實驗五土壤中微生物的分離計數(shù)

關(guān)于實驗五土壤中微生物的分離計數(shù)一、實驗?zāi)康模簩W(xué)習(xí)微生物稀釋平板計數(shù)及劃線分離技術(shù)二、實驗原理:采用適宜（選擇）培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，或加入某種抑制劑有利于目標(biāo)微生物的生長，從而分離獲得目標(biāo)微生物的純培養(yǎng)：常用稀釋平板分離法和劃線分離法在固體培養(yǎng)基上形成單個菌落。依據(jù)一個單細(xì)胞在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)后可以長成一菌落從而推算樣品中含有多少細(xì)菌的活菌數(shù)目。第2頁,共14頁，2024年2月25日，星期天取一瓶牛肉膏培養(yǎng)基（250ml／瓶）熔化后每組倒4個平皿。（每個人倒1個平皿用于劃線分離）三、實驗步驟：（一）土樣的采集采集土樣，扒開表土層大約5cm厚，取土樣10g左右，裝于滅菌后的牛皮袋中，封口帶回。

（二）土壤懸液制備準(zhǔn)備1瓶土壤懸液：稱10克土壤放入帶玻璃珠的90ml瓶裝無菌水中，振蕩（10min），使土樣分散。（三）倒固體瓊脂培養(yǎng)基平板第3頁,共14頁，2024年2月25日，星期天

（四）懸液稀釋

無菌操作采用－4，－5，－6稀釋液涂布牛肉膏蛋白胨平板;每個稀釋度2個重復(fù)。每人用剩下的1個平板做劃線分離，從三角瓶中取土壤懸液作劃線分離。90毫升無菌水10克土樣10-310-210-410-510-1第4頁,共14頁，2024年2月25日，星期天第5頁,共14頁，2024年2月25日，星期天(五)平板涂布簡單易行，但易造成機(jī)械損傷Liquidspecimenisspreadonthesurfaceofsolidagarwithasterilebentglassrod.第6頁,共14頁，2024年2月25日，星期天（六）培養(yǎng)：將平板用報紙包好（每個平板方向一致），寫上班級和姓名，皿底朝上，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)(溫度37℃)。第7頁,共14頁，2024年2月25日，星期天（七）細(xì)菌計數(shù)結(jié)果稀釋度10-510-610-7平板121212菌落數(shù)各濃度平均菌落數(shù)土壤中含細(xì)菌數(shù)量第8頁,共14頁，2024年2月25日，星期天四、平皿劃線分離法第9頁,共14頁，2024年2月25日，星期天特點(diǎn)：快速、方便。

分區(qū)劃線（適用于濃度較大的樣品）

連續(xù)劃線（適用于濃度較小的樣品）第10頁,共14頁，2024年2月25日，星期天第11頁,共14頁，2024年2月25日，星期天五、試管斜面接種1.兩支試管呈“V”字形

2.拔下試管塞3.火焰上微燒一周

4.接種環(huán)灼燒、冷卻5.接種、劃線

6.塞上塞子，灼燒接種環(huán)第12頁,共14頁，2024年2月25日，星期天六、思考題(1)要使平板菌落計數(shù)準(zhǔn)確，需要掌握哪幾個關(guān)鍵?為什么?(2)當(dāng)你的平板上長出的菌落不是均勻分散的而是集中在一起時，你認(rèn)為問題出在哪里?第13