蜜柑大實蠅鑒定方法

中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準Methodsforidentificationofjapaneseor[Bactrocera(Tetradacus)tsuneonis(Miyake)]2004-06-01發(fā)布國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局本標準的附錄C為規(guī)范性附錄，附錄A.附錄B和附錄D為資料性附錄。本標準由國家認證認可監(jiān)督委員會提出并歸口。本標準由中華人民共和國廣東出入境檢驗檢疫局負責起草。本標準主要起草人：吳佳教、梁廣勤、梁帆、楊國海、胡學難、張志紅。本標準系首次發(fā)布的檢驗檢疫行業(yè)標準。本標準規(guī)定了蜜柑大實蠅的鑒定方法。本標準適用于進口蜜柑大實蠅寄主植物(參見附錄A)及其果實時對蜜柑大實蠅的鑒定。蜜柑大實蠅Bactrocera(Tetradacus)tsuneonis(Miyake),屬雙翅目(Diptera),實蠅科(Tephritid-ae)、寡毛實蠅亞科(Dacinae)、離腹寡毛實蠅屬(Bactracera),大實蠅亞屬(Tetradacus),主要以幼蟲隨被害果實(有時也能隨被害種子)作遠距離傳播，其卵也可隨果實傳播，圍蛹則可隨果實的包裝物或寄主植物所附土壤傳播。蜜柑大實蠅的形態(tài)特征、寄主植物、傳播途徑及生物學特性為制定鑒定方法提供了依據(jù)。3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標準。位于額區(qū)靠頭頂?shù)囊粚蚨娴睦@稱。下額眶景inferiorfronto-orbitalbristles位于額區(qū)上額眶繁之下的數(shù)對聚的統(tǒng)稱。位于頭頂，兩復跟之間，單眼三角區(qū)周田的二對鬃(分別稱內(nèi)頂聚和外頂聚)的統(tǒng)稱。中胸盾片的前側(cè)方略為隆出的區(qū)域。府胛與翅基之間的背側(cè)板上三角形隆起。小盾前鬃prescutellarbristles小盾片前方，近盾片后緣的一對鬃。小盾片上的一對或二對槃。中胸背板側(cè)緣，前翅翅基正上方的一對躲。后翅上鬃posterlorsuppa-alarbrlstles中胸青板后側(cè)角，翅基之上的一對聚。中側(cè)板聚mesopleuralbristles中胸側(cè)板上，在背側(cè)板胛之下的鬃。背側(cè)區(qū)上的二對梨，分別位于三角形背側(cè)板甲之端部和肩胖與背側(cè)板胛之間。肩板鬃scapularbrlstles位于中胸背板前緣的槃的統(tǒng)稱。中胸側(cè)板條mesopleuralstripes位于胸部側(cè)面，蓋住中胸上前側(cè)片后緣和上后側(cè)片前緣，并常延伸到下前側(cè)片上緣的一對黃色條帶。中胸背板縫mesomotalsuture中胸背板上由背側(cè)板胛內(nèi)緣至中胸背板中央的一條凹線。始于中胸縫或其之前，沿中胸背板側(cè)緣的一對黃色帶或黃色條。位于中胸背板中線上的一條黃色帶。4儀器、用具和試劑4.1儀器與用具體視顯微鏡、測微尺、干燥箱、冰箱、溫濕度計、量簡(50mL,500mL)、燒杯數(shù)個(大號、小號》、培養(yǎng)皿、小型干燥器、剪刀、解剖刀、解剖針、昆蟲針(00號、四號)、載玻片、蓋玻片、標簽紙、三級臺、三角紙、酒精燈、玻璃棉、養(yǎng)蟲杯、養(yǎng)蟲盒、養(yǎng)蟲箱、防蟲網(wǎng)罩《用40月紗網(wǎng)做村底)、白瓷盤(大號、小號)。10%氧氧化鈉(或10%氫氧化鉀)溶液、封片膠、苯酚、二甲苯，75%乙醇、丙三醇、水合三氯乙醛、阿拉伯樹膠粉、燕餾水。