糖類脂肪蛋白質(zhì)的鑒定

關(guān)于糖類脂肪蛋白質(zhì)的鑒定（一）生物組織中可溶性還原糖的鑒定1.實(shí)驗(yàn)原理

當(dāng)質(zhì)量濃度為0.1g/mL的氫氧化鈉溶液與質(zhì)量濃度為0.05g/mL的硫酸銅溶液混合后，立即生成淡藍(lán)色的Cu(OH)2懸濁液。Cu(OH)2與葡萄糖、果糖、麥芽糖等可溶性還原糖共熱，能夠生成磚紅色的Cu2O沉淀。因此，利用該反應(yīng)，可證明樣液中含可溶性還原糖。R—CHO+2Cu(OH)2→R—COOH+Cu2O↓+2H2O第2頁(yè),共19頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.實(shí)驗(yàn)材料

做可溶性還原糖的鑒定實(shí)驗(yàn)，還原糖的含量、生物組織有無(wú)色素是影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果及其觀察的最重要因素。

因此要選用可溶性還原糖含量高、白色或近于白色的植物組織，其中以蘋果、梨最好，也可用白蘿卜替代。第3頁(yè),共19頁(yè)，2024年2月25日，星期天3.試劑配制

甲液（0.1g/mL的氫氧化鈉溶液）斐林試劑

乙液（0.05g/mL的硫酸銅溶液）甲液乙液等量混合，現(xiàn)用現(xiàn)配，切不可分開滴加，或者久置后才用。第4頁(yè),共19頁(yè)，2024年2月25日，星期天4.實(shí)驗(yàn)步驟（1）制備組織樣液（教師制備）（2）鑒定樣液先在試管中加入2mL組織樣液第5頁(yè),共19頁(yè)，2024年2月25日，星期天再加入2mL剛配制的斐林試劑水浴煮沸2分鐘注意觀察整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，溶液顏色的變化?。?！第6頁(yè),共19頁(yè)，2024年2月25日，星期天還原糖檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果第7頁(yè),共19頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）生物組織中脂肪的鑒定1.實(shí)驗(yàn)原理

蘇丹Ⅲ是可以對(duì)脂肪染色的試劑，因此，當(dāng)含有大量油滴的植物細(xì)胞用蘇丹Ⅲ染色后，在顯微鏡下可以看到細(xì)胞內(nèi)橘黃色的顆粒。第8頁(yè),共19頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.實(shí)驗(yàn)材料

做脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn)時(shí)，所用材料一要脂肪含量高，二要有一定大小才能做徒手切片，花生種子符合該實(shí)驗(yàn)的要求。將花生種子經(jīng)過(guò)3-4小時(shí)的浸泡使其變軟，有利于切成薄片；但浸泡時(shí)間也不宜過(guò)長(zhǎng)，否則切片時(shí)易碎裂，切不成薄片。3.試劑配制

蘇丹Ⅲ溶液：將0.1g蘇丹Ⅲ干粉溶于100mL體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精溶液中，待全部溶解后即成。第9頁(yè),共19頁(yè)，2024年2月25日，星期天4.實(shí)驗(yàn)步驟（1）切片制作①去掉花生種皮②用左手的三個(gè)手指夾住花生的一片子葉，使花生子葉高于手指之上（為什么？）。右手持刀片，將子葉削去一層，形成平面。③刀口向內(nèi)，與花生斷面平行，以均勻的動(dòng)作，自左前方向右后方快速拉刀，滑行切片（注意要整個(gè)臂部用力，而不要腕部用力。）如此連續(xù)動(dòng)作，切下一些薄片。第10頁(yè),共19頁(yè)，2024年2月25日，星期天（2）染色

用毛筆將最薄的幾片材料移至潔凈的載玻片的中央→滴蘇丹Ⅲ溶液2-3滴于花生子葉薄片上→2-1min后，吸去染液→滴50%的酒精洗去浮色→吸去多余酒精→再滴1-2滴蒸餾水→蓋上蓋玻片，制成臨時(shí)裝片。（3）鏡檢鑒定

在低倍鏡下觀察，找到花生子葉切片的最薄處（最好只有1-2層細(xì)胞），移至視野的中心→換用高倍鏡觀察，調(diào)焦至最清晰?？砂l(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)橘黃色的圓形小顆粒，這就是脂肪滴（油滴）。若發(fā)現(xiàn)觀察物外圍也有許多橘黃色小顆粒，則是脂肪跑了出來(lái)。第11頁(yè),共19頁(yè)，2024年2月25日，星期天脂肪檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果第12頁(yè),共19頁(yè)，2024年2月25日，星期天若用物理方法如何鑒定脂肪的存在?烘烤種子后,把子葉放在白紙上用手指擠壓,白紙上會(huì)出現(xiàn)透明的油跡,說(shuō)明子葉含有脂肪。

第13頁(yè),共19頁(yè)，2024年2月25日，星期天（三）生物組織中蛋白質(zhì)的鑒定1實(shí)驗(yàn)原理

在堿性溶液（NaOH）中，雙縮脲（H2NOC-NH-CONH2）能與Cu2+作用，形成紫色的絡(luò)合物，這個(gè)反應(yīng)叫做雙縮脲反應(yīng)。

由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，因此，蛋白質(zhì)都可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng)。第14頁(yè),共19頁(yè)，2024年2月25日，星期天3.試劑配制

A液（0.1g/mL的氫氧化鈉溶液）雙縮脲試劑

B液（0.01g/mL的硫酸銅溶液）2.實(shí)驗(yàn)材料

做蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)，一般選用蛋白質(zhì)含量較高的大豆(可用豆?jié){替代）或雞蛋清。第15頁(yè),共19頁(yè)，2024年2月25日，星期天4.實(shí)驗(yàn)步驟：（1）制備生物組織樣液（教師制備）（2）鑒定先加2mL組織樣液再加2mL雙縮脲試劑A液加3-4滴雙縮脲試劑B液第16頁(yè),共19頁(yè)，2024年2月25日，星期天蛋白質(zhì)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果第17頁(yè),共19頁(yè)，2024年2月25日，星期天注意：在鑒定蛋白質(zhì)時(shí)要分別滴加兩種試劑，并且硫酸銅只能加3—4滴，不能過(guò)量如過(guò)量，CuSO4在堿性溶液中生成大量藍(lán)色Cu（OH）2沉淀，遮蓋了紫色。鑒定蛋清組織中存在蛋白質(zhì)時(shí)，要充分稀釋。