臨床學(xué)液一般檢驗(yàn)

臨床學(xué)液一般檢驗(yàn)

第一節(jié)血液標(biāo)本采集與處理

血液標(biāo)本的采集是分析前質(zhì)量控制的重在環(huán)節(jié)，可分為

毛細(xì)血管采血法和靜脈采血法。需要血量較少的檢驗(yàn)，如手

工法或半自動(dòng)血細(xì)胞分析儀血細(xì)胞計(jì)數(shù)，常用毛細(xì)管采血

法。需血量較多檢驗(yàn)，如紅細(xì)胞比積、臨床生化檢驗(yàn)、全自

動(dòng)血細(xì)胞分析血細(xì)胞計(jì)數(shù)一般用靜脈采血法。特別是全自動(dòng)

血細(xì)胞分析儀，無論儀器進(jìn)樣品多少，為防止血樣中小凝塊

的形成，保證儀器進(jìn)樣時(shí)標(biāo)本能充分混勻，原則上均應(yīng)使用

靜脈血。毛細(xì)血管血和靜脈血之間，無論細(xì)胞成分或化學(xué)組

成，都存在程度不同的差異。在判斷和比較所得結(jié)果時(shí)必須

予以考慮。某些生理因素，如吸煙、進(jìn)食、運(yùn)動(dòng)和情緒激動(dòng)

等，均可影響血液成分。甚至一日之間，白細(xì)胞總數(shù)、嗜酸

性粒細(xì)胞絕對值、淋巴細(xì)胞各亞群的比例等參數(shù)均有一定的

波動(dòng)。服用某些藥物可能明顯干擾實(shí)驗(yàn)，得出假象結(jié)果。因

此采血時(shí)，應(yīng)詢問是否服用過明顯干擾試驗(yàn)的藥物（如阿司

匹林對血小板聚集的抑制作用）盡可能在一定時(shí)間在無干擾

因素條件下進(jìn)行，以便于比較和動(dòng)態(tài)分析。

、毛細(xì)血管采血法

成人常用手指或耳垂采血。耳垂采血痛感較輕，操作方

便，適用于反復(fù)采集。但耳垂外周血循環(huán)較差，血細(xì)胞容易

停滯，受氣溫影響較大，檢查結(jié)果不夠恒定。紅細(xì)胞、白細(xì)

胞、血紅蛋白和紅細(xì)胞比積結(jié)果均比靜脈血高，特別是冬季

波動(dòng)幅度更大。手指采血操作方便，可獲較多血量。嬰幼兒

手指太小可用拇指或足跟采血。嚴(yán)重?zé)齻颊?，可選擇皮膚

完整處采血，采血器用三棱針或?qū)Ｓ玫?'采血針〃為好，特別

是后者有利于采血技術(shù)的質(zhì)量控制，為了避免交叉感染，應(yīng)

嚴(yán)格實(shí)行一人一針制。應(yīng)注意穿刺深度要適當(dāng)，切忌用力擠

壓，以免混入組織液，影響檢驗(yàn)結(jié)果。

二、靜脈采血法

位于體表的淺靜脈均可作為采血部位，通常采用肘部靜

脈，肘部靜脈不明顯時(shí)，可用手背靜脈或內(nèi)踝靜脈。幼兒可

于頸外靜脈采血。根據(jù)采血量可選用不同型號注射器配相對

應(yīng)的針頭。某些特殊的檢查，血小板的激活，要使用塑料注

射器和硅化處理后的試管或塑料封閉式采血管。采血前應(yīng)向

病人作適當(dāng)解釋，以消除不必要的疑慮和恐懼。如遇個(gè)別病

人采血后發(fā)生暈厥，可讓其平臥，通常休息片刻即可恢復(fù)。

必要時(shí)可嗅芳香氨酊，針刺或指掐人中，合谷等穴位。止血

帶壓迫時(shí)間不宜過長，最好不超過半分鐘，以避免瘀血和血

液濃縮，有試驗(yàn)證明，壓迫時(shí)間過長，可引起纖溶活性增強(qiáng),

血小板釋放及某些因子活性增強(qiáng)，影響某些實(shí)驗(yàn)結(jié)果。注射

器和容器必須干燥，抽血時(shí)避免產(chǎn)生大量泡沫，然后將血液

徐徐注入標(biāo)本容器，否則可能導(dǎo)致溶血。溶血標(biāo)本不僅紅細(xì)

胞破壞，紅細(xì)胞比積降低，血漿（清）化學(xué)組成也會(huì)產(chǎn)生變

化，影響鉀、鎂、轉(zhuǎn)氨酶等多項(xiàng)指標(biāo)的測定。目前國外已經(jīng)

普及（國內(nèi)已開始生產(chǎn)）的封閉式真空采血器，既有利于標(biāo)

本的收集運(yùn)送和保存，又便于防止血液交叉感染，已開始在

國內(nèi)推廣使用。

三、真空采血法

又稱為負(fù)壓采血法。各種真空定量貯存抗凝試管，根據(jù)

