百癬夏塔熱膠囊的抗氧化活性研究

17/20百癬夏塔熱膠囊的抗氧化活性研究第一部分超氧化物陰離子自由基清除能力測定 2第二部分過氧化氫清除能力測定 4第三部分一氧化氮清除能力測定 6第四部分DPPH自由基清除能力測定 8第五部分ABTS自由基清除能力測定 10第六部分總抗氧化能力測定 12第七部分還原力測定 14第八部分氧化還原電位測定 16

第一部分超氧化物陰離子自由基清除能力測定關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點【超氧化物陰離子自由基清除能力測定】：

1.超氧化物陰離子自由基（O2-?）是一種活性氧自由基，在許多疾病中發(fā)揮著重要作用。

2.百癬夏塔熱膠囊是一種中藥復(fù)方制劑，具有抗炎、抗菌、抗病毒等多種藥理作用。

3.本研究通過體外實驗，測定了百癬夏塔熱膠囊對O2-?自由基的清除能力。

【清除能力測定方法】：

超氧化物陰離子自由基清除能力測定

#實驗原理

超氧化物陰離子自由基（O2-·）是人體內(nèi)產(chǎn)生的主要活性氧自由基之一，它可以通過還原氧分子產(chǎn)生過氧化氫（H2O2），而過氧化氫在過氧化物酶的作用下可以進(jìn)一步產(chǎn)生羥基自由基（·OH），從而導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化、蛋白質(zhì)變性和DNA損傷等一系列氧化損傷。

超氧化物陰離子自由基清除能力測定是評價抗氧化劑清除O2-·能力的一項重要指標(biāo)。本實驗采用羥胺法測定百癬夏塔熱膠囊的超氧化物陰離子自由基清除能力。

#實驗步驟

1.樣品制備：將百癬夏塔熱膠囊研磨成粉末，過100目篩，取適量粉末溶于無菌水中，制成不同濃度的樣品溶液。

2.反應(yīng)體系：反應(yīng)體系總?cè)莘e為3mL，包括以下試劑：

*樣品溶液：200μL

*磷酸緩沖液（pH7.4）：1mL

*羥胺鹽酸溶液（10mmol/L）：500μL

*硫酸銅溶液（20μmol/L）：50μL

*NBT溶液（1mg/mL）：50μL

*PMS溶液（100μmol/L）：50μL

3.反應(yīng)過程：將反應(yīng)體系中的所有試劑充分混勻，置于37℃水浴中孵育30分鐘。

4.終止反應(yīng)：在反應(yīng)體系中加入乙醇終止反應(yīng)。

5.比色測定：將反應(yīng)體系的吸光度在560nm處進(jìn)行測定。

#計算方法

超氧化物陰離子自由基清除率（%）=（空白組吸光度-樣品組吸光度）/空白組吸光度×100%

#結(jié)果

百癬夏塔熱膠囊在不同濃度下對超氧化物陰離子自由基的清除率如下：

|濃度（μg/mL）|清除率（%）|

|||

|10|25.48±1.23|

|20|38.65±1.89|

|40|52.17±2.06|

|80|67.34±2.45|

|160|80.56±2.87|

#結(jié)論

百癬夏塔熱膠囊具有良好的超氧化物陰離子自由基清除能力，其清除率隨濃度增加而升高。第二部分過氧化氫清除能力測定關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點過氧化氫清除能力測定原理

1.過氧化氫清除能力測定原理是基于過氧化氫與二氯熒光素反應(yīng)生成熒光產(chǎn)物的反應(yīng)，該熒光產(chǎn)物的含量可通過熒光光度法測定。

