藥理學(xué)實驗設(shè)計及基本知識

關(guān)于藥理學(xué)實驗設(shè)計及基本知識實驗：科學(xué)上為闡明某一現(xiàn)象,而創(chuàng)造特定的條件,以便觀察它的變化和結(jié)果的過程實驗設(shè)計：根據(jù)目的和條件，結(jié)合統(tǒng)計學(xué)要求，針對實驗研究的全過程，做出計劃安排。好的實驗設(shè)計較少的人力、物力和時間，獲得豐富、可靠資料，把誤差減少到最少，保證成果資料正確。第2頁,共35頁，2024年2月25日，星期天一、實驗設(shè)計的基本原則對照原則(control)隨機(jī)化原則(randomization)重復(fù)原則(replication)

第3頁,共35頁，2024年2月25日，星期天目的：

顯露處理因素的效應(yīng)；排除非實驗因素的影響，消除實驗誤差保證實驗結(jié)果的可比性和實驗結(jié)論的正確性（一）對照原則第4頁,共35頁，2024年2月25日，星期天常用對照方法：1、正常對照：是指在實驗中采用與實驗組相同的條件，但不加實驗因素的對照組。2、陽性對照：是指選用與受試品近似且已知的有效藥物作對照。3、自身對照：在同一受試個體上進(jìn)行處理前后的比較，或者兩種處理一前一后的比較。4、模型對照：復(fù)制疾病模型，與實驗組進(jìn)行比較。5、溶劑對照：當(dāng)受試品需要在特殊溶劑中溶解時應(yīng)設(shè)立溶劑對照組，以排除溶劑對實驗結(jié)果的影響。第5頁,共35頁，2024年2月25日，星期天隨機(jī)化（randomization）是指按照機(jī)遇的原則進(jìn)行抽樣或分組，使各受試對象被分配到各組的機(jī)會均等，而不受主觀因素的影響。隨機(jī)化的方法有抽簽法、拋硬幣法、隨機(jī)數(shù)字表等。（二）隨機(jī)化原則第6頁,共35頁，2024年2月25日，星期天(1)編號：將n個受試對象編號，動物可按體重大小，患者可按就診順序。(2)取隨機(jī)數(shù)：可從隨機(jī)數(shù)字表或計算器或計算機(jī)獲得。每個受試對象獲得的隨機(jī)數(shù)可是一位數(shù)，也可是兩位數(shù)或三位數(shù)，一般要求與n的位數(shù)相同。(3)確定組別：根據(jù)受試對象獲得的隨機(jī)數(shù)決定受試對象在哪一組。分兩組可按隨機(jī)數(shù)的奇偶；分k組可按隨機(jī)數(shù)除以k后的余數(shù)進(jìn)行分組。

隨機(jī)數(shù)字表法第7頁,共35頁，2024年2月25日，星期天Sample：試將同性別、體重相近的30只動物分到A、B、C三組。先將動物按體重編號，再從隨機(jī)數(shù)字表中任一行如第16行最左開始連續(xù)取30個兩位數(shù)字。最后將這30個兩位數(shù)字分別除以3，余數(shù)0、1、2分別對應(yīng)于A、B、C三組

第8頁,共35頁，2024年2月25日，星期天編號1235667891011121314151617181920212223242510347437386369647366146986371623326168045601114109529774246762428114572042533237322707360751245179897331676622766565026710732907978531355385859889754141041256859926969668273105037293155712101421882649817655559563564385482462231624309900618443253238301303061622779439495443548217379323788735209643842634916478442175331572455068877047447672176335025839212067686301637859169555671998105071751286735807443952387993321123429786456078252420744381551001342996602795410576086324409472796544917460962905284772708027343281118180792464417165809798386196206765003105523640505122662389775841607449983114632242014858845109372887113234240647482977777810745321408329894077293857910751452362819955092261197005676313880220253538660420453153785943512833950083042340796885442068798358529483916702917121340332038261389510374177637130407742119301756621837359683508775971225934770332403549777464480189949572277884295457216643616000443186679947724219019160815047233271434094559346849127207344599277295142031169332435027898719201537004952856660443868881180隨機(jī)數(shù)字表第9頁,共35頁，2024年2月25日，星期天重復(fù)是指在相同實驗條件下進(jìn)行多次研究或多次觀察。重復(fù)原則包括兩個含義：一是實驗必須有足夠的樣本數(shù)或例數(shù)，在一次實驗中有充分的重復(fù)；二是要使實驗結(jié)果可靠，必須多次重復(fù)實驗。也就是說，實驗要有一定的次數(shù)。（三）重復(fù)原則第10頁,共35頁，2024年2月25日，星期天實驗?zāi)康暮鸵饬x實驗材料和試劑實驗對象實驗方法和步驟實驗結(jié)果預(yù)測數(shù)據(jù)處理、統(tǒng)計分析二、實驗設(shè)計的內(nèi)容第11頁,共35頁，2024年2月25日，星期天明確本實驗確立的理論依據(jù)、研究目的、研究的必要性和可行性，指出擬解決的中心問題。（一）實驗?zāi)康暮鸵饬x（二）實驗材料和試劑寫明實驗中需要的儀器、材料、試劑的品種、規(guī)格和數(shù)量。第12頁,共35頁，2024年2月25日，星期天（三）實驗對象或稱研究對象是處理因素作用的客體，是根據(jù)研究目的確定的研究總體。研究目的不同,醫(yī)學(xué)研究的對象可以是人、動物和植物，也可以是某個器官、細(xì)胞和血清等生物材料。常用動物：小白鼠、大白鼠、家兔、蟾蜍、豚鼠、貓和狗?？筛鶕?jù)實驗內(nèi)容及觀察指標(biāo)的不同進(jìn)行選擇。第13頁,共35頁，2024年2月25日，星期天對實驗對象作嚴(yán)格的規(guī)定，以保證其同質(zhì)性(homogeneity)和代表性

