項(xiàng)目3病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造

疫苗制造基本程序

---病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造

濱州職業(yè)學(xué)院項(xiàng)目三病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造受精卵應(yīng)來自SPF雞群，至少源于未用抗生素藥物的非免疫雞群，以免受母源抗體的干擾和殘留抗生素的影響。從受精卵入孵開始至培養(yǎng)全過程都應(yīng)保持無菌，要求一定的溫度和濕度，且需不斷翻動，然后選擇。選擇一定日齡、發(fā)育正常的胚用于接毒培養(yǎng)。

痘病毒、正粘病毒、副粘病毒和皰疹病毒等一類生物制品，目前仍然利用禽胚特別是雞胚制備，如雞新城疫苗、禽流感疫苗、犬瘟熱雞胚弱毒疫苗等。禽胚疫苗生產(chǎn)的原材料來源方便、質(zhì)量比較容易控制，制造程序簡單，不需要過高的設(shè)備條件，生產(chǎn)的疫苗質(zhì)量可靠。（一）雞胚選擇雞胚選擇種毒與毒種繼代接毒與收獲配苗（二）種毒與毒種繼代目前適應(yīng)于雞胚的種毒多系弱毒，包括自然弱毒與人工培育的弱毒兩類。各種制苗用的種毒多數(shù)由國家菌毒種保藏部門或指定單位保存，保存的種毒多為凍干毒。凍干毒種需按規(guī)定要求在雞胚繼代復(fù)壯，通常繼代3代以上，經(jīng)檢定符合標(biāo)準(zhǔn)后方可作力生產(chǎn)疫苗的毒種，毒種檢定內(nèi)容包括無菌檢驗(yàn)、毒價測定和其他項(xiàng)目的檢定等。病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造種毒與毒種繼代雞胚選擇接毒與收獲配苗（三）接毒與收獲

雞胚接毒涉及接毒途徑和接毒量兩方面。根據(jù)不同的病毒與不同疫苗生產(chǎn)程序，選擇最佳接種途徑和接種量。接種途徑：絨毛尿囊膜接種11~12日齡胚尿囊腔接種9~11日齡胚羊膜腔接種10~12日齡胚卵黃囊接種5~8日齡胚

如雞新城疫I系和II系毒采取尿囊腔接毒，前者接種10-3稀釋毒種0.1ml，后者接種10-4稀釋毒種0.1ml。鴨瘟雞胚化弱毒疫苗采用絨毛尿囊膜接種50-100倍稀釋毒0.2ml。1.接毒病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造接毒與收獲雞胚選擇種毒與毒種繼代配苗

雞胚接毒后培養(yǎng)增殖的時間和溫度、濕度以及收獲的標(biāo)準(zhǔn)與內(nèi)容物依不同的病毒和不同的疫苗而異。如雞新城疫I系疫苗，接毒后于38.5~39

C、相對濕度60%~70%條件培養(yǎng)增殖，收集接毒后24~48h內(nèi)死亡胚，置0~10C冷卻4~24h，收獲胚液，進(jìn)行無菌檢驗(yàn)，供制備濕苗用。也可收獲胚液、胎兒及絨毛尿囊膜混合制成乳劑制備凍干苗。鴨瘟雞胚化弱毒疫苗，則收集接毒后48~120h內(nèi)死亡的雞胚，冷卻后采取絨毛尿囊膜、尿囊液、胎兒制造凍干苗用。2.培養(yǎng)收獲

按規(guī)定收獲的胚液、胎兒和絨毛尿囊膜乳劑經(jīng)無菌檢驗(yàn)合格后即可進(jìn)行配苗。

1.濕苗通常于雞胚液內(nèi)，按每毫升加入青霉素和鏈霉素500~1000U，放置0~10

C冷暗處處理后分裝。

2.凍干苗經(jīng)無菌檢驗(yàn)后合格的胚液或胚液、胎兒、絨毛尿囊膜乳劑，按比例加入保護(hù)劑，充分混合后濾過，于濾液內(nèi)按每毫升加入青、鏈霉素500~1000U，混合后分裝凍干。

3.滅活苗

收獲雞胚液經(jīng)無菌檢驗(yàn)及毒價測定合格后，按規(guī)定比例加入平衡液，按不同病毒的滅活溫度、時間進(jìn)行滅活，加入相應(yīng)的佐劑，制備成滅活疫苗，放置4-10

C保存。（四）配苗病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造配苗雞胚選擇種毒與毒種繼代接毒與收獲流程圖2——病毒性禽胚疫苗制造工藝流程受精卵禽胚毒株種毒滅活病毒液鑒定培育檢驗(yàn)檢驗(yàn)配制原料佐劑配苗、乳化滅活疫苗含病毒尿囊液或禽胚組織含病毒懸液配苗活疫苗保護(hù)劑分裝、凍干分裝滅活原料種子擴(kuò)增收獲配制純化病毒懸液接種毒種：毒種的優(yōu)劣不僅影響疫苗的產(chǎn)量，而且也影響疫苗的質(zhì)量，毒種不純會產(chǎn)生相互干擾，減毒活疫苗毒種若毒力回升易造成事故，因此毒種的選擇應(yīng)挑選那些致病性低，免疫效價高而持久，抗原譜廣的，易增殖，便于生產(chǎn)，可在傳代細(xì)胞上傳代的毒種。培養(yǎng)病毒的細(xì)胞：細(xì)胞若有潛在的致癌性病毒或慢病毒，以及有支原體污染均不能用作疫苗生產(chǎn)。對此因素應(yīng)嚴(yán)格檢查。此外若細(xì)胞本身發(fā)生轉(zhuǎn)化后，不宜于制備活疫苗，只能制備一些滅活疫苗或亞單位疫苗。培養(yǎng)液：培養(yǎng)細(xì)胞的營養(yǎng)液中多少含有一定量的血清蛋白，在疫苗使用中常會出現(xiàn)某種程度的過敏反應(yīng)，為此，應(yīng)盡量使細(xì)胞適應(yīng)于無血清蛋白的培養(yǎng)基中，以消除過敏源。甲醛滅活劑的使用：甲醛能使病毒滅活，但仍保持其抗原性，因此普遍用來制備滅活病毒疫苗，但要控制含量。影響疫苗質(zhì)量的因素獲得質(zhì)量優(yōu)良、安全的產(chǎn)品，關(guān)鍵環(huán)節(jié)如下

1.選擇優(yōu)良的菌種和毒種，并保持其穩(wěn)定性；

2.選用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)