致病菌的檢驗(yàn)分支桿菌屬及相似屬

關(guān)于致病菌的檢驗(yàn)分支桿菌屬及相似屬第2頁,共33頁，2024年2月25日，星期天

第1節(jié)分枝桿菌屬(Mycobacterium)分支桿菌是一類細(xì)長或稍彎的桿菌，因有分枝生長趨勢而得名。此菌屬的最顯著特性為其胞壁中含有大量類脂，可達(dá)菌體干重的40%，形成粗糙菌落，難用一般染料染色。第3頁,共33頁，2024年2月25日，星期天

第1節(jié)分枝桿菌屬(Mycobacterium)——若設(shè)法使之著色后，又不易以含3%HCI的酒精脫色。這種能抵抗鹽酸酒精脫色的細(xì)菌稱為抗酸桿菌?！揪鷮俜N類頗多，其中可引起人類和動物疾病的有:（1）人型、牛型以及禽結(jié)核桿菌;（2）麻風(fēng)桿菌。這些細(xì)菌多為慢性感染，因長期遷延而致組織病變。第4頁,共33頁，2024年2月25日，星期天

第1節(jié)分枝桿菌屬(Mycobacterium)分支桿菌屬主要有3種：結(jié)核分支桿菌(M.tuberculosis)、牛分支桿菌(M.bovis)、禽分支桿菌(M.avium)，是引起人類以及畜禽結(jié)核病的病原體。這里只介紹結(jié)核分支桿菌。第5頁,共33頁，2024年2月25日，星期天

一結(jié)核分支桿菌（M.tuberculosis）1、形態(tài)與染色特性——細(xì)長略彎,端鈍園,0.4×1-4μm，單個或分枝狀排列，無莢膜、無鞭毛、無芽胞。在陳舊的病灶和培養(yǎng)物中形態(tài)不典型，呈顆粒，串球，短棒，長絲形等。第6頁,共33頁，2024年2月25日，星期天

一結(jié)核分支桿菌（M.tuberculosis）

——結(jié)核桿菌常用萎-鈉氏(Ziehl-Neelsen)抗酸染色法染色，菌染成紅色，其他非抗酸細(xì)菌及細(xì)胞等呈藍(lán)色。第7頁,共33頁，2024年2月25日，星期天

2、培養(yǎng)特性——專性需氧。營養(yǎng)要求高，在含蛋黃、馬鈴薯、甘油和天門冬素等的固體培養(yǎng)基上才能生長。最適pH6.5-6.8，最適溫度37℃，生長緩慢，接種后培養(yǎng)3-4周才出現(xiàn)肉眼可見菌落。第8頁,共33頁，2024年2月25日，星期天

2、培養(yǎng)特性——菌落干燥、堅(jiān)硬、表面顆粒狀、乳酪色或黃色，形似菜花。液體培養(yǎng)呈粗糙皺紋狀菌膜，加入水溶性脂肪酸Tween-80，可降低結(jié)核桿菌表面的疏水性，使其呈均勻分散生長，有利于藥物敏感試驗(yàn)。第9頁,共33頁，2024年2月25日，星期天

3、抵抗力結(jié)核桿菌對某些理化因子抵抗力較強(qiáng)。在干痰中存活6-8個月；粘附于塵埃上，保持傳染性8-10d；在3%HCl或NaOH溶液中耐受30min，常以酸或堿處理污染的樣品，以殺死雜菌，提高檢出率；對濕熱、紫外線、酒精抵抗力弱:液體加熱62-63℃15min，日光直射2-3h，75%酒精數(shù)分鐘即死亡。第10頁,共33頁，2024年2月25日，星期天

4、變異性對鏈霉素、利福平、異煙肼等抗結(jié)核藥物易產(chǎn)生耐藥性。耐藥菌株常伴隨活力和毒力減弱，如異煙肼耐藥菌株對豚鼠的毒力消失，但對人仍有一定致病性?？ń榫?BacilliCalmette-Giierin,BCG)：卡-介（Calmette-Gerine）二氏將牛型結(jié)核桿菌培養(yǎng)于膽汁、甘油、馬鈴薯培養(yǎng)基，經(jīng)230次傳代，歷時13年，其毒力發(fā)生變異，成為對人無致病性，而仍保持良好免疫性的菌株，接種人體后可獲得對該菌的免疫力。

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5、致病因子結(jié)核分支桿菌無內(nèi)毒素、外毒素和侵襲性酶，其致病作用主要靠菌體成份，特別是胞壁中所含的大量脂質(zhì)。脂質(zhì)含量與結(jié)核桿菌的毒力相關(guān)，含量愈高毒力愈強(qiáng)。

