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專題五生物技術(shù)與工程一“鼠”到底背景介紹鼠哺乳動(dòng)物體型小、易飼養(yǎng);性成熟早,繁殖力強(qiáng);對(duì)外界環(huán)境反應(yīng)敏感;生理特征、形態(tài)和基因等方面上比較接近人類;
鼠+動(dòng)物細(xì)胞工程&胚胎工程&基因工程人鼠細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)、單克隆抗體——?jiǎng)游锛?xì)胞融合小鼠成纖維細(xì)胞誘導(dǎo)iPS細(xì)胞孤雌、孤雄小鼠——?jiǎng)游锛?xì)胞融合&胚胎工程轉(zhuǎn)基因小鼠——基因工程人鼠嵌合抗體——蛋白質(zhì)工程
考點(diǎn)歸納動(dòng)物細(xì)胞工程人鼠細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)單克隆抗體;誘導(dǎo)iPS細(xì)胞孤雌、孤雄小鼠
原理:細(xì)胞膜具有流動(dòng)性
融合方法?動(dòng)物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合
物理方法:電融合法、離心法
化學(xué)方法:聚乙二醇融合法、
高Ca2+-高pH融合法誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合
物理方法:電融合法
化學(xué)方法:聚乙二醇(PEG)融合法生物方法:滅活的病毒誘導(dǎo)法滅活:用物理或化學(xué)手段使病毒失去感染能力,但是并不破壞病毒抗原結(jié)構(gòu)。兩親本細(xì)胞的細(xì)胞核逐漸融合病毒吸附在細(xì)胞表面并使細(xì)胞凝集兩親本細(xì)胞膜上磷脂和蛋白質(zhì)重新排布,細(xì)胞膜打開細(xì)胞膜連接誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理注射特定抗原免疫小鼠培養(yǎng)小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞多種細(xì)胞多種雜交瘤細(xì)胞能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞選擇培養(yǎng)基篩選克隆化培養(yǎng)抗體檢測(cè)注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖體外培養(yǎng)單克隆抗體融合用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選∶在該培養(yǎng)基上,未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死亡,只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長(zhǎng)。對(duì)上述經(jīng)選擇培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè),經(jīng)多次篩選,就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞。動(dòng)物細(xì)胞工程iPS細(xì)胞(誘導(dǎo)多能干細(xì)胞)的培養(yǎng)和應(yīng)用將特定基因或特定蛋白導(dǎo)入細(xì)胞用小分子化合物誘導(dǎo)形成①獲取方法:iPS細(xì)胞最初是由小鼠成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來的,后來發(fā)現(xiàn)已分化的T細(xì)胞、B細(xì)胞等也能被誘導(dǎo)為iPS細(xì)胞。②誘導(dǎo)多能干細(xì)胞優(yōu)點(diǎn):A.誘導(dǎo)過程無需破壞胚胎。
B.iPS細(xì)胞可以來源于病人自身的體細(xì)胞,將它移植回病人體內(nèi)后,理論上可以避免免疫排斥反應(yīng)。應(yīng)用前景優(yōu)于胚胎干細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞工程隨堂檢測(cè)小鼠減數(shù)分裂過程的特點(diǎn)為:雌性哺乳動(dòng)物的減數(shù)分裂過程是不連續(xù)的,且多數(shù)動(dòng)物的第一極體不進(jìn)行減數(shù)第二次分裂。通常只有受精時(shí)才激活次級(jí)卵母細(xì)胞完成減數(shù)第二次分裂應(yīng)用用來自減數(shù)分裂Ⅱ期兩個(gè)不同階段的小鼠卵細(xì)胞誘導(dǎo)融合,并促使其分裂,發(fā)育,從得到的胚胎中分離出干細(xì)胞(ES細(xì)胞)細(xì)胞培養(yǎng)+核移植D隨堂檢測(cè)C隨堂檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)+胚胎工程胚胎工程體外受精早期胚胎發(fā)育受體雌鼠(代孕)精子卵子胚胎移植受精卵早期胚胎鼠卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng)精子的采集和獲能3.受精4.早期胚胎培養(yǎng)精子在進(jìn)行體外受精前需要精子獲能處理采集后的卵母細(xì)胞都要在體外經(jīng)過人工培養(yǎng)成熟后,才能與獲能的精子受精。以檢查受精狀況和受精卵的發(fā)育能力適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液意義:提高動(dòng)物繁殖能力的有效措施;還可以為胚胎移植提供可用的胚胎。胚胎工程——體外受精遺傳性狀優(yōu)良供體母鼠健康的體質(zhì)、正常的繁殖能力受體母鼠