需要標(biāo)有不同的色碼備用，適于不同的檢驗(yàn)項(xiàng)目。該法采用

封閉式采血，血樣無需容器之間的轉(zhuǎn)移，減少了溶血現(xiàn)象，

能有效保護(hù)血液有形成分，保證待驗(yàn)血標(biāo)本原始性狀的完

整，使檢驗(yàn)結(jié)果更接近真實(shí)，為臨床診斷提供可靠依據(jù)。但真

空采血管價(jià)格較高，有待進(jìn)一步降低成本。

四、抗凝劑的選用

抗凝劑種類很多，性質(zhì)各異，必須根據(jù)檢驗(yàn)適當(dāng)選擇，

才能獲得預(yù)期的結(jié)果。現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)常用抗凝劑及其使用方法簡

述如下：

1、乙二胺四乙酸鹽：EDTA有二鈉、二鉀和三鉀鹽。

均可與鈣離子結(jié)合成螯合物，從而阻止血液凝固。

EDTA鹽經(jīng)1000攝氏度烘干，抗凝作用不變，通常配

成15g/L水溶液，每瓶0.4ml,干燥后可抗凝5ml血液。

EDTA鹽對紅、白細(xì)胞形態(tài)影響很小根據(jù)國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委

員會(huì)1993年文件建議，血細(xì)胞計(jì)數(shù)用EDTA二鉀作抗凝劑

用量為EDTA-K21.5-2.2Mg(4.45±0.85pmol)/ml

血液。EDTA-NA2與EDTA-K2對血細(xì)胞計(jì)數(shù)影響均較小，

但二鈉溶解度明顯低于二鉀，有時(shí)影響抗凝效果，其他抗凝

劑不適合于血細(xì)胞計(jì)數(shù)。

2.枸椽酸鈉：枸椽酸鹽可與血中鈣離子形成可溶性螯合物，

從而阻止血液凝固。

枸椽酸鈉有多種晶體。通常用前者配成109mmol/l

(32g/l)水溶液(也有用106mmol/l濃度),與血液按1：

9或1：4比例使用。枸椽鈉對凝血V因子有較好的保護(hù)作

用，使其活性減低，故常用于凝血象的檢查，也用于紅細(xì)胞

沉降率的測定。因毒性小，是輸血保養(yǎng)液中的成分之一。

由于枸椽酸鈉溶液是按體積比例加入血液內(nèi)達(dá)到抗凝

目的，而抗凝劑主要是作用于積壓漿成分，通常所謂的1：

9比例抗凝的概念是指1份體積的抗凝劑作用9份紅細(xì)胞比

積正常血液內(nèi)的血漿成分而言。所以結(jié)果對貧血或紅細(xì)胞增

多癥患者的血液仍按L9的比例加入抗凝劑時(shí)，就會(huì)發(fā)生

抗凝劑不足或相對過多，這將明顯地影響凝象檢查結(jié)果。為

了避免這種現(xiàn)象，有文獻(xiàn)報(bào)道應(yīng)根據(jù)抗凝劑用量(ml)

=0.00185x血量x(100-病人紅細(xì)胞比積%)這一公式,

來計(jì)算抗凝劑的用量。

3.草酸鈉：草酸鹽可與血中鈣離子生成草酸鈣沉淀，從而阻

止血液凝固。

草酸鈉通常用0.1mol/L濃度，與血液按1：9比例使

用，過去主要用于凝血象檢查。實(shí)踐發(fā)現(xiàn)草酸鹽對凝血V因

子保護(hù)功能差，影響凝血酶原時(shí)間測定效果；另外由于草酸

鹽與鈣結(jié)合形成的是沉淀物，影響自動(dòng)凝血儀的使用，因此,

多數(shù)學(xué)者認(rèn)為凝血象檢查選用枸椽酸鈉為抗凝劑更為適宜。

4.肝素：肝素廣泛存在于肺、肝、脾等幾乎所有組織和血管

周圍肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的顆粒中。它是一種含硫酸基

團(tuán)