4.3試劑的配制4.3.110%氯氧化鈉(或10%氯氧化鉀)溶液的配制稱取氫氧化鈉(或氮氧化鉀)10g,加入100mL.蒸餾水，溶解后即可。4.3.2封片膠的配制稱取阿拉伯樹膠粉30g于燒杯中，加入50mL蒸餾水(最好是溫水以加速溶解)。溶解后，加入200mL水合三氯乙醛及20mL丙三醇，置于55℃~60℃的干燥箱內(nèi)。一天后，用玻璃棉過濾(過濾時仍置于55℃~60℃的干燥箱內(nèi)進行)。4.3.3保存液的配制量取75%乙醇100mL,加入1mL丙三醇。5實驗室鑒定5.1鑒定前的培養(yǎng)方法5.1.1即或幼蟲的培養(yǎng)將現(xiàn)場采取的卵和幼蟲部分個體制成鑒定標本，其余個體繼續(xù)用原寄主果實培養(yǎng)。具體的培養(yǎng)方法是；將帶有卵或幼蟲的寄主果實故在小號白瓷盤里，然后將小號白瓷盤故在裝有自來水的大號白瓷盤內(nèi)，再用防蟲網(wǎng)罩蓋住小號白瓷盤，罩的下方邊緣浸沒于大號白瓷盤內(nèi)的水中，置于溫度為22℃~28℃,濕度為50%～90%的環(huán)境中培養(yǎng)5d～10d。在樣品培養(yǎng)過程中，感染在果實中的卵或幼蟲發(fā)育至老熟幼蟲時將會彈跳入大號白瓷盤的水中，易于發(fā)現(xiàn)。5.1.2圍蛹的培養(yǎng)取一盛有半干濕(含水量約5%)潔凈細砂的養(yǎng)蟲杯，將現(xiàn)場檢疫收集的或室內(nèi)培養(yǎng)得到的圍蛹埋入距細砂表面3cm～5cm處(若是老熟幼蟲則可直接將其置于細砂表面，幼蟲將鉆入砂中化蛹),然后置于養(yǎng)蟲箱中培養(yǎng)，待成蟲羽化。培養(yǎng)環(huán)境溫度為22℃~28℃,濕度為50%～90%,培養(yǎng)過程中注意保濕。5.1.3初羽化成蟲的飼養(yǎng)成蟲羽化后，懸掛相應寄主果實切片于養(yǎng)蟲箱內(nèi)供其取食，待成蟲班紋的色澤和大小穩(wěn)定后(約需5d),收集成蟲并置于冰箱冷凍層0.5h～1h,殺死，待鑒定。5.2標本的預處理5.2.1成蟲還軟處理如果成蟲蟲體已干硬，在制作標本前應進行還軟處理。具體方法是：取一小型干燥器，加入干凈細砂約2cm,加水至漫過細砂表面約1em,并滴加數(shù)滴苯酚以防標本腐爛，上層故待還軟的成蟲標本，密閉一天即可。5.2.2成蟲標本制備取00號昆蟲針，借助三級臺插入三角紙尖角近處，然后將針尖端從成蟲中胸的腹面插人，再用四號昆蟲針插入三角紙另兩個角中央近邊緣處，固定，插上相應的標簽。5.2.3成蟲外生殖器封片標本的制作用解剖刀取成蟲標本腹節(jié)，置于預先配制好的10%氫氧化鈉(或10%氫氧化鉀)溶液的小燒杯中，浸泡12h(或煮沸3min)后取出，用燕餾水法凈，在體視顯微鏡下，用解剖針挑取所需的部位(陽莖或產(chǎn)卵器)并置于載玻片上，滴上封片膠，再用解剖針將所需的結(jié)構(gòu)展開，然后蓋上蓋玻片，附上相應的標簽。5.2.4幼蟲封片標本制備用昆蟲針在幼蟲體壁上刺截數(shù)個小孔，置于10%氫氧化鈉(或10%氫氧化鉀)溶液中浸泡12h(或意沸3min)后取出，用解剖針將幼蟲體中的殘留物擠壓出并用蒸餾水洗凈、在體視顯微鏡下挑取口鉤、前氣門和后氣門等部位，置于載玻片上，滴上封片膠，用解剖針將所挑取部位展開，最上蓋玻片并附上相應的標簽，5.3鑒定特征(見附錄B、附錄C和附錄D)體大型，黃褐色。雌蟲體長(不包括產(chǎn)卵器)10.0mm～12.0mm,翅長8.8mm～10.1mm。雄蟲體長9.9mm~11.0mm,翅長8.2mm~10.1mm。頭部黃色或黃褐色，單眼三角區(qū)黑色，顏面班棱形或長橢圓形，黑色；觸角黃褐色，觸角芒暗褐色，其基部近黃色。具一對上額距聚和二對下額眶聚，內(nèi)、外頂聚各一對。