輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)

前言

血型判定、交叉配血、抗體篩選試驗(yàn)是輸血科當(dāng)前最慣用試驗(yàn)，也是每個(gè)輸血工作者應(yīng)該熟練掌握試驗(yàn)，依據(jù)工作經(jīng)驗(yàn)我們認(rèn)為在試驗(yàn)過(guò)程中一些細(xì)節(jié)輕易被忽略，值得注意，現(xiàn)將工作中一些體會(huì)與大家一起探討交流，請(qǐng)大家提出寶貴意見(jiàn)。輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第1頁(yè)ABO血型判定1、判定原理：依據(jù)紅細(xì)胞上有沒(méi)有A抗原或(和)B抗原及血清中有無(wú)對(duì)應(yīng)抗體將血型分為A型、B型、AB型和O型四種

正定型（細(xì)胞定型）

反定型（血清定型）2、方法：試管法、微柱凝膠法、玻片法均為凝集試驗(yàn)輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第2頁(yè)ABO血型判定（試管法）1、試驗(yàn)材料：正定試劑：抗-A、抗-B（是否質(zhì)控？質(zhì)控要求？統(tǒng)計(jì)？）抗-AB

確認(rèn)弱A、B抗原，與弱A、B抗原親和力強(qiáng),會(huì)產(chǎn)生較強(qiáng)反應(yīng)?？?H

用于檢驗(yàn)亞型及孟買型?？?A1

用于A亞型檢測(cè)。輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第3頁(yè)ABO血型判定（試管法）反定試劑A1細(xì)胞（為何？）、B細(xì)胞，自制細(xì)胞質(zhì)控