的粘多糖，是分散物質(zhì)，平均分子量為15000

(2000-40000)o肝素可加強(qiáng)抗凝血酶III(AT-III)滅活

絲氨酸蛋白酶，從而具有阻止凝血酶形成，對抗凝血酶和阻

止血小板聚集等多種作用。每毫升血液抗凝需要肝素

15±2.5Iu.盡管肝素可以保持紅細(xì)胞的自然形態(tài)，但由于

其常可引起白細(xì)胞聚集并使用涂片在羅氏染色時(shí)產(chǎn)生藍(lán)色

背景，因此肝素抗凝血不適用血液學(xué)的一般檢查。肝素是紅

細(xì)胞透滲脆性試驗(yàn)理想的抗凝劑。

五.血涂片的制備

血涂片的顯微檢查是血液細(xì)胞學(xué)檢查的基本方法，臨床

上應(yīng)用極為廣泛，特別是對于各種血液病的診斷具有重要的

價(jià)值，近年來血細(xì)胞分析儀的廣泛應(yīng)用，血涂片的觀察也可

作為判斷儀器結(jié)果的簡易方法。因此制備厚薄適宜，分布均

勻，染色良好的血涂片是血液學(xué)檢查的重要技術(shù)之一。

【器材】清潔、干燥、無塵、無油脂的載玻片

新載玻片常帶有游離堿質(zhì),須用濃度約為Imol/L的HC1

浸泡24h,再用清水徹底沖洗，干燥后備用。舊載玻片要用

含洗滌劑的清水中煮沸20min,洗掉血膜，再用清水反復(fù)沖

洗，蒸儲(chǔ)水最后浸洗，干燥備用。

【操作】

血涂片制備方法很多，目前臨床普遍采用的是手工推片

法。取末梢或靜脈血1滴，置載玻片一端三分之一處，取

另一邊緣光滑的推片，放在血滴前面慢慢后移，接觸血滴后

稍停。血液即沿推片散開，將推片與載片保持30?45°角,

向前平穩(wěn)均勻推動(dòng)推片，載片上便留下一層薄血膜。血涂片

制成后，立即在空氣中揮動(dòng)，使其迅速干燥，以免血細(xì)胞變

形。血膜干燥后，用鉛筆在血膜的一端寫上病人姓名編號。

【附注】

一張良好的血片，厚薄要適宜，頭體尾要明顯，細(xì)胞分

布要均勻，膜的邊緣要整齊，并留有一定的空隙。涂片時(shí)，

血滴愈大，角度愈大，推片速度愈快則血膜愈厚，反之血膜

愈薄。太薄的血膜片50%的白細(xì)胞集中于邊緣或尾部，不利

于白細(xì)胞分類。如果血膜分布不勻，主要是推片不整齊，用

力不均勻，載片不清潔所致。

六、血涂片染色

1.瑞氏染色法(Wrightstaining)

本法的特點(diǎn)是將固定和染色合并在一起進(jìn)行，手續(xù)簡

便，染色時(shí)間短，對白細(xì)胞中的特異性顆粒著色較好，但

對核的著色較差。

(1)原理瑞氏染粉是由伊紅和美藍(lán)混合后組成的一種中性

鹽染料。伊紅是一種酸性染料，為伊紅鈉鹽，其有色部分為

陰離子；美藍(lán)是一種堿性染料，為氯化美藍(lán)，有色基團(tuán)為陽

離子。如以M+代表美藍(lán)，以E-代表伊紅，其反應(yīng)式為：

M+Cl-+Na+E-MEI+NaCl

美藍(lán)伊紅伊紅化美藍(lán)(瑞士染料)

將適量的ME溶解在甲醇中，即成為瑞氏染液。甲醇的

作用可使ME溶解，解離為M+和E-,這兩種有色離子可以

選擇性地吸附血細(xì)胞內(nèi)的不同成分而著色。甲醇的另一個(gè)作

用是有很強(qiáng)的脫水作用，可將細(xì)胞固定為一定形態(tài)，當(dāng)細(xì)胞

發(fā)生凝固時(shí)，蛋白質(zhì)被沉淀為顆粒狀或者網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，增加細(xì)

胞結(jié)構(gòu)的表面積，提高對染料的吸附作用，增強(qiáng)染色效果。

細(xì)胞的著色過程是染料透入被染物并存留其內(nèi)部的一種

過程，此過程既有物理吸附作用，又有化學(xué)親和作用。各種

細(xì)胞及細(xì)胞的各種成分由于其化學(xué)性質(zhì)不同，對各種染料的

親和力也不一樣，因此，在血片上可以見到不同的著色。細(xì)

胞中堿性物質(zhì)與酸性染料伊紅結(jié)合染成紅色，因此該物質(zhì)又

稱為嗜酸性物質(zhì)。如，紅細(xì)胞中的血紅蛋白，嗜酸性粒細(xì)