多種激素同期發(fā)情處理促性腺激素超數(shù)排卵供體公牛發(fā)情配種或人工授精收集胚胎并檢查胚胎移植妊娠檢查分娩(胚胎移植的犢牛)①該過程中
次使用激素:②該過程中的
次檢查:③胚胎移植成功與否要有兩個(gè)條件:第一次對(duì)受、供體進(jìn)行同期發(fā)情處理;第二次用于供體的超數(shù)排卵。第一次對(duì)收集的胚胎進(jìn)行檢查;第二次對(duì)受體母牛是否妊娠進(jìn)行檢查。胚胎移植一般應(yīng)在同種的雌性供體和受體之間進(jìn)行。進(jìn)行胚胎移植的供體和受體的生理狀態(tài)要相同。胚胎工程——胚胎移植概念:采用機(jī)械方法將早期胚胎切割成2等份,4等份或8等份等,經(jīng)移植獲得同卵雙胎或多胎的技術(shù)。后代具有相同的遺傳物質(zhì),因此胚胎分割可以看做動(dòng)物無性繁殖或克隆的方法之一。理論基礎(chǔ):主要儀器設(shè)備:特點(diǎn):選擇的胚胎:體視顯微鏡和顯微操作儀發(fā)育良好的,形態(tài)正常的桑葚胚或囊胚。動(dòng)物胚胎細(xì)胞的全能性。胚胎工程——胚胎分割分割針或分割刀?;蚬こ剔D(zhuǎn)基因動(dòng)物:通過實(shí)驗(yàn)手段將外源基因?qū)氲绞芫鸦蛟缙谂咛ゼ?xì)胞中最終可以獲得能穩(wěn)定遺傳并表達(dá)的動(dòng)物。目的基因的篩選與獲取基因表達(dá)載體的構(gòu)建目的基因的檢測(cè)與鑒定將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞第一步第二步第三步第四步將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞——顯微注射法基因工程藥用蛋白基因乳腺中特異表達(dá)的基因的啟動(dòng)子等調(diào)控元件基因表達(dá)載體顯微注射受精卵泌乳期分泌乳汁轉(zhuǎn)基因動(dòng)物藥物發(fā)育A.動(dòng)物泌乳期有間隔B.有些蛋白不能在乳腺里表達(dá)C.某些蛋白在乳腺中的修飾可能與天然狀態(tài)不同A.乳腺是天然的高效合成蛋白質(zhì)的器官,
適合于表達(dá)高等動(dòng)物體內(nèi)的復(fù)雜蛋白B.制備乳腺反應(yīng)器的方法成熟C.重組蛋白的提取和純化相對(duì)容易膀胱生物反應(yīng)器1.科學(xué)家培養(yǎng)出一種轉(zhuǎn)基因小鼠,其膀胱上皮細(xì)胞可以合成人的生長(zhǎng)激素并分泌到尿液中。下列說法正確的是(
)A.將人的生長(zhǎng)激素基因?qū)胄∈笫荏w細(xì)胞,可以用感受態(tài)細(xì)胞法B.人的生長(zhǎng)激素基因只存在于在小鼠的膀胱上皮細(xì)胞中C.進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移時(shí),要將目的基因轉(zhuǎn)入小鼠受精卵中D.采用抗原—抗體雜交技術(shù)檢測(cè)目的基因是否插入了小鼠的基因組C隨堂檢測(cè)蛋白質(zhì)工程:以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ),通過改造或合成基因,來改造現(xiàn)有蛋白質(zhì),或制造一種新的蛋白質(zhì),以滿足人類生產(chǎn)和生活的需求。
①基礎(chǔ):___________________________________
②實(shí)質(zhì):___________________________________
③操作對(duì)象:_______________________________
④目的:__________________________________
⑤地位:___________________________________
⑥理論和技術(shù):_____________________________蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系改造或合成基因,定向改造現(xiàn)有蛋白質(zhì),或制造新的蛋白質(zhì)改造現(xiàn)有蛋白質(zhì)或制造一種新的蛋白質(zhì),以滿足生產(chǎn)生活需求在基因工程基礎(chǔ)上延伸出來的第二代基因工程基因分子生物學(xué)、晶體學(xué)和計(jì)算機(jī)技術(shù)蛋白質(zhì)工程降低人對(duì)小鼠單克隆抗體的免疫反應(yīng)
通過_______,將小鼠抗體上______的區(qū)域(即_____)“嫁接”到_______(即_____)上,經(jīng)過這樣改造的抗體__________________________________;改造基因結(jié)合抗原可變
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