O細(xì)胞檢驗(yàn)是否存在ABO系統(tǒng)以外抗體干擾ABO反定型。本身對(duì)照用于確認(rèn)正反定型結(jié)果有效性,排除本身抗體對(duì)定型干擾(如冷凝集等)。A2細(xì)胞用于A亞型判定（有些A亞型產(chǎn)生抗-A1抗體而不產(chǎn)生抗A2）。輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第4頁(yè)ABO血型判定（試管法）2、試驗(yàn)方法：正定：1滴2~5%被檢者紅細(xì)胞+1~2滴標(biāo)準(zhǔn)血清混勻，3400轉(zhuǎn)15秒（轉(zhuǎn)速選擇）反定：2滴受檢者血清+1滴標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞混勻離心輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第5頁(yè)ABO血型判定（試管法）3、結(jié)果判定：搖動(dòng)力度，細(xì)胞扣邊緣情況，弱凝集判斷（亞型尤其主要）正定預(yù)期結(jié)果3+~4+，假如出現(xiàn)弱凝集應(yīng)該考慮是抗原減弱還是亞型，不能輕易錯(cuò)過(guò)。血型判定并統(tǒng)計(jì)正反不一致思索與處理？關(guān)鍵在于認(rèn)識(shí)發(fā)覺(jué)問(wèn)題輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第6頁(yè)ABO血型判定（試管法）4、正反不一致原因分析試驗(yàn)人員技術(shù)操作錯(cuò)誤紅細(xì)胞標(biāo)本相關(guān)問(wèn)題血清標(biāo)本相關(guān)問(wèn)題輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第7頁(yè)ABO血型判定（試管法）技術(shù)操作錯(cuò)誤試劑濃度與配比，普通問(wèn)題不大，不過(guò)百分比不適當(dāng)可能漏檢亞型忘記加試劑，試劑工作中有可能出現(xiàn)結(jié)果判定，尤其對(duì)溶血結(jié)果認(rèn)識(shí)，假如是血清標(biāo)本可能碰到，56度破壞補(bǔ)體驗(yàn)證統(tǒng)計(jì)錯(cuò)誤，實(shí)際工作中對(duì)于錯(cuò)誤匯報(bào)占很大百分比標(biāo)本錯(cuò)誤輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第8頁(yè)ABO血型判定（試管法）紅細(xì)胞問(wèn)題：ABO亞型！使正定凝集較弱，也是發(fā)覺(jué)亞型關(guān)鍵所在白血病或其它惡性疾病使患者紅細(xì)胞A、B抗原減弱??！患者近期輸入了ABO不一樣型紅細(xì)胞，或ABO不一樣型骨髓移植，可能出現(xiàn)混合視野。紅細(xì)胞取得性或遺傳性異常，如取得性B抗原、T/Tn多凝集紅細(xì)胞。一些疾?。ㄈ绺骨话┰斐裳獫{中存在大量型物質(zhì)，中和抗-A或抗-B抗體，引發(fā)正定型為假陰性或弱陽(yáng)性?；颊哐逯懈咝r(jià)本身冷凝集素使紅細(xì)胞發(fā)生凝集！！輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第9頁(yè)ABO血型判定（試管法）血清標(biāo)本相關(guān)問(wèn)題新生兒抗體陰性或很弱、老年人抗體減弱??！白血病、淋巴瘤及使用免疫抑制劑患者、先天丙種球蛋白缺乏患者、免疫缺點(diǎn)患者抗體減弱?。BO不一樣型骨髓移植患者。使用血漿或凝固不完全血清會(huì)形成很小纖維蛋白凝集紅細(xì)胞凝塊！！患者血清中有不規(guī)則抗體或本身冷凝集素?。∫恍┘膊。ǘ喟l(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、何杰金淋巴瘤等）造成球蛋白水平增高，引發(fā)緡錢(qián)狀凝集；纖維蛋白原水平增高，會(huì)引發(fā)緡錢(qián)狀凝集；血漿增容劑（葡聚糖、PVP）也會(huì)引發(fā)緡錢(qián)狀凝集造成假陽(yáng)性結(jié)果。輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第10頁(yè)ABO血型判定（試管法）5、正反不符處理程序：患者年紀(jì)患者病史患者近期輸血史患者近期用藥史患者是否進(jìn)行了骨髓移植患者以前血型家系調(diào)查處理細(xì)胞、血清、改變?cè)囼?yàn)條件增加試驗(yàn)（洗滌細(xì)胞、改變百分比、反應(yīng)溫度、吸收放散、血型物質(zhì)測(cè)定）輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第11頁(yè)ABO血型判定（試管法）常見(jiàn)問(wèn)題處理ABO亞型正定：抗-A、抗-B、抗-AB、抗-A1、抗-H反定：A1c、A2c、Bc、Oc、本身對(duì)照吸收放散唾液型物質(zhì)檢測(cè)有條件者可作家系調(diào)查輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第12頁(yè)ABO血型判定（試管法）A、B抗原減弱延長(zhǎng)孵育時(shí)間、4℃孵育酶處理紅細(xì)胞吸收放散唾液型物質(zhì)檢測(cè)既往血型調(diào)查輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第13頁(yè)ABO血型判定（試管法）抗體減弱延長(zhǎng)孵育時(shí)間、4℃孵育加大血清用量（很實(shí)用)既往血型調(diào)查酶處理試劑紅細(xì)胞輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第14頁(yè)ABO血型判定（試管法）冷本身抗體將血清和紅細(xì)胞分別在37孵育后再混合用37℃溫鹽水洗滌紅細(xì)胞、45℃熱放散3分鐘巰基試劑(DTT)處理紅細(xì)胞本身吸收去除血清中本身冷抗體輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第15頁(yè)ABO血型判定（試管法）室溫反應(yīng)同種抗體用譜細(xì)胞做抗體判定選擇沒(méi)有對(duì)應(yīng)抗原A、B細(xì)胞做反定型輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第16頁(yè)ABO血型判定（微柱法）1、原理：是生物化學(xué)凝膠過(guò)濾技術(shù)和免疫學(xué)抗原抗體反應(yīng)相結(jié)合產(chǎn)物，經(jīng)過(guò)調(diào)整凝膠濃度來(lái)控制凝膠間隙大小。使其間隙只能允許游離RBC經(jīng)過(guò)，從而使游離RBC與聚集RBC分離。假如經(jīng)過(guò)離心RBC沉積在凝膠管底部，則表明RBC未發(fā)生凝聚凝集，是陰性反應(yīng)，若RBC聚集在凝膠帶上部，則表明RBC發(fā)生凝集，呈陽(yáng)性反應(yīng)。其本質(zhì)仍是凝集試驗(yàn)（凝膠可能不一樣，長(zhǎng)春為葡聚糖。）基本概念：特異性膠、中性膠、抗人球蛋白試劑膠輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第17頁(yè)ABO血型判定（微柱法）2、試驗(yàn)材料：比較單一，都是商品化，定量加樣，注意細(xì)胞濃度0.8%3、操作：正定反定（加樣次序）4、結(jié)果判定：按說(shuō)明，凝集強(qiáng)度判斷，注意混合視野判定，弱凝集判定5、注意事項(xiàng)：細(xì)胞濃度，試劑一定室溫平衡，最好室溫反應(yīng)15分鐘再離心以增強(qiáng)弱反強(qiáng)度（衛(wèi)生部第1批質(zhì)控出現(xiàn)問(wèn)題，有2個(gè)標(biāo)本反定正確率60%）輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第18頁(yè)ABO血型判定（微柱法）6、假陽(yáng)性反應(yīng)可見(jiàn)于：