胞胞漿中的顆粒為堿性物質(zhì)，這些物質(zhì)可與伊紅結(jié)合染成紅

色。細(xì)胞中的酸性物質(zhì)可與染液中的堿性染料美藍(lán)結(jié)合染成

藍(lán)色，該物質(zhì)又稱嗜堿性物質(zhì)，如：嗜堿性粒細(xì)胞中的顆粒

為酸性物質(zhì)可與堿性染料美藍(lán)結(jié)合染成藍(lán)色。細(xì)胞核主要由

脫氧核糖核酸和強(qiáng)堿性的組蛋白、精蛋白等形式的核蛋白

所組成，這種強(qiáng)堿性的物質(zhì)與瑞氏染液中的酸性染料伊紅

結(jié)合成紅色，但因?yàn)楹说鞍字羞€有少量的弱酸性物質(zhì)，它們

又與染料中的堿性染料美藍(lán)作用染成藍(lán)色。但因含量太少,

藍(lán)色反應(yīng)極弱，故核染色呈現(xiàn)紫紅色。幼稚紅細(xì)胞的胞漿

和細(xì)胞核的核仁中含有酸性物質(zhì)，它們與染液中的堿性染料

美藍(lán)有親和力，故染成藍(lán)色。當(dāng)細(xì)胞含酸、堿性物質(zhì)各半

時(shí)，它們既與酸性染料作用，又與堿性染料作用，染成紅

藍(lán)色或灰紅色，即所謂多嗜性。當(dāng)胞漿中的酸性物質(zhì)消失時(shí),

只與染液中的伊紅起作用，則染成紅色，即所謂正色性。

⑵試劑

①.瑞氏染液

瑞氏染料(粉)1.0g

純甲醇(AR級以上)600.0ml

將全部染料放入乳缽內(nèi)，先加少量甲醇慢慢地研磨(至少半

小時(shí))，以使染料充分溶解，再加一些甲醇混勻，然后將溶

解的部分倒入潔凈的棕色瓶內(nèi)，乳缽內(nèi)剩余的未溶解的染

料，再加入少許甲醇細(xì)研，如此多次研磨，直至染料全部溶

解，甲醇用完為止，密閉保存。

②.磷酸鹽緩沖液(pH6.4?6.8)

磷酸二氫鉀(KH2P04)0.3g

磷酸氫二鈉(Na2HP04)0.2g

蒸儲(chǔ)水加至1000.0ml

配好后用磷酸鹽溶液校正pH,如無緩沖液可用新鮮蒸饋水

代替。

⑶血涂片制作及染色操作

①用蠟筆在血膜兩頭劃線，以防染液溢出，然后將血膜平放

在染色架上。

②用瑞氏染液3?5滴覆蓋整個(gè)血膜，固定細(xì)胞0.5?1

分鐘。

③滴加等量或稍多的緩沖液，用吸耳球?qū)⑵渑c染液吹勻，或

者搖動(dòng)玻片染色5?10分鐘。

④慢慢搖動(dòng)玻片，然后用流動(dòng)水從玻片的一側(cè)沖去染液，待

血片自然干燥后（或用濾紙吸干），即可鏡檢。

2.姬姆薩染色法（Giemsastaining）

⑴原理姬姆薩染料由天青、伊紅組成，其染色原理與瑞氏

染色法基本相同，但姬姆薩染色法對細(xì)胞核著色較好，結(jié)構(gòu)

顯示更清晰，而對胞漿和中性顆粒則染色較差。

⑵試劑

姬姆薩（Giemsa）染料1.0g甘油66.0ml甲醇66.0ml

將1.0g姬姆薩染料粉末全部倒入盛有66.0ml甘油

的圓錐燒瓶內(nèi)，在56℃的水浴鍋上加熱90?120分鐘，

使染料與甘油充分混勻溶解，然后加入60C預(yù)熱的甲醇，

充分搖勻后置棕色瓶中，于室溫下7天，過濾后才能使用。

此種染液放置時(shí)間愈久，細(xì)胞著色越佳。

⑶操作

①.將干燥血片用甲醇固定3?5分鐘。

②.將固定的血片置于被PH6.4?6.8磷酸鹽緩沖液（同

瑞氏染色）稀釋10?20倍的姬姆薩染液中，浸染10?

30分鐘（標(biāo)本較少可用滴染法）。

③.取出用水沖洗，待干后鏡檢。

3.瑞氏姬姆薩混合一次染色法I液：取瑞氏染粉1g、姬

姆薩染粉0.3g,置潔凈研缽中，加少量甲醇（分析純）研磨

片刻，吸出上層染液。再加少量甲醇，繼續(xù)研磨，再吸出上

液。如此連續(xù)幾次，共用甲醇500nli，收集于棕色瓶中，每

天早、晚各振搖3分鐘，共5天，以后存放1周即能使用。

II液：pH6.4?6.8磷酸鹽緩沖液

磷酸二氫鉀（無水）6.64g磷酸氫二鉀（無水）2.56g加

少量蒸儲(chǔ)水溶解，用磷酸鹽調(diào)整pH,加水至1000ml。

【操作】平置玻片于染色架上，滴加染液3?5滴，使其

迅速蓋滿血膜，約1分鐘后，滴加緩沖液5?10滴，輕

輕搖動(dòng)玻片或?qū)?zhǔn)血片吹氣，與染液充分混合，5?10分鐘

后用水沖去染液，待干。

4.血涂片的質(zhì)量控制

1）血膜片的質(zhì)量要求是厚薄均勻適度，低倍鏡下觀察全片，

細(xì)胞不重疊，頭尾及兩側(cè)有一定的空隙，血膜頭部有明確的

病人標(biāo)志。

2）一些體積較大的特殊細(xì)胞常在血膜的尾部出現(xiàn)，因此蠟筆

劃線時(shí)應(yīng)注意保存血膜尾部細(xì)胞，血膜必須充分干燥，否則

在染色過程中容易脫落。

3）配制染料須用優(yōu)質(zhì)甲醇，稀釋染液用緩沖液，因?yàn)榫彌_液

的pH對細(xì)胞染色的影響很重要。在偏酸性環(huán)境中正電荷增

多，在偏堿性環(huán)境中負(fù)電荷增多，又因?yàn)榧?xì)胞著色對氫離子

濃度十分敏感。如果染色偏堿，原是紫紅色的中性顆粒則染

成深藍(lán)色，造成識別困難。沖洗須用中性水，雖亦可用自來

水（但不能保持穩(wěn)定）。

4）對所用染液應(yīng)進(jìn)行預(yù)染試驗(yàn)，新配制的染液放置一段時(shí)間

后其中的美藍(lán)逐漸氧化成天青B，天青B對細(xì)胞核的著色效

果比美藍(lán)好，因此，瑞氏染液放置時(shí)間越長染色效果越好，

臨床上稱之為成熟。判斷染液成熟程度的簡易方法是用正常

優(yōu)質(zhì)血片做預(yù)染試驗(yàn)，先用低倍鏡觀察載有染液的血片，認(rèn)