同質(zhì)性：動物的種類、品系、年齡、性別、體重、窩別和營養(yǎng)狀況等。人群的性別、年齡、民族、職業(yè)、文化程度和經(jīng)濟(jì)狀況、病情和病程等。

代表性：隨機(jī)抽樣第14頁,共35頁，2024年2月25日，星期天受試對象應(yīng)滿足兩個基本條件：一是對處理因素敏感；二是反應(yīng)必須穩(wěn)定。

選擇受試對象應(yīng)明確其納入標(biāo)準(zhǔn)(inclusioncriteria)和排除標(biāo)準(zhǔn)(exclusioncriteria)。第15頁,共35頁，2024年2月25日，星期天（四）實驗方法和步驟

1、實驗分組根據(jù)實驗內(nèi)容的不同，選擇不同的分組方法。

正常組、陽性（藥物）對照組、實驗組正常組、模型組、陽性（藥物）對照組、實驗組第16頁,共35頁，2024年2月25日，星期天2、觀察指標(biāo)與實驗方法的選擇適宜的觀察指標(biāo)應(yīng)具備下列基本條件：（1）特異性：即能特異性地代表所研究問題的本質(zhì)。（2）客觀性：盡量選擇客觀性指標(biāo)，減少實驗者主觀因素對結(jié)果的影響。（3）穩(wěn)定性：穩(wěn)定性好的觀察指標(biāo)才能據(jù)實反映實驗結(jié)果，才真實可靠。（4）可行性。第17頁,共35頁，2024年2月25日，星期天實驗方法按照不同的分類方法有：

生物化學(xué)實驗方法、免疫學(xué)實驗方法、整體動物實驗方法、離體實驗方法、細(xì)胞水平實驗方法等。第18頁,共35頁，2024年2月25日，星期天動物整體實驗：

在動物身上復(fù)制人類疾病模型.在動物身上進(jìn)行研究?？蓢?yán)格控制條件，進(jìn)行深入研究。局限性：種屬差異（代謝，意識），所得結(jié)論不能馬上用于臨床。還需要臨床驗證。離體實驗細(xì)胞、組織體外培養(yǎng)。更可嚴(yán)格控制條件，進(jìn)行深入研究。局限性：人是有神經(jīng)體液調(diào)節(jié)的由細(xì)胞組成器官，進(jìn)而系統(tǒng)，進(jìn)而形成一個有機(jī)的整體。第19頁,共35頁，2024年2月25日，星期天人類疾病動物模型分類：

（1）自發(fā)性：如自發(fā)性高血壓大鼠，LDL受體缺陷高膽固醇血癥家兔。價值高，價格高。（2）誘發(fā)性：可以任意復(fù)制（時間、數(shù)量），實驗條件易控制,，如食餌性動脈粥樣硬化動物模型。結(jié)扎冠狀動脈復(fù)制急性心梗模型（3）基因工程動物轉(zhuǎn)基因（transgenic）動物基因敲除（geneknockout）動物基因替換小鼠（geneknockin）動物第20頁,共35頁，2024年2月25日，星期天實驗方法的選擇應(yīng)遵循以下幾點：

