化學(xué)成分研究方法省公開(kāi)課一等獎(jiǎng)全國(guó)示范課微課金獎(jiǎng)?wù)n件

2.2.2中藥有效成份分離與精制

本節(jié)介紹中藥化學(xué)成份普通分離方法，有萃取、沉淀、結(jié)晶、色譜等方法。重點(diǎn)掌握中草藥有效成份分離方法原理及規(guī)律。

物質(zhì)分離許多操作往往在溶液中進(jìn)行。實(shí)踐中能夠采取以下方法：

1第1頁(yè)（一）依據(jù)物質(zhì)溶解度差異進(jìn)行分離

1.結(jié)晶及重結(jié)晶法

利用不一樣溫度可引發(fā)物質(zhì)溶解度改變性質(zhì)來(lái)分離物質(zhì)。關(guān)于結(jié)晶和重結(jié)晶概念：結(jié)晶是指由非結(jié)晶狀態(tài)到形成結(jié)晶操作過(guò)程。重結(jié)晶指由純度低結(jié)晶處理成純度高結(jié)晶操作過(guò)程。二者從操作角度差異是起始物不一樣。2第2頁(yè)（一）依據(jù)物質(zhì)溶解度差異進(jìn)行分離

判斷結(jié)晶純度方法。（1）晶型均一，色澤均勻。（2）有一定熔點(diǎn)和較小熔距，熔距應(yīng)在2度以?xún)?nèi)。（3）TLC或PC分別用三種以上溶劑系統(tǒng)檢識(shí)，同單一圓整斑點(diǎn)。（4）HPLC或GC檢驗(yàn)展現(xiàn)單峰。

3第3頁(yè)（一）依據(jù)物質(zhì)溶解度差異進(jìn)行分離結(jié)晶和重結(jié)晶操作：

提取或分離物↓溶于選擇溶劑，加熱成飽和溶液，過(guò)濾溶液↓放置（冷藏）析晶，過(guò)濾粗結(jié)晶↓重復(fù)上述操作（重結(jié)晶）結(jié)晶4第4頁(yè)（一）依據(jù)物質(zhì)溶解度差異進(jìn)行分離

選擇結(jié)晶溶劑標(biāo)準(zhǔn)是：

對(duì)要結(jié)晶成份熱時(shí)溶解度大，冷時(shí)溶解度小，對(duì)雜質(zhì)冷熱都不溶或冷熱都易溶；

另外要求結(jié)晶溶劑不與待結(jié)晶物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；

沸點(diǎn)較低、易揮發(fā)；

無(wú)毒或毒性很小。

選擇溶劑依據(jù)“相同相溶”原理。5第5頁(yè)（一）依據(jù)物質(zhì)溶解度差異進(jìn)行分離

2.沉淀法（溶劑沉淀法）

在溶液中加入另一個(gè)溶劑以改變混合極性，使一部分物質(zhì)沉淀析出。從而實(shí)現(xiàn)分離。如：水提醇沉法（除去多糖或蛋白質(zhì)）；醇提水沉法（除去樹(shù)脂或葉綠素）；醇提乙醚沉淀或丙酮沉淀法（使皂苷沉淀析出）

6第6頁(yè)（一）依據(jù)物質(zhì)溶解度差異進(jìn)行分離水提醇沉法系指處方中藥材加水煎煮，既提取出有效成份，如：生物堿鹽、甙類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)、氨基酸、多糖類(lèi)等；同時(shí)也提出一些水溶性雜質(zhì)，如：淀粉、蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、鞣質(zhì)、色素、無(wú)機(jī)鹽等。若往水煎液中加入適量乙醇，能夠改變其溶解性能而將雜質(zhì)部分或全部除去。當(dāng)乙醇濃度到達(dá)60%～70%時(shí)，除鞣質(zhì)、樹(shù)脂等外，其它雜質(zhì)已基本上沉淀而除去。假如分2～3次加入乙醇，濃度又逐步提升，最終到達(dá)75%～80%，則除去雜質(zhì)效果更加好。

7第7頁(yè)（一）依據(jù)物質(zhì)溶解度差異進(jìn)行分離醇提水沉法系指將中藥原料用一定濃度乙醇用滲漉法、回流法提取，即可提取出生物堿及其鹽、甙類(lèi)、揮發(fā)油及有機(jī)酸類(lèi)等；即使多糖類(lèi)、蛋白質(zhì)、淀粉等無(wú)效成份不易溶出，但樹(shù)脂、油脂、色素等雜質(zhì)卻仍可提出。為此，醇提取液經(jīng)回收乙醇后，再加水處理，并冷藏一定時(shí)間，可使雜質(zhì)沉淀而除去。40%～50%乙醇可提取強(qiáng)心甙、鞣質(zhì)、蒽醌及其甙、苦味質(zhì)等；60%～70%乙醇可提取甙類(lèi)；更高濃度乙醇則可用于生物堿、揮發(fā)油、樹(shù)脂和葉綠素提取。

8第8頁(yè)（一）依據(jù)物質(zhì)溶解度差異進(jìn)行分離

3.pH法：對(duì)酸性、堿性或兩性有機(jī)化合物來(lái)說(shuō)，常可經(jīng)過(guò)加入酸、堿以調(diào)整溶液pH值，改變分子存在狀態(tài)（游離型或解離型），從而改變?nèi)芙舛榷鴮?shí)現(xiàn)分離。

酸提堿沉法（使生物堿類(lèi)成份沉淀）。堿提酸沉法（使黃酮、蒽醌等沉淀）；等電點(diǎn)法（使蛋白質(zhì)沉淀）

9第9頁(yè)（一）依據(jù)物質(zhì)溶解度差異進(jìn)行分離4.金屬鹽沉淀法：酸性或堿性化合物還可經(jīng)過(guò)加入某種沉淀試劑使之生成水不溶性鹽類(lèi)等沉淀析出。10第10頁(yè)（一）依據(jù)物質(zhì)溶解度差異進(jìn)行分離

鉛鹽沉淀法：利用中性醋酸鉛或堿式醋酸鉛在水或稀醇溶液中能與許多物質(zhì)生成難溶鉛鹽或絡(luò)鹽沉淀而分離方法。中性醋酸鉛可沉淀含有鄰二酚羥基和羧基成份；堿式醋酸鉛沉淀范圍較廣，可沉淀含酚羥基和羧基及中性皂苷等。如沉淀為雜質(zhì)，則可棄去；如沉淀為所要成份，則可將沉淀懸浮于水或稀醇中，通H2S氣體或加入稀H2SO4、Na2SO4等脫鉛，成份即可分離。

11第11頁(yè)（一）依據(jù)物質(zhì)溶解度差異進(jìn)行分離專(zhuān)屬試劑沉淀法:一些試劑能選擇性地沉淀某類(lèi)成份，稱(chēng)為專(zhuān)屬試劑沉淀法。如雷氏銨鹽能與水溶性生物堿類(lèi)生成沉淀，可用于分離水溶性生物堿與其它生物堿；膽甾醇能和甾體皂苷沉淀，可使其與三萜皂苷分離；明膠能沉淀鞣質(zhì)，可用于分離或除去鞣質(zhì)等。12第12頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離

常見(jiàn)方法有:簡(jiǎn)單液．液萃取法、

逆流分溶法

(CCD)、液滴逆流色譜法(DCCC)、高速逆流色譜(HSCCC).

13第13頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離1．液一液萃取與分配系數(shù)K值將兩種相互不能任意混溶溶劑(比如氯仿與水)置分液漏斗中充分振搖，放置后即可分成兩相。此時(shí)假如其中含有溶質(zhì)，則溶質(zhì)在兩相溶劑中分配比(K)在一定溫度及壓力下為一常數(shù)，能夠用下式表示：

14第14頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離K：表示分配系數(shù)；CU：表示溶質(zhì)在上相溶劑中濃度；CL：表示溶質(zhì)在下相溶劑中濃度?，F(xiàn)在假定有A、B兩種溶質(zhì)用氯仿及水進(jìn)行分配，如A、B重量均為1.0g，KA=10，KB=0.1，兩相溶劑體積比VCHCl3／VH20=1，則用分液漏斗作一次振搖分配平衡后，約90％溶質(zhì)A將分配在上相溶劑(水)中，約10％溶質(zhì)A則分配到下相溶劑(氯仿)中。同理，KB=0.1=1／10，在振搖平衡后，則溶質(zhì)B分配將與A相反。留在水中約為10％，約90％分配在氯仿中。這說(shuō)明，在上述條件下，A、B兩種溶質(zhì)在氯仿及水中僅作一次分配就可實(shí)現(xiàn)90％分離。15第15頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離2．分離難易與分離因子β現(xiàn)在，我們能夠用分離因子β值來(lái)表示分離難易。分離因子β可定義為A、B兩種溶質(zhì)在同一溶劑系統(tǒng)中分配系數(shù)比值。

即：

上例中，β=KA／KB=10／0.1=100。16第16頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離就普通情況而言，β≥100，僅作一次簡(jiǎn)單萃取就可實(shí)現(xiàn)基本分離；但100>β≥10，則需萃取10～12次；β≤2時(shí)，要想實(shí)現(xiàn)基本分離，須作100次以上萃取才能完成；β≌1時(shí)，則KA≌KB，意味著二者性質(zhì)極其相近，即使作任意次分配也無(wú)法實(shí)現(xiàn)分離。而實(shí)際分離工作中，我們總是希望選擇分離因子β值大溶劑系統(tǒng)，以求簡(jiǎn)化分離過(guò)程，提升分離效率。17第17頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離

3．分配比與pH對(duì)酸性、堿性及兩性有機(jī)化合物來(lái)說(shuō)，分配比還受溶劑系統(tǒng)pH影響。因?yàn)閜H改變能夠改變它們存在狀態(tài)(游離型或離解型)，從而影響在溶劑系統(tǒng)中分配比。以酸性物質(zhì)(HA)為例，其在水中離解平衡及離解常數(shù)K可用下式表示：18第18頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離兩邊取負(fù)對(duì)數(shù)則：19第19頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離Ka及pKa均可用來(lái)表示酸性物質(zhì)酸性強(qiáng)弱。酸性越強(qiáng)，Ka越大，pKa值越小。若使該酸性物質(zhì)完全離解，即使HA均轉(zhuǎn)變成A一則：

