食用菌菌種生產(chǎn)

關(guān)于食用菌菌種生產(chǎn)第一節(jié)菌種概述一、菌種概念二、菌種類型三、菌種生產(chǎn)程序第2頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、菌種概念菌種經(jīng)過(guò)人工培養(yǎng)的純菌絲體。來(lái)歷野生菌馴化

原菌株改良

生物技術(shù)創(chuàng)新優(yōu)良

菌株擴(kuò)大

繁殖用于

生產(chǎn)實(shí)行純培養(yǎng)

不含任何雜菌基本

要求第3頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、菌種類型一級(jí)菌種二級(jí)菌種三級(jí)菌種級(jí)別按保藏用菌種實(shí)驗(yàn)用菌種

生產(chǎn)用菌種目的狀態(tài)：固體菌種

液體菌種

固化菌種第4頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天（一）目的不同的菌種1、保藏用種：指用于中、長(zhǎng)期保持菌種的生活力和原有性狀的菌種。2、實(shí)驗(yàn)用種：供實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行科學(xué)試驗(yàn)、研究的菌種。3、生產(chǎn)用種（商業(yè)菌種）：供食用菌大面積栽培使用的菌種。第5頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）級(jí)別不同的菌種1、一級(jí)種（母種）從大自然中用分離法首次得到的

純次生菌絲體概念概況培養(yǎng)環(huán)境試管、斜面培養(yǎng)基用途再生母種擴(kuò)大原種

保藏用種菌絲弱而少、不可直接栽培特點(diǎn)第6頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天第7頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天2、二級(jí)種（原種）將母種擴(kuò)大至粗放培養(yǎng)基上

形成的菌種概念概況培養(yǎng)環(huán)境菌絲較多而壯、適應(yīng)性較強(qiáng)特點(diǎn)用途擴(kuò)大栽培種或直接出菇大口瓶、較粗放的

液體或固體培養(yǎng)基第8頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天第9頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天3、三級(jí)種（栽培種）將原種擴(kuò)大至粗放培養(yǎng)基上

形成的菌種概念概況培養(yǎng)環(huán)境菌絲多而壯、適應(yīng)性強(qiáng)特點(diǎn)用途栽培生產(chǎn)菌種袋、較粗放的

液體或固體培養(yǎng)基不可再擴(kuò)第10頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天第11頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天食用菌生產(chǎn)總過(guò)程第12頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天第13頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天（三）狀態(tài)不同的菌種

用固體基質(zhì)培養(yǎng)的菌種1、固體

菌種概念特點(diǎn)設(shè)備、工藝簡(jiǎn)單

菌齡長(zhǎng)而不一

發(fā)酵率較低用液體基質(zhì)培養(yǎng)的菌種2、液體

菌種概念特點(diǎn)設(shè)備、工藝較復(fù)雜

菌齡短而一致

發(fā)酵率高

易老化和自溶第14頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天生長(zhǎng)勢(shì)的區(qū)別液體菌種固體菌種第15頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天第16頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、菌種生產(chǎn)程序四大步驟制培養(yǎng)基滅菌培養(yǎng)接種第一節(jié)食用菌制種的條件第17頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天制種程序第18頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、主要生產(chǎn)設(shè)備一、制培養(yǎng)基設(shè)備二、滅菌設(shè)備三、接種設(shè)備四、培養(yǎng)設(shè)備五、保藏設(shè)備六、菌種廠布局第19頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、制培養(yǎng)基設(shè)備

（一）原料處理設(shè)備切片粉碎兩用機(jī)切片粉碎兩用機(jī)鍘草機(jī)粉碎機(jī)第20頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天拌料機(jī)第21頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天裝袋機(jī)（二）培養(yǎng)基分裝設(shè)備第22頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天裝瓶機(jī)挖瓶機(jī)第23頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天菌種袋頸圈第24頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天菌種瓶第25頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、滅菌設(shè)備高

壓

鍋外鍋：裝水

內(nèi)鍋：裝物（有壁管）鍋蓋安全閥

排氣閥

壓力表第26頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天常壓滅菌第27頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天常壓第28頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天密閉性好要

求1.

接

種

箱用

法

清潔、放物品→消毒噴霧

熏蒸

紫外燈特

點(diǎn)簡(jiǎn)易、利移動(dòng)

對(duì)人體低害

效果好、工效低

三、接種設(shè)備

（一）接種環(huán)境第29頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天觀察窗紫外燈操作孔接種箱第30頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天第31頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天

2.接種室緩沖間：2~3m2

接種間：5~6m2面積7~9m2高2.2~2.5m要求6個(gè)面平滑

兩門錯(cuò)開(kāi)、平拉式

頂裝紫外燈清潔→物品放緩沖間→消毒

→移物至接種間→噴消毒液

→10min后接種→消毒液清潔

使用第32頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天第33頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天第34頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天使一定工作區(qū)達(dá)到相對(duì)無(wú)菌、無(wú)塵狀態(tài)的電器3.超凈工作臺(tái)雙人單人第35頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天要求:前端為導(dǎo)熱性好的金屬材料槍匙鉤鏟鑷耙針環(huán)接種4.接種工具第36頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天固

