抗雙鏈DNA抗體檢測(cè)講解

抗雙鏈DNA抗體檢測(cè)（酶聯(lián)免疫法）【預(yù)期用途】

本試劑盒用于體外定性檢測(cè)人血清中的抗雙鏈DNA抗體（ds-DNA抗體）水平。適用于系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的輔助診斷?！緦?shí)驗(yàn)原理】

本試劑盒應(yīng)用間接酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)原理。在微孔板預(yù)包被ds-DNA抗原，加入樣本稀釋液及待檢樣本進(jìn)行溫育，樣本中存在的抗ds-DNA抗體與包被抗原形成“包被抗原-抗體”復(fù)合物，洗板去除不與包被抗原結(jié)合的物質(zhì)；加入酶結(jié)合物（HRP標(biāo)記的抗人IgG抗體）進(jìn)行第二次溫育，酶標(biāo)二抗將與“包被抗原-抗體”復(fù)合物結(jié)合，形成“包被抗原-IgG抗體-酶標(biāo)二抗”復(fù)合物；再次洗板后加入顯色劑，復(fù)合物上連接的HRP催化顯色劑反應(yīng)，生成藍(lán)色產(chǎn)物。終止反應(yīng)后，變?yōu)辄S色。若樣本中無(wú)抗ds-DNA抗體，不顯色或很淺色?！具m用儀器】含波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀?！緲颖疽蟆?.本試劑使用的樣本為人血清。2.不能檢測(cè)含有疊氮鈉的樣本，因疊氮鈉抑制辣根過(guò)氧化物酶的活性；不能檢測(cè)含有懸浮纖維蛋白或聚集物、重度溶血的樣本。3.樣本中應(yīng)無(wú)微生物。無(wú)菌分離的樣本可在2～8℃貯存1周，低于-18℃貯存三周，避免反復(fù)凍融。

4.使用前請(qǐng)將樣本置于室溫（10～30℃）平衡30分鐘以上，冷凍樣本實(shí)驗(yàn)前需解凍至室溫（10～30℃）并混勻?！緦?shí)驗(yàn)方法】1.配液：用蒸餾水或去離子水將1瓶濃縮洗滌液全部稀釋至450ml。2.樣本稀釋：取90μl生理鹽水于塑料試管中，再加10μl樣本混勻。陰、陽(yáng)對(duì)照已經(jīng)1：10稀釋可直接使用。3.編號(hào)：將樣本對(duì)應(yīng)的微孔按序編號(hào)，每板設(shè)陰性對(duì)照3孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔和空白孔1孔（雙波長(zhǎng)測(cè)定可不設(shè)空白孔）。

4.加樣：每孔加100μl（或2滴）樣本稀釋液，空白孔不加。分別在相應(yīng)的孔中加稀釋過(guò)的樣本或陰、陽(yáng)對(duì)照10μl，輕輕振蕩混勻。

5.溫育：用封板膜封板后放入37±1℃溫箱溫育45±1分鐘。6.洗滌：小心揭掉封板膜，用洗板機(jī)洗滌5次（也可手工洗板），每次浸泡30秒，洗滌時(shí)各孔均需加滿洗滌液，最后一次在吸水紙上盡量拍干。7.加酶：搖勻后每孔加100μl（或2滴）酶結(jié)合物，空白孔不加，輕輕振蕩混勻。8.溫育：用另一張封板膜封板后放入37±1℃溫箱溫育30±1分鐘。9.洗滌：操作同第6步。10.顯色：每孔先加50μl（或1滴）顯色劑A，然后加50μl（或1滴）顯色劑B（包括空白孔），37±1℃避光顯色10±1分鐘。

11.測(cè)定：每孔加50μl（或1滴）終止液終止反應(yīng)，輕輕振蕩混勻，10分鐘內(nèi)在波長(zhǎng)450nm下分別測(cè)定各孔的吸光值A(chǔ)值。（單波長(zhǎng)酶標(biāo)儀需空白孔調(diào)零，雙波長(zhǎng)酶標(biāo)儀不需空白孔調(diào)零）【實(shí)驗(yàn)方法】【陽(yáng)性判斷值】1.陰性對(duì)照質(zhì)控的正常范圍：正常情況下，陰性對(duì)照孔的A值≤0.1（若有1孔陰性對(duì)照A值大于0.1應(yīng)舍棄，若有兩孔或兩孔以上陰性對(duì)照A值大于0.1，應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。若陰性對(duì)照平均A值小于0.05，則按0.05計(jì)算）。2.陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)控的正常范圍：正常情況下，陽(yáng)性對(duì)照孔的A值≥0.6（若有1孔陽(yáng)性對(duì)照A值小于0.6應(yīng)舍棄，若兩孔陽(yáng)性對(duì)照A值都小于0.6，應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)）。3.界限值（CUTOFF值）計(jì)算：CUTOFF值=0.2+陰性對(duì)照平均A值。4.陰性判定：樣本A值＜CUTOFF值者為抗ds-DNA抗體陰性。5.陽(yáng)性判定：樣本A值≥CUTOFF值者為抗ds-DNA抗體陽(yáng)性。注：本試劑盒的界限值是基于150例健康人血清吸光度（A）值的平均值+2SD而得出?！緳z驗(yàn)結(jié)果的解釋】1.由于受ELISA反應(yīng)原理的限制，本試劑盒抗ds-DNA抗體檢測(cè)陰性并不排除系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE），還需結(jié)合其他臨床指標(biāo)判定。2.抗ds-DNA抗體陽(yáng)性需用其他方法進(jìn)行系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的確認(rèn)?！咀⒁馐马?xiàng)】1.本試劑盒僅用于體外診斷，操作應(yīng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。2.使用前請(qǐng)將試劑盒平衡至室溫（10～30℃）。3.加液時(shí)建議使用加樣器，若使用滴瓶滴加，請(qǐng)將滴瓶垂直，擠出頭2滴舍棄，再依次加入。4.加樣器要定期校準(zhǔn)；加入不同樣本或不同試劑組分時(shí)，應(yīng)更換加樣器吸頭，以防交叉污染。5.所用樣本、質(zhì)控