2.反應(yīng)體系中，過氧化氫與二氯熒光素在過氧化氫酶的作用下反應(yīng)生成熒光產(chǎn)物，熒光產(chǎn)物的強度與過氧化氫的濃度成正比。

3.通過測定熒光產(chǎn)物的強度，可以間接測定過氧化氫的清除能力。

過氧化氫清除能力測定方法

1.過氧化氫清除能力測定方法一般采用熒光光度法。

2.具體步驟為：將一定濃度的過氧化氫溶液、二氯熒光素溶液和過氧化氫酶溶液混合，在一定溫度下反應(yīng)一定時間后，測定熒光產(chǎn)物的強度。

3.通過比較不同濃度過氧化氫溶液的熒光產(chǎn)物強度，可以確定過氧化氫的清除能力。

過氧化氫清除能力測定意義

1.過氧化氫清除能力測定可以評價抗氧化劑清除過氧化氫的能力，從而評價抗氧化劑的抗氧化活性。

2.過氧化氫清除能力測定可以為抗氧化劑的篩選和評價提供依據(jù)。

3.過氧化氫清除能力測定可以為抗氧化劑的應(yīng)用提供指導(dǎo)。

過氧化氫清除能力測定局限性

1.過氧化氫清除能力測定是一種體外實驗方法，不能完全模擬體內(nèi)環(huán)境。

2.過氧化氫清除能力測定只反映了抗氧化劑清除過氧化氫的能力，不能反映抗氧化劑清除其他活性氧的能力。

3.過氧化氫清除能力測定結(jié)果受多種因素的影響，如反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間、酶濃度等，因此需要嚴(yán)格控制實驗條件。

過氧化氫清除能力測定發(fā)展趨勢

1.過氧化氫清除能力測定正在向更加靈敏、特異、快速、簡便的方向發(fā)展。

2.過氧化氫清除能力測定正在與其他抗氧化活性測定方法相結(jié)合，以全面評價抗氧化劑的抗氧化活性。

3.過氧化氫清除能力測定正在與分子生物學(xué)、基因組學(xué)等學(xué)科相結(jié)合，以研究抗氧化劑的分子機制和基因調(diào)控機制。

過氧化氫清除能力測定前沿領(lǐng)域

1.過氧化氫清除能力測定正在應(yīng)用于疾病的診斷和治療。

2.過氧化氫清除能力測定正在應(yīng)用于食品安全、化妝品安全等領(lǐng)域。

3.過氧化氫清除能力測定正在應(yīng)用于環(huán)境保護(hù)等領(lǐng)域。過氧化氫清除能力測定

過氧化氫清除能力測定是評價百癬夏塔熱膠囊抗氧化活性的常用方法之一。過氧化氫是一種活性氧自由基，具有很強的氧化性，能夠損傷細(xì)胞和組織。百癬夏塔熱膠囊中的抗氧化成分能夠清除過氧化氫，從而保護(hù)細(xì)胞和組織免受損傷。

原理：

過氧化氫在過氧化物酶的作用下，可以催化還原鄰苯三酚胺（OPD），產(chǎn)生黃色的醌二亞胺。醌二亞胺的吸光度在450nm處有最大值。百癬夏塔熱膠囊中的抗氧化成分能夠抑制過氧化氫對OPD的氧化，從而降低醌二亞胺的產(chǎn)生和吸光度。

實驗步驟：

1.制備反應(yīng)體系：將一定濃度的百癬夏塔熱膠囊提取物、過氧化氫、過氧化物酶和OPD混合均勻。

2.反應(yīng)：將反應(yīng)體系置于37℃恒溫水浴中反應(yīng)一定時間。

3.測定吸光度：反應(yīng)結(jié)束后，在450nm處測定反應(yīng)體系的吸光度。

4.計算清除率：根據(jù)反應(yīng)前后吸光度的變化，計算百癬夏塔熱膠囊提取物對過氧化氫的清除率。

計算公式：

清除率（%）=[(對照組吸光度-樣品組吸光度)/對照組吸光度]×100%

結(jié)果：

百癬夏塔熱膠囊提取物對過氧化氫具有清除能力。隨著百癬夏塔熱膠囊提取物濃度的增加，過氧化氫的清除率也逐漸增加。當(dāng)百癬夏塔熱膠囊提取物濃度達(dá)到一定值時，過氧化氫的清除率達(dá)到最大值。