為著色滿意后，再按照染色后沖洗順序最后用油鏡鏡檢，這

樣不僅可了解染液的成熟程度，而且還可以選擇合適的染色

時(shí)間，供臨床標(biāo)本染色時(shí)參考。

5）染液與緩沖液的比例要適當(dāng)，以1：27為宜。一般說來緩

沖液稀釋度愈大，染色時(shí)間愈長，細(xì)胞著色愈勻稱、鮮艷。

緩沖液和染液量要充足，否則染液很快蒸發(fā)，染料沉淀于

細(xì)胞上，使細(xì)胞深染而無法檢查。細(xì)胞較多較厚的涂片（如

紅細(xì)胞增多癥）染液應(yīng)多些。細(xì)胞較少的涂片染液應(yīng)少些。

6）染色時(shí)間與染液濃度、室溫高低、細(xì)胞多少有關(guān)，染液愈

淡，室溫越低，細(xì)胞愈多，所需時(shí)間越長，應(yīng)適當(dāng)增加染

液濃度，因此必須根據(jù)情況靈活掌握。

7）血涂片制作及染色操作，染色良好的血膜片，外觀呈淺紅

色，紅細(xì)胞呈粉紅色，白細(xì)胞核呈暗紫紅色，染色質(zhì)結(jié)構(gòu)

能辨，粒細(xì)胞的顆粒呈固有種異顏色。

七、白細(xì)胞計(jì)數(shù)

一.目的：規(guī)范白細(xì)胞計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)操作

二.適用范圍：適用于手工白細(xì)胞計(jì)數(shù)

三.支持性文件：全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第三版

四.原理:血液經(jīng)稀酸稀釋后，成熟紅細(xì)胞全部被溶解，注入

汁數(shù)池后，在顯微鏡下計(jì)數(shù)白細(xì)胞。

五.儀器OLYMPUS顯微鏡、血球計(jì)數(shù)板

六.試劑:冰醋酸2ml,蒸儲(chǔ)水98ml,10g/L亞甲藍(lán)溶液3滴,

混勻過濾后備用。

七.樣本要求：靜脈采血使用EDTA-K2抗凝。毛細(xì)血管采血應(yīng)

擦去第一滴血，以免混入組織液影響結(jié)果。標(biāo)本采集完成放

置5-10分鐘后測定。

八.操作步驟：

1.小試管1支，加白細(xì)胞稀釋液0.38mlo

2.用微量吸管準(zhǔn)確吸取末梢血20^1,擦去管尖外部余血，

將吸管插入小試管中的稀釋液底部，輕輕將血放出，并吸取

上層清液，清洗吸管二次，混勻。

3.充池，靜置2?3min,待白細(xì)胞下沉。

4.用低倍鏡計(jì)數(shù)四角4個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)。

5.計(jì)算

白細(xì)胞數(shù)/L=4個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)*10*20*104即4

個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)*50*1。6=白細(xì)胞數(shù)兒

6.結(jié)果

九.參考范圍：

成人：（4—10）X109/L

兒童：（5一12）X109/L

新生兒：（15—20）X109/|_

十.注意事項(xiàng)：

1.采血時(shí)不能擠壓過甚，因此針刺深度必須適當(dāng)。

2大小方格內(nèi)壓線細(xì)胞應(yīng)按數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右的原則

進(jìn)行計(jì)數(shù)。

3稀釋液要過濾，小試管、計(jì)數(shù)板均須清潔，以免雜質(zhì)、微

粒等被誤認(rèn)為細(xì)胞。

4.一些貧血患者血液中有核紅細(xì)胞增多，影響白細(xì)胞計(jì)數(shù),

應(yīng)校正除去。

校正公式：白細(xì)胞校正數(shù)=X-100/100+Y

X=未校正前白細(xì)胞數(shù)；

丫=在分類計(jì)數(shù)時(shí)，計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞的同時(shí)計(jì)數(shù)到的有核

紅細(xì)胞數(shù)。

5.計(jì)數(shù)時(shí)，兩次重復(fù)計(jì)數(shù)誤差不得超過10%。

八、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)

【操作】見血圖片染色

【參考值】

白細(xì)胞總數(shù)成人：(4?10)X109/L(4000~10000/mm3)；

兒童：(5-12)X109/L；新生兒：(15?20)X109/L.

白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)中性桿狀核：0.01-0.05；中性分葉核：

0.50-0.70；嗜酸粒細(xì)胞：0.005-0.05；嗜堿粒細(xì)胞：0-0.01；

淋巴細(xì)胞：0.20?0.40；單核細(xì)胞：0.03?0.08.

