血常規(guī)分析中的誤差因素及血涂片復(fù)檢規(guī)則

關(guān)于血常規(guī)分析中的誤差因素及血涂片復(fù)檢規(guī)則第2頁,共45頁，2024年2月25日，星期天第3頁,共45頁，2024年2月25日，星期天多種病理條件對血常規(guī)檢測的干擾假性血小板減少或增多假性紅細胞減少或增多假性白細胞減少或增多第4頁,共45頁，2024年2月25日，星期天假性血小板減少或增多的干擾因素假性血小板減少樣品采集環(huán)節(jié)中的血小板聚集EDTA誘導(dǎo)的血小板聚集血小板衛(wèi)星現(xiàn)象巨大血小板假性血小板增多紅、白細胞碎片小紅細胞第5頁,共45頁，2024年2月25日，星期天WBCLYM%MXD%NEUT%PLTPDWMPVP-LCR6.30.1310.0580.8115812.09.60.232×109/L×109/LfLfLWL*WL*WL*WL*AGEDTA誘導(dǎo)的血小板聚集第6頁,共45頁，2024年2月25日，星期天第7頁,共45頁，2024年2月25日，星期天EDTA誘導(dǎo)血小板聚集發(fā)病率0.07%~0.11%誘因健康人自身免疫病、慢性炎癥、病毒或細菌感染腫瘤潛在的誤診風(fēng)險高預(yù)防性血小板輸血的醫(yī)學(xué)決定水平血小板計數(shù)為20×109/L誤診為ITP或TTP第8頁,共45頁，2024年2月25日，星期天EDTA誘導(dǎo)血小板聚集的發(fā)病機制血小板糖膜改變，血小板膜內(nèi)隱匿性抗原暴露血漿中自身抗體與隱匿性抗原形成復(fù)合物激活細胞膜中的磷酯酶血小板膜水解并釋放血小板活性物質(zhì)AA、ADP、5-TH、膠原、凝血酶原等血小板纖維蛋白原受體被活化血小板與纖維蛋白原受體結(jié)合后聚集成團出現(xiàn)血小板假性減少第9頁,共45頁，2024年2月25日，星期天EDTA誘導(dǎo)血小板聚集的處理方法光學(xué)顯微鏡鏡檢采用血小板稀釋液進行稀釋瑞氏染色更換抗凝劑重新抽血檢測枸櫞酸鈉肝素鈉第10頁,共45頁，2024年2月25日，星期天血小板衛(wèi)星現(xiàn)象自身抗體引起的一種免疫反應(yīng)IgG型抗體識別中性粒細胞和血小板上共同抗原結(jié)構(gòu)血小板的GPIIb-IIIa中性粒細胞上的FcγRIII片斷處理方法形態(tài)學(xué)鏡檢第11頁,共45頁，2024年2月25日，星期天巨大血小板PLT-I32[10^9/L](x1000)PLT-O65[10^9/L]第12頁,共45頁，2024年2月25日，星期天紅、白細胞碎片的干擾紅細胞碎片的產(chǎn)生彌散性血管內(nèi)凝血微血管病性溶血性貧血心源性溶血性貧血其它化學(xué)中毒、腎功能衰竭、血栓性血小板減少性紫癜和化療白細胞碎片的產(chǎn)生AML、淋巴瘤、嚴(yán)重感染、化療第13頁,共45頁，2024年2月25日，星期天排除紅、白細胞碎片對血小板干擾第14頁,共45頁，2024年2月25日，星期天假性紅細胞減少或增多的干擾因素紅細胞冷凝集所致假性紅細胞減少巨大血小板所致假性紅細胞增多第15頁,共45頁，2024年2月25日，星期天紅細胞凝集所致干擾及處理RBCHGBHCTMCVMCHMCHCRDW2.231440.249111.764.65780.254×1012/Lg/LfLpgg/LRU*RU*RU*RU*RU**處理方法加溫到37OC后再測定第16頁,共45頁，2024年2月25日，星期天紅細胞冷凝集所致假性紅細胞減少冷凝集素綜合癥在31℃以下自身紅細胞抗原發(fā)生可逆性凝集病因白血病、惡性淋巴瘤或全身性紅斑狼瘡肺炎支原體屬感染傳染性單核細胞增多癥血吸蟲病、絲蟲病、瘧疾肝硬化、非典型性肺炎第17頁,共45頁，2024年2月25日，星期天假性白細胞減少或增多的干擾因素白細胞聚集所致假性白細胞減少紅細胞溶血不良所致假性白細胞增多有核紅細胞所致假性白細胞增多第18頁,共45頁，2024年2月25日，星期天溶血劑滴下后正常人RBC肝硬化病人RBC紅細胞溶血不良第19頁,共45頁，2024年2月25日，星期天因脂類代謝異常所致紅細胞膜表面與外周血脂類結(jié)合形成脂質(zhì)顆粒保護膜，或紅細胞膜表面結(jié)構(gòu)異常，正常濃度的溶血素?zé)o法破壞紅細胞膜表面常見于以下疾病肝功能低下(肝硬化、肝癌晚期、膽道堵塞)高脂血癥高膽固醇制劑輸液治療過程中異常血紅蛋白癥(Hgb-S癥、Hgb-C癥)紅細胞溶血不良的原因第20頁,共45頁，2024年2月25日，星期天紅細胞溶血不良處理辦法：人工顯微鏡形態(tài)學(xué)鏡檢淋巴細胞峰左邊上翹顯示碎片明顯涂片顯示大血小板、棘形紅細胞WBC6.9×109/LLYM%34.3%MXD%19.4%NEUT%46.3%第21頁,共45頁，2024年2月25日，星期天有核紅細胞的存在血液學(xué)疾病：急性髓細胞白血病急性紅白血病急性淋巴細胞白血病慢性粒細胞白血病慢性淋巴細胞白血病多發(fā)性骨髓瘤骨髓增生異常綜合征惡性淋巴瘤骨髓轉(zhuǎn)移癌骨髓纖維化原發(fā)性血小板增多癥血液非腫瘤性疾病缺鐵性貧血巨幼細胞貧血溶血性貧血增生性貧血再生障礙性貧血原發(fā)性血小板減少性紫癜感染性疾病原發(fā)性脾亢脾