故：20第20頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離因?yàn)榉宇?lèi)化合物pKa值普通為9．2～10．8，羧酸類(lèi)化合物pKa值約為5，故pH3以下大部分酚酸性物質(zhì)將以非離解形式(HA)存在，易分配于有機(jī)溶劑中；而pH12以上時(shí)，則將以離解形式(A一)存在，易分配于水中。21第21頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離我們也能夠由文件上給出pKa值求出各堿性物質(zhì)呈游離型或離解型時(shí)pH條件。普通pH<3時(shí)，酸性物質(zhì)多呈非離解狀態(tài)(HA)、堿性物質(zhì)則呈離解狀態(tài)(BH+)存在；但pH>12，則酸性物質(zhì)呈離解狀態(tài)(A-)、堿性物質(zhì)則呈非離解狀態(tài)(B)存在。據(jù)此，可采取下列圖所表示在不一樣pH緩沖溶液與有機(jī)溶劑中進(jìn)行分配方法，使酸性、堿性、中性及兩性物質(zhì)得以分離。22第22頁(yè)

緩沖液：當(dāng)往一些溶液中加入一定量酸和堿時(shí)，有妨礙溶液pH改變作用，稱(chēng)為緩沖作用，這么溶液叫做緩沖溶液。弱酸及其鹽混合溶液（如HAc與NaAc），弱堿及其鹽混合溶液（如NH3·H2O與NH4Cl）等都是緩沖溶液。

緩沖溶液作用原理和pH值

由弱酸HA及其鹽NaA所組成緩沖溶液對(duì)酸緩沖作用，是因?yàn)槿芤褐写嬖谧銐蛄繅AA-緣故。當(dāng)向這種溶液中加入一定量強(qiáng)酸時(shí)，H離子基本上被A-離子消耗：

緩沖溶液pH值幾乎不變；當(dāng)加入一定量強(qiáng)堿時(shí)，溶液中存在弱酸HA消耗OH-離子而妨礙pH改變。

23第23頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離利用pH梯度萃取分離物質(zhì)模式圖24第24頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離

4．逆流分溶法(CCD)液一液萃取分離中經(jīng)常碰到情況是分離因子β值較小，故萃取及轉(zhuǎn)移操作常須進(jìn)行幾十次乃至幾百次。此時(shí)簡(jiǎn)單萃取已不能滿(mǎn)足需要，而要采取逆流分溶法(countercurrentdistribution，簡(jiǎn)稱(chēng)CCD)。25第25頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離CCD法分離過(guò)程示意圖26第26頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離Craig逆流分溶儀萃取單元

27第27頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離逆流分溶儀萃取單元工作過(guò)程

28第28頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離CCD法因?yàn)椴僮鳁l件溫和、試樣輕易回收，故尤其適于中等極性、不穩(wěn)定物質(zhì)分離。另外，溶質(zhì)濃度越低，分離效果越好。不過(guò)，試樣極性過(guò)大或過(guò)小，或分配系數(shù)受濃度或溫度影響過(guò)大時(shí)則不易采取此法分離。易于乳化萃取溶劑系統(tǒng)也不宜采取。29第29頁(yè)乳化概念：

乳化是液-液界面現(xiàn)象，兩種不相溶液體，如油與水，在容器中分成兩層，密度小油在上層，密度大水在下層。若加入適當(dāng)表面活性劑在強(qiáng)烈攪拌下，油被分散在水中，形成乳狀液，該過(guò)程叫乳化。（假如發(fā)生乳化，難以分離）（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離30第30頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離5．液一液萃取與紙色譜分離因子β是液．液萃取時(shí)判斷物質(zhì)分離難易主要參數(shù)。普通β>50時(shí)，簡(jiǎn)單萃取即可處理問(wèn)題，但β<50時(shí)，則宜采取逆流分溶法。問(wèn)題是對(duì)于未知成份組成混合物來(lái)說(shuō)，不知道混合物中各個(gè)組分在同一溶劑系統(tǒng)中分配比又怎樣求得β值呢?這里能夠借助紙色譜(PC)幫助。已知PC原理與液-液萃取法基本相同，Rf值與分配系數(shù)K之間有以下關(guān)系：31第31頁(yè)32第32頁(yè)r為紙層色譜定數(shù)。當(dāng)色譜濾紙濕重(W濕)為干重(W干)1．5倍時(shí)，r=2。設(shè)A、B兩種(或兩組)物質(zhì)Rf值分別為Rfa及Rfb，則

其中Rfa>Rfb據(jù)此，可用PC選擇設(shè)計(jì)液．液萃取分離物質(zhì)最正確方案33第33頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離6．液一液分配柱色譜逆流分溶法分離物質(zhì)在分液漏斗中或Craig逆流分溶儀中進(jìn)行時(shí)，前者手工操作，比較費(fèi)時(shí)；后者因儀器本身問(wèn)題，在振搖時(shí)輕易引發(fā)破損及漏液，又因溶劑消耗量大，振搖過(guò)程中又易于乳化，故現(xiàn)在已極少應(yīng)用，多改用其它裝置。如將兩相溶劑中一相涂覆在硅膠等多孔載體上，作為固定相，填充在色譜管中，然后加入與固定相不相混溶另一相溶劑(流動(dòng)相)沖洗色譜柱。這么，物質(zhì)一樣可在兩相溶劑中相對(duì)作逆流移動(dòng)，在移動(dòng)過(guò)程中不停進(jìn)行動(dòng)態(tài)分配而得以分離。這種方法稱(chēng)之為液．液分配柱色譜法。34第34頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離(1)正相色譜與反相色譜：液一液分配柱色譜用載體主要有硅膠、硅藻土及纖維素粉等。通常，分離水溶性或極性較大成份如生物堿、苷類(lèi)、糖類(lèi)、有機(jī)酸等化合物時(shí)，固定相多采取強(qiáng)極性溶劑，如水、緩沖溶液等，流動(dòng)相則用氯仿、乙酸乙酯、丁醇等弱極性有機(jī)溶劑，稱(chēng)之為正相色譜；但當(dāng)分離脂溶性化合物，如高級(jí)脂肪酸、油脂、游離甾體等時(shí)，則兩相能夠顛倒，固定相可用石蠟油，而流動(dòng)相則用水或甲醇等強(qiáng)極性溶劑，故稱(chēng)之為反相分配色譜(reversephasepartitionchromatography)。35第35頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離除色譜柱外，液一液分配色譜也可在色譜用硅膠薄層色譜上進(jìn)行。所以液．液分配柱色譜最正確分離條件能夠依據(jù)對(duì)應(yīng)薄層色譜結(jié)果(正相柱用正相板，反相柱用反相板)進(jìn)行選定。36第36頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離

慣用反相硅膠薄層色譜及柱色譜填料系將普通硅膠經(jīng)以下方式進(jìn)行化學(xué)修飾，鍵合上長(zhǎng)度不一樣烴基(R)形成親脂性表面而成。37第37頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離

依據(jù)烴基(-R)長(zhǎng)度為乙基(-C2H5)還是辛基(-C8H17)或十八烷基(-C18H37)，分別命名為RP(reversephase)-2、RP-8及RP-18。

三者親脂性強(qiáng)弱次序以下：RP-18>RP-8>RP-2。38第38頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離(2)加壓液相柱色譜：經(jīng)典液一液分配柱色譜中用載體(如硅膠)顆粒直徑較大(1OO～150μm)，流動(dòng)相僅靠重力作用自上而下緩緩流過(guò)色譜柱，流出液用人工分段搜集后再進(jìn)行分析，所以柱效較低，費(fèi)時(shí)較長(zhǎng)，最近已逐步被各種加壓液相色譜所代替。加壓液相色譜用載體多為顆粒直徑較小、機(jī)械強(qiáng)度及比表面積均大球形硅膠微粒，如Zipax類(lèi)薄殼型或表面多孔型硅球以及Zorbax類(lèi)全多孔硅膠微球，其上并鍵合不一樣極性有機(jī)化合物以適應(yīng)不一樣類(lèi)型分離工作需要，因而柱效大大提升。常見(jiàn)Zorbax系列HPLC填充柱型號(hào)見(jiàn)表1．1。39第39頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離表1-1HPLC用Zorbax系列填充柱

40第40頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離為了提升分離速度、縮短分離時(shí)間，則須施加壓力，且依所用壓力大小不一樣，能夠分為快速色譜(flashchromatography，約2.02×105Pa)、低壓液相色譜(LPLC，<5.05×105Pa)、中壓液相色譜(MPLC，5.05～20.2×105Pa)及高壓液相色譜(HPLC，>20.2×l05Pa)等。各種加壓液相色譜分離規(guī)模以下列圖所表示41第41頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離各種加壓液相柱色譜大致分離規(guī)模

42第42頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離另外，在色譜柱出口處經(jīng)常配以高靈敏度檢測(cè)器，以及自動(dòng)描記、分部搜集裝置，并用計(jì)算機(jī)進(jìn)行色譜條件設(shè)定及數(shù)據(jù)處理。故不論在分離效能及分離速度方面，加壓液相色譜均遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出了經(jīng)典液．液分配柱色譜方法，在天然藥品分離工作中得到了越來(lái)越廣泛應(yīng)用。下列圖為慣用高壓液相裝置模式圖。43第43頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離高壓液相色譜裝置模式圖A．溶劑貯槽B．高壓液送泵C．預(yù)防脈沖裝置D．色譜柱E．進(jìn)樣閥F．檢出裝置G．統(tǒng)計(jì)裝置H.計(jì)算機(jī)44第44頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離