體

菌

種

接

種

槍液體菌種接種槍第37頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、菌種培養(yǎng)沒(méi)備1.培養(yǎng)箱

培養(yǎng)少量菌種的恒溫電器（20~40℃）第38頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.培養(yǎng)室要求光線暗

密閉好、通風(fēng)性強(qiáng)

能升溫、降溫有培養(yǎng)架第39頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天貯藏室遠(yuǎn)離污染源低溫（4~8℃）干燥、通風(fēng)、遮光用前要嚴(yán)格消毒殺蟲(chóng)地面常撒石灰粉保藏原種、栽培種：五、菌種保藏設(shè)備

保藏母種：冰箱（4℃）左右第40頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天六、液體發(fā)酵設(shè)備第41頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天七、菌種廠的布局

根據(jù)菌種生產(chǎn)流程合理設(shè)置倉(cāng)庫(kù)配料室滅菌室接種室培養(yǎng)室辦公室栽培棚門口曬料場(chǎng)第42頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天第三節(jié)菌種培養(yǎng)基一、概述

（一）概念及要求

（二）培養(yǎng)基的類型二、各級(jí)菌種的培養(yǎng)基

（一）母種培養(yǎng)基

（二)原種、栽培種培養(yǎng)基三、培養(yǎng)基的滅菌第43頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、培養(yǎng)基的概述（一）概念及要求概念人工配制的適于菌種生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)要

求營(yíng)養(yǎng)種類、比例、水分、pH適宜；

保持無(wú)菌狀態(tài)。第44頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）培養(yǎng)基的類型

l、按營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)種類分類①天然培養(yǎng)基常用的生物材料有馬鈴薯、胡蘿卜、蠶蛹粉、豆芽汁、花生餅粉、玉米粉、酵母等。②合成培養(yǎng)基是指用已知成分和數(shù)量的化合物配制而成的培養(yǎng)基。③半合成培養(yǎng)基利用天然物質(zhì)作為碳、氮源及維生素的來(lái)源另加一些無(wú)機(jī)鹽類配制而成。第45頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天2、按培養(yǎng)基的物理狀態(tài)分類①液體培養(yǎng)基不加瓊脂，多用于生理生化方面研究,培養(yǎng)液體菌種等。②固體培養(yǎng)基凝固劑的量,瓊脂冬季為1.5%--2.0%,夏季2.2%--2.3%。③半固體培養(yǎng)基含有較少量瓊脂(0.2%--0.5%)的培養(yǎng)基,使培養(yǎng)基未達(dá)到固態(tài)而呈粘稠狀態(tài)。第46頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天粉狀條狀屬天然植物多糖

融點(diǎn)96℃以上

凝點(diǎn)40℃以下

冷水中不溶

透明度好、粘著力強(qiáng)

不被微生物分解利用特性第47頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天第48頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、各級(jí)菌種的培養(yǎng)基（一）母種培養(yǎng)基1、通用配方PDA馬鈴薯200g、葡萄糖20g

瓊脂15~20g、水1000ml第49頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天①營(yíng)養(yǎng)液制作a準(zhǔn)備工作2、制作方法第50頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天

b稱量、材料預(yù)處理按配方準(zhǔn)確稱量各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。將馬鈴薯去皮、挖掉芽眼后稱量200g，切成1cm見(jiàn)方的小塊。瓊脂剪碎后用水浸泡。第51頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天c熬煮將切好的馬鈴薯塊加適量水后放入鍋中，煮至酥而不爛。第52頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天D、過(guò)濾、加可溶藥物用雙層沙布過(guò)濾，取濾汁，放在電飯鍋中加入糖。第53頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天E、熬瓊脂、定容在沸騰狀態(tài)下加入瓊脂，直到瓊脂完全溶化為止，定容至1000ml。f、調(diào)節(jié)PH值。第54頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天②營(yíng)養(yǎng)液分裝a用注射器分裝b分裝標(biāo)準(zhǔn):分裝量為試管長(zhǎng)度的1/4—1/5。注意培養(yǎng)基不能沾污試管口。第55頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天c塞棉塞棉塞松緊適度，1/3在管外，2/3在管內(nèi)。d扎捆

7-10支試管捆在一起，棉塞上包好防水紙，直立放入高壓滅菌鍋中。第56頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天

③滅菌處理在1.0—1.5kg/cm2壓力下維持20--30min。第57頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天④擺斜面滅菌結(jié)束后鍋蓋開(kāi)1/5的小縫，用余熱烘干報(bào)紙和棉塞，然后擺斜面。斜面長(zhǎng)是試管總長(zhǎng)的1/2。第58頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天第59頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天