第22頁,共45頁，2024年2月25日，星期天有核紅細胞對白細胞檢測的干擾<WBC直方圖>WBC56.1X109/L外周血中紅細胞的數(shù)量是白細胞的三次方數(shù)量級第23頁,共45頁，2024年2月25日，星期天排除NRBC對白細胞檢測的干擾形態(tài)學(xué)鏡檢高端儀器WBC6.90Х109/LNRBC0.34Х109/L第24頁,共45頁，2024年2月25日，星期天A(blood)smearcampaignBlood,1April2003,101(7),2453-2453

臨檢是實驗室風(fēng)險最大的部門第25頁,共45頁，2024年2月25日，星期天ISO對血常規(guī)形態(tài)學(xué)的相關(guān)要求5.5檢驗程序b）血液學(xué)檢查部門需制定如下標(biāo)準(zhǔn)/程序并形成文件（不僅限于如下標(biāo)準(zhǔn)/程序）：血細胞分析的顯微鏡復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)（檢測結(jié)果出現(xiàn)異常計數(shù)、警示標(biāo)志、異常散點圖等情況時結(jié)果的確認方法和程序）；血涂片制備和檢驗的書面程序/過程；對患者血液檢查和凝固試驗的標(biāo)本進行重復(fù)檢驗的標(biāo)準(zhǔn)及程序。c）血液計數(shù)結(jié)果超出儀器線性范圍時宜規(guī)定識別和解決方法（如對血樣進行適當(dāng)稀釋和重復(fù)檢驗）；對于檢測樣本存在一些影響因素（如有核紅細胞、紅細胞凝集、小紅細胞、紅細胞有內(nèi)容物或瘧原蟲、血小板凝塊、巨型血小板等）時，對儀器檢測結(jié)果可靠性的判定和糾正措施需有書面規(guī)定。第26頁,共45頁，2024年2月25日，星期天CAP對血常規(guī)形態(tài)學(xué)的相關(guān)要求HEM.34200Hasthelaboratoryestablishedcriteriaforcheckingandreviewingleukocytedifferentialcounterdata,histograms,and/orbloodfilmsforclinicallyimportantresultsflaggedbytheautomateddifferentialcounter?HEM.34300Isthequalityofbloodfilmssatisfactory(properlystained,freeofprecipitate,goodcelldistribution)?HEM.34350Areslidesuniquelyidentified?NOTE:Slidesorcoverslipsmustbeuniquelyidentifiedbyelement(s)suchasspecimenoraccessionnumber,orpatientnameand/ornumber.HEM.34450Arebloodfilmsretainedforatleastoneweekforpossiblereviewand/orreference?NOTE:Itmaybedesirabletoretainoutpatientfilmsforalongerperiodandsignificantlyabnormalfilmsindefinitelyforteachingpurposes.