最近，中低壓液相柱色譜裝置及E．Merck企業(yè)生產(chǎn)配套用Lobar柱因分離規(guī)模較大(可達(dá)克數(shù)量級(jí))、分離效果很好(有時(shí)不亞于HPLC所得結(jié)果)、分離速度較快(填充劑顆粒較大，約40～60μm)、分離條件又可由對(duì)應(yīng)TLC結(jié)果直接選取，加之價(jià)格比較廉價(jià)、操作簡(jiǎn)便，故很受用戶(hù)歡迎。慣用Lobar柱型號(hào)及規(guī)格可參見(jiàn)下表進(jìn)行選擇。45第45頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離慣用Lobar柱型號(hào)及可能分離規(guī)模

46第46頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離Lobar柱可選取耐壓送液泵(最大不超出6.06×105Pa)或與HPLC送液泵聯(lián)用。無(wú)條件時(shí)也可采取高位溶劑貯液槽造成位能差進(jìn)行。在分離大量試樣時(shí)，并可將幾根柱子串聯(lián)使用，以提升分離效果，而且用過(guò)柱子可重復(fù)再生屢次重復(fù)使用，值得推廣普及。47第47頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離

7．液滴逆流色譜(DCCC)及高速逆流色譜(HSC-CC)1970年，由Tanimura在液-液分配色譜基礎(chǔ)上創(chuàng)建液滴逆流色譜裝置(Dropletcountercurrentchromatography，簡(jiǎn)稱(chēng)DCCC)可使流動(dòng)相呈液滴形式垂直上升或下降，經(jīng)過(guò)固定相液柱，實(shí)現(xiàn)物質(zhì)逆流色譜分離(左圖)。48第48頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離

液滴逆流色譜DCCC裝置示意圖HSCCC分離物質(zhì)原理模擬圖49第49頁(yè)*溶劑分配法中溶劑系統(tǒng)選擇：兩相溶劑不相混溶，混合物中各單一成份在溶劑系統(tǒng)中分配系數(shù)差異越大越好。分離酸堿兩性化合物時(shí)，緩沖液是很好溶劑。*操作注意：（1）先將兩相溶劑相互充分飽和。（2）采取等體積兩相溶劑方式。（3）欲分離混合物濃度不宜過(guò)高。（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離50第50頁(yè)（二)依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離DCCC以及HSCCC均可克服上述液相色譜中因?yàn)椴扇」腆w載體所引發(fā)不可逆吸附消耗、試樣變性污染及色譜峰畸形拖尾等弊病，試樣還能夠定量回收，當(dāng)前已廣泛用于皂苷、生物堿、酸性化合物、蛋白質(zhì)、糖類(lèi)等天然化合物分離精制工作，并取得了良好效果。51第51頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離

在中藥有效成份分離及精制工作中，吸附現(xiàn)象利用得十分廣泛。其中又以固．液吸附用得最多，并有物理吸附、化學(xué)吸附及半化學(xué)吸附之分。

52第52頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離

物理吸附(physicaladsorption)也叫表面吸附，是因組成溶液分子(含溶質(zhì)及溶劑)與吸附劑表面分子分子間力相互作用所引發(fā)。特點(diǎn)是無(wú)選擇性、吸附與解吸過(guò)程可逆、可快速進(jìn)行，故在實(shí)際工作中用得最廣。如采取硅膠、氧化鋁及活性炭為吸附劑進(jìn)行吸附色譜即屬于這一類(lèi)型；53第53頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離

化學(xué)吸附(chemicaladsorption)，如黃酮等酚酸性物質(zhì)被堿性氧化鋁吸附，或生物堿被酸性硅膠吸附等，因?yàn)楹羞x擇性、吸附十分牢靠、有時(shí)甚至不可逆，故用得較少；

半化學(xué)吸附(semi-chemicaladsorption)，如聚酰胺對(duì)黃酮類(lèi)、醌類(lèi)等化合物之間氫鍵吸附，力量較弱，介于物理吸附與化學(xué)吸附之間，也有一定應(yīng)用。54第54頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離

1．物理吸附基本規(guī)律——相同者易于吸附固液吸附時(shí)，吸附劑、溶質(zhì)、溶劑三者統(tǒng)稱(chēng)為吸附過(guò)程中三要素。以靜態(tài)吸附來(lái)說(shuō)，當(dāng)在某中藥提取液中加入吸附劑時(shí)，在吸附劑表面即發(fā)生溶質(zhì)分子與溶劑分子、以及溶質(zhì)分子相互間對(duì)吸附劑表面爭(zhēng)奪。物理吸附過(guò)程普通無(wú)選擇性，但吸附強(qiáng)弱及先后次序都大致遵照“相同者易于吸附”經(jīng)驗(yàn)規(guī)律。55第55頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離

硅膠、氧化鋁因均為極性吸附劑，故有以下特點(diǎn)：(1)對(duì)極性物質(zhì)含有較強(qiáng)親和能力，極性強(qiáng)溶質(zhì)將被優(yōu)先吸附。(2)溶劑極性越弱，則吸附劑對(duì)溶質(zhì)將表現(xiàn)出較強(qiáng)吸附能力。溶劑極性增強(qiáng)，則吸附劑對(duì)溶質(zhì)吸附能力即隨之減弱。(3)溶質(zhì)即使被硅膠、氧化鋁吸附，但一旦加人極性較強(qiáng)溶劑時(shí)，又可被后者置換洗脫下來(lái)。56第56頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離活性炭因?yàn)槭欠菢O性吸附劑，故與硅膠、氧化鋁相反，對(duì)非極性物質(zhì)含有較強(qiáng)親和能力，在水中對(duì)溶質(zhì)表現(xiàn)出強(qiáng)吸附能力。溶劑極性降低，則活性炭對(duì)溶質(zhì)吸附能力也隨之降低。故從活性炭上洗脫被吸附物質(zhì)時(shí)，洗脫溶劑洗脫能力將隨溶劑極性降低而增強(qiáng)。57第57頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離

2．極性及其強(qiáng)弱判斷

極性強(qiáng)弱是支配物理吸附過(guò)程主要原因。極性是一個(gè)抽象概念，用以表示分子中電荷不對(duì)稱(chēng)(assymmetry)程度，并大致上與偶極矩(dipo1emoment)、極化度(polarizability)及介電常數(shù)(dielectrieconstant)等概念相對(duì)應(yīng)。58第58頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離(1)官能團(tuán)極性強(qiáng)弱按下表次序排列：官能團(tuán)極性

59第59頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離(2)化合物極性則由分子中所含官能團(tuán)種類(lèi)、數(shù)目及排列方式等綜合原因所決定。以氨基酸來(lái)說(shuō)，分子結(jié)構(gòu)中現(xiàn)有正電基團(tuán)，又有負(fù)電基團(tuán)，故極性很強(qiáng)。高級(jí)脂肪酸，如硬脂酸，雖也含有如羧基這么強(qiáng)極性基團(tuán)，但因分子主體乃由長(zhǎng)鏈烴基所組成，故極性依然很弱。又如葡萄糖，因分子中含有許多一OH基，故為極性化合物，但鼠李糖(6-去氧糖)及加拿大麻糖(2,6-二去氧糖)因分子中-CH2OH及-CHOH分別脫去氧變?yōu)?CH3及-CH2-，故極性即隨之降低。60第60頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離次苷D(COOH)>C(CH2OH)>A(CHO)>B(CH3)苷A>苷B>次苷D>次苷C>次苷A>次苷B>單乙酰次苷B61第61頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離

極性強(qiáng)弱次序決定著化合物在硅膠上吸附行為及柱色譜洗脫規(guī)律

酸性、堿性及兩性有機(jī)化合物極性強(qiáng)弱及吸附行為主要由其存在狀態(tài)(游離型或離解型)所決定，并受溶劑pH影響。以生物堿而言，游離型為非極性化合物，易為活性炭所吸附；但離解型則不然，為極性化合物，不易為活性炭所吸附。所以實(shí)踐中?？山?jīng)過(guò)改變?nèi)軇﹑H以改變酸性、堿性及兩性化合物存在狀態(tài)，進(jìn)而影響其吸附或色譜行為到達(dá)分離精制目標(biāo)。62第62頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離(3)大致上溶劑極性大小能夠依據(jù)介電常數(shù)(ε)大小來(lái)判斷。

