高三生物一輪復(fù)習(xí)課件微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用

第45講

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)基人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配置出供其生長繁殖的營養(yǎng)物質(zhì)分類按物理性質(zhì)分按功能用途分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基用于擴大培養(yǎng)用于微生物分離、鑒別、活菌計數(shù)、菌種保藏成分水無機鹽碳源調(diào)節(jié)PH的物質(zhì)氮源特殊營養(yǎng)物質(zhì)O2用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累微生物或積累代謝產(chǎn)物無菌技術(shù)消毒滅菌微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)基成分水無機鹽碳源調(diào)節(jié)PH的物質(zhì)氮源特殊營養(yǎng)物質(zhì)O2無菌技術(shù)消毒滅菌煮沸消毒法巴氏消毒法化學(xué)藥物消毒法紫外線消毒法日常食品、器具不耐高溫的液體表面消毒空間消毒灼燒滅菌干熱滅菌濕熱滅菌接種工具、其他金屬用具玻璃器皿、金屬用具高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基及容器純培養(yǎng)微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)基成分水無機鹽碳源調(diào)節(jié)PH的物質(zhì)氮源特殊營養(yǎng)物質(zhì)O2無菌技術(shù)消毒滅菌純培養(yǎng)概念純培養(yǎng)物純培養(yǎng)培養(yǎng)物由單一個體繁殖所獲得微生物群體獲得純培養(yǎng)物的過程培養(yǎng)基上培養(yǎng)出來的微生物群體酵母菌純培養(yǎng)制備培養(yǎng)基接種和分離培養(yǎng)結(jié)果分析與評價滅菌配制培養(yǎng)基倒平板稱取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000ml，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛，用紗布過濾。向濾液中加入20g葡萄糖、15-20g瓊脂，用蒸餾水定容至1000ml。將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，并用皮筋勒緊，再放入高壓蒸汽滅菌鍋中，在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，滅菌15-30min。將5-8套培養(yǎng)皿包成一包，用幾層牛皮紙包緊，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160-170℃滅菌2h。制備培養(yǎng)基滅菌配制培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基倒平板待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時，在酒精燈火焰附近倒平板。(1)培養(yǎng)基要冷卻到50℃左右時開始倒平板。溫度過高會燙手，過低培養(yǎng)基又會凝固。(2)要使錐形瓶的瓶口通過酒精燈火焰。通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。(3)倒平板時，要用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，不要完全打開，以免雜菌污染培養(yǎng)基。(4)平板冷凝后，要將平板倒置。因為平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，平板倒置后，既可避免培養(yǎng)基表面的水分過快地揮發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。

名師解讀接種和分離①灼燒接種環(huán)，直至接種環(huán)金屬絲燒紅②在火焰旁冷卻接種環(huán)，拔出酵母菌培養(yǎng)液試管的棉塞④在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液⑥將皿蓋打開一條縫隙，將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃3-5條平行線，蓋上皿蓋。⑤試管口通過火焰，并塞上棉塞③試管口通過火焰⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線。①接種環(huán)只蘸一次菌液,但要在培養(yǎng)基不同位置連續(xù)劃線多次②劃線首尾不能相接③每次劃線前接種環(huán)進行滅菌④劃線后,培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)⑤一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；存留在劃破處的單個細胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。注意事項平板劃線法操作過程中幾次灼燒接種環(huán)的目的灼燒時期目的取菌種前每次劃線前接種結(jié)束后殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者殺死上次劃線時殘留菌種，使下一次劃線的菌種直接來源上次劃線的末端，從而使每次劃線時菌種數(shù)目逐漸減少，直至得到單個細胞殺死接種環(huán)上原有微生物培養(yǎng)

完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和一個未接種的平板倒置，放入28℃左右的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-28h。結(jié)果分析與評價未接種培養(yǎng)基表面是否有菌落生長？接種的培養(yǎng)基表面是否出現(xiàn)單菌落，菌落大小、形狀、顏色是否一致，是否復(fù)合微生物的特征？若培養(yǎng)基表面出現(xiàn)了其他菌落，可能有哪些原因引起？B1.(2023·湖北襄陽四校聯(lián)考)微生物培養(yǎng)過程中，要重視無菌操作，現(xiàn)代生物學(xué)實驗中的許多方面也要進行無菌操作，防止雜菌污染，請分析下列操作，正確的是(