【臨床意義】

白細(xì)胞數(shù)高于10于()9/L(10000/mm3)稱白細(xì)胞增多；

低于40x10%(4000/mm3)稱白細(xì)胞減少。白細(xì)胞總數(shù)的

增、減主要受中性粒細(xì)胞的影響。

1.中性粒細(xì)胞

(1)中性粒細(xì)胞增多反應(yīng)性粒細(xì)胞增多是機(jī)體對各

種病因刺激產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)，增多的粒細(xì)胞大多為成熟的分

葉核粒細(xì)胞或較成熟的桿狀核粒細(xì)胞。見于：①感染：化膿

性感染為最常見的原因，如流行性腦脊髓膜炎、肺炎、闌尾

炎等；還見于某些病毒感染、某些寄生蟲感染。②嚴(yán)重組織

損傷：如較大手術(shù)后、急性心肌梗死后較常見。③急性大出

血、溶血：如脾破裂或?qū)m外孕、急性溶血等。④其他：如中

毒、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及應(yīng)用某些藥物如皮質(zhì)激素等。

異常增生性粒細(xì)胞增多見于急、慢性粒細(xì)胞性白血病，

骨髓增殖性疾病等。

(2)中性粒細(xì)胞減少見于：①某些感染：病毒感染是

常見的原因，如流行性感冒、麻疹、病毒性肝炎、水痘、風(fēng)

疹等。也見于傷寒、瘧疾等。②某些血液?。喝缭偕系K性

貧血、粒細(xì)胞缺乏癥及惡性組織細(xì)胞病等。③藥物及理化因

素的作用：如氯霉素、抗腫瘤藥物、抗結(jié)核藥物、抗甲狀腺

藥物、X線及放射性核素等。④自身免疫性疾患：如系統(tǒng)性

紅斑狼瘡等。⑤脾功能亢進(jìn)：如肝硬化等。

(3)中性粒細(xì)胞的核象變化：中性粒細(xì)胞的核象是指

粒細(xì)胞的分葉狀況，它反映粒細(xì)胞的成熟程度。

①核左移：外周血中桿狀核增多，并可出現(xiàn)晚幼粒、中

幼粒及早幼粒等細(xì)胞，稱為核左移。常見于各種病原體所致

的感染、大出血、大面積燒傷、大手術(shù)、惡性腫瘤晚期等。

②核右移：正常人血中的中性粒細(xì)胞以3葉者為主，若

中性粒細(xì)胞分葉過多，大部分為4?5葉或更多，則稱為核

右移。核右移常伴白細(xì)胞總數(shù)減少，為骨髓造血功能減退或

缺乏造血物質(zhì)所致。常見于巨幼細(xì)胞貧血、惡性貧血，若在

疾病進(jìn)行期突然發(fā)現(xiàn)核右移，表示預(yù)后不良。

(4)中性粒細(xì)胞的中毒性改變、大小不均、中毒顆粒、

空泡變性、核變性等可單獨(dú)或同時(shí)出現(xiàn)。常見于各種嚴(yán)重感

染、中毒、惡性腫瘤及大面積燒傷等。

2.嗜酸粒細(xì)胞

(1)嗜酸粒細(xì)胞增多見于：①變態(tài)反應(yīng)性疾?。喝缰?/p>

氣管哮喘、藥物過敏反應(yīng)、熱帶嗜酸粒細(xì)胞增多癥以及某些

皮膚病等；②寄生蟲??；③某些血液病：如慢性粒細(xì)胞白血

病、嗜酸粒細(xì)胞白血病。

(2)嗜酸粒細(xì)胞減少見于傷寒、副傷寒、應(yīng)激狀態(tài)等。

3.嗜堿粒細(xì)胞

嗜堿粒細(xì)胞增多可見于慢性粒細(xì)胞白血病等。其減少一

般無臨床意義。

4.淋巴細(xì)胞

(1)淋巴細(xì)胞增多見于：①感染性疾?。褐饕獮椴《?/p>

感染，如麻疹、風(fēng)疹、水痘、流行性腮腺炎、傳染性單核細(xì)

胞增多癥等。也可見于某些桿菌感染，如結(jié)核病、百日咳、

布氏桿菌病。②某些血液病。③急性傳染病的恢復(fù)期。

(2)淋巴細(xì)胞減少主要見于應(yīng)用皮質(zhì)激素、烷化劑，

接觸放射線，免疫缺陷性疾病等。

5.單核細(xì)胞

單核細(xì)胞增多見于：①生理性：嬰幼兒。②某些感染：

如感染性心內(nèi)膜炎、活動(dòng)性結(jié)核病、瘧疾及急性感染的恢復(fù)

期。③某些血液?。喝鐔魏思?xì)胞白血病。

九、血小板計(jì)數(shù)

［原理］血小板計(jì)數(shù)(bloodplateletcount,BPC)的基本原理,

同血液的白細(xì)胞或紅細(xì)胞計(jì)數(shù)法。

［方法學(xué)評價(jià)］血小板由于體積小，特別是容易發(fā)生粘附、聚

集和變性破壞，故常難以準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。目前血小板計(jì)數(shù)方法主