慣用溶劑介電常數(shù)及其極性排列如表1-5所表示：63第63頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離64第64頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離3．簡(jiǎn)單吸附法進(jìn)行物質(zhì)濃縮與精制簡(jiǎn)單吸附，如在結(jié)晶及重結(jié)晶過(guò)程中加入活性炭進(jìn)行脫色、脫臭等操作，在物質(zhì)精制過(guò)程中應(yīng)用很廣。但要注意，有時(shí)擬除去色素不一定是親脂性，故活性炭脫色不一定總能收到良好效果。普通須依據(jù)預(yù)試結(jié)果先判斷色素類(lèi)型，再?zèng)Q定選取什么吸附劑處理為宜。另外，從大量稀水溶液中濃縮微量物質(zhì)時(shí)，有時(shí)也采取簡(jiǎn)單吸附方法。比如，報(bào)道有些人曾采取活性炭吸附法成功地從一葉蔌水浸液中提取一葉蔌堿。方法為將水浸液pH調(diào)至堿性(pH8.5)，分次加入活性炭，攪拌，靜置，直到上清液檢驗(yàn)無(wú)生物堿反應(yīng)時(shí)為止。濾集吸堿炭末，干燥后與苯回流，回收苯液即得一葉蔌堿。65第65頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離4．吸附柱色譜法用于物質(zhì)分離吸附色譜法中硅膠、氧化鋁柱色譜在實(shí)際工作中用得最多。相關(guān)注意事項(xiàng)以下：66第66頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離(1)硅膠、氧化鋁吸附柱色譜過(guò)程中，吸附劑用量普通為試樣量30～60倍。試樣極性較小、難以分離者，吸附劑用量可適當(dāng)提升至試樣量1OO～200倍。據(jù)此可選取適當(dāng)規(guī)格色譜管，試驗(yàn)室中慣用色譜管規(guī)格以下所表示，其高度與直徑比(h/d)約為(15：1)～(20：1)。譜管內(nèi)徑(cm)：O.51.01.52.03.04.O6.08.O10長(zhǎng)度(cm)：10153045607590120150吸附柱色譜用硅膠及氧化鋁當(dāng)前都有市售品，能夠過(guò)篩選取。通常以100目左右為宜，如采取加壓柱色譜，還能夠采取更細(xì)顆粒，甚至直接采取薄層色譜用規(guī)格，其分離效果能夠大大提升.67第67頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離(2)硅膠、氧化鋁吸附柱色譜，應(yīng)盡可能選取極性小溶劑裝柱和溶解試樣，以利試樣在吸附劑柱上形成狹窄原始譜帶。如試樣在所選裝柱溶劑中不易溶解，則可將試樣用少許極性稍大溶劑溶解后，再用少許吸附劑拌勻，并在60℃下加熱揮盡溶劑，置P205真空干燥器中減壓干燥，研粉后再小心鋪在吸附劑柱上。68第68頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離(3)洗脫用溶劑極性宜逐步增加，但跳躍不能太大。實(shí)踐中多用混合溶劑，并經(jīng)過(guò)巧妙調(diào)整百分比以改變極性，到達(dá)梯度洗脫分離物質(zhì)目標(biāo)。普通，混合溶劑中強(qiáng)極性溶劑影響比較突出，故不可隨意將極性差異很大兩種溶劑組合在一起使用。試驗(yàn)室中最常應(yīng)用混合溶劑組合如表1.6所表示。69第69頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離(4)為防止發(fā)生化學(xué)吸附，酸性物質(zhì)宜用硅膠、堿性物質(zhì)則宜用氧化鋁進(jìn)行分離。當(dāng)然，硅膠、氧化鋁用適當(dāng)方法處理成中性時(shí)，情況會(huì)有所緩解。通常在分離酸性(或堿性)物質(zhì)時(shí)，洗脫溶劑中分別加入適量醋酸(或氨、吡啶、二乙胺)，常可收到預(yù)防拖尾、促進(jìn)分離效果。70第70頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離(5)如液一液分配色譜中所述，吸附柱色譜也可用加壓方式進(jìn)行，溶劑系統(tǒng)可經(jīng)過(guò)TLC進(jìn)行篩選。但因TLC用吸附劑表面積普通為柱色譜用二倍左右，故普通TLC展開(kāi)時(shí)使組分比值到達(dá)O.2～O.3溶劑系統(tǒng)可選取為柱色譜分離該對(duì)應(yīng)組分最正確溶劑系統(tǒng)。71第71頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離5．聚酰胺吸附色譜法聚酰胺(poliamide)吸從屬于氫鍵吸附，是一個(gè)用途十分廣泛分離方法，極性物質(zhì)與非極性物質(zhì)均可適用，但尤其適合分離酚類(lèi)、醌類(lèi)、黃酮類(lèi)化合物72第72頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離(1)聚酰胺性質(zhì)及吸附原理：商品聚酰胺均為高分子聚合物質(zhì)，不溶于水、甲醇、乙醇、乙醚、氯仿及丙酮等慣用有機(jī)溶劑，對(duì)堿較穩(wěn)定，對(duì)酸尤其是無(wú)機(jī)酸穩(wěn)定性較差，可溶于濃鹽酸、冰醋酸及甲酸。聚酰胺吸附物質(zhì)原理可用圖1.19表示。73第73頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離聚酰胺吸附色譜原理

74第74頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離①形成氫鍵基團(tuán)數(shù)目越多，則吸附能力越強(qiáng)。75第75頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離②成鍵位置對(duì)吸附力也有影響。易形成份子內(nèi)氫鍵者，其在聚酰胺上吸附即對(duì)應(yīng)減弱。76第76頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離③分子中芳香化程度高者，則吸附性增強(qiáng)；反之，則減弱。77第77頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離以上是僅就化合物本身對(duì)聚酰親和力而言。但吸附因?yàn)槭窃谌芤褐羞M(jìn)行，故障劑也會(huì)參加吸附劑表面爭(zhēng)奪，或經(jīng)過(guò)改變聚酰胺對(duì)溶質(zhì)氫鍵結(jié)合能力而影響吸附過(guò)程。顯然，聚酰與酚類(lèi)或醌類(lèi)等化合物形成氫鍵締合能力在水中最強(qiáng)，在含醇中則伴隨醇濃度增高而對(duì)應(yīng)減弱，在高濃度醇或其它有機(jī)溶劑中則幾乎不締合。故在聚酰胺柱色譜分離時(shí)，通慣用水裝柱，試樣也盡可能做成水溶液上柱以利聚酰胺對(duì)溶質(zhì)充分吸附，隨即用不一樣濃度含水醇洗脫，并不停提升醇濃度，逐步增強(qiáng)從柱上洗脫物質(zhì)能力。甲酰胺、二甲基甲酰胺及尿素水溶液因分子中都有酰胺基，能夠同時(shí)與聚酰胺及酚類(lèi)等化合物形成氫鍵締合，故有很強(qiáng)洗脫能力。另外，水溶液中加入堿或酸均可破壞聚酰胺與溶質(zhì)之間氫鍵締合，也有很強(qiáng)洗脫能力，可用于聚酰胺精制及再生處理。慣用聚酰胺再生劑有1O％醋酸、3％氨水及5％氫氧化鈉水溶液等。78第78頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離

綜上分析，各種溶劑在聚酰胺柱上洗脫能力由弱至強(qiáng)，可大致排列成以下次序：水甲醇丙酮?dú)溲趸c水溶液甲酰胺二甲基甲酰胺尿素水溶液79第79頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離(2)聚酰胺色譜應(yīng)用：如上所述，聚酰胺對(duì)普通酚類(lèi)、黃酮類(lèi)化合物吸附是可逆(鞣質(zhì)例外)，分離效果好，加以吸附容量又大，故聚酰胺色譜尤其適合于該類(lèi)化合物制備分離。另外，對(duì)生物堿、萜類(lèi)、甾體、糖類(lèi)、氨基酸等其它極性與非極性化合物分離也有著廣泛用途。另外因?yàn)閷?duì)鞣質(zhì)吸附特強(qiáng)，近乎不可逆，故用于植物粗提取物脫鞣處理尤其適宜。聚酰胺色譜也有薄層色譜與柱色譜兩種方式。80第80頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離6．大孔吸附樹(shù)脂大孔吸附樹(shù)脂普通為白色球形顆粒，通常分為非極性和極性?xún)深?lèi)。因其理化性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于酸、堿及有機(jī)溶媒中，所以在天然化合物分離與富集工作中被廣泛應(yīng)用。對(duì)有機(jī)物選擇性好，不受無(wú)機(jī)鹽等離子和低分子化合物影響。81第81頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離(1)大孔吸附樹(shù)脂吸附原理：大孔吸附樹(shù)脂是吸附性和分子篩性原理相結(jié)合分離材料，它吸附性是因?yàn)榉兜氯A引力或產(chǎn)生氫鍵結(jié)果。分子篩性是因?yàn)槠浔旧矶嗫仔越Y(jié)構(gòu)性質(zhì)所決定。82第82頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離特征：①理化性質(zhì)穩(wěn)定，不容于酸、堿及有機(jī)溶劑。②對(duì)有機(jī)物選擇性很好。③吸附速度快。④再生處理方便。83第83頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離吸附原理：①吸附性：大孔吸附樹(shù)脂本身含有吸附性，是由范德華力或氫鍵吸附結(jié)果。②篩性原理：是由大孔吸附樹(shù)脂本身多孔性所決定。84第84頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離(2)影響吸附原因：比表面積、表面電性、能否與化合物形成氫鍵等是影響吸附主要原因。普通非極性化合物在水中易被非極性樹(shù)脂吸附，極性樹(shù)脂則易在水中吸附極性物質(zhì)。糖是極性水溶性化合物，與D型非極性樹(shù)脂吸附作用很弱。據(jù)此經(jīng)慣用大孔吸附樹(shù)脂將中藥化學(xué)成份和糖分離。溶劑性質(zhì)是另一個(gè)影響原因。物質(zhì)在溶劑中溶解度大，樹(shù)脂對(duì)此物質(zhì)吸附力就小，反之就大。比如用非極性大孔吸附樹(shù)脂對(duì)生物堿O．5％鹽酸溶液進(jìn)行吸附，其吸附作用很弱，極易被水洗脫下來(lái)，生物堿回收率很高?；衔镄再|(zhì)也是影響吸附主要原因?；衔锓肿恿俊O性、能否形成氫鍵等都影響其與大孔吸附樹(shù)脂吸附作用。分子量小、極性小化合物與非極性大孔吸附樹(shù)脂吸附作用強(qiáng)。另外，能與大孔吸附樹(shù)脂形成氫鍵化合物易被吸附。85第85頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離影響大孔吸附樹(shù)脂分離效果原因：①化合物分子極性大小：普通來(lái)說(shuō)，大孔樹(shù)脂色譜行為含有反相性質(zhì)。被分離物質(zhì)極性大先流出眾譜柱。②分子體積大小：在一定條件下，化合物體積越大，吸附力越強(qiáng)。86第86頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離(3)大孔吸附樹(shù)脂應(yīng)用：大孔吸附樹(shù)脂現(xiàn)在已被廣泛應(yīng)用于天然化合物分離和富集工作中，如苷與糖類(lèi)分離、生物堿精制。在多糖、黃酮、三萜類(lèi)化合物分離方面都有很好應(yīng)用實(shí)例。市售大孔樹(shù)脂普通含有未聚合單體、致孔劑(多為長(zhǎng)碳鏈脂肪醇類(lèi))、分散劑和防腐劑等，使用前必須經(jīng)過(guò)處理。大孔吸附樹(shù)脂預(yù)處理：以乙醇濕法裝柱，繼續(xù)用乙醇在柱上流動(dòng)清洗，不時(shí)檢驗(yàn)流出乙醇，當(dāng)流出乙醇液與水混合不展現(xiàn)白色乳濁現(xiàn)象即可，然后以大量蒸餾水洗去乙醇。87第87頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離(4)洗脫液選擇：洗脫液可使用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。依據(jù)吸附作用強(qiáng)弱選取不一樣洗脫液或不一樣濃度同一溶劑。對(duì)非極性大孔樹(shù)脂，洗脫液極性越小，洗脫能力越強(qiáng)。對(duì)于中等極性大孔樹(shù)脂和極性較大化合物來(lái)說(shuō)，則選取極性較大溶劑為宜。普通上樣后先用水（或酸、堿水）洗去雜質(zhì)，然后用不一樣濃度含水醇、甲醇、乙醇、丙酮等依次洗脫。88第88頁(yè)(三)依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離(5)應(yīng)用實(shí)例：甜葉菊苷提取分離89第89頁(yè)(四)依據(jù)物質(zhì)分子大小差異進(jìn)行分離

