以慈航丹方藥探討含揮發(fā)性成分復方用“半仿生提取法”研究的模式

以慈航丹方藥探討含揮發(fā)性成分復方用“半仿生提取法”研究的模式目的：以慈航丹方藥為例,通過半仿生提取法(SBE法)制備分子量≤1000Da提取物為最終產(chǎn)物,探討含揮發(fā)性成分的中藥復方藥效物質用“SBE法”研究的基本思路與模式。方法：①首先對慈航丹方藥進行基源、性狀鑒定與質量鑒定研究；②將方中含揮發(fā)性藥物(當歸、川芎、香附)用超臨界流體萃取,以均勻設計U7(75)表發(fā)布點試驗,在飲片、設備、技術參數(shù)相同的基礎上作SFE-CO2萃取,萃取物另器保存；以藁苯內(nèi)酯、鹽酸川芎嗪、α-香附酮、總萃取物為指標,綜合評判,優(yōu)選出方藥超臨界萃取(SFE-CO2)較佳工藝條件；③將超臨界萃取后的藥渣與方中益母草混合,用半仿生法提取,采用均勻設計U9(91×33)表發(fā)布點試驗,以鹽酸水蘇堿、鹽酸川芎嗪、阿魏酸、總糖及分子量≤1000Da提取物為指標,綜合評判,優(yōu)選出SBE法制備分子量≤1000Da提取物的條件；④在乙醇濃度30%-80%范圍內(nèi),采用比例分割法,以上述相同的指標和評判方法,優(yōu)選出方藥醇提制備分子量≤1000Da提取物的較佳醇濃度；⑤以上述相同的指標和評判方法,作方藥3種方法(SBE法、WE法、AE法)分子量≤1000Da提取物的多指標成分比較；⑥因化學等值不一定生物等效,故作方藥3種方法分子量≤1000Da提取物的活血調(diào)經(jīng)、止痛、抗炎等主要藥效及毒性的研究比較；⑦對方藥3種方法分子量≤1000Da提取物藥液及其兔含藥血清作HPLC指紋圖譜的研究比較；⑧對方藥3種方法分子量≤1000Da提取液的兔含藥血清作大鼠離體子宮平滑肌作用的研究比較；⑨最后綜合評判分析,優(yōu)選出慈航丹方藥的最佳提取方法和工藝條件。結果：①方中所用的中藥皆符合《中國藥典》2005版一部各項下規(guī)定,均為合格的飲片；②優(yōu)選出慈航丹方中含揮發(fā)性成分的中藥超臨界流體萃取的工藝條件為：萃取壓力30MPa、萃取溫度48℃、解析溫度Ⅰ60℃、解析溫度Ⅱ30℃、萃取時間4.0h。③優(yōu)選出慈航丹方藥的SBE法工藝條件為：3煎用水的pH依次為：6.0、7.5、8.8；提取時間依次為2.0h、1.5h、1.5h。④優(yōu)選出醇提的最佳濃度為80%；⑤3種方法提取液的綜合評判值的順序為：YSBE>YAE>YWE;⑥以SBE液的含藥血清HPLC指紋圖譜,優(yōu)選出兔的最佳采血時間為1.5h；給藥劑量為7.0g·Kg-1(生藥·體重-1)；3種方法提取液及其含藥血清的HPLC指紋圖譜比較研究結果表明,以SBE組色譜中特征峰峰數(shù)最多,特征峰總面積最大,共有峰重疊率最高；⑦3種方法提取液的主要藥效試驗研究結果表明,SBE液的活血調(diào)經(jīng)、止痛、抗炎作用的效果最強；該試驗結果與用多指標綜合評判的提取工藝優(yōu)選結果及指紋圖譜的比較研究結果相吻合；最大耐受量試驗動物無一死亡,3種方法提取液的毒理學研究結果無顯著性差異；⑧3種方法提取液含藥血清對大鼠離體子宮平滑肌的收縮頻率、收縮張力和收縮幅度均有抑制作用；與對照組比較,均有顯著性差異(P<0.05)；與SBE組相比,AE組、WE組亦有顯著性差異(P<0.05),其中SBE液的抑制作用最強；⑨綜合評判結果表明,慈航丹方藥的3種提取方法中,以SBE法為最佳。結論：慈航丹方藥的提取,以先將含揮發(fā)性成分的中藥用SFE-CO2萃取,其藥渣與方中益母草混合,再用SBE法提取,經(jīng)離心-膜濾法制得分子量≤1000Da提取物,其多指標綜合評判效果最佳；SBE法分子量≤1000Da提取液及其含藥血清與其他提取方法(AE法、WE法)分子量≤1000Da提取液作相應比較,以SBE法提取液的藥效物質含量高,藥理作用最強。因此,慈航丹方藥以SBE法提取為佳。本研究將化學成分(鹽酸水蘇堿、鹽酸川芎嗪、阿魏酸、總糖)及分子量≤1000Da提取物、主要藥效、分子量≤1000Da提取液的指紋圖譜及其含藥血清指紋圖譜有機結合起來,對慈航丹方藥進行了SBE法系統(tǒng)的研究,進一步證明了該法研究設計的科學性、合理性,豐富和完善了“用灰思維方式建立中藥半仿