1、脂質(zhì)（Lipide）占菌體干重20-40%，胞壁干重的60%，主要是磷脂、脂肪酸和蠟質(zhì)，大多與蛋白質(zhì)或多糖結(jié)合成復(fù)合物。①磷脂：刺激單核細(xì)胞增生，抑制蛋白酶的分解作用，使病灶組織溶解不完全，形成干酪樣壞死。第12頁,共33頁，2024年2月25日，星期天②脂肪酸：在脂質(zhì)中比重較大，其中6,6-二分枝酰-a,a‘-海澡糖(6,6-Dimycocyl-a,a’-D-trehalose)能破壞細(xì)胞線粒體膜，毒害微粒體酶類，抑制中性粒細(xì)胞游走和吞噬，引起慢性肉芽腫。具有該物質(zhì)的結(jié)核桿菌毒株，在液體培養(yǎng)基中能緊密粘成索狀，稱為索狀因子(cordfactor)。③蠟質(zhì)D：為胞壁主要成分，是一種肽糖脂(Piptidoglycolipids)與分枝菌酸(My-colicacid)的復(fù)合物，能引起遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，并具有佐劑作用。第13頁,共33頁，2024年2月25日，星期天④硫酸腦苷脂(salfatides)和硫酸多酰基化海澡糖(Multiasiylatedtrehalosesalfate)：存在于結(jié)核桿菌毒株胞壁，能抑制吞噬細(xì)胞中的吞噬小體與溶酶體融合，使結(jié)核桿菌在細(xì)胞內(nèi)存活。這類糖脂能結(jié)合中性紅染料。產(chǎn)生中性紅反應(yīng)，借此可鑒定結(jié)核桿菌的毒力。

2、蛋白質(zhì)（Protein）結(jié)核桿菌菌體內(nèi)含數(shù)種蛋白質(zhì)，重要的是結(jié)核菌素(tuberculin)，其與蠟質(zhì)D結(jié)合后，能引起較強(qiáng)的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。蛋白質(zhì)具免疫原性，但無保護(hù)作用。第14頁,共33頁，2024年2月25日，星期天3、多糖（Polysuccharides）多糖常與脂質(zhì)結(jié)合存在于胞壁中，主要有半乳糖，甘露醇、阿拉拍糖等。多糖可使中性粒細(xì)胞增多，引起病灶局部細(xì)胞浸潤。4、核酸(Nucleicacid)核糖體核糖核酸(Ribonucleieacidribosonic,rRNA)是本菌的免疫原，刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性細(xì)胞免疫。

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6、致病性結(jié)核桿菌的致病作用可能是細(xì)菌在組織細(xì)胞內(nèi)頑強(qiáng)增殖引起的炎癥反應(yīng)，以及誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)有關(guān)。結(jié)核桿菌可通過呼吸道、消化道和破損的皮膚粘膜進(jìn)入機(jī)體，侵犯多種組織器官，引起相應(yīng)器官的結(jié)核病，其中以肺結(jié)核最常見。動物則常見內(nèi)臟（如腸道等）結(jié)核。

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6、致病性第17頁,共33頁，2024年2月25日，星期天

7、免疫性

結(jié)核分支桿菌的免疫原rRNA和變應(yīng)原結(jié)核菌素可誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生由T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫和遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。人類及動物對結(jié)核桿菌的感染率很高，但發(fā)病率卻較低，這表明機(jī)體感染結(jié)核桿菌可獲得一定免疫力，其持久性依賴于結(jié)核桿菌在機(jī)體內(nèi)的活性，一旦體內(nèi)結(jié)核桿菌消失，抗結(jié)核免疫力也隨之消失，這種免疫稱為有菌免疫或傳染性免疫(Infectionimmunify)。第18頁,共33頁，2024年2月25日，星期天

8、微生物診斷

肺炎結(jié)核最好取早晨第一次咯痰；腎或膀胱結(jié)核以無菌導(dǎo)尿；腸結(jié)核采糞便，結(jié)核性腦膜炎取腦脊液；胸膜炎、腹膜炎或骨髓結(jié)核等則穿刺取膿汁。

1、涂片染色咯痰可直接涂片。用抗酸染色法，若鏡檢找到抗酸性桿菌，可能是結(jié)核桿菌，單憑形態(tài)染色不能確定是結(jié)核桿菌，需進(jìn)一步分離培養(yǎng)鑒定。標(biāo)本中結(jié)核桿菌量少時應(yīng)濃縮集菌后再涂片染色鏡檢，以提高陽性檢出率。第19頁,共33頁，2024年2月25日，星期天無菌直接采取的腦脊液和導(dǎo)尿可直接離心集菌?？┨岛图S便標(biāo)本需用4%NaOH或3%HCl或6%H2SO4處理，然后用離心沉淀集菌作抗酸染色檢查、分離培養(yǎng)或動物試驗(yàn)。第20頁,共33頁，2024年2月25日，星期天