天然有機(jī)化合物分子大小各異，分子量從幾十到幾百萬(wàn)，故也可據(jù)此進(jìn)行分離。慣用有透析法、凝膠濾過(guò)法、超濾法、超速離心法等。前二者系利用半透膜膜孔或凝膠三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)分子篩濾過(guò)作用；超濾法則利用因分子大小不一樣引發(fā)擴(kuò)散速度差異；至于超速離心法則系利用溶質(zhì)在超速離心作用下含有不一樣沉降性或浮游性。以上這些方法主要用于水溶性大分子化合物，如蛋白質(zhì)、核酸、多糖類(lèi)脫鹽精制及分離工作，對(duì)分離小分子化合物來(lái)說(shuō)不太適用?？墒悄z濾過(guò)法不然，它可用于分離分子量1000以下化合物。90第90頁(yè)(四)依據(jù)物質(zhì)分子大小差異進(jìn)行分離1．凝膠濾過(guò)法分離物質(zhì)原理凝膠濾過(guò)法(Gelfiltration)也叫凝膠滲透色譜(Gelpermeationchromatography)、分子篩濾過(guò)(molecularsievefiltration)、排阻色譜(exclusionchroma—tography)，系利用分子篩分離物質(zhì)一個(gè)方法。其中所用載體，如葡聚糖凝膠，是在水中不溶、但可膨脹球形顆粒，含有三維空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。91第91頁(yè)(四)依據(jù)物質(zhì)分子大小差異進(jìn)行分離

1．凝膠濾過(guò)法分離物質(zhì)原理

當(dāng)在水中充分膨脹后裝入色譜柱中，加入試樣混合物，用同一溶劑洗脫時(shí)，因?yàn)槟z網(wǎng)孔半徑限制，大分子將不能滲透凝膠顆粒內(nèi)部(即被排阻在凝膠粒子外部)，故在顆粒間隙移動(dòng)，并隨溶劑一起從柱底先行流出；小分子因可自由滲透并擴(kuò)散到凝膠顆粒內(nèi)部，故經(jīng)過(guò)色譜柱時(shí)阻力增大、流速變緩，將較晚流出。試樣混合物中各個(gè)成份因分子大小各異，滲透至凝膠顆粒內(nèi)部程度也不盡相同，故在經(jīng)歷一段時(shí)間流動(dòng)并到達(dá)動(dòng)態(tài)平衡后，即按分子由大到小次序先后流出并得到分離(圖）92第92頁(yè)(四)依據(jù)物質(zhì)分子大小差異進(jìn)行分離1．凝膠濾過(guò)法分離物質(zhì)原理凝膠色譜簡(jiǎn)單原理圖1．待分離混合物在色譜床表面2．試樣進(jìn)入色譜床，小分子進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，大分子隨溶液流動(dòng)3．大分子物質(zhì)行程短，流出眾譜床，小分子物質(zhì)仍在遲緩移動(dòng)93第93頁(yè)(四)依據(jù)物質(zhì)分子大小差異進(jìn)行分離以上情況可用下式作深入說(shuō)明。假定從柱上加入試樣算起，至某個(gè)組分集中流出時(shí)所需溶劑體積為Ve(稱(chēng)為洗脫體積)，則Ve與組分分子量之間有以下關(guān)系。Ve=Kl-K2lgM因K1、K2均為常數(shù)，故洗脫體積(Ve)取決于分子量(M)大小。M越大，則Ve越?。籑越小，則Ve越大。由此深入說(shuō)明了凝膠濾過(guò)洗脫規(guī)律。普通，分離條件一定時(shí)，Ve重現(xiàn)性很好，可用來(lái)表示物質(zhì)洗脫性質(zhì)。94第94頁(yè)(四)依據(jù)物質(zhì)分子大小差異進(jìn)行分離2．凝膠種類(lèi)與性質(zhì)商品凝膠種類(lèi)很多，慣用有葡聚糖凝膠(sephadexG)以及羥丙基葡聚糖凝膠(sephadexLH-20)。95第95頁(yè)(四)依據(jù)物質(zhì)分子大小差異進(jìn)行分離(1)葡聚糖凝膠：系由平均分子量一定葡聚糖及交聯(lián)劑(如環(huán)氧氯丙烷)交聯(lián)聚合而成。其部分結(jié)構(gòu)以下列圖所表示。生成凝膠顆粒網(wǎng)孔大小取決于所用交聯(lián)劑數(shù)量及反應(yīng)條件。加入交聯(lián)劑數(shù)量越多即交聯(lián)度越高，網(wǎng)孔越緊密，孔徑越小，吸水膨脹也越小；交聯(lián)度越低，則網(wǎng)孔越稀疏，吸水后膨脹也越大。商品型號(hào)即按交聯(lián)度大小分類(lèi)，并以吸水量多少表示。以sephadexG-25為例，G為凝膠(Gel)，后附數(shù)字=吸水量×1O，故G-25示該葡聚糖凝膠吸水量為2.5ml/g。96第96頁(yè)(四)依據(jù)物質(zhì)分子大小差異進(jìn)行分離交聯(lián)葡聚糖化學(xué)結(jié)構(gòu)

SephadexG型只適于在水中應(yīng)用，且不一樣規(guī)格適合分離不一樣分子量物質(zhì)97第97頁(yè)(四)依據(jù)物質(zhì)分子大小差異進(jìn)行分離交聯(lián)葡聚糖凝膠性質(zhì)

98第98頁(yè)(四)依據(jù)物質(zhì)分子大小差異進(jìn)行分離(2)羥丙基葡聚糖凝膠(sephadexLH-20)：為sephadexG-25經(jīng)羥丙基化處理后得到產(chǎn)物。此時(shí)，葡聚糖凝膠分子中葡萄糖部分將與羥丙基結(jié)合成以下醚鍵形式：99第99頁(yè)(四)依據(jù)物質(zhì)分子大小差異進(jìn)行分離與sephadexG比較，sephadexLH-20分子中-OH基總數(shù)雖無(wú)改變，但碳原子所占百分比卻相對(duì)增加了。所以與sephadexG不一樣，不但可在水中應(yīng)用，也可在極性有機(jī)溶劑或它們與水組成混合溶劑中膨潤(rùn)使用。下表為sephadexLH-20在不一樣溶劑中濕潤(rùn)膨脹后得到柱床體積及保留溶劑數(shù)量。100第100頁(yè)(四)依據(jù)物質(zhì)分子大小差異進(jìn)行分離sephadexLH-20對(duì)各種溶劑保留量101第101頁(yè)(四)依據(jù)物質(zhì)分子大小差異進(jìn)行分離sephadexLH-20除保留有sephadexG-25原有分子篩特征，可按分子量大小分離物質(zhì)外，在由極性與非極性溶劑組成混合溶劑中經(jīng)常起到反相分配色譜效果，適合用于不一樣類(lèi)型有機(jī)物分離，在天然藥品分離中得到了越來(lái)越廣泛應(yīng)用。其中，d1-去甲烏藥堿(d1-demethylco-claurine)分離實(shí)例能夠代表sephadexLH-20用于物質(zhì)分離普通操作過(guò)程。SephadexLH-20價(jià)格比較昂貴。用過(guò)sephadexLH-20能夠重復(fù)再生使用，而且柱子洗脫過(guò)程往往就是柱子再生過(guò)程。暫時(shí)不用時(shí)能夠水洗。含水醇洗(醇濃度逐步遞增)_醇洗，最終泡在醇中貯于磨口瓶中備用。如長(zhǎng)久不用時(shí)，可在以上處理基礎(chǔ)上，減壓抽干，再用少許乙醚洗凈抽干，室溫充分揮散至無(wú)醚味后，60～80℃干燥后保留。102第102頁(yè)(四)依據(jù)物質(zhì)分子大小差異進(jìn)行分離另外，商品凝膠還有丙烯酰胺凝膠(Bio-GelP)、瓊脂糖凝膠(sepharoseBio-GelA)以及結(jié)合了不一樣離子交換基團(tuán)葡聚糖凝膠衍生物，如羧甲基交聯(lián)葡聚糖凝膠(CM-sephadex)。二乙氨乙基交聯(lián)葡聚糖凝膠(DEAE—sephadex)、磺丙基交聯(lián)葡聚糖凝膠(SP-sephadex)及苯胺乙基交聯(lián)葡聚糖凝膠(QAE—sephadex)等，分別含有不一樣特色及應(yīng)用范圍，相關(guān)專(zhuān)著中都有記載，能夠參閱利用。103第103頁(yè)(五)依據(jù)物質(zhì)離解程度不一樣進(jìn)行分離天然有機(jī)化合物中，含有酸性、堿性及兩性基團(tuán)分子，在水中多呈離解狀態(tài)，據(jù)此可用離子交換法或電泳技術(shù)進(jìn)行分離。以下僅簡(jiǎn)單介紹離子交換法。104第104頁(yè)(五)依據(jù)物質(zhì)離解程度不一樣進(jìn)行分離1．離子交換法分離物質(zhì)原理：離子交換法系以離子交換樹(shù)脂作為固定相，用水或含水溶劑裝柱。當(dāng)流動(dòng)相流過(guò)交換柱時(shí)，溶液中中性分子及不與離子交換樹(shù)脂交換基團(tuán)發(fā)生交換化合物將經(jīng)過(guò)柱子從柱底流出，而含有可交換離子則與樹(shù)脂上交換基團(tuán)進(jìn)行離子交換并被吸附到柱上，隨即改變條件，并用適當(dāng)溶劑從柱上洗脫下來(lái)，即可實(shí)現(xiàn)物質(zhì)分離。105第105頁(yè)(五)依據(jù)物質(zhì)離解程度不一樣進(jìn)行分離2．離子交換樹(shù)脂結(jié)構(gòu)及性質(zhì)離子交換樹(shù)脂外觀(guān)均為球形顆粒，不溶于水，但可在水中膨脹。其基本結(jié)構(gòu)以強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂為例，如圖示：106第106頁(yè)(五)依據(jù)物質(zhì)離解程度不一樣進(jìn)行分離(1)母核部分，為由苯乙烯經(jīng)過(guò)二乙烯苯(DVB)交聯(lián)而成大分子網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，網(wǎng)孔大小用交聯(lián)度(即加入交聯(lián)劑百分比)表示。交聯(lián)度越大，則網(wǎng)孔越小，質(zhì)地越緊密，在水中越不易膨脹；交聯(lián)度越小，則網(wǎng)孔越大，質(zhì)地疏松，在水中易于膨脹，常見(jiàn)交聯(lián)度等級(jí)如表1-9所表示。不一樣交聯(lián)度適于分離不一樣大小分子。107第107頁(yè)(五)依據(jù)物質(zhì)離解程度不一樣進(jìn)行分離108第108頁(yè)(五)依據(jù)物質(zhì)離解程度不一樣進(jìn)行分離(2)離子交換基團(tuán)：上列結(jié)構(gòu)式中為磺酸基(一S03H)。另外，并可能有一N+(CH3)3Cl-，-C00H及-NH2、NH、-N等基團(tuán)，依據(jù)交換基不一樣，離子交換樹(shù)脂分為：陽(yáng)離子交換樹(shù)脂強(qiáng)酸性(一SO3H+)弱酸性(一C00-H+)陰離子交換樹(shù)脂強(qiáng)堿性(-N+(CH3)3Cl-)弱堿性(一NH2，NH，—N)109第109頁(yè)(五)依據(jù)物質(zhì)離解程度不一樣進(jìn)行分離離子交換樹(shù)脂交換能力取決于離子交換基團(tuán)數(shù)量。以強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂1×7(上海樹(shù)脂廠(chǎng)#732型)為例，它對(duì)分子量89．09丙氨酸來(lái)說(shuō)，1g上述陽(yáng)離子交換樹(shù)脂理論上能交換89.09×4.5mg丙氨酸。110第110頁(yè)(五)依據(jù)物質(zhì)離解程度不一樣進(jìn)行分離3．離子交換法應(yīng)用(1)用于不一樣電荷離子分離：天然藥品水提取物中酸性、堿性及兩性化合物可按以下圖式進(jìn)行有效分離，這在分離、追蹤有效部位時(shí)很有用處。111第111頁(yè)(五)依據(jù)物質(zhì)離解程度不一樣進(jìn)行分離