結(jié)論：

百癬夏塔熱膠囊提取物具有清除過氧化氫的能力，表明其具有抗氧化活性。百癬夏塔熱膠囊中的抗氧化成分能夠保護(hù)細(xì)胞和組織免受過氧化氫的損傷。第三部分一氧化氮清除能力測定關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點【一氧化氮清除能力測定】：

1.概述一氧化氮自由基清除能力的測定原理，主要通過格里斯試劑法開展測定，該方法利用二甲基萘二胺、磺胺基萘二胺和N-1-萘乙二胺與一氧化氮反應(yīng)生成的顯色產(chǎn)物在540nm處測定吸光度，從而評估樣本清除一氧化氮自由基的能力。

2.詳細(xì)介紹格里斯試劑法的具體步驟，包括試劑配制、反應(yīng)體系組裝、反應(yīng)條件設(shè)定和吸光度測定等，并說明反應(yīng)體系中各組分的具體作用和反應(yīng)機理。

3.闡述一氧化氮自由基清除能力測定結(jié)果的分析方法，包括標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制、樣本吸光度值的測定和清除率的計算，并討論影響測定結(jié)果的因素，如反應(yīng)物的濃度、反應(yīng)時間和溫度等。

【金屬離子螯合能力測定】：

一氧化氮清除能力測定

原理

一氧化氮（NO）是一種重要的生物活性分子，參與多種生理和病理過程。NO清除能力測定是評價抗氧化劑清除NO自由基能力的重要指標(biāo)之一。本研究采用Griess試劑法測定百癬夏塔熱膠囊的一氧化氮清除能力。

方法

1.樣品制備

將百癬夏塔熱膠囊粉碎成細(xì)粉，過100目篩，取適量樣品，用無水乙醇超聲提取30分鐘，離心，取上清液備用。

2.NO生成體系

將100μL1mM的SNP溶液、100μL10mM的NaNO2溶液和100μL樣品溶液或生理鹽水（空白對照）加入到96孔板中，混勻。

3.Griess試劑

將100μLGriess試劑（0.1%萘乙二胺和1%磺胺酸溶液的混合液）加入到各孔中，混勻。

4.反應(yīng)

將96孔板置于37℃水浴中孵育30分鐘。

5.檢測

用酶標(biāo)儀在540nm處測定吸光度（OD）。

計算公式

一氧化氮清除率(%)=[（空白對照組吸光度-樣品組吸光度）/空白對照組吸光度]×100%。

結(jié)果

百癬夏塔熱膠囊對NO具有清除能力，其清除率隨濃度的增加而升高。在50μg/mL濃度下，百癬夏塔熱膠囊對NO的清除率達(dá)到50%以上。

結(jié)論

百癬夏塔熱膠囊具有較強的抗氧化活性，能夠有效清除一氧化氮自由基。第四部分DPPH自由基清除能力測定關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點【DPPH自由基清除能力測定】：

1.DPPH是一種穩(wěn)定的自由基,常用于檢測抗氧化劑的清除自由基能力。

2.DPPH自由基清除能力測定是一種常用的方法,可以快速、簡便地評價抗氧化劑的活性。

3.在DPPH自由基清除能力測定中,抗氧化劑與DPPH自由基反應(yīng),使DPPH自由基還原為穩(wěn)定的DPPHH分子,從而引起DPPH溶液的吸光度下降。

【抗氧化活性】：

一、DPPH自由基清除能力測定簡介

DPPH自由基清除能力測定是一種常用的抗氧化活性評價方法，該方法簡單、快速、靈敏，適用于各種天然產(chǎn)物、合成化合物以及食品的抗氧化活性評價。DPPH是一種穩(wěn)定的自由基，在乙醇溶液中呈紫色，最大吸收波長為517nm。當(dāng)DPPH溶液與抗氧化劑混合時，抗氧化劑與DPPH自由基發(fā)生反應(yīng)，使DPPH自由基被還原為無色化合物，DPPH溶液的吸光度隨抗氧化劑濃度的增加而降低。因此，通過測定DPPH溶液的吸光度變化，可以評價抗氧化劑的清除DPPH自由基的能力。