（1）未完全除去纖維蛋白原不完全血清標(biāo)本，殘余纖維蛋白原在凝膠中成為纖維蛋白，妨礙紅細(xì)胞沉淀而浮于膠中或膠表面。（我們收到衛(wèi)生部2、3批質(zhì)控標(biāo)本有此現(xiàn)象）（２）被檢標(biāo)本染菌也使紅細(xì)胞浮于膠中或膠表面。

（3）被檢紅細(xì)胞破碎，常管底及近底部一側(cè)，而不是在管底尖部。此為離心時(shí)微柱管離心力方向和該微管軸向方向不一致，本應(yīng)為陰性結(jié)果沉淀位置偏離而呈似弱陽(yáng)性是因?yàn)榧t細(xì)胞陳舊，此時(shí)即使應(yīng)該是陰性結(jié)果，但破碎紅細(xì)胞膜沉于膠中或膠面呈弱陽(yáng)性。

（4）試驗(yàn)室溫度低時(shí)，因凝膠顆?；顒?dòng)性降低，單個(gè)細(xì)胞穿過(guò)時(shí)困難，輕易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。

輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第19頁(yè)ABO血型判定（微柱法）（5）鐮刀形紅細(xì)胞貧血病人在做血型配血時(shí)易出現(xiàn)假陽(yáng)性：

正常紅細(xì)胞有一定變形性，能夠經(jīng)過(guò)小于其直徑凝膠間隙，而鐮形紅細(xì)胞貧血病人紅細(xì)胞變形能力降低，剛性增大，不能透過(guò)凝膠間隙，故出現(xiàn)假陽(yáng)性。（6）嚴(yán)重感染病人易出現(xiàn)假陽(yáng)性：

病人血清或血漿中白細(xì)胞過(guò)多，堵塞了凝膠間隙，從而影響了紅細(xì)胞沉降，造成假陽(yáng)性。（曾碰到一例）

輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第20頁(yè)ABO血型判定（微柱法）7、假陰性反應(yīng)：