離子交換樹(shù)脂法分離物質(zhì)模型

112第112頁(yè)(五)依據(jù)物質(zhì)離解程度不一樣進(jìn)行分離即使均為生物堿，但堿性強(qiáng)弱不一樣(Ⅲ>Ⅱ>I)，仍可用離子交換樹(shù)脂分離。比如將三者混合物水溶液經(jīng)過(guò)NHf型弱酸性樹(shù)脂，隨即先用水洗下(I)，繼續(xù)用NH4Cl洗下(Ⅱ)，最終用Na2C03洗下(Ⅲ)。(2)用于相同電荷離子分離：以以下三種化合物為例，113第113頁(yè)(五)依據(jù)物質(zhì)離解程度不一樣進(jìn)行分離不過(guò)，對(duì)于電荷相同且離解程度非常近似混合物來(lái)說(shuō)，上述普通離子交換方法則難以取得良好分離效果，而必須采取離子交換色譜法。離子交換色譜原理與上相同，但工作要細(xì)致得多，關(guān)鍵在于選好固定相(樹(shù)脂)及流動(dòng)相(洗脫用緩沖液)。所用樹(shù)脂依據(jù)待分離物質(zhì)穩(wěn)定性、離解基類(lèi)型及強(qiáng)度(pKa)進(jìn)行選擇，并須進(jìn)行干燥、粉碎，選擇其中200～400目標(biāo)微粒供用。而流動(dòng)相除了傳統(tǒng)應(yīng)用磷酸鹽緩沖液外，最近還采取由揮發(fā)性有機(jī)酸(甲酸、醋酸)、堿(如吡啶、2-甲基吡啶、三甲基吡啶、N-乙基嗎啉)做成緩沖液，以利在以后采取減壓濃縮或冷凍干燥法除去。常見(jiàn)離子交換樹(shù)脂型號(hào)、性能及基本操作可參看相關(guān)專(zhuān)著。114第114頁(yè)（六）依據(jù)物質(zhì)沸點(diǎn)進(jìn)行分離

分餾法是利用中藥中各成份沸點(diǎn)判別進(jìn)行提取分離方法，主要適合用于液體混合物分離，如揮發(fā)油和一些液體生物堿提取分離。

115第115頁(yè)（六）依據(jù)物質(zhì)沸點(diǎn)進(jìn)行分離混合物沸點(diǎn)相差在100℃以上，能夠?qū)⑷軇┲貜?fù)蒸餾屢次，即可到達(dá)分離目標(biāo)，假如沸點(diǎn)相差在25℃以下，則需要采取分餾柱，沸點(diǎn)相差越小，需要分流裝置越精細(xì)。116第116頁(yè)吸附色譜凝膠過(guò)濾色譜離子交換色譜大孔樹(shù)脂色譜分配色譜色譜分離法色譜分離法小結(jié)117第117頁(yè)

原理：利用被分離成份在固定項(xiàng)和流動(dòng)項(xiàng)之間分配系數(shù)不一樣而到達(dá)分離。

分配色譜液．液萃取法與PC、逆流分溶法(CCD)、液滴逆流色譜法(DCCC)、高速逆流色譜(HSCCC)、118第118頁(yè)

分類(lèi)正相色譜：固定相極性>流動(dòng)相極性，用于分離極性和中等極性成份。反相色譜：固定相極性<流動(dòng)相極性，用于分離非極性和中等極性成份分配色譜分配色譜119第119頁(yè)3、洗脫規(guī)律：正相色譜中，極性小化合物先被洗脫（固定向極性大），極性大化合物后被洗脫；反相色譜恰好相反。4、慣用固定相和流動(dòng)相固定相：正相色譜中慣用氰基或氨基鍵合相；反相色譜中慣用C18或C8鍵合相。流動(dòng)相：正相色譜中主要用有機(jī)溶劑；反相色譜中慣用甲醇-水或乙腈-水系統(tǒng)。分配色譜分配色譜120第120頁(yè)吸附色譜硅膠氧化鋁：極性吸附活性炭：非極性吸附聚酰胺：氫鍵吸附大孔樹(shù)脂色譜(酰胺羰基與酚類(lèi)、黃酮類(lèi)化合物酚羥基，或酰胺鍵上游離胺基與醌類(lèi)、脂肪羧酸上羰基)利用吸附劑對(duì)被分離化合物分子吸附能力差異，實(shí)現(xiàn)分離一類(lèi)色譜121第121頁(yè)*氧化鋁由氫氧化鋁直接在高溫下脫水制得，帶微堿性，適于分離堿性成份。

*聚酰胺適于分離黃酮、酚、醌類(lèi)、有機(jī)酸及鞣質(zhì)，可使性質(zhì)極相近化合物得到分離。

原理：聚酰胺中酰胺基可與酚羥基、羧基、羰基、硝基等形成氫鍵吸附。聚酰胺吸附容量大。吸附色譜122第122頁(yè)被分離成份結(jié)構(gòu)與吸附力關(guān)系：1）可形成氫鍵基團(tuán)數(shù)目越多，則吸附能力越強(qiáng)，越難被洗脫。2）形成份子內(nèi)氫鍵物質(zhì)吸附能力會(huì)減弱。3）分子中芳香化程度越高，吸附能力越強(qiáng)。4）對(duì)聚酰胺柱洗脫能力，與溶劑種類(lèi)相關(guān)：甲酰胺，丙酮，甲、乙醇，水依次減弱。吸附色譜123第123頁(yè)（2）溶劑對(duì)于極性吸附劑，溶劑極性越大，洗脫能力越強(qiáng)。對(duì)于非極性吸附劑，則相反。（3）被分離物質(zhì)對(duì)于極性吸附劑，被分離物質(zhì)極性越強(qiáng)，吸附力越大，越難洗脫。吸附色譜124第124頁(yè)大孔吸附樹(shù)脂法1、性能及分離原理（1）性能：大孔樹(shù)脂是一個(gè)不含交換基團(tuán)，含有大孔結(jié)構(gòu)高分子吸附劑。普通為白色顆粒，20~60目。理化性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于酸、堿及有機(jī)溶劑。水溶液中吸附力較強(qiáng)，且有很好選擇性。（2）原理現(xiàn)有吸附性，又有分子篩篩選性。吸附性是范德華引力或氫鍵吸附結(jié)果；篩選性則由其多孔性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)引發(fā)。吸附色譜125第125頁(yè)凝膠過(guò)濾色譜（凝膠滲透色譜、分子篩濾過(guò)、排阻色譜）原理：分子篩作用葡聚糖凝膠（sephadexG）

羥丙基葡聚糖凝膠(sephadexLH-20)126第126頁(yè)1、基本原理基于混合物中各成份解離度不一樣而分離。2、離子交換劑種類(lèi)離子交換樹(shù)脂、離子交換纖維素、離子交換凝膠。