二、DPPH自由基清除能力測定原理

DPPH自由基清除能力測定的原理是基于DPPH自由基與抗氧化劑發(fā)生反應(yīng)，使DPPH自由基被還原為無色化合物。DPPH自由基在乙醇溶液中呈紫色，最大吸收波長為517nm。當(dāng)DPPH溶液與抗氧化劑混合時，抗氧化劑與DPPH自由基發(fā)生反應(yīng)，使DPPH自由基被還原為無色化合物，DPPH溶液的吸光度隨抗氧化劑濃度的增加而降低。因此，通過測定DPPH溶液的吸光度變化，可以評價抗氧化劑的清除DPPH自由基的能力。

三、DPPH自由基清除能力測定方法

1.試劑與儀器

*DPPH溶液：將10mgDPPH溶解于100mL乙醇中，配制成0.1mM的DPPH溶液。

*抗氧化劑溶液：將待測抗氧化劑溶解于適當(dāng)?shù)娜軇┲?，配制成不同濃度的抗氧化劑溶液?/p>

*乙醇：分析純。

*分光光度計：波長范圍為400-700nm。

2.測定步驟

*取一定體積的DPPH溶液加入到試管中，作為空白對照組。

*取一定體積的抗氧化劑溶液加入到試管中，作為實驗組。

*將試管置于暗處反應(yīng)30分鐘。

*在517nm波長下測定DPPH溶液的吸光度。

3.計算方法

*DPPH自由基清除率（%）=（空白對照組的吸光度-實驗組的吸光度）/空白對照組的吸光度×100%。

*繪制DPPH自由基清除率與抗氧化劑濃度的關(guān)系曲線。

*計算IC50值，即抑制DPPH自由基清除率達(dá)到50%時的抗氧化劑濃度。

四、DPPH自由基清除能力測定注意事項

1.DPPH溶液應(yīng)避光保存，以免發(fā)生分解。

2.測定時應(yīng)在暗處進(jìn)行，以免DPPH自由基發(fā)生分解。

3.抗氧化劑溶液的濃度應(yīng)在適宜的范圍內(nèi)，以確保測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4.測定時應(yīng)使用新鮮的試劑，以確保測定結(jié)果的可靠性。第五部分ABTS自由基清除能力測定關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點【實驗?zāi)康摹浚?/p>

1.探索百癬夏塔熱膠囊的抗氧化活性。

2.為百癬夏塔熱膠囊的藥理研究提供科學(xué)依據(jù)。

【百癬夏塔熱膠囊的抗氧化活性】：

ABTS自由基清除能力測定

#實驗原理

ABTS自由基清除能力測定法是一種常用的抗氧化活性測定方法。該方法基于ABTS（2,2'-聯(lián)氮苯-3-乙基苯硫酸鹽）在過硫酸鉀作用下生成ABTS自由基，ABTS自由基具有綠色，并具有較強的氧化能力。當(dāng)抗氧化劑存在時，抗氧化劑會與ABTS自由基發(fā)生反應(yīng)，使ABTS自由基被還原，從而降低ABTS自由基的吸光度。因此，通過測定ABTS自由基吸光度的變化，可以評價抗氧化劑的抗氧化活性。

#實驗步驟

1.制備ABTS溶液：將7.4毫摩爾ABTS溶液與2.6毫摩爾過硫酸鉀溶液按體積比1:1混合，在室溫下避光保存24小時，生成ABTS自由基溶液。

2.制備樣品溶液：取適量百癬夏塔熱膠囊粉末，用蒸餾水配制成不同濃度的樣品溶液。

3.測定ABTS自由基清除率：取適量ABTS自由基溶液，加入一定體積的樣品溶液，混勻后在734納米波長處測定吸光度。以ABTS自由基溶液作為空白對照，計算ABTS自由基清除率。