（二）原種、栽培種培養(yǎng)基制作1、常見(jiàn)原種配方①木屑培養(yǎng)基配方細(xì)木屑80%，麩皮12%，玉米面1%，黃豆粉2%，過(guò)磷酸鈣1.5%，紅糖0.5%，尿素0.4%，硫酸鎂0.1%，石灰1%，石膏2%，料：水=1：1.0-1.2。此配方適合香菇、黑木耳、平菇原種生長(zhǎng)，菌絲粗壯潔白。②玉米芯培養(yǎng)基配方玉米芯80%，麩皮14%，糖0.5%，過(guò)磷酸鈣1%，石灰2%，尿素0.5%，玉米面2%，料：水=1：1.4-1.5。此配方適合于培養(yǎng)平菇原種，菌絲生長(zhǎng)速度快，且菌絲粗狀。第60頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天③玉米芯、木屑混合培養(yǎng)基配方玉米芯42%，木屑20%，豆秸20%，麩皮10%，過(guò)磷酸鈣1.5%，石灰2%，石膏1%，糖0.5%，玉米面3%，料：水1=1：1.4-1.5。此配方適合于培養(yǎng)平菇原種。生長(zhǎng)健壯，也可培養(yǎng)金針菇，滑子蘑原種。④軟質(zhì)木屑配方椴木屑75%（木線廠下腳料，顆粒較大），麩皮15%，玉米面5%，石膏1.5%，石灰1%，糖0.5%，過(guò)磷酸鈣1.5%，尿素0.5%，料，水=1：1.2左右。適用于金針菇，滑子蘑等分解基質(zhì)能力較弱的品種使用。第61頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天⑤麥粒、木屑培養(yǎng)基配方新鮮、優(yōu)質(zhì)小麥80%，闊葉樹(shù)木屑20%，木屑：水=1：1左右，拌木屑用煮小麥水，或在此基礎(chǔ)上，加入總量0.5%的過(guò)磷酸鈣，0.5%的蔗糖,1%的石灰，在麥粒煮好后連同木屑拌入。⑥玉米粒培養(yǎng)基配方優(yōu)質(zhì)新鮮玉米100%，或后期加入0.5%過(guò)磷酸鈣，0.5%的糖,1%的石灰。玉米粒培養(yǎng)基制作的原種，具備麥粒原種的優(yōu)點(diǎn)，后勁更足，接種擴(kuò)繁量更大。第62頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天2、原種培養(yǎng)基的制作方法谷粒培養(yǎng)基制作①按配方稱量各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)配方一：優(yōu)質(zhì)新鮮小麥65%，木屑15%，棉籽殼15%，麩皮5%，石膏1%，過(guò)磷酸鈣0.5%，糖0.5%，尿素0.5%②谷粒浸泡吸水冬季浸泡24-48小時(shí)，夏季加1%石灰（以防變酸）浸泡24小時(shí)，隔夜換水。第63頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天③煮沸、瀝干撈出泡好后，漂洗干凈（去雜），煮至飽脹無(wú)白心，切忌煮開(kāi)花，瀝干水分后撈出。④拌料用煮小麥水拌木屑、棉籽殼、麩皮，最后再一起與麥粒拌勻。第64頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天⑤裝瓶a.裝料量應(yīng)為1/3或1/2罐頭瓶，便于培養(yǎng)時(shí)搖動(dòng)基料促進(jìn)絲均勻生長(zhǎng)。b.擦凈并封瓶口封口塑料袋采用規(guī)格為13cm×13cm×0.004cm高壓聚丙稀袋，二層，里層在中央剪一3cm寬菱形口。至少二個(gè)皮套。第65頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天⑥裝鍋滅菌高壓滅菌于126℃左右維持2小時(shí)；常壓滅菌于100℃維持10-12小時(shí)，夏季時(shí)間可酌情延長(zhǎng)。⑦出鍋、冷卻冷卻至30℃以下待接種。第66頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天木屑、玉米芯料培養(yǎng)基制作方法①按配方稱料。②拌料：干混（將石膏和不溶于水的主料和輔料混勻）；濕混（將石灰和溶于水的輔料制成母液，加入所需水量稀釋后拌料）。第67頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天③裝瓶：悶1-2個(gè)小時(shí)（夏季時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)）待料充分吸足水后裝瓶，裝料至瓶肩，上緊下松，壓平料面，擦凈瓶口，打1.5cm粗接種孔至瓶底封口。④滅菌：同谷料培養(yǎng)基制作⑤出鍋、冷卻：同谷粒培養(yǎng)基制作第68頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天(三)栽培種制作制作方法基本同于原種制作。需要注意的是栽培種培養(yǎng)基制作一般選用豐富的培養(yǎng)料，而且含水量要較原種加大，更利于菌種快速吃料。容器可以用500ml罐頭瓶，也可以用（17-18）X（30-35）X（0.04-0.05）cm低壓聚乙烯袋。第69頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天栽培種的裝袋第70頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、培養(yǎng)基的滅菌（一）母種培養(yǎng)基的滅菌

無(wú)菌檢驗(yàn)

約30℃條件下→空白培養(yǎng)2~3天滅菌與擺斜面擺斜面1kg/cm2(103kpa、121℃）20~30min第71頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天母基滅菌與擺斜面第72頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）原種、栽培種培養(yǎng)基的滅菌高壓滅菌1.5kg/cm2（152kpa、128.1℃）滅菌1~2h