要有兩大類：血細(xì)胞分析儀法和目視顯微鏡計(jì)數(shù)法(目視

顯微鏡計(jì)數(shù)法有普通光學(xué)顯微鏡計(jì)數(shù)法和相差顯微鏡法。

1.普通光鏡直接計(jì)數(shù)法：因稀釋液成分，有多種計(jì)數(shù)方法。

可分為兩類：①破壞紅細(xì)胞的溶血法；例如草酸鍍稀釋液法

對紅細(xì)胞破壞力強(qiáng)，也有用赤血鹽血小板稀釋者，此劑穩(wěn)定,

可在室溫下長期保存而不變質(zhì)，但如稀釋20倍或40倍，則

紅細(xì)胞破壞不完全。②不破壞紅細(xì)胞方法：有復(fù)方碘稀釋液

法。因紅細(xì)胞未破壞，可能掩蓋血小板，此液易生長微生物

而干擾計(jì)數(shù)，已被淘汰。

2.相差顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：用草酸筱作稀釋液，在相

差顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)。此法準(zhǔn)確性高，血小板易于識別。

3.血細(xì)胞分析儀法：此法由于重復(fù)性好，適于臨床應(yīng)

用，目前血液細(xì)胞分析儀逐步普及，一般均以全血作為標(biāo)本,

比用富含血小板漿測定簡便。但由于血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)法不

能完全將血小板與其它類似大小的物質(zhì)(如紅細(xì)胞或白細(xì)胞

碎片、灰法等雜物）區(qū)別開來，因此計(jì)數(shù)結(jié)果有時(shí)仍需目視

顯微鏡計(jì)數(shù)作校正，因而國內(nèi)外仍將目視顯微鏡計(jì)數(shù)（特別

是相差異顯微鏡計(jì)數(shù)法）作為參考方法。

在各種稀釋液中，無論自動(dòng)血細(xì)胞分析儀法或顯微鏡計(jì)

數(shù)法，多以1%草酸鏤溶血法作為參考（國內(nèi)亦將此稀釋液

定為首選方法）。

現(xiàn)代的多參數(shù)血液細(xì)胞分析儀還可利用測量細(xì)胞的原

理計(jì)算出平均血小板體積。

［參考值］普通顯微鏡計(jì)數(shù)法：（100-300）x109/L

【臨床意義］

1.生理性：正常人血小板計(jì)數(shù)一天內(nèi)可有6-10%變化;

表現(xiàn)為早晨較低，午后略高；春季較低，冬季略高；平原居

民較低，高原較高；靜脈血比毛細(xì)血管血高10%；月經(jīng)前降

低，月經(jīng)后升高；妊娠中晚期升高，分娩后即降低；運(yùn)動(dòng)后

升高，休息后恢復(fù)。

2.病理性

（1）在臨床上，除創(chuàng)傷之外，血小板減少引起出血為

常見原因。血小板數(shù)大于100x109/L,無異常出血；當(dāng)小于

50x109/L時(shí)，可有出血癥狀。常見的疾病有：①血小板生成

障礙，如急性白血病、再生障礙性貧血；②血小板破壞過多,

如ITP、脾功能亢進(jìn)，系統(tǒng)性紅斑狼瘡；③血小板消耗增多,

如DIC、血栓性血小板減少性紫瘢。

(2)血小板增多(血小板數(shù)大于400x10/L)；①骨髓

增生性疾?。郝粤＜?xì)胞白血病，真性紅細(xì)胞增多癥；②原

發(fā)性血小板增多癥；③急性大出血，急性化膿性感染；④脾

切除手術(shù)。

第二節(jié)血細(xì)胞自動(dòng)分析儀

全血(20ul)

加入稀釋液中

I輕輕混勻五分鐘后放入血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)

判讀結(jié)果

一、血細(xì)胞分析儀原理簡介

20世紀(jì)50年代，庫爾特(W.H.Coulter)先生根據(jù)

血細(xì)胞不良導(dǎo)體的特性，以電解質(zhì)溶液中懸浮細(xì)胞顆粒在通

過計(jì)數(shù)小孔時(shí)引起的電阻變化(即電阻抗原理,又稱庫爾特原

理)，產(chǎn)生脈沖再經(jīng)儀器放大、甄別、整形、計(jì)數(shù)，生產(chǎn)出第

一臺(tái)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，開創(chuàng)了血細(xì)胞分析儀的新紀(jì)元，使人工

計(jì)數(shù)實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，血細(xì)胞分析儀也日

新月異，目前己普及至縣或鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院，現(xiàn)將常用血細(xì)胞分

析儀的基本測定原理、校準(zhǔn)及質(zhì)量管理介紹如下。

（-）紅細(xì)胞和血小板參數(shù)檢測原理

由于庫爾特原理不但能進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)，而且可以同時(shí)測

定每個(gè)細(xì)胞體積。血液經(jīng)較高倍數(shù)的稀釋后，正常情況下白

細(xì)胞所占比例較少，可以忽略不計(jì)，通過血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)