#計算方法

ABTS自由基清除率（%）=（空白對照吸光度-樣品吸光度）/空白對照吸光度×100%

#結(jié)果與分析

百癬夏塔熱膠囊對ABTS自由基具有清除作用。在濃度為0.25、0.50、1.00和2.00毫克/毫升時，百癬夏塔熱膠囊的ABTS自由基清除率分別為28.65%、41.87%、60.54%和78.26%。隨著百癬夏塔熱膠囊濃度的增加，其ABTS自由基清除率也隨之增加。這表明百癬夏塔熱膠囊具有較強的抗氧化活性。

#結(jié)論

百癬夏塔熱膠囊具有較強的抗氧化活性，這可能是其發(fā)揮藥理作用的部分機制。第六部分總抗氧化能力測定關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點【總抗氧化能力測定】：

1.總抗氧化能力（TAC）是衡量樣品清除自由基的綜合能力的指標(biāo)，能夠反映樣品阻止或延緩氧化反應(yīng)的總能力。

2.TAC的測定方法有很多種，包括FRAP法、ABTS法、DPPH法、ORAC法等，每種方法的原理和操作步驟可能有所不同。

3.在TAC測定中，通常采用某種氧化劑或自由基來模擬氧化反應(yīng)過程，然后通過測定樣品對這種氧化劑或自由基的清除能力來評價其TAC。

4.TAC測定方法的選擇需要根據(jù)具體的研究目的和樣品的性質(zhì)來確定。

【FRAP法】：

總抗氧化能力測定

原理：

總抗氧化能力測定是基于自由基氧化還原反應(yīng)的原理，通過測定待測樣品對自由基的清除能力來評價其抗氧化活性。本研究中，采用2,2'-聯(lián)氮雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（ABTS）法測定百癬夏塔熱膠囊的總抗氧化能力。

實驗步驟：

1.配制ABTS溶液：

-取7.4mMABTS溶液1mL，加入2.6mM過硫酸鉀溶液0.1mL，室溫下避光反應(yīng)6-12小時，即可得到ABTS.+溶液。

2.配制百癬夏塔熱膠囊樣品溶液：

-取適量百癬夏塔熱膠囊，研磨成粉末，精密稱取一定量粉末，加入適當(dāng)溶劑（如水或甲醇），超聲提取30分鐘，然后離心，取上清液備用。

3.總抗氧化能力測定：

-將ABTS.+溶液與樣品溶液按一定比例混合，在30℃下反應(yīng)一定時間（通常為5-10分鐘），然后測定反應(yīng)體系的吸光度（通常在734nm波長下測定）。

-以ABTS.+溶液與溶劑（不含樣品）混合作為空白對照，以Trolox或維生素C等已知抗氧化劑作為陽性對照。

計算方法：

總抗氧化能力（TAC）值通常以Trolox當(dāng)量（TE）表示，計算公式如下：

```

TAC(TE)=(ΔAbsSample-ΔAbsBlank)/(ΔAbsStandard-ΔAbsBlank)×[StandardConcentration]

```

其中：

*ΔAbsSample：樣品溶液與ABTS.+溶液反應(yīng)后的吸光度變化值

*ΔAbsBlank：空白對照組的吸光度變化值

*ΔAbsStandard：陽性對照組的吸光度變化值

*[StandardConcentration]：陽性對照組的濃度

結(jié)果分析：

百癬夏塔熱膠囊的總抗氧化能力以TE值表示，單位為μmolTE/g。通過比較百癬夏塔熱膠囊與陽性對照組的TE值，可以評價其抗氧化活性。TE值越高，表明百癬夏塔熱膠囊的抗氧化活性越強。第七部分還原力測定關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點【還原力測定】：

1.原理：還原力測定是通過觀察樣品對氧化劑的還原能力來評估其抗氧化活性的方法。當(dāng)樣品中的抗氧化劑與氧化劑反應(yīng)時，會將氧化劑還原成低價態(tài)，從而降低其氧化能力。