第73頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天常壓滅菌100℃滅菌10h左右→再悶12h要求攻頭、控中、保尾第74頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、液體菌種制作技術(shù)（一）液體菌種制作的原理食用菌液體菌種制作是在發(fā)酵罐中，采用液體培養(yǎng)基通入無(wú)菌空氣并加以攪拌，增加培養(yǎng)基中溶氧含量，提供食用菌菌體呼吸代謝所需要的氧氣，并控制適宜的外界條件，獲得大量的菌絲體或代謝產(chǎn)物。第75頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）液體菌種制作的特點(diǎn)1.原料來(lái)源廣泛2.菌絲體生長(zhǎng)快速3.生產(chǎn)周期短食用菌深層發(fā)酵一般僅需2-7d就可獲得大量的菌絲體，而固體培養(yǎng)則需30-60d。4.工廠化生產(chǎn)、無(wú)季節(jié)性食用菌深層發(fā)酵是在發(fā)酵罐內(nèi)、控制最佳條件來(lái)培菌體的，不受季節(jié)性限制。第76頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天（三）液體菌種制作的用途1、生產(chǎn)液體菌種食用菌經(jīng)深層發(fā)酵2-7d的幼嫩菌絲體，可以用來(lái)作為食用菌栽培用的原種和栽培種。2、制備藥物或提取生化制品許多食用菌種類，其深層發(fā)酵培養(yǎng)的菌絲體可作為提取藥物成分或生化制品的材料。3、制作食品或畜禽飼料

第77頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天（四）液體菌種制作的主要設(shè)備

1.搖床往復(fù)式播床：振蕩方式為來(lái)回振蕩旋轉(zhuǎn)式搖床：振蕩方式為旋轉(zhuǎn)第78頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.種子罐和發(fā)酵罐許多食用菌種類，其深層發(fā)酵培養(yǎng)的菌絲體可作為提取藥物成分或生化制品的材料。第79頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天3.空氣凈化設(shè)備4.培養(yǎng)基連續(xù)滅菌設(shè)備

包括配料罐、連消塔、維持塔、噴淋冷卻器等。5．供氣設(shè)備

主要是蒸氣鍋爐及附屬設(shè)備第80頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天第四節(jié)菌種的接種一、無(wú)菌操作二、母種的接種

(一）分離法

1.組織分離

2.孢子分離

（二）轉(zhuǎn)管法三、原種、栽培種的接種第81頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天菌種分離將有價(jià)值的子實(shí)體的局部組織、孢子或基內(nèi)菌絲移接到斜面試管培養(yǎng)基上，獲得純培養(yǎng)菌絲的操作稱為菌種分離。菌種分離可以分為孢子分離、組織分離和菇木分離三種。第82頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天概念：菌種移至新培養(yǎng)基上的過(guò)程

關(guān)鍵：無(wú)菌操作接種在嚴(yán)格消毒滅菌條件下進(jìn)行的操作概念一、無(wú)菌操作接種環(huán)境消毒滅菌酒精棉球消毒雙手開(kāi)啟的管口、瓶口靠近燈焰拔出的棉塞勿觸及任何地方動(dòng)作快，接種時(shí)間勿太長(zhǎng)要點(diǎn)必備第83頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天母種轉(zhuǎn)管無(wú)菌操作程序：

1.將接種用品及原始母種放入接種箱內(nèi)。2.用菇保1號(hào)、氣霧消毒盒（2g/m3）或甲醛進(jìn)行熏蒸，時(shí)間要在30分鐘以上。3.手、臺(tái)面、接種工具、試管用酒精棉球擦試消毒。4.點(diǎn)燃酒精燈，火焰灼燒接種鎬至燒紅后冷卻，凡能伸進(jìn)試管的桿部均過(guò)火滅菌。第84頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天5．左手大拇指和其他四指并攏握住菌種管和待接試管，斜面向上，并保持水平。

第85頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天6．右手小指、無(wú)名指及手掌拔掉棉塞，用火焰灼燒試管口并不斷攪動(dòng)。第86頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天7．先棄去前端1cm處，然后用接種鎬快速移取黃豆粒大小的菌種入待接試管斜面培養(yǎng)基中央。

