土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）試劑盒說明書

第第頁土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）試劑盒說明書土壤N乙酰βD葡萄糖苷酶（SolidNacetylβDglucosidase,SNAG）試劑盒說明書微量法100管/48樣注意：正式測定前務必取23個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：SNAG是溶酶體中的一種酸性水解酶，由土壤微生物分泌。SNAG活性變化與機體某些病理狀態(tài)密切相關。測定原理：SNAG分解βN乙酰氨基葡萄糖苷生成對硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算NAG活性。自備用品：可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。試劑組成和配制：試劑一：甲苯5mL×1瓶，4℃保存；（自備）試劑二：粉劑×1瓶，20℃保存；臨用前加入10mL蒸餾水，充分溶解備用，用不完的試劑仍20℃保存；試劑三：液體20mL×1瓶，4℃保存；試劑四：液體15mL×1瓶，4℃保存；樣品處理：新鮮土樣自然風干或37度烘箱風干，過30~50目篩。測定步驟：1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至400nm，蒸餾水調(diào)零。2、加樣表試劑名稱測定管對照管風干土樣（g）0.020.02試劑一（μL）1010室溫振蕩混勻15min90℃振蕩混勻15min試劑二（μL）130蒸餾水130試劑三（μL）160160混勻，37℃振蕩反應1h后，90℃水浴5min（蓋緊，防止水分散失），流水冷卻。10000g25℃離心10min，取上清液（在EP管或96孔板中加入下列試劑）上清液（μL）7070試劑四（μL）130130充分混勻，室溫靜置2min后，400nm處測定吸光值A，計算ΔA=A測定管A對照管。每個測定管設一個對照管。SNAG活力計算：a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下標準條件下測定的回歸方程為y=0.00645x0.0054；x為標準品濃度（μmol/L），y為吸光值。單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol對硝基苯酚定義為一個酶活力單位。SNAG活力（μmol/d/g土樣）＝(ΔA+0.0054)÷0.00645×V反總÷W÷T=55.81×(ΔA+0.0054)T：反應時間，1h=1/24d；V反總：反應體系總體積：3×104L；W：樣本質(zhì)量，0.02g。b.用96孔板測定的計算公式如下標準條件下測定的回歸方程為y=0.0043x0.0054；x為標準品濃度（μmol/L），y為吸光值。單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol對硝基苯酚定義為一個酶活力單位。SNAG活力（μmol/d/g土樣）＝(ΔA+0.0054)÷0.0043×V反總÷W÷T=83.72×(