A02細(xì)胞株中白血病耐藥相關(guān)microRNA的篩選研究的開題報(bào)告

K562與K562/A02細(xì)胞株中白血病耐藥相關(guān)microRNA的篩選研究的開題報(bào)告一、研究背景與意義白血病是一種惡性腫瘤，全球范圍內(nèi)的發(fā)病率與死亡率均有逐年增加的趨勢?；熓悄壳鞍籽≈委煹闹饕侄?，但是白血病患者的化療耐藥問題卻一直是困擾醫(yī)生和患者的難題。因此，研究白血病藥物耐藥的機(jī)制及其調(diào)控因素，對于治療白血病這一疾病具有非常重要的意義。MicroRNA是一類短鏈非編碼RNA，參與許多生物過程的調(diào)控，如轉(zhuǎn)錄調(diào)控、RNA的剪接、RNA的定位和降解等。在各種細(xì)胞過程中，microRNA經(jīng)常起到了一種生物調(diào)控分子的作用。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，microRNA與癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，如在白血病中，某些microRNA的異常表達(dá)很可能是導(dǎo)致白血病細(xì)胞發(fā)展為藥物耐藥性的原因。因此，對于白血病中與耐藥有關(guān)的microRNA進(jìn)行篩選和研究，不僅可以深入了解癌癥的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，也可以為臨床上藥物治療指導(dǎo)提供理論依據(jù)。本研究將利用篩選肝癌患者外周血中的microRNA，并鑒定其中與癌癥藥物耐藥相關(guān)的microRNA，進(jìn)而研究其在白血病細(xì)胞耐藥中的作用機(jī)制，為白血病的治療提供一定的理論基礎(chǔ)。二、研究內(nèi)容和擬解決的問題1.研究目的本研究旨在篩選出K562與K562/A02細(xì)胞株中與白血病耐藥相關(guān)的microRNA，并探究其作用機(jī)制，為治療白血病提供新的治療方法和理論依據(jù)。2.研究內(nèi)容（1）K562和K562/A02細(xì)胞株的篩選K562和K562/A02細(xì)胞株將被用作本研究的研究對象，研究其之間的差異，并確定與耐藥相關(guān)的K562/A02細(xì)胞株。該細(xì)胞株也將被用作后續(xù)的實(shí)驗(yàn)研究對象。（2）microRNA的篩選利用高通量測序技術(shù)，篩選出與K562/A02細(xì)胞株中白血病耐藥相關(guān)的microRNA，并與K562細(xì)胞株進(jìn)行比較，找出與K562/A02細(xì)胞株中顯著上調(diào)的microRNA。（3）篩選結(jié)果的驗(yàn)證對篩選出來的與耐藥相關(guān)的microRNA進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)小鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證其與耐藥相關(guān)的表達(dá)水平，以及其對細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡的作用。（4）機(jī)制分析進(jìn)一步探討篩選的或鑒定的microRNA對白血病耐藥的作用機(jī)制。通過RNAi技術(shù)、基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)等技術(shù)手段，探討microRNA在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)化中的作用機(jī)制。3.擬解決的問題本研究旨在篩選肝癌患者外周血中的microRNA，并鑒定其中與癌癥藥物耐藥相關(guān)的microRNA，進(jìn)而研究其在白血病細(xì)胞耐藥中的作用機(jī)制，為白血病的治療提供新的治療方法和理論依據(jù)。具體來說，本研究擬解決以下問題：（1）篩選出K562與K562/A02細(xì)胞株中與白血病耐藥相關(guān)的microRNA；（2）鑒定其在細(xì)胞增殖和凋亡中的作用；（3）探究其轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)化及調(diào)控機(jī)制；（4）為治療白血病耐藥性提供新的理論和實(shí)踐依據(jù)。三、研究方法和技術(shù)路線1.實(shí)驗(yàn)材料和設(shè)備（1）細(xì)胞系：K562和K562/A02細(xì)胞株（2）試劑：RPMI1640培養(yǎng)基、10％胎牛血清、TRIzolRNA提取試劑盒、cDNA合成試劑盒（3）實(shí)驗(yàn)設(shè)備：高通量測序儀、逆轉(zhuǎn)錄PCR儀、膜式透析器、動態(tài)光散射儀等。2.研究方法和技術(shù)路線（1）將K562和K562/A02細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)以及對其進(jìn)行PCR鑒定；（2）通過高通量測序技術(shù)，篩選出與K562/A02細(xì)胞株中白血病耐藥相關(guān)的microRNA；（3）通過指定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和分析方法，比較K562和K562/A02細(xì)胞株中microRNA的差異；（4）篩選結(jié)果的驗(yàn)證，通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)小鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證其與耐藥