第87頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天8．灼燒試管口，并將棉塞在火焰上迅速過(guò)一下然后塞上。9．用接種鎬挑持住母種管，另一只手換待接管，重復(fù)上述操作。10．收拾臺(tái)面。11.貼標(biāo)簽第88頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天特點(diǎn)簡(jiǎn)便，易成功保持原菌種性狀重復(fù)多易退化不適于耳類1.組織分離：采用食用菌子實(shí)體或菌核、菌索的任何一部分組織培養(yǎng)成純菌絲體的方法。組織PDA次生菌絲培養(yǎng)（一）分離法第89頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天根據(jù)分離材料的不同，組織分離法可分為子實(shí)體分離法、菌核分離法以及菌索分離法。（1）子實(shí)體分離法采用子實(shí)體的任何部分如菌蓋、菌柄、菌褶、菌肉進(jìn)行組織培養(yǎng)，從而形成純菌絲體的方法。第90頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天a傘菌組織分離法①種菇的選擇：頭潮菇、外觀典型、大小適中、菌肉肥厚、顏色正常、尚未散孢，無(wú)病蟲(chóng)害、長(zhǎng)至七八分熟的優(yōu)質(zhì)單朵菇做種菇。②種菇消毒：切取菇體基部，用75%的酒精溶液浸泡0.5-1min，再用無(wú)菌水沖洗2-3次。③切塊接種：縱剖（撕）菇體，尖頭鑷取柄蓋交界處綠豆粒大的組織放入新斜面中部第91頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天④培養(yǎng)純化：適溫下培養(yǎng)2-4天，可看到組織塊上長(zhǎng)出白色絨毛狀菌絲體，移接到新的培養(yǎng)基上再經(jīng)過(guò)5-7天適溫培養(yǎng)，長(zhǎng)滿試管后即為純菌絲體。⑤出菇試驗(yàn)：將分離得到的試管種擴(kuò)大繁殖，并移接培養(yǎng)成原種、栽培種,做出菇試驗(yàn),選出出菇好、產(chǎn)量高、質(zhì)量好的，即可作栽培生產(chǎn)用種。第92頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天b膠質(zhì)菌類組織分離法：①一種方法是將耳片反復(fù)用無(wú)菌水沖洗，切成0.5cm，小塊移入培養(yǎng)基，于28℃下進(jìn)行培養(yǎng)；②另一種方法是剖取尚未展開(kāi)耳片的耳基團(tuán)內(nèi)的組織塊進(jìn)行分離。第93頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天（2）菌核分離法：一些藥用菌如茯苓、豬苓、雷丸都有菌核。進(jìn)行組織分離時(shí)，采用含漿汁多的菌核。在無(wú)菌的條件之下，將菌核剖開(kāi)，于菌核的附近，剖取蠶豆大小的菌核組織塊移入斜面培養(yǎng)基上，在26-30℃下培養(yǎng)。第94頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天（3）菌索分離法：從菌索中分離培養(yǎng)得到純菌絲體的方法。.菌索分離第95頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天2、木腐菌基內(nèi)菌絲分離①把分離用菇木的部分或全部的表面在火焰上輕燎。②取小刀在火焰上滅菌，對(duì)準(zhǔn)菇木上菇柄（耳基）的著生位置切成兩半。③確定欲分離菌絲在菇木上的位置，再次用火焰滅菌過(guò)的小刀，在欲分離部位刻劃數(shù)個(gè)井字。④用火焰滅過(guò)菌的接種鉤，鉤取一小塊木屑（綠豆大小或更小）移接于斜面培養(yǎng)基。⑤接種后將試管置于25—27℃下培養(yǎng)，促使其恢復(fù)。近風(fēng)干的種木內(nèi)菌絲常處于休眠狀態(tài)。接種后，種木吸濕，菌絲逐漸恢復(fù)生長(zhǎng)。如果短期時(shí)間內(nèi)分離物未曾發(fā)，則可保留至4周后，再斷定分離是否成功。第96頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天3.孢子分離(有性繁殖）

孢子分離主要是指利用子實(shí)體上產(chǎn)生的成熟有性孢子分離培養(yǎng)獲得純菌種的方法。分為多孢分離與單孢分離兩種。孢子

特點(diǎn)菌齡小

生命力強(qiáng)

變異率高孢子

分離法難度較大單孢分離多孢分離較簡(jiǎn)易第97頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天多孢分離概念使許多孢子在同一培養(yǎng)基上，

萌發(fā)后自由交配成次生菌絲的方法步驟種菇消毒采收孢子

接種孢子整菇插種法

鉤懸法孢子印法單孢分離

的菌落第98頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天1.種菇

消毒菌柄去2/3苞被有：75%酒精棉球擦0.25%新潔爾滅浸2~3min

無(wú)菌紗布吸干表面水分無(wú)第99頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.采收孢子整菇

插種法種菇插在孢子收集器中

使孢子散落于培養(yǎng)皿內(nèi)的方法用

前

滅

菌25℃、24h現(xiàn)孢子粉

取出分離材料

培養(yǎng)皿蓋嚴(yán)第100頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天鉤懸法生產(chǎn)上采集木耳、銀耳的孢子常采用此法。25℃、24h現(xiàn)孢子粉

