等癥狀；3.外毒素：A群志賀菌Ⅰ型和Ⅱ型能產(chǎn)生志賀外毒素(ST),ST能引起Vero細(xì)胞病變,故也稱(chēng)Vero毒素(VT)。ST的組成是由1個(gè)A及5個(gè)B亞單位組成.B亞單位是毒素與靶細(xì)胞表面糖脂受體結(jié)合的單位;A亞單位鏈為毒性部分能抑制蛋白質(zhì)的合成。ST具有細(xì)胞毒素,腸毒素和神經(jīng)毒素3種生物學(xué)活性：腸毒素性，此毒素有類(lèi)似和霍亂腸毒素的作用能引起腹瀉與嘔吐；細(xì)胞毒性，它可以阻止小腸上皮細(xì)胞對(duì)糖和氨基酸的吸收；神經(jīng)毒性，在痢疾志賀菌引起的重癥感染者可作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng),造成昏迷或腦膜炎；ST在體外還可加重對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷。ST和內(nèi)毒素的持續(xù)存在的聯(lián)合作用可能與志賀菌感染的溶血性尿毒綜合征等并發(fā)癥有關(guān)。二、細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)室檢查及其它檢查主要根據(jù)暴露史、臨床特征與實(shí)驗(yàn)室檢查診斷。急性期有發(fā)熱、腹痛、腹瀉、里急后重及黏液膿血便，左下腹明顯壓痛。糞便鏡檢有多數(shù)白細(xì)胞或膿細(xì)胞及紅細(xì)胞即可診斷。確診則依賴(lài)于糞便培養(yǎng)出痢疾桿菌。1.血常規(guī)急性期白細(xì)胞總數(shù)輕至中度增高，多在（10~20）×109/L，中性粒細(xì)胞亦增高。2.直腸鏡檢查可見(jiàn)粘膜表面彌漫性充血并