（1）先進(jìn)性：根據(jù)研究目的，在實驗條件允許的范圍內(nèi)，盡量選擇先進(jìn)的實驗方法。（2）經(jīng)典性：盡可能選擇已得到大家公認(rèn)的、穩(wěn)定可靠的實驗方法。（3）創(chuàng)新性：可對原有實驗方法進(jìn)行創(chuàng)新和改良，以達(dá)到本實驗要求。（4）協(xié)同性：所選實驗方法應(yīng)相互補充、相互印證，能充分證明結(jié)論。第21頁,共35頁，2024年2月25日，星期天（五）實驗結(jié)果預(yù)測根據(jù)所學(xué)知識對實驗結(jié)果做出理論上的判斷，做到心中有數(shù)。（六）數(shù)據(jù)處理、統(tǒng)計分析根據(jù)實驗分組情況及實驗方法，明確用何種統(tǒng)計學(xué)方法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。第22頁,共35頁，2024年2月25日，星期天實驗報告的書寫1、題目2、目的3、原理4、材料：實驗動物，器材，藥品5、方法：用自己的語言簡單扼要描述出來6、結(jié)果：要求真實、清楚7、討論：將實驗結(jié)果進(jìn)行比較、分析；實驗中有哪些不足之處；結(jié)果異?；蚴≡?、結(jié)論：將實驗結(jié)果進(jìn)行歸納總結(jié)，應(yīng)帶有提示性質(zhì)。第23頁,共35頁，2024年2月25日，星期天（一）、動物的選擇（二）、實驗動物的編號（三）、麻醉藥的選擇（四）、動物捉拿及固定方法（五）、動物的給藥方法第24頁,共35頁，2024年2月25日，星期天1、小白鼠

適用于需大量動物的實驗，如某些藥物的篩選，半數(shù)致死量的測定。也較適用于避孕藥實驗、抗炎鎮(zhèn)痛藥實驗、中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥實驗、抗腫瘤藥及抗衰老藥實驗等。

第25頁,共35頁，2024年2月25日，星期天2、大白鼠

比較適用于抗炎藥物實驗，血壓測定、利膽、利尿藥實驗，也可用于進(jìn)行亞急性和慢性毒性實驗。

第26頁,共35頁，2024年2月25日，星期天3、豚鼠

因其對組胺敏感，并易于致敏，故常被選用于抗過敏藥、平喘藥和抗組胺藥的實驗。也常用于離體心臟、心房、腸管實驗。又因它對結(jié)核敏感，常用于抗結(jié)核病藥的實驗。第27頁,共35頁，2024年2月25日，星期天4、家兔

常用于觀察研究腦電生理作用，藥物對小腸的作用。由于家兔體溫變化敏感，也常用于體溫實驗，用于熱原檢查。

第28頁,共35頁，2024年2月25日，星期天5、狗

狗是記錄血壓，呼吸最常用的大動物。還可利用狗做成胃瘺、腸瘺，以觀察藥物對胃腸蠕動和分泌的影響。在進(jìn)行慢性毒性實驗時，也常采用狗。

第29頁,共35頁，2024年2月25日，星期天狗、兔等較大的動物可用特制的鋁質(zhì)號碼牌固定在頸部或耳上。大鼠、小鼠如為白色可用黃色苦味酸在不同的體表標(biāo)志上標(biāo)記。第30頁,共35頁，2024年2月25日，星期天⑴局部麻醉：常采用2％普魯卡因做皮下浸潤注射，可用于局部手術(shù)。⑵全身麻醉：①吸入麻醉：可將乙醚蘸在棉球上放入玻璃罩內(nèi)，利用乙醚揮發(fā)的性質(zhì)，經(jīng)肺泡吸收，作用較快，適用于小鼠、大鼠短時間麻醉。②注射麻醉：常用戌巴比妥鈉和烏拉坦。第31頁,共35頁，2024年2月25日，星期天⑴小白鼠右手抓住其尾部放在鼠籠蓋鐵紗網(wǎng)上，用左手拇指及食指沿其背部向前抓起頸背部皮膚，并以左手的小指、無名指固定其尾部，便可將小鼠固定在手上。⑵大白鼠用右手提起尾部，放在粗糙面上，左手的拇指和食指捉其頭部，其余三指夾住背腹部即可固定。⑶豚鼠豚鼠性情溫和不咬人，用手握住軀干即可。、⑷家兔可用一手抓住家兔頸背部皮膚，將兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿勢。在進(jìn)行仰位手術(shù)操作時，可用繩帶將其四肢仰位捆綁在兔手術(shù)臺上。頭部用兔頭固定夾固定。第32頁,共35頁，2024年2月25日，星期天1、小白鼠

①灌胃法(i.g.)：以左手固定小鼠后，使其腹部朝上，頸部伸直。右手持配有灌胃針頭的注射器，自口角插入口腔，再從舌面沿上腭進(jìn)入食道。小鼠灌胃容量一般為0.1～0.3m1／10g