) A.煮沸消毒法中100℃煮沸5～6min可以殺死全部微生物的細胞和芽孢、孢子B.將接種環(huán)直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌 C.加入培養(yǎng)基中的指示劑和染料不需要滅菌 D.家庭制作葡萄酒時要將容器和葡萄進行滅菌B3.(2023·江蘇南京調(diào)研)下圖為實驗室培養(yǎng)和純化大腸桿菌過程中的部分操作步驟，下列說法正確的是(

)A.步驟①后需將培養(yǎng)基滅菌并調(diào)節(jié)pHB.步驟①②③操作時需要在酒精燈火焰附近進行C.步驟③到④的過程中，接種環(huán)共灼燒處理了5次D.圖中步驟①結(jié)束后需倒置平板，④結(jié)束后不需要微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)基允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基篩選土壤中分解尿素的細菌：培養(yǎng)基以尿素為唯一氮源篩選土壤中耐高溫的微生物：培養(yǎng)基放置在高溫環(huán)境中篩選能利用大氣中N2的微生物：培養(yǎng)基缺少氮源篩選自養(yǎng)微生物：培養(yǎng)基無有機碳源篩選真菌：培養(yǎng)基加入青霉素實例培養(yǎng)過程涂布平板法配置選擇培養(yǎng)基添加尿素作唯一氮源濃度梯度稀釋選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)基允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基篩選土壤中分解尿素的細菌：培養(yǎng)基以尿素為唯一氮源篩選土壤中耐高溫的微生物：培養(yǎng)基放置在高溫環(huán)境中篩選能利用大氣中N2的微生物：培養(yǎng)基缺少氮源篩選自養(yǎng)微生物：培養(yǎng)基無有機碳源篩選真菌：培養(yǎng)基加入青霉素實例培養(yǎng)過程涂布平板法配置選擇培養(yǎng)基添加尿素作唯一氮源濃度梯度稀釋培養(yǎng)與觀察細菌一般在30-37℃的溫度下培養(yǎng)1-2d每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，防止因培養(yǎng)時間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。結(jié)果分析與評價有無雜菌污染對照的空白培養(yǎng)基有無菌落生長有無篩選作用選擇培養(yǎng)基上的菌落和非選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)量對比樣品稀釋是否合適得到3各或三個以上菌落數(shù)目在在30~300平板實驗結(jié)果是否可靠同一土壤、同一稀釋度的重復(fù)組結(jié)果相近注意事項④本實驗使用的平板和試管較多，為了避免混淆，最好在使用前做好標記。例：標記注明組別、培養(yǎng)日期和平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度等。③第一次做實驗可以將稀釋范圍放寬，將1×103~1×107倍稀釋的稀釋液分別涂到平板上培養(yǎng)，確保能從中選擇出菌落數(shù)為30~300的平板進行計數(shù)①取土樣時的鐵鏟和取樣紙袋在使用前要滅菌，操作完成之后要洗手②不要將過熱的涂布器放在盛有酒精的燒杯中，以免引燃酒精課本19頁數(shù)量測定稀釋涂布平板法選擇30~300菌落數(shù)的平板進行計數(shù)，在同一稀釋度下選擇3個或3個以上的平板取平均值缺點統(tǒng)計菌落數(shù)目結(jié)果比活菌的實際數(shù)目少當兩個或多個細胞連在一起，平板上觀察到的只有一個菌落原因顯微鏡直接計數(shù)法利用特定的細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板在顯微鏡下觀察計數(shù)缺點統(tǒng)計細菌數(shù)目結(jié)果比活菌的實際數(shù)目多統(tǒng)計的結(jié)果是活菌和死菌的總和原因課本18頁C1.(2023·山東淄博月考)某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細菌的污染情況而進行了實驗，包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察與計數(shù)。下列與此實驗相關(guān)問題的敘述，正確的是(

) A.實驗用過的帶菌培養(yǎng)基經(jīng)過加熱后才能倒掉 B.可利用平板劃線法對細菌進行分離純化并計數(shù) C.培養(yǎng)基中含有的蛋白胨主要為細菌培養(yǎng)提供氮源和維生素等 D.觀察細菌培養(yǎng)的實驗時，最好是在另一平板上接種清水作為對照實驗5.(2023·江西九江質(zhì)檢)在篩選纖維素分解菌的培養(yǎng)基中加入剛果紅染料，研究者觀察到幾個有透明圈的菌落。據(jù)圖分析正確的是(

)CA.透明圈內(nèi)的剛果