2、分離培養(yǎng)結(jié)核分支桿菌生長緩慢，培養(yǎng)期長，當(dāng)接種于固體培養(yǎng)基上（如青霉素血液瓊脂），以蠟封口防止干燥。37℃培養(yǎng)4-6周后檢查，該菌生長緩慢，菌落干燥、顆粒狀、乳酪色，菜花狀。

3、動物試驗(yàn)常用豚鼠或地鼠鑒別疑似結(jié)核桿菌的分離培養(yǎng)物和其毒力。取濃縮集菌標(biāo)本1ml注射于豚鼠腹股溝皮下，經(jīng)3-4周飼養(yǎng)觀察，如出現(xiàn)局部淋巴結(jié)腫大，消瘦或結(jié)核菌素試驗(yàn)陽性，可及時剖檢，注意觀察淋巴結(jié)、肝、脾、肺等臟器有無結(jié)核病變。

4、變態(tài)反應(yīng)我國常用皮內(nèi)法和點(diǎn)眼法，皮內(nèi)法4mm以上為陽性；2-4mm為可疑；2mm以下為陰性?？蓹z出95~98%的結(jié)核病牛。第21頁,共33頁，2024年2月25日，星期天

9、預(yù)防

1、預(yù)防接種卡介苗接種是預(yù)防結(jié)核病的有效措施之一，廣泛接種卡介苗能大大地降低結(jié)核病的發(fā)病率。

2、治療人類結(jié)核病的治療在于控制疾病，促使病灶愈合，消除癥狀和防止復(fù)發(fā)。常用的藥物有鏈霉素、對氨水楊酸鈉、利福平、乙胺丁醇等。各種抗結(jié)核藥物如合并應(yīng)用，有協(xié)同作用，且能降低耐藥性的產(chǎn)生，減少毒性。因耐藥菌株出現(xiàn)較多，因此由病人體內(nèi)人分離的結(jié)核菌株在治療過程中應(yīng)作藥敏試驗(yàn)。

3、定期檢測動物發(fā)病或檢測陽性后一般不治療，直接淘汰作無害化處理。第22頁,共33頁，2024年2月25日，星期天第23頁,共33頁，2024年2月25日，星期天

第2節(jié)放線菌屬（Actinomyces）

是處于細(xì)菌和真菌之間的一群單細(xì)胞微生物，具有分支的細(xì)絲狀菌絲；廣泛存在于自然界，特別是土壤；在自然界物質(zhì)轉(zhuǎn)化中起作用，許多抗生素都是由放線菌產(chǎn)生的（如鏈霉素、土霉素等）;已知的病原菌有牛放線菌和依氏放線菌。

第24頁,共33頁，2024年2月25日，星期天放線菌屬1.形態(tài)與染色特性

G-，長短不一，多數(shù)為分支狀細(xì)菌絲組成的菌絲體；菌絲橫徑約1~2μm，無隔膜，不具核膜；無運(yùn)動性，無芽胞，非抗酸性。第25頁,共33頁，2024年2月25日，星期天2.

生理特性厭氧或微需氧(厭氧培養(yǎng)時需CO2)；最適生長溫度為30~32℃，致病性放線菌在37~40℃也生長良好；中性偏堿pH環(huán)境適于生長；發(fā)酵葡萄糖、接觸酶陰性、氧化酶陰性。第26頁,共33頁，2024年2月25日，星期天3.繁殖斷裂繁殖——從菌絲斷片形成新的菌絲體；孢子形成——主要繁殖方式第27頁,共33頁，2024年2月25日，星期天4.致病性及其他特性能致病的很少；已知的病原菌主要有牛放線菌和依氏放線菌，引起牛、豬的放線菌?。ㄒ灶M骨多見）。對青霉素、鏈霉素、四環(huán)素、頭孢霉素和林肯霉素敏感，可用于治療。第28頁,共33頁，2024年2月25日，星期天

第3節(jié)棒狀桿菌屬（Corynebacterium）

白喉?xiàng)U菌(C.diphtheria):引起人類白喉的病原菌。1、形態(tài)染色：G+細(xì)長桿菌，美蘭染色兩端有異染顆粒(極體)。第29頁,共33頁，2024年2月25日，星期天白喉?xiàng)U菌2、培養(yǎng)特性：需血清或血液，生長快，亞碲酸鉀瓊脂上長成黑色菌落。3、抵抗力：對干燥、寒冷和日光的抵抗力較其他無芽胞菌強(qiáng)；對熱和消毒劑抵抗力較弱。4、致病與免疫（1）致病性①致病物質(zhì)：侵襲力（白喉索狀因子）、外毒素毒性強(qiáng)，由A和B兩個片段組成，A片段有毒，B片段無毒，起輔助作用。第30頁,共33頁，2024年2月25日，星期天4、致病與免疫②可引起人類白喉，易感者主要是兒