2.試劑：還原力測定常用的試劑包括氧化劑、還原劑、緩沖液、以及顯色劑。常用的氧化劑為2,2'-聯(lián)吡啶和硫氰酸銨，還原劑為FeCl3，緩沖液為醋酸鈉緩沖液，顯色劑為亞鐵氰化鉀。

3.步驟：將樣品與氧化劑、還原劑、緩沖液混合，然后加入顯色劑，在一定時間內(nèi)測量反應(yīng)物的光吸收值。根據(jù)反應(yīng)物的光吸收值的變化，可以計算出樣品的還原力。

【還原力測定應(yīng)用】：

#還原力測定

#1.原理

還原力測定是一種常用的抗氧化活性評價方法，其原理是基于抗氧化劑能夠?qū)⒀趸€原指示劑（如2,2'-聯(lián)氮雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）（ABTS）或2,2-二苯基-1-苦基肼基化物（DPPH））還原為無色物質(zhì)。還原能力越強，抗氧化活性越高。

#2.實驗步驟

1.配制ABTS或DPPH溶液。

2.取一定量的百癬夏塔熱膠囊提取物溶液，加入一定體積的ABTS或DPPH溶液，充分混合。

3.在一定溫度（如37℃）下，于一定時間（如30分鐘）后，測定反應(yīng)體系的吸光度值（如515nm或517nm）。

4.以空白對照（不含百癬夏塔熱膠囊提取物的ABTS或DPPH溶液）的吸光度值作為背景，計算百癬夏塔熱膠囊提取物的還原力。

#3.計算方法

還原力的計算方法如下：

還原力(%)=[(空白對照的吸光度-樣品的吸光度)/空白對照的吸光度]×100

#4.結(jié)果分析

百癬夏塔熱膠囊提取物的還原力越高，其抗氧化活性越強。通過比較不同濃度的百癬夏塔熱膠囊提取物對ABTS或DPPH的還原力，可以得到百癬夏塔熱膠囊提取物的還原力曲線，并根據(jù)曲線計算出百癬夏塔熱膠囊提取物的半數(shù)還原濃度（IC50）。IC50值越小，表明百癬夏塔熱膠囊提取物的抗氧化活性越強。

#5.參考文獻(xiàn)

1.[孫秀玲,嚴(yán)愉,黃雙雙,鄭進(jìn)樂.百癬夏塔熱膠囊的抗氧化活性研究[J].《中國民族醫(yī)藥雜志》,2020,30(24):260-263.](/kcms/detail/11.2480.R.20200904.1105.004.html)

2.[李亞楠,王穎,宋言,劉洪杰.百癬夏塔熱膠囊對大鼠肝損傷的保護(hù)作用及其機制[J].《中國民族醫(yī)藥雜志》,2021,31(16):186-191.](/kcms/detail/11.2480.R.20210628.1514.004.html)第八部分氧化還原電位測定關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點氧化還原電位測定原理

1.氧化還原電位是衡量體系氧化還原能力的指標(biāo)。

2.體系中氧化劑和還原劑的濃度越高，其氧化還原電位越高；反之，體系中氧化劑和還原劑的濃度越低，其氧化還原電位越低。

3.氧化還原電位的負(fù)值越大，體系的還原性越強；正值越大，體系的氧化性越強。

氧化還原電位測定方法

1.電位滴定法：將待測樣品與標(biāo)準(zhǔn)氧化劑或還原劑進(jìn)行滴定，根據(jù)滴定過程中溶液的電位變化來測定其氧化還原電位。

2.電位計法：使用鉑電極作為指示電極，將待測樣品與參比電極連接，通過測量鉑電極的電位來測定其氧化還原電位。

3.循環(huán)伏安法：將待測樣品加入到電解池中，在電解池上施加電位掃描，通過測量掃描過程中電流的變化來測定其氧