第27頁,共45頁，2024年2月25日，星期天國內(nèi)常用血細胞分析儀復(fù)檢規(guī)則的制定SysmexXE-2100BeckmanCoulter系列SiemensBayerAdvia120/2120第28頁,共45頁，2024年2月25日，星期天協(xié)和醫(yī)院血常規(guī)檢查儀器配置北京協(xié)和醫(yī)院檢驗科協(xié)和醫(yī)院東院區(qū)檢驗科協(xié)和醫(yī)院西院區(qū)檢驗科門診HST-XE-302ADVIA2120病房ADVIA2120XS-800i國際醫(yī)療部/特需ADVIA2120急診XT-1800XS-800i病房/門診XE-2100XE-2100急診XT-180011臺第29頁,共45頁，2024年2月25日，星期天涂片復(fù)檢規(guī)則設(shè)置流程確定實驗方法及目標(biāo)儀器校準(zhǔn)/比對確定鏡檢陽性標(biāo)準(zhǔn)雙盲法分別進行儀器檢測和鏡檢設(shè)定/調(diào)整復(fù)檢規(guī)則滿足預(yù)設(shè)定目標(biāo)？驗證實驗NY磨刀不誤砍柴工參考發(fā)表數(shù)據(jù)并調(diào)整記錄完整數(shù)據(jù)Datamining推片率≈30%,假陰性<5%血液病患者不能漏診第30頁,共45頁，2024年2月25日，星期天鏡檢陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)存在異常紅細胞可見NRBC白細胞計數(shù)異常Dohle小體粒細胞顯見中毒顆粒粒細胞顯見空泡變性粒細胞顯見原始和幼稚細胞≥1%早、中幼粒細胞≥1%晚幼粒細胞>2%異型淋巴細胞>5%存在巨大血小板存在血小板聚集第31頁,共45頁，2024年2月25日，星期天第32頁,共45頁，2024年2月25日，星期天鏡下形態(tài)異常樣品分類1223例血常規(guī)樣本來自體檢者、門診及住院患者其中陰性標(biāo)本37.4%、陽性標(biāo)本62.3%，陽性標(biāo)本包括細胞數(shù)量異常、白細胞分類異常和細胞形態(tài)異常鏡下形態(tài)異常樣品203例（16.6%）第33頁,共45頁，2024年2月25日，星期天對國際復(fù)檢規(guī)則進行評估采用相同涂片復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)，不同型號儀器的篩選性能大致相同，略有差異雖然假陰性率符合目標(biāo)，但XE/XT漏掉2例AL病例，XS漏掉其中1例。

2例AL都未觸發(fā)41條規(guī)則，但鏡下發(fā)現(xiàn)白細胞分類異常并有異常紅細胞推片率過高陽性率假陽性率陰性率假陰性率符合率推片率XE-210014.23%23.71%59.61%2.45%73.83%37.94%XT-1800i14.06%21.50%61.98%2.45%76.04%35.56%XS-800i13.90%19.54%63.86%2.70%77.76%33.44%ADVIA212014.64%23.30%60.16%1.88%74.82%37.94%N=1223第34頁,共45頁，2024年2月25日，星期天對加強的國際復(fù)檢規(guī)則進行評估血液科標(biāo)本全推，以避免漏掉嚴(yán)重的血液病病人假陰性率下降但推片率過高，工作中實現(xiàn)難度增大我們確定的推片復(fù)檢規(guī)則以此為基礎(chǔ)，從降低假陽性入手陽性率假陽性率陰性率假陰性率符合率推片率XE-210014.39%24.94%58.38%2.29%72.77%39.32%XT-1800i14.23%22.40%61.08%2.29%75.31%36.63%XS-800i13.98%20.77%62.63%2.62%76.61%34.75%N=1223第35頁,共45頁，2024年2月25日，星期天導(dǎo)致假陽性的主要觸發(fā)規(guī)則WBC(x10^9/L)