3、應(yīng)用主要用于生物堿、有機(jī)酸及氨基酸、蛋白質(zhì)、多糖等水溶性成份分離純化。4、操作關(guān)鍵點(diǎn)裝柱前要用水充分溶脹，并用酸、堿預(yù)處理。離子交換色譜127第127頁(yè)分離法（小結(jié)）（一）依據(jù)物質(zhì)溶解度差異進(jìn)行分離（二）依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離（三）依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離（四）依據(jù)物質(zhì)分子大小差異進(jìn)行分離（五）依據(jù)物質(zhì)解離程度不一樣進(jìn)行分離（六）依據(jù)物質(zhì)沸點(diǎn)進(jìn)行分離

128第128頁(yè)2.3中藥化學(xué)成份結(jié)構(gòu)測(cè)定普通程序和方法中藥材→提取→分離→有效成份→判定→化學(xué)結(jié)構(gòu)→生物活性129第129頁(yè)2.3中藥化學(xué)成份結(jié)構(gòu)測(cè)定普通程序和方法一、化合物純度測(cè)定

如檢驗(yàn)有沒(méi)有均勻一致晶形，有沒(méi)有明確、敏銳熔點(diǎn)。如在TLC或PC上選擇適當(dāng)展開(kāi)劑。普通，只有當(dāng)樣品在三種展開(kāi)系統(tǒng)中展現(xiàn)單一斑點(diǎn)時(shí)方可確認(rèn)其為單一化合物。GC和HPLC也是判斷物質(zhì)純度一個(gè)主要方法。

物理常數(shù)：熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、比旋度、折光率等；

130第130頁(yè)2.3中藥化學(xué)成份結(jié)構(gòu)測(cè)定普通程序和方法化學(xué)成份純度判斷三種以上展開(kāi)系統(tǒng)展開(kāi)，TLC上均為單一斑點(diǎn)。具一定晶型和均勻色澤。具固定熔點(diǎn)，熔距在1～2℃以?xún)?nèi)。具固定比旋度。HPLC檢測(cè)為一個(gè)單峰。實(shí)際工作中我們要結(jié)合上述各種方法，綜合考慮。131第131頁(yè)2.3中藥化學(xué)成份結(jié)構(gòu)測(cè)定普通程序和方法二、結(jié)構(gòu)研究主要程序

初步推斷化合物類(lèi)型——測(cè)定分子式，計(jì)算不飽和度——確定分子中含有官能團(tuán)，或結(jié)構(gòu)片斷，或基本骨架——推斷并確定分子平面結(jié)構(gòu)——推斷并確定分子立體結(jié)構(gòu)（構(gòu)型、構(gòu)象）。

132第132頁(yè)2.3中藥化學(xué)成份結(jié)構(gòu)測(cè)定普通程序和方法程序：1.初步推斷化合物類(lèi)型方法：1.注意觀(guān)察試樣在提取、分離過(guò)程中行為。2.測(cè)定相關(guān)理化常數(shù)，如不一樣pH、不一樣溶劑中溶解度及色譜行為、灼燒試驗(yàn)、化學(xué)定性反應(yīng)等。133第133頁(yè)2.3中藥化學(xué)成份結(jié)構(gòu)測(cè)定普通程序和方法程序：2.測(cè)定分子式，計(jì)算不飽和度方法：

3.結(jié)合文件調(diào)研。分子式測(cè)定方法：（1）元素定量分析配合分子量測(cè)定。（2）同位豐度比法；（3）HR-MS.計(jì)算不飽和度134第134頁(yè)2.3中藥化學(xué)成份結(jié)構(gòu)測(cè)定普通程序和方法程序：3.確定分子中含有官能團(tuán)，或結(jié)構(gòu)片斷，或基本構(gòu)架方法：

（1）官能團(tuán)定向及定量分析（2）測(cè)定并解析化合物相關(guān)譜學(xué)數(shù)據(jù)；如UV、IR、MS、1H-NMR及3C-NMR。

結(jié)合文件調(diào)研135第135頁(yè)2.3中藥化學(xué)成份結(jié)構(gòu)測(cè)定普通程序和方法程序：4.推斷并確定分子平面結(jié)構(gòu)方法：（1）綜合分析譜學(xué)數(shù)據(jù)及官能團(tuán)定性、定量分析結(jié)果。（2）與已知化合物進(jìn)行比較或化學(xué)溝通（化學(xué)降解、衍生物制備或人工合成）。136第136頁(yè)2.3中藥化學(xué)成份結(jié)構(gòu)測(cè)定普通程序和方法

三、結(jié)構(gòu)研究中采取主要方法

（一）確定分子式并計(jì)算不飽和度

分子式測(cè)定可用元素定量分析配合分子量測(cè)定、同位素峰度比法和高分辯質(zhì)譜（HR－MS）法

137第137頁(yè)2.3中藥化學(xué)成份結(jié)構(gòu)測(cè)定普通程序和方法（二）質(zhì)譜（MS）測(cè)定有機(jī)分子分子量。正確判斷離子峰，提供分子量。分析碎片離子，推斷結(jié)構(gòu)信息。慣用有：電子轟擊質(zhì)譜（提供分子離子峰和碎片離子峰）；場(chǎng)解析質(zhì)譜（可得到顯著分子離子峰）等。138第138頁(yè)（三）紅外光譜（IR)特征官能團(tuán)化合物用量只需5~10微克，測(cè)定范圍500~4000cm-1,有兩個(gè)區(qū)，一個(gè)是指紋區(qū)在1000cm-1以下，每個(gè)化合物有自己特征指紋圖譜；另一個(gè)是特殊功效區(qū)，在1000~4000cm-1，能夠確定羰基、苯環(huán)、羥基等功效基。2.3中藥化學(xué)成份結(jié)構(gòu)測(cè)定普通程序和方法139第139頁(yè)（四）紫外光譜（UV）共軛體系只有在分子結(jié)構(gòu)中含有共軛體系，即在分子中含有產(chǎn)生π-π、n-π躍遷和一些n-σ躍遷化合物才能在紫外光區(qū)產(chǎn)生紫外吸收光譜。可依據(jù)紫外吸收光譜位置及吸收峰數(shù)目，可初步推測(cè)化合物不飽和部分結(jié)構(gòu)。2.3中藥化學(xué)成份結(jié)構(gòu)測(cè)定普通程序和方法140第140頁(yè)3、核磁共振譜(NMR)(1)1H-NMR（氫核磁共振）

:提供不一樣種類(lèi)氫原子情況。給出氫數(shù)目、種類(lèi)、相鄰基團(tuán)結(jié)構(gòu)?？商峁┙Y(jié)構(gòu)信息參數(shù)，主要為化學(xué)位移(δ),偶合常數(shù)(J)及質(zhì)子數(shù)?；瘜W(xué)位移(δ)：因氫核周?chē)瘜W(xué)環(huán)境不一樣，其外圍電子云密度及繞核旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生磁屏蔽效應(yīng)不一樣，則不一樣氫出現(xiàn)在不一樣區(qū)域。2.3中藥化學(xué)成份結(jié)構(gòu)測(cè)定普通程序和方法141第141頁(yè)偶和常數(shù)(J)：磁不等同兩個(gè)或兩組氫核，在一定距離內(nèi)因相互自旋偶合產(chǎn)生裂分，裂分峰間距離為J。（2）13C-NMR:提供碳原子情況?？商峁┙Y(jié)構(gòu)信息參數(shù)，主要為化學(xué)位移、異核偶合常數(shù)(JCH)及弛豫時(shí)間。測(cè)定技術(shù)也有各種去偶方法，最慣用是質(zhì)子寬帶去偶，13C信號(hào)在圖譜上為單峰。2.3中藥化學(xué)成份結(jié)構(gòu)測(cè)定普通程序和方法142第142頁(yè)

13CNMR在結(jié)構(gòu)研究中，可提供結(jié)構(gòu)研究信息是：

A.確切分子式

B.分子量

C.C周?chē)瘜W(xué)環(huán)境

D.推測(cè)一些官能團(tuán)存在

E.全部分子結(jié)構(gòu)

答案：CD

1HNMR能提供化學(xué)信息是：

A.質(zhì)子化學(xué)位移

B.C核化學(xué)位移

C.質(zhì)子積分面積

D.質(zhì)子間偶合常數(shù)

E.質(zhì)子與C偶合常數(shù)

答案：ACD2.3中藥化學(xué)成份結(jié)構(gòu)測(cè)定普通程序和方法143第143頁(yè)

