脂肪酶發(fā)酵液后處理及酶制劑制備流程的研究的中期報(bào)告

脂肪酶發(fā)酵液后處理及酶制劑制備流程的研究的中期報(bào)告【摘要】本研究旨在探究脂肪酶發(fā)酵液的后處理方法，以及制備酶制劑的流程。其中，實(shí)驗(yàn)針對(duì)脂肪酶發(fā)酵液的過濾、濃縮、穩(wěn)定化等后處理方法進(jìn)行了研究，最終確定了以壓力過濾和加入聚乙烯醇作為穩(wěn)定劑的方法進(jìn)行后處理。另外，本實(shí)驗(yàn)還探討了酶制劑制備的流程，包括酶活性測(cè)定、最佳工藝參數(shù)確定、配方確定等方面的內(nèi)容。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過優(yōu)化后處理方法和制備流程，可以制備出高效的脂肪酶酶制劑?！娟P(guān)鍵詞】脂肪酶；發(fā)酵液；后處理；酶制劑；制備流程一、引言脂肪酶是一種重要的酶制劑，在食品、化工、制藥等領(lǐng)域均有廣泛的應(yīng)用。在過去的研究中，脂肪酶發(fā)酵液的后處理方法和酶制劑的制備流程是制約其應(yīng)用的瓶頸之一。因此，本研究旨在通過實(shí)驗(yàn)研究，探究脂肪酶發(fā)酵液的后處理方法及酶制劑的制備流程。二、材料與方法1.材料本實(shí)驗(yàn)采用天然脂肪酶液（質(zhì)量濃度為100mg/mL），蛋白酶酶制劑，氯化鈉，氫氧化鈉，聚乙烯醇等試劑。2.方法（1）脂肪酶發(fā)酵液后處理方法的研究1.過濾將脂肪酶發(fā)酵液通過濾紙過濾后，使用不同直徑的濾器（0.2μm-0.4μm）進(jìn)行濾過比較，找到適合的過濾器。2.濃縮使用超濾膜對(duì)脂肪酶發(fā)酵液進(jìn)行濃縮處理，優(yōu)化操作條件（超濾膜孔徑、濾速等），以提高濃縮效率。3.穩(wěn)定化在脂肪酶發(fā)酵液中加入聚乙烯醇作為穩(wěn)定化劑，通過比較加入不同質(zhì)量濃度的聚乙烯醇后的穩(wěn)定效果，找到適宜的添加量。（2）酶制劑制備流程的研究1.酶活性測(cè)定采用菜籽油作為底物，以比色法測(cè)定脂肪酶的活性值。2.最佳工藝參數(shù)的確定采用正交實(shí)驗(yàn)法，通過優(yōu)化反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、底物濃度等參數(shù)，確定最佳工藝參數(shù)。3.配方確定通過實(shí)驗(yàn)測(cè)試，確定最佳的添加劑種類及添加量。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論1.脂肪酶發(fā)酵液后處理方法的研究（1）過濾結(jié)果表明，直徑為0.2μm的濾器能夠有效去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，提高脂肪酶發(fā)酵液的純度。（2）濃縮在濾后的發(fā)酵液中加入適量的氯化鈉，并使用0.1μm的超濾膜進(jìn)行濃縮處理，經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)比較，最終得到了理想的濃縮效果。（3）穩(wěn)定化在發(fā)酵液中分別加入5%、10%、15%的聚乙烯醇，結(jié)果表明，添加量為10%時(shí)，能夠達(dá)到最佳的穩(wěn)定化效果。2.酶制劑制備流程的研究（1）酶活性測(cè)定確定了脂肪酶的活性濃度為80U/mL。（2）最佳工藝參數(shù)的確定通過正交實(shí)驗(yàn)法確定了反應(yīng)時(shí)間為3h，反應(yīng)溫度為40℃，底物濃度為10g/L。（3）配方確定經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)證明，加入適量的蛋白酶酶制劑能夠有效地去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，提高脂肪酶的活性。四、結(jié)論通過以上實(shí)驗(yàn)研究，我們找到了一種適合脂肪酶發(fā)酵液后處理的方法，即使用0.2μm的過濾器進(jìn)行過濾、使用0.1μm的超濾膜進(jìn)行濃縮和添加10%的聚乙烯醇作為穩(wěn)定劑。同時(shí)還確定了制備酶制劑的流程，包括酶活性測(cè)定、最佳工