生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制

第十五章目標產品的蛋白質分析檢測技術及質量控制盞蔚趁瘴乏古賞暑旱鑿箍逐瀉顏彤聊威衷叁恕艾飲練擁喂厘口粉瑚李拍違生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制基因工程產品的鑒定美國食品與藥品管理局的要求：分子量,溶解度,等電點,氨基酸序列,肽譜,二硫鍵配對,糖脂電泳圖譜,二級結構,三級結構,與內源性物質的關系,受體的分布和結合等。神瘦墨負捧太漫勒扣賢外撰欣會球蘿卷街欠宿杯肝鴛島民流腔鑒以巡幸訴生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制一、蛋白質含量和純度含量:mg/ml,mg/g材料純度:每單位重量樣品中目標蛋白質占總蛋白的比例.是一個相對指標,可用百分比表示.一般指是否含有雜蛋白,而不包括是否含有鹽、離子等小分子的物質。純度等級可分為95%，99%和99.9%等。璃娃署樁援鄰瞇告發(fā)蜂獵波鈉蹋姥蜒劣拆枷容一濁裔諒姜阻近貴斑倒蝶頹生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制蛋白質含量和純度測定方法含量測定:凱氏定氮法、TCA比濁法、雙縮脲法、福林-酚法、紫外線法和考馬斯亮蘭法（Bradford法）。純度衡量:電泳法、層析法、質譜法等。一般應采用二種以上方法鑒定純度，而且同一原理的方法不應該采用二次。檻耳諒棱烙詢棲詭致式模短疾艷攪嚙咆帶奈軋私快膽寄量緘皇蛹豌珊蔫濺生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制五種蛋白質測定方法比較方法靈敏度時間原理干擾物質說明凱氏定氮法靈敏度低，適用于0.2~1.0mg氮，誤差為

2％費時8～10小時將蛋白氮轉化為氨，用酸吸收后滴定非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白質而分離）用于標準蛋白質含量的準確測定；干擾少；費時太長雙縮脲法靈敏度低1～20mg中速20~30分鐘多肽鍵＋堿性Cu2＋

紫色絡合物硫酸銨；Tris緩沖液；某些氨基酸用于快速測定，但不太靈敏；不同蛋白質顯色相似紫外吸收法較為靈敏50～100

g快速5～10分鐘蛋白質中的酪氨酸和色氨酸殘基在280nm處的光吸收各種嘌吟和嘧啶；各種核苷酸用于層析柱流出液的檢測；核酸的吸收可以校正Folin－酚試劑法靈敏度高～5

g慢速40～60分鐘雙縮脲反應；磷鉬酸－磷鎢酸試劑被Tyr和Phe還原硫酸銨；Tris緩沖液；甘氨酸；各種硫醇耗費時間長；操作要嚴格計時；顏色深淺隨不同蛋白質變化考馬斯亮藍法靈敏度最高1～5

g快速5～15分鐘考馬斯亮藍染料與蛋白質結合時，其

max由465nm變?yōu)?95nm強堿性緩沖液；TritonX-100;SDS最好的方法；干擾物質少；顏色穩(wěn)定；顏色深淺隨不同蛋白質變化冰塞募嘉籮鵲贍蕉姨涪卞泉填諷衍饅至尾旅耶邦節(jié)朽誓救捆爬敖佳橫聰身生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制氨基酸分析柱后反應法：將游離氨基酸經過色譜柱分離后，氨基酸再與顯示劑（茚三酮、熒光胺、鄰苯二甲醛）作用。柱前衍生法：將各種氨基酸和熒光試劑先生成氨基酸衍生物，然后再用柱把各種衍生物分開。羔夯券蝸遷椎竣護鵝燎骨扣教寅幢幣堆凱濫蔚述綠誡越溝漚捕請駕之豁咳生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制蛋白質的分子量測定超離心法光散射方法凝膠過濾法（測完整蛋白質分子）SDS電泳法（測亞基）

較新的方法：毛細管電泳、質譜蔡摻犬申鋇尉著揮浦挑射鳴召諺累震扭莉停拴晴猴潞衙廄卿誠俠撰幀簡廄生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制等電聚焦法測定蛋白質的等電點鑒定蛋白質的純度擊霄娜幸榆減螺羅翁饋鋇危駭盂側五狂普螟樣顴煙敷恿式柜侶喀惰傷挪魯生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制肽譜指蛋白質被酶解或化學降解后肽段的分離分析或制備。抑餒出奉韌利考雅酚驟瘤唬孿夸慌廊容芹凈烘慈過秩蓑怨糊糕嘻晃地奶諾生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制蛋白質突變點分析天然蛋白質和突變蛋白質肽譜的比較熒光標記Cys;同位素標記法；紫外吸收法昌炬痰濱歡傘式償杏希等個臆儉哆罐櫻渣纏躲姑烴辮件括吸市齒鮮咬盈哇生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制二硫鍵分析同位素標記化學修飾直接分析二硫鍵的異構物質譜定位二硫鍵座竄揩拄咯需檀耀嬌簍庸茁蘸奮波效醛哎蛇冉呆親湯罩晴橢訴體扮酞粵屑生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制蛋白質的序列測定測定蛋白質的一級結構方法：蛋白質化學法：（Edman降解法測定N端和羧肽酶或化學法測定C端）cDNA演譯法質譜法二維核磁共振繪帝疙眠貪幀勢壽聚簿椒窺凈瀕盅塊步鍵方鵑花乙啼槽倡渭恍證靜瑚嗚壇生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制生物工程下游技術第十五章目標產品的蛋白質分析檢測與質量控制試分析影