取出分離材料第101頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天孢子印法

取成熟的傘菌或膠質(zhì)的子實(shí)體，經(jīng)表面消毒，切去菌柄，菌褶向下，放置于滅過(guò)菌的有色紙上（紅、黑、藍(lán)、白），用通氣鐘罩上，靜置一天（20-24℃），孢子落在紙上，形成孢子印，再?gòu)闹刑羧∩倭挎咦愚D(zhuǎn)入試管培養(yǎng)基上培養(yǎng)。第102頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天空中孢子捕捉法:傘菌的孢子大量彈射時(shí)，子實(shí)體周圍可以看到“孢子云”，可以在其漂去的上方倒放瓊脂平板，使孢子附在其上，再蓋上蓋，用塑料膠水紙封好培養(yǎng)，整個(gè)過(guò)程要快。褶上涂抹法:取成熟傘菌，切去菌柄基部，帶入接種箱內(nèi)，先表面消毒，用接種針插入兩片菌褶之間，輕輕抹過(guò)表面，然后用劃線法涂抹于試管培養(yǎng)基上。第103頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天帖褶法:取一小塊成熟的菌褶或菌蓋，用熔化的瓊脂或膠水、糨糊之類，帖附在試管斜面的正上方試管壁上或培養(yǎng)皿皿蓋上，經(jīng)6-12小時(shí)，待孢子落下后，立即把試管或培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)到另一消毒過(guò)的空白試管或培養(yǎng)皿中進(jìn)行培養(yǎng)。第104頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天接種孢子用接種環(huán)

蘸孢子液或孢子粉

涂布于平板上第105頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天第106頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）轉(zhuǎn)管法注意種塊勿太大原老種塊勿再接入傳代次數(shù)勿太多將母種移入新的過(guò)程概念過(guò)程接種環(huán)取綠豆粒大母種

移入新斜面中部第107頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天轉(zhuǎn)管第108頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、原種、栽培種的接種接原種用接種耙取蠶豆大母種

放于瓶中料面上第109頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天第110頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天接栽培種用接種匙（鑷、鏟）取棗大原種放于袋的兩端或瓶中料面上注意表面老菌絲及

老種塊勿接入第111頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天栽培種接種第112頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天(一)培養(yǎng)條件場(chǎng)所清潔空氣清新光線暗空氣濕度

60%~70%溫度約25℃一、母種培養(yǎng)第六節(jié)菌種的培養(yǎng)第113頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天1、溫度控制菌種培養(yǎng)過(guò)程中，瓶溫會(huì)比室溫高2~4℃。隨著菌齡增加，瓶溫會(huì)逐漸下降，但仍比室溫高。一般培養(yǎng)初期溫度控制在該菌最佳生長(zhǎng)溫度，隨后每隔10天降低1℃，長(zhǎng)滿瓶后，盡可能將溫度調(diào)低。2、濕度控制：梅雨季節(jié)，降低RH；冬季需提高RH（掛濕布或拖地板）。3、通風(fēng)第114頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天4、光：營(yíng)養(yǎng)菌絲培養(yǎng)階段，培養(yǎng)室盡可能地暗。5、酸堿度比最適PH值略高1.5。后期管理中可以用1%-2%的石灰水噴灑菌床，以防PH值下降。6、培養(yǎng)時(shí)間

控制菌齡（即將長(zhǎng)滿斜面）。培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)菌種容易衰退。7、污染的檢查及時(shí)挑揀污染管第115頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天第116頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天母種培養(yǎng)返回本節(jié)第117頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天

二、原種

栽培種

的培養(yǎng)培養(yǎng)時(shí)間：約30天勿堆放過(guò)擠,不宜多次翻倒及時(shí)挑揀污染瓶（袋）栽培種的菌袋缺氧時(shí)可刺孔增氧控制菌齡（菌絲長(zhǎng)滿后7~10天使用）第118頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天第119頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天刺孔點(diǎn)第120頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天

第121頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天第七節(jié)菌種質(zhì)量的鑒定形態(tài)特征、生理特性、

栽培性狀、經(jīng)濟(jì)效益等鑒定

項(xiàng)目

菌種鑒定主要包括兩個(gè)方面的內(nèi)容：一方面要鑒定未知的菌種，從而避免菌種混亂帶來(lái)得損失；另一方面鑒定已知菌種質(zhì)量的好壞，從而選出優(yōu)良品種，奪得食用菌的豐產(chǎn)。、

一般從菌種的純度、長(zhǎng)勢(shì)、顏色、菌齡、均勻度和出菇快慢等6個(gè)方面進(jìn)行鑒定。第122頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天（一）母種質(zhì)量的鑒定

一般分離培養(yǎng)以及引進(jìn)的母種，都應(yīng)嚴(yán)格控制轉(zhuǎn)管的次數(shù)，最多不要超過(guò)5次。同時(shí)要考慮其菌齡，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，菌齡越來(lái)越大，生活力隨之降低，菌種老化。母種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：菌絲白、整齊、粗壯、有彈性、萌發(fā)快等1.外觀好差絲干燥、收縮、自溶

產(chǎn)生紅褐色液體等第123頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天退化母種好母種第124頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.鑒定耐干濕性試驗(yàn)接入母種→正常生長(zhǎng)原種

培養(yǎng)基

含水量＜50%＞70%耐高溫性試驗(yàn)仍正常生長(zhǎng)適溫培養(yǎng)7天

30~35℃鍛煉24h

再適溫培養(yǎng)第125頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天出菇試驗(yàn)栽培出菇快