5.3.1.3.1中胸背板中胸背板紅褐色，中央有“人”字形的褐色縱紋，肩肝和背側(cè)板胛以及中胸側(cè)板條均為黃色，中胸側(cè)板條寬，幾乎伸抵肩胛的后緣，避后側(cè)黃色條始于中胸背板縫并終于翅內(nèi)聚之后，呈內(nèi)弧形彎曲，具縫后中黃色條。5.3.1.3.2小盾片小盾片黃色。翅膜質(zhì)透明，前緣帶寬，與R脈匯合，并在翅端R,脈的下方和M?脈之間略擴展；在R?脈與R?:脈之間的暗褐色前緣帶上有一空白透明長形條，無臀條。是近紅褐色，脛節(jié)色較深。5.3.1.3.5胸部的梨序小盾聚一對，無小盾前暴。后翅上熙及翅內(nèi)躲各一對，前翅上躲兩對(有時一對，或有時一側(cè)二根而另一側(cè)僅具一根),中側(cè)板梨缺，背側(cè)梨網(wǎng)對，肩板梨兩對(內(nèi)對常較外對弱小)。腹部橢圓形，黃褐色至紅褐色，背面具一暗褐色到黑色中橫帶，自腹基部延伸到腹部末端或在末端之前終止；第三腹節(jié)背板前緣有一暗褐色到黑色橫帶，與上述中縱帶相交呈“十”字形；第一節(jié)呈長方形，第四和第五節(jié)背板兩側(cè)各有一對暗褐色到黑色短帶，第二至四節(jié)背板側(cè)緣均有照色短條斑紋。雌蟲第六節(jié)背板陷于第五節(jié)的下方，第七至九節(jié)形成產(chǎn)卵器。產(chǎn)卵器的組成是，第七節(jié)為基節(jié)，形如瓶狀，暗褐色；第八節(jié)為中節(jié)，具縫區(qū)；第九節(jié)為產(chǎn)卵管節(jié)，端呈三葉狀，長度在2.5mm以下，具端前剛毛四對。產(chǎn)卵器基節(jié)長度約等于腹部第二至五節(jié)長度之和，其后端狹小部分短于腹部第五背板長。雄蟲第三腹節(jié)背板具櫛毛，第五腹板后緣向內(nèi)凹陷的深度達此腹板長度的五分之一。陽莖端暗褐色，其上透明的蘑菇狀物痛半部密生透明小刺。5.3.2.1三齡幼蟲體長5.0mm~15.5mm。口鉤發(fā)達，黑色，長0.21mm～0.38mm。前氣門丁字形，外緣呈較平直，略彎曲，有指突33個～35個。體節(jié)第二至四節(jié)前端有小刺帶，腹面僅第二至三節(jié)有刺帶。后氣門具氣門裂三個，氣門毛五叢。5.3.2.2二齡幼蟲體長3.4mm～8.0mm?？阢^長0.16mm～0.17mm。前氣門外綜中央深凹，有指突28個~30個。后氣門具氣門裂三個，氣門毛五叢。5.3.2.3一齡幼蟲體長1.25mm～3.50mm?？阢^小形，長0.04mm～0.07mm,前氣門尚未發(fā)現(xiàn)，后氣門甚小，由二片氣門裂組成，裂孔呈馬踏形，氣門毛四叢。卵長1.33mm～1,60圍蛹長8.0mm～9.8mm,桶圓形，黃褐色至淡黃色。6鑒定結(jié)果判定6.1亞科的判定翅Sc脈突然朝前彎曲成近90°,外彎段變?nèi)酰K于前緣脈的斷裂處，R?脈的背側(cè)有小鬃；cup室具一尖角延伸。單眼后槃均細長且通常為黑色。中胸背板具肩板祭，上前側(cè)片的后區(qū)為一頂縫將上前側(cè)片的其余部分清楚地分離。翅通常沿R,+。脈背而遠至rm橫脈處具小聚。6.2屬的判定觸角第三節(jié)長至少為其寬的三倍；翅cup室狹，其延伸部分甚長，翅上斑紋通常匯合成前緣帶和臀條。腹部各節(jié)背板分離。6.3亞屬的判定體大型(長10.0mm以上);中胸背板縫側(cè)黃色條前方向內(nèi)彎，無小盾前躲，具一對小盾聚。腹部第一節(jié)背板近長方形，第三至五節(jié)背板呈圓形，產(chǎn)卵器基節(jié)呈球狀。雄蟲第三節(jié)背板具櫛毛，加翅葉不明顯。6.4種的判定以成蟲形態(tài)特征為依據(jù)，符合上述形態(tài)特征的個體可確定為蜜柑大實蠅。成蟲以外蟲態(tài)的形態(tài)特征描述僅做參考。7.1成蟲標本及玻片標本的保存將制好的成蟲標本或相應的玻片標本，置于干燥箱中干燥數(shù)日，然后移入標本柜中保存，保存過程中注重防蟲和防潮。7.2幼蟲、圍蛹標本的保存將采集到的