（1）抗體過(guò)少、弱。

（2）抗原、抗體百分比不適當(dāng)。

注意：不是一個(gè)試驗(yàn)方法能夠檢測(cè)出全部抗原抗體反應(yīng)。輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第21頁(yè)ABO血型判定總結(jié)注意弱反應(yīng)（尤其是正定，普通應(yīng)該很強(qiáng)）發(fā)覺(jué)正反不一致，不能輕易錯(cuò)過(guò)，慎用假陽(yáng)性解釋，可重復(fù)試驗(yàn)有問(wèn)題做好統(tǒng)計(jì)，處理方案，不?？偨Y(jié)不一樣試驗(yàn)方法結(jié)合，試管與微柱各有優(yōu)缺點(diǎn)發(fā)覺(jué)問(wèn)題是關(guān)鍵，因?yàn)槊總€(gè)醫(yī)院情況不一樣，大部分醫(yī)院試劑不全，不能準(zhǔn)確判斷其亞型，不過(guò)應(yīng)該具備發(fā)覺(jué)亞型能力.輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第22頁(yè)RH血型判定1、原理：依據(jù)是否含有D抗原區(qū)分Rh陰陽(yáng)性2、試劑：IgM;IgG+IgM3、操作及結(jié)果解釋試劑選擇及陰性確認(rèn)問(wèn)題??！試劑選擇：輸血科能夠選擇IgM試劑Rh陰性確認(rèn)：輸血科與血站對(duì)陰性標(biāo)本處理不一樣，輸血科對(duì)陰性標(biāo)本無(wú)須再深入確認(rèn)，以防弱D或部分D患者輸入Rh陽(yáng)性血；血站必須對(duì)RH陰性標(biāo)本確認(rèn)，以防弱D過(guò)部分D血液輸給Rh陰性患者。輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第23頁(yè)交叉配血慣用方法鹽水：發(fā)覺(jué)IgM抗體凝聚胺、微柱凝膠、酶法：發(fā)覺(jué)IgG型不規(guī)則抗體輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第24頁(yè)交叉配血（凝聚胺）原理：（略）操作：（是否質(zhì)控？統(tǒng)計(jì)？）試劑用量:假凝集消除液不能輕易多加，可能會(huì)造成假陰性反應(yīng)時(shí)間：加凝聚胺試劑后不可馬上離心，應(yīng)使其充分反應(yīng)觀察時(shí)間：一分鐘之內(nèi)觀察結(jié)果影響原因：抗凝劑影響（反定凝集較差可能受到抗凝劑影響，能夠多加凝聚胺試劑凝集很好）、細(xì)胞濃度不可太濃輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第25頁(yè)交叉配血（微柱凝膠）原理：屬于經(jīng)典抗人球蛋白試驗(yàn)操作：50微升0.8%紅細(xì)胞+25微升血清或血漿（依據(jù)廠家說(shuō)明）結(jié)果判斷：不能錯(cuò)過(guò)弱凝集，假如有懷疑能夠重復(fù)試驗(yàn)，注意：標(biāo)本最好抗凝、離心以消除纖維蛋白帶來(lái)干擾輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第26頁(yè)交叉配血（微柱凝膠）凝聚胺與微柱凝膠法兩種方法差異：微柱法相對(duì)敏感，但不是萬(wàn)能，有些抗體可能凝聚胺更敏感（如Rh抗體），實(shí)際工作極難發(fā)覺(jué)此現(xiàn)象，可能與工作人員熟練程度相關(guān)，不論任何一個(gè)方法配血不合均不能發(fā)血。輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第27頁(yè)抗體篩選（微柱法）操作及結(jié)果判斷（略）抗體篩選陽(yáng)性結(jié)果處理：最好作抗體判定，有些稀有抗體配血成功率極低能夠?qū)で髱椭?，普通醫(yī)院可能無(wú)此條件用微柱法和凝聚胺兩種方法同時(shí)配血或者用微柱凝膠法配血，絕對(duì)不能夠單純用凝聚胺配血（方法差異可能漏檢）輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第28頁(yè)問(wèn)題討論：1、微柱法抗體篩選弱陽(yáng)性，遇配血不合標(biāo)本是否也應(yīng)為弱陽(yáng)性？（劑量效應(yīng)以及紅細(xì)胞新鮮度影響）2、微柱法抗體篩選陽(yáng)性，選擇3袋微柱法配血均相合是否說(shuō)明抗體篩選為假陽(yáng)性？3、微柱法抗體篩選陽(yáng)性，是否可用凝聚胺法直接配血選擇相合血液？輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第29頁(yè)發(fā)覺(jué)B(A)血型1例試管法正定AB，A抗原弱于B抗原，不過(guò)結(jié)果顯著微柱法正反定型，正反定型相符為B型，抗A抗體很強(qiáng)與正?？笰無(wú)差異，懷疑初檢血型錯(cuò)誤試管法正反定型復(fù)檢：正定AB，反定B型，懷疑特殊血型或標(biāo)本問(wèn)題保險(xiǎn)起見(jiàn)重抽標(biāo)本，結(jié)果相同懷疑A亞型B，產(chǎn)生抗A（以上試驗(yàn)我科完成）省血液中心送檢，匯報(bào)A2B輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第30頁(yè)發(fā)覺(jué)B(A)血型1例我科隨即進(jìn)行以下試驗(yàn)：父母血型判定：父親：O母親：與女兒血型表現(xiàn)一致，初步判為cisAB依據(jù)資料普通cisAB為A強(qiáng)B弱，產(chǎn)生抗B，而此例A弱B強(qiáng)產(chǎn)生抗A，與B(A)血型表現(xiàn)一致，高度懷疑B(A)無(wú)法確認(rèn)，送上海血液中心進(jìn)行血清血及分子生物學(xué)確認(rèn)輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第31頁(yè)上海血液中心判定結(jié)果ABO正定抗-A抗B抗A1人源抗A人源抗B2+4+W-1+4+W說(shuō)明確實(shí)存在A、B抗原ABO反定：A1細(xì)胞B細(xì)胞O細(xì)胞A2細(xì)胞（6滴）

3+S--1+W說(shuō)明確實(shí)存在抗-A，且與A1、A2細(xì)胞同時(shí)凝集抗-H：O細(xì)胞B細(xì)胞患者細(xì)胞

2+S1+W2+說(shuō)明抗H增強(qiáng)輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第32頁(yè)上海血液中心判定結(jié)果結(jié)論：患者存在AB抗原，且A弱B強(qiáng)；血清中存在抗A，同時(shí)和A1、A2細(xì)胞凝集；抗-H增強(qiáng)，符合B(A)特點(diǎn)判定為：B（A）血型為了深入證實(shí)進(jìn)行基因測(cè)序結(jié)論為640堿基變異，A被G取代為B（A）*04型輸血科常用實(shí)驗(yàn)及工作體會(huì)第33頁(yè)B(A)血型血清學(xué)特點(diǎn)B(A)血型血清學(xué)特點(diǎn)：同時(shí)存在AB抗原，A弱B強(qiáng)普通判定為A亞型B，不過(guò)存