產(chǎn)量高

品質(zhì)好

抗逆性強(qiáng)第126頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天外觀肉眼鑒定

肉眼觀察包裝是否合乎要求，棉塞有無(wú)松動(dòng)，試管有無(wú)破損，有無(wú)病蟲(chóng)害等。外表菌絲潔白、粗壯、富有彈性、則生命力強(qiáng)。如有淡茶褐色的菌膜及子實(shí)體，只要接種時(shí)去除就可以用，若菌絲已干燥、收縮或菌絲體自溶產(chǎn)生大量紅褐色液體，則表明生活力下降，不能作為菌種。第127頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天菌絲生長(zhǎng)速率測(cè)定

將所獲的菌種，轉(zhuǎn)接至PDA培養(yǎng)皿中央,待菌絲生長(zhǎng)蔓延時(shí),用直徑0.5cm的打孔器,經(jīng)滅菌后打取邊緣菌絲,連同培養(yǎng)基重新接入PDA培養(yǎng)皿中央進(jìn)行培養(yǎng),每隔24小時(shí),測(cè)定菌落直徑,直至菌落覆蓋全皿為止,從而計(jì)算出菌絲平均生長(zhǎng)速度。第128頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天顯微鏡檢查

在載玻片上滴一滴蒸餾水，然后挑取少許菌絲置水滴上，讓菌絲體充分展開(kāi)，蓋好玻片，在顯微鏡下觀察。蘑菇菌絲體應(yīng)粗壯，菌絲節(jié)較長(zhǎng)，呈分枝狀，說(shuō)明是正常菌種，如果菌絲節(jié)很短，分枝很濃密，菌絲較纖細(xì)，生長(zhǎng)緩慢，一般為不正常菌種。第129頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天液體培養(yǎng)鑒定

配制2％糖水溶液，經(jīng)常規(guī)滅菌消毒，挑取黃豆粒大的菌塊，放入100毫升上述溶液中，置于25-28℃溫度下培養(yǎng)3-7天后，若液面出現(xiàn)氣泡，產(chǎn)生“油皮”，發(fā)生渾濁現(xiàn)象，說(shuō)明菌種本身有雜菌；如果苗塊下沉，或遲遲才長(zhǎng)出很薄的菌絲層，則說(shuō)明菌種生活力弱；如若液面四周的菌絲生長(zhǎng)快，且濃白呈棉絮狀，則表明菌種生命力強(qiáng)。第130頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天菌種純度測(cè)定

隨機(jī)抽取經(jīng)初步檢測(cè)的菌種，挑取菌種不同部位菌絲連同培養(yǎng)基轉(zhuǎn)接到PDA培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿，每瓶菌種轉(zhuǎn)接30-50點(diǎn)，25℃培養(yǎng)，觀察菌種萌發(fā)時(shí)有無(wú)雜菌和異常生長(zhǎng)狀況出現(xiàn)。第131頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天吃料能力鑒定將試管母種接入新鮮配制的裝在試管中的糞草培養(yǎng)基中，置24℃下進(jìn)行培養(yǎng),5天后觀察菌絲生長(zhǎng)情況,如果菌種塊能很快萌發(fā),并迅速向培養(yǎng)料中生長(zhǎng)伸展,則說(shuō)明該品種的吃料能力強(qiáng);如果菌種萌發(fā)后生長(zhǎng)緩慢,遲遲不向四周和料層深處伸展,則表明該品種對(duì)培養(yǎng)料的適應(yīng)能力差,是劣質(zhì)菌種。

第132頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）原種、栽培種質(zhì)量的鑒定好的原種和栽培種的標(biāo)準(zhǔn)：1、母種的轉(zhuǎn)管次數(shù)用轉(zhuǎn)管次數(shù)4-5次以內(nèi)的母種生產(chǎn)的原種和栽培種。2、菌齡一般食用菌的原種和栽培種，在20℃左右可保存3個(gè)月，超過(guò)上述菌齡的菌種就已經(jīng)老化，不應(yīng)用于生產(chǎn)。