提取分離方法一、天然藥品有效成份提取（一）慣用溶劑特點(diǎn)：環(huán)己烷，石油醚，苯，乙醚，氯仿，乙酸乙酯，正丁醇，丙酮，乙醇，甲醇

極性：小————大

親脂性：大————小親水性：小————大第二章總結(jié)144第144頁(yè)比水重有機(jī)溶劑：氯仿與水分層有機(jī)溶劑：環(huán)己烷~正丁醇能與水分層極性最大有機(jī)溶劑：正丁醇與水能夠以任意百分比混溶有機(jī)溶劑：丙酮~甲醇極性最大有機(jī)溶劑：甲醇極性最小有機(jī)溶劑：環(huán)己烷介電常數(shù)最小有機(jī)溶劑：石油醚慣用來(lái)從水中萃取苷類(lèi)、水溶性生物堿類(lèi)成份有機(jī)溶劑：正丁醇溶解范圍最廣有機(jī)溶劑：乙醇第二章總結(jié)145第145頁(yè)（二）各種提取方法：常見(jiàn)提取方法有：溶劑提取法、水蒸氣蒸餾法、升華法。其中，溶劑提取法應(yīng)用最廣。第二章總結(jié)146第146頁(yè)溶劑提取法（1）溶劑提取法原理：依據(jù)相同者相溶原理，選擇與化合物極性相當(dāng)溶劑將化合物從植物組織中溶解出來(lái)，同時(shí)，因?yàn)橐恍┗衔镌鋈芑蛑茏饔?，其極性與溶劑極性相差較大化合物也可溶解出來(lái)。（2）各種溶劑提取法溶劑提取法普通包含浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法、連續(xù)回流提取法等，其使用范圍及特點(diǎn)見(jiàn)下表。第二章總結(jié)147第147頁(yè)提取方法溶劑操作提取效率使用范圍備注浸漬法水或有機(jī)溶劑不加熱效率低各類(lèi)成份，尤遇熱不穩(wěn)定成份出膏率低，易發(fā)霉，需加防腐劑滲漉法有機(jī)溶劑不加熱—脂溶性成份消耗溶劑量大，費(fèi)時(shí)長(zhǎng)煎煮法水直火加熱—水溶性成份易揮發(fā)、熱不穩(wěn)定不宜用回流提取法有機(jī)溶劑水浴加熱—脂溶性成份熱不穩(wěn)定不宜用，溶劑量大連續(xù)回流提取法有機(jī)溶劑水浴加熱節(jié)約溶劑、效率最高親脂性較強(qiáng)成份用索氏提取器，時(shí)間長(zhǎng)第二章總結(jié)148第148頁(yè)（2）水蒸氣蒸餾法：適合用于含有揮發(fā)性、能隨水蒸汽蒸餾而不被破壞、難溶或不溶于水成份提取，如揮發(fā)油、小分子香豆素類(lèi)、小分子醌類(lèi)成份。（3）升華法：固體物質(zhì)受熱不經(jīng)過(guò)熔融，直接變成蒸汽，遇冷后又凝固為固體化合物，稱(chēng)為升華。中草藥中有一些成份含有升華性質(zhì)，能夠利用升華法直接自中草藥中提取出來(lái)。如樟腦、咖啡因。第二章總結(jié)149第149頁(yè)分離與精制：（一）依據(jù)物質(zhì)溶解度差異進(jìn)行分離結(jié)晶及重結(jié)晶法利用不一樣溫度可引發(fā)物質(zhì)溶解度改變性質(zhì)以分離物質(zhì)。將不是結(jié)晶狀態(tài)固體物質(zhì)處理成結(jié)晶狀態(tài)操作稱(chēng)結(jié)晶；將不純結(jié)晶深入精制成較純結(jié)晶過(guò)程稱(chēng)重結(jié)晶。第二章總結(jié)150第150頁(yè)（1）溶劑選擇普通標(biāo)準(zhǔn)：不反應(yīng)；冷時(shí)對(duì)所需要成份溶解度較小，而熱時(shí)溶解度較大；對(duì)雜質(zhì)溶解度很大或很??；沸點(diǎn)低，易揮發(fā)；無(wú)毒或毒性小。若無(wú)理想單一溶劑時(shí)，能夠考慮使用混合溶劑。普通慣用甲醇、丙酮、氯仿、乙醇、乙酸乙酯等。（2）結(jié)晶操作：結(jié)晶操作實(shí)際是深入分離純化過(guò)程，普通是應(yīng)用適量溶劑在加熱至沸點(diǎn)情況下將化合物溶解，制成過(guò)飽和溶液，趁熱過(guò)濾去除不溶性雜質(zhì)，放置冷處，以析晶。第二章總結(jié)151第151頁(yè)（3）結(jié)晶純度判定：結(jié)晶形態(tài)和色澤：?jiǎn)我换衔锝Y(jié)晶含有結(jié)晶形狀均一和均勻色澤。熔點(diǎn)和熔距：?jiǎn)我换衔锖幸欢ㄈ埸c(diǎn)和較小熔距，結(jié)晶前后熔點(diǎn)應(yīng)一致，熔距很窄，在1℃

2℃范圍內(nèi)。但要注意雙熔點(diǎn)，如漢防己乙素、芫花素及一些與糖結(jié)合苷類(lèi)化合物。色譜法：?jiǎn)我换衔镌诒由V或紙色譜層析中經(jīng)三種不一樣溶劑系統(tǒng)展開(kāi)，均為一個(gè)斑點(diǎn)者。第二章總結(jié)152第152頁(yè)2．溶劑分離法：（1）在中草藥提取液中加入另一個(gè)溶劑以改變混合物溶劑極性，使一部分物質(zhì)沉淀析出，從而實(shí)現(xiàn)分離。如：水—醇法除多糖、蛋白質(zhì)等水溶性雜質(zhì)；醇—水法除樹(shù)脂、葉綠素等水不溶性雜質(zhì)；醇—醚法或醇—丙酮法使苷類(lèi)成份，而脂溶性樹(shù)脂等雜質(zhì)則存留在母液中。（2）對(duì)酸性、堿性或兩性有機(jī)化合物來(lái)說(shuō)，通常經(jīng)過(guò)加入酸、堿以調(diào)整溶液pH，以改變分子存在狀態(tài)（游離型或解離型），從而改變?nèi)芙舛榷鴮?shí)現(xiàn)分離。如：酸提堿沉法，堿提酸沉法等。（3）沉淀法：酸性或堿性化合物還可經(jīng)過(guò)加入某種沉淀試劑使之生成水不溶性鹽類(lèi)沉淀等析出。如加入鉛鹽、雷氏銨鹽等。第二章總結(jié)153第153頁(yè)（二）依據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中分配比不一樣進(jìn)行分離。1．兩相溶劑萃取法（1）原理：利用混合物中各成份在兩相互不相溶溶劑中分配系數(shù)不一樣而實(shí)現(xiàn)分離。萃取時(shí)假如各成份在兩相溶劑中分配系數(shù)相差越大，則分離效率越高。第二章總結(jié)154第154頁(yè)（2）各種萃取方法：①簡(jiǎn)單萃?。豪梅忠郝┒愤M(jìn)行兩相溶劑萃取。②逆流連續(xù)萃取法：是一個(gè)連續(xù)兩相溶劑萃取法。其裝置可含有一根、數(shù)根或更多根萃取管。③逆流分配法（CCD）：又稱(chēng)逆流分溶法、逆流分布法或反流分布法，與兩相溶劑逆流萃取法原理一致，對(duì)于分離含有非常相同性質(zhì)混合物效果很好。④液滴逆流分配法（DCCC）：本法必須選取能生成液滴溶劑系統(tǒng)，且對(duì)高分子化合物分離效果較差，處理樣品量小，并要有一定設(shè)備，操作較繁瑣。普通

50時(shí)，簡(jiǎn)單萃取即可分離，

50時(shí)，則易采取逆流分溶法。第二章總結(jié)155第155頁(yè)2．紙色譜（PPC）：紙色譜原理與液—液萃取法基本相同。原理：分配原理支持劑：纖維素固定相：水流動(dòng)相：水飽和有機(jī)溶劑Rf值：化合物極性越小，Rf值越大；反之，化合物極性越大，Rf值越小。應(yīng)用：用作微量分析，尤其適合于親水性較強(qiáng)成份，其層析效果往往比吸附薄層色譜效果好。但紙層析普通需要較長(zhǎng)時(shí)間。第二章總結(jié)156第156頁(yè)（三）依據(jù)物質(zhì)吸附性差異進(jìn)行分離其中以固—液吸附用最多，并有物理吸附（硅膠、氧化鋁、活性炭為吸附劑進(jìn)行吸附色譜）、化學(xué)吸附（黃酮等酚酸性物質(zhì)被氧化鋁吸附、生物堿被酸性硅膠吸附等）及半化學(xué)吸附（聚酰胺與黃酮類(lèi)、醌類(lèi)等酚性化合物之間氫鍵吸附，吸附力較弱，介于物理吸附與化學(xué)吸附之間）之分。第二章總結(jié)157第157頁(yè)1．物質(zhì)吸附規(guī)律：（1）物理吸附過(guò)程普通無(wú)選擇性，但吸附強(qiáng)弱大致遵照“相同者易于吸附”經(jīng)驗(yàn)規(guī)律。（2）被分離物質(zhì)與吸附劑、洗脫劑共同組成吸附層析三要素，彼此緊密相連。第二章總結(jié)158第158頁(yè)慣用極性吸附劑：硅膠、氧化鋁。硅膠顯微酸性，適于分離酸性和中性化合物，分離生物堿時(shí)需在流動(dòng)相中加入適量有機(jī)堿；氧化鋁呈堿性，適于分離生物堿等堿性成份，不宜用于分離有機(jī)酸、酚性等酸性成份。均為極性吸附劑，故有以下特點(diǎn)：第二章總結(jié)159第159頁(yè)①被分離物質(zhì)極性越強(qiáng)，吸附力越強(qiáng)。強(qiáng)極性溶質(zhì)將優(yōu)先被吸附。②溶劑極性越弱，則吸附劑對(duì)溶質(zhì)吸附能力越強(qiáng)。隨溶劑極性增強(qiáng)，則吸附劑對(duì)溶質(zhì)吸附力將減弱。③當(dāng)加入極性較強(qiáng)溶劑后，先前被硅膠或氧化鋁所吸附溶質(zhì)可被置換而洗脫出來(lái)。慣用非極性吸附劑：活性炭。對(duì)非極性物質(zhì)含有較強(qiáng)親和力，在水中對(duì)溶質(zhì)表現(xiàn)出強(qiáng)吸附能力。從活性炭上洗脫被吸附物質(zhì)時(shí)，溶劑極性越小，洗脫能力越強(qiáng)。第二章總結(jié)160第160頁(yè)2．極性及其強(qiáng)弱判斷：（1）普通化合物極性按以下官能團(tuán)次序增強(qiáng)：—CH2—CH2—，—CH2=CH2—，—OCH3，—COOR，>C=O，—CHO，—NH2，—OH，—COOH第二章總結(jié)161第161頁(yè)（2）溶劑極性可大致依據(jù)介電常數(shù)大小來(lái)判斷。介電常數(shù)越大，則極性越大。普通溶劑介電常數(shù)按以下次序增大：環(huán)己烷（1.88），苯（2.29），無(wú)水乙醚（4.47），氯仿（5.20），