<4或>30PLT(x10^9/L)

<100或

>1000不成熟粒細胞原始細胞核左移異型淋巴細胞WBC(x10^9/L)

<4或>30PLT(x10^9/L)

<100或

>1000不成熟粒細胞有核紅細胞異常紅細胞血小板聚集WBC(x10^9/L)

<4或>30PLT(x10^9/L)

<100或

>1000不成熟粒細胞血液科全推WBC(x10^9/L)

<4或>30PLT(x10^9/L)

<100或

>1000不成熟粒細胞小細胞(+/++/+++)大細胞(+/++/+++)細胞大小不等

(+/++/+++)XE-2100XT-1800i

XS-800iADVIA-2120第36頁,共45頁，2024年2月25日，星期天導(dǎo)致假陽性的主要觸發(fā)規(guī)則XE-2100WBC(x10^9/L)

<3或>30PLT(x10^9/L)

<

80或

>1000不成熟粒細胞原始細胞核左移異型淋巴細胞XT-1800iWBC(x10^9/L)

<3或>30PLT(x10^9/L)

<

85或

>1000不成熟粒細胞有核紅細胞異常紅細胞血小板聚集XS-800iWBC(x10^9/L)

<3或>30PLT(x10^9/L)

<

80或

>1000不成熟粒細胞血液科全推ADVIA-2120WBC(x10^9/L)

<3或>30PLT(x10^9/L)

<

80或

>1000不成熟粒細胞小細胞(+)大細胞(+)細胞大小不等(+)降低假陽性同時必須使真陽性率改變不大第37頁,共45頁，2024年2月25日，星期天4種型號血細胞分析儀復(fù)檢規(guī)則的分析結(jié)果N=1223陽性率假陽性率陰性率假陰性率符合率推片率XE-210013.57%16.43%67.13%2.86%80.70%30.00%XT-1800i13.33%16.68%66.89%3.11%80.21%30.01%XS-800i13.74%16.35%67.05%2.78%80.87%30.09%ADVIA212013.57%17.50%65.99%2.94%79.56%31.07%第38頁,共45頁，2024年2月25日，星期天4種型號血細胞分析儀涂片復(fù)檢規(guī)則(一)序號相關(guān)參數(shù)復(fù)檢界定標(biāo)準(zhǔn)1WBC<3.0χ109/L

或>30.0χ109/L2Hb<70

g/L或>180

g/L3MCV<75fl或>105fl4RDW>22%5DC無分類6Neut#<1.0χ109/L

或>20.0χ109/L7Lym#>5.0χ109/L8Mono#>1.5χ109/L9Eos#>2χ109/L10Baso#>0.5χ109/L11血液科標(biāo)本全推12RBCIPMessageRBC聚集或RBC碎片或RBC溶血不良或雙形性紅細胞等13WBCIPMessage原始細胞14WBCIPMessage未成熟粒細胞15WBCIPMessage有核紅細胞第39頁,共45頁，2024年2月25日，星期天SysmexXE-210016PLT<80χ109/L或>1000χ109/L17PLTIPMessagePLT異常分布或PLT聚集18RBCIPMessage不均一性紅細胞SysmexXT-1800i16PLT<85χ109/L或>1000χ109/L17WBCIPMessageWBC異常散點圖18WBCIPMessage不典型和/或變異Lym19WBCIPMessage核左移SysmexXS-800i16PLT<80χ109/L或>1000χ109/L17WBCIPMessage核左移18WBCIPMessage不典型和/或變異Lym19PLTIPMessagePLT異常分布或PLT聚集20RBCIPMessage不均一性紅細胞4種型號血細胞分析儀涂片復(fù)檢規(guī)則(二)第40頁,共45頁，2024年2月25日，星期天SiemensAdiva212016PLT<80χ109/L或>1000χ109/L17LUC%>618LeftshiftFlag++orFlag+++19Atypical/variantlymphocytesFlag+orFlag++orFlag+++20PLTclump

Flag21LargePlateletFlag+orFlag+++22Micro-RBCFlag++orFlag+++23Macro-RBCFlag++orFlag