第133頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天3、原種和栽培種的外觀要求（1）菌絲生長(zhǎng)健壯，絨狀菌絲多，生長(zhǎng)整齊。（2）菌絲已長(zhǎng)滿培養(yǎng)基，銀耳的菌種還要求在培養(yǎng)基上分化出子實(shí)體原基。（3）菌絲色澤潔白或符合該菌的顏色（4）菌種瓶?jī)?nèi)無(wú)雜色出現(xiàn)和雜菌污染（6）菌種培養(yǎng)基不能干縮與瓶壁分開(kāi)第134頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天4、常見(jiàn)優(yōu)質(zhì)原種和栽培種的優(yōu)良性狀（1）平菇菌絲粗壯，濃白，密集，爬壁力強(qiáng)，菌柱斷面菌絲濃白，清香，無(wú)異味，發(fā)菌快，為優(yōu)質(zhì)菌的性狀。（2）猴頭菌絲潔白，細(xì)絨毛狀，緊貼培養(yǎng)基放射狀生長(zhǎng)，程星芒狀或點(diǎn)片狀，后期在培養(yǎng)基上產(chǎn)生珊瑚狀子實(shí)體原基，培養(yǎng)基的顏色常變?yōu)榈睾稚?。?）金針菇菌絲潔白，較粗壯，密集，長(zhǎng)絨毛狀，外觀似細(xì)粉狀，培養(yǎng)基后期菌種表面易產(chǎn)生菇蕾。第135頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天（4）香菇菌絲潔白，綿毛狀，后期見(jiàn)光后易分泌出醬油色的液體，呈褐色，有時(shí)表面產(chǎn)生小菇蕾。（5）木耳菌絲潔白，密集，棉絨狀，短而整齊，全瓶發(fā)育均勻，有時(shí)瓶壁間出現(xiàn)淡褐色、褐色、淺黑色的梅花狀膠質(zhì)即子實(shí)體原基。（6）銀耳銀耳菌絲與香灰菌絲按比例混合培養(yǎng)。羽毛狀菌絲生長(zhǎng)健壯，成束分布，黑疤多，分布均勻，無(wú)其他雜斑。同時(shí)銀耳菌絲吃料較深，瓶?jī)?nèi)有發(fā)白的棉毛團(tuán)或耳片。第136頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天（7）草菇菌絲呈透明狀，白色或黃白色，分布均勻，常有大量的紅褐色的后垣孢子堆。（8）雙孢蘑菇菌絲灰白帶微藍(lán)，密集，細(xì)絨狀，氣生菌絲少，貼生菌絲的培養(yǎng)基內(nèi)呈細(xì)絨狀分布，發(fā)菌均勻，有特有的雙孢蘑菇的香味。第137頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天（9）靈芝菌絲白色，密集，以接種點(diǎn)為中心，呈輻射狀向四周生長(zhǎng)，接種點(diǎn)菌絲常呈蛋黃白色，菌絲貼生于培養(yǎng)基表面，易形成菌膜。（10）滑菇菌絲潔白，密集，棉絮狀，上下分布均勻，用手指按菌種柱有彈性，菌柱的斷面呈白色或橙黃色，顏色均勻一致，用手捏碎成大塊而不是粉末。第138頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天菌種種類品種名稱菌種級(jí)別代時(shí)生產(chǎn)廠家接種日期合格菌種用于生產(chǎn)第139頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天產(chǎn)生原基第140頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天黃水污染第141頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天第八節(jié)菌種保藏與復(fù)壯一、菌種保藏

（一）保藏目的及原理

（二）常用保藏法

（三）保藏注意

二、菌種復(fù)壯

(一）菌種的衰退

（二）復(fù)壯方法

（三）防衰措施第142頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、菌種保藏（一）保藏目的及原理目的原理創(chuàng)造不利于菌種生長(zhǎng)的一切條件，

使其代謝處于休眠狀態(tài)。使菌種不生長(zhǎng)不死亡不污染不降低或不喪失其優(yōu)良性以盡量延長(zhǎng)使用時(shí)間第143頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天低溫干燥無(wú)氧缺營(yíng)養(yǎng)不利

條件第144頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）常用保藏法以母種形式保藏特點(diǎn)簡(jiǎn)便

保藏時(shí)間短

易污染及退化

不適于草菇等菌類1.斜面低溫法

斜面菌種置，4~6℃冰箱中（3~6個(gè)月），最好在2-3個(gè)月時(shí)轉(zhuǎn)管一次。第145頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天返回本節(jié)第146頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天2、液體石蠟油保藏法無(wú)菌檢驗(yàn)注入種管淹沒(méi)斜面約1cm礦油

處理滅菌：152kpa、30min

去水：40~50℃烘至無(wú)色透明口堵膠塞用無(wú)菌橡皮塞封口吸取液體石蠟垂直放置保藏室溫或4℃第147頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天第148頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天4、濾紙保藏0.5cm×1.0cm濾紙條收集孢子印投入指形管，同時(shí)投入硅膠1~2粒，塞上軟木塞后用石蠟封口。要無(wú)菌操作，硅膠要干熱滅菌。第149頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天3.自然基質(zhì)保藏法①麩皮保藏法：稱取一定量的麩皮加水或營(yíng)養(yǎng)液后拌勻即可使用。水、麩皮裝入試管，高壓滅菌后接入菌種，放在適溫下培養(yǎng)。菌絲體發(fā)育好后，將試管放入干燥室溫下進(jìn)行干燥。干燥后放在20℃以下干燥處保藏，可保藏3—5年時(shí)間。②麥粒保藏法：取優(yōu)質(zhì)小麥，淘洗后浸入20℃水中泡5小時(shí)，稍加晾干，裝管。裝入量以管長(zhǎng)的1／4到1／3為宜，滅菌，趁熱搖散，冷卻后接入菌絲體，適溫培養(yǎng)至大多數(shù)麥粒上出現(xiàn)稀疏菌絲時(shí)終止培養(yǎng)。置于25℃以下干燥處，可保藏1—2年。第150頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天防衰老

保藏時(shí)間長(zhǎng)

轉(zhuǎn)接后生長(zhǎng)旺

易污染，滅菌要徹底特點(diǎn)第151頁(yè),共163頁(yè)，2024年2月25日，星期天

4.菌絲球保藏法：將菌種接入馬鈴薯培養(yǎng)液中，每250毫升