和細(xì)胞體積大小處理，即可獲得RBC、PUT數(shù)量和MCV、

MPV及RBC和PLT體積分布直方圖。如儀器中再引入血紅

蛋白測定系統(tǒng)。通過RBC、Hb、MCV的實(shí)測數(shù)據(jù)，自動(dòng)計(jì)

算出HCT、MCH、MCHC、RDW等參數(shù)。

有的儀器采用流式細(xì)胞術(shù)加二維激光散射法檢測RBC及

PLTo全血經(jīng)專用稀釋液稀釋后，使自然狀態(tài)下的雙凹盤狀

扁圓形紅細(xì)胞成為球形并經(jīng)戊二醛固定，這種處理并不影響

紅細(xì)胞的平均體積。紅細(xì)胞通過測量區(qū)時(shí)，激光束以低角度

前向光散射測量單個(gè)紅細(xì)胞的體積和紅細(xì)胞總數(shù)，同時(shí)用高

角度光散射測量每個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白濃度。同樣原理可測

定每個(gè)血小板的大小、數(shù)量和密度，使紅細(xì)胞及血小板計(jì)數(shù)

更加準(zhǔn)確。

（二）網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)檢測原理有的儀器除了進(jìn)行全血

細(xì)胞計(jì)數(shù)外，還利用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。先將

熒光染料（或新亞甲藍(lán)）與網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)RNA結(jié)合，通過

相應(yīng)激光束時(shí)，儀器同時(shí)測量前向散光強(qiáng)度和熒光強(qiáng)度，分

別反映細(xì)胞體積大小和胞漿內(nèi)RNA多少，構(gòu)成二維顯示散

點(diǎn)圖。將網(wǎng)織紅細(xì)胞分成低熒光強(qiáng)度(lowfluorescent

reticulocyte,LFR)、中熒光強(qiáng)度(middlefluorescent

reticulocyte,MFR)和高熒光強(qiáng)度(highfluorescent

reticulocyte,HFR)網(wǎng)織紅細(xì)胞。幼稚網(wǎng)織紅細(xì)胞熒光最

強(qiáng)。反之，成熟紅細(xì)胞極少或沒有熒光。儀器還可提供網(wǎng)織

紅細(xì)胞絕對數(shù)及網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)(reticulocyte

matureindex,RMI)。RMI增高與骨髓移植、慢性溶血、

近期出血或療效反應(yīng)有關(guān)；RMI降低通常提示骨髓衰竭或無

效造血。

(三)白細(xì)胞參數(shù)檢測原理

白細(xì)胞計(jì)數(shù)是利用溶血?jiǎng)⒁欢ū稊?shù)稀釋的血液中紅細(xì)

胞溶解，而白細(xì)胞胞漿也經(jīng)胞膜滲出，胞膜緊裹在細(xì)胞核和

存在的顆粒周圍，使白細(xì)胞成為''膜包核〃狀態(tài)被保留下來。

利用電阻抗原理經(jīng)小孔計(jì)數(shù)出白細(xì)胞數(shù)量及體積測定，通過

白細(xì)胞體積分布直方圖，將白細(xì)胞大小進(jìn)行分群，即當(dāng)今的

二分群、三分群血細(xì)胞分析儀。

另一種類型血細(xì)胞分析儀是利用流式細(xì)胞術(shù)和光散射

原理。首先將血液進(jìn)行稀釋，在鞘流液的作用下，形成細(xì)胞

流，細(xì)胞排列成單列通過光學(xué)檢測區(qū)，引起光散射變化，獲

得脈沖信號。信號大小與細(xì)胞體積有關(guān)，以此來進(jìn)行白細(xì)胞

計(jì)數(shù)及體積大小測定。

(四)白細(xì)胞五分類檢測原理

要進(jìn)行白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)，必須對每個(gè)細(xì)胞進(jìn)行多參數(shù)的測

量，綜合分析測得數(shù)據(jù)，才能做出五分類計(jì)數(shù)。現(xiàn)作簡要介

紹：

1.容量、傳導(dǎo)、光散射(volumeconductivityscatter,

VCS)分類法：首先將血液稀釋標(biāo)本加入只作用紅細(xì)胞的溶

血?jiǎng)?，使紅細(xì)胞溶解破壞，而白細(xì)胞基本保持完整狀態(tài)，利

用流式細(xì)胞術(shù)使白細(xì)胞單個(gè)通過檢測器，接受VCS三種技

術(shù)同時(shí)檢測。即利用電阻抗法測量細(xì)胞體積(volume,V)

大??；傳導(dǎo)性(conductivity,C)是采用高頻電磁波測量

細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，如細(xì)胞核、漿的比例，細(xì)胞內(nèi)顆粒的大小和

密度；光散射(scatter,S)是利用激光對每一個(gè)細(xì)胞進(jìn)行

掃描分析，區(qū)別細(xì)胞顆粒的構(gòu)型和顆粒質(zhì)量。根據(jù)三種方法

測定數(shù)據(jù)經(jīng)計(jì)算機(jī)處理進(jìn)行白細(xì)胞五分類。

2.阻抗、射頻和特殊稀釋液處理的聯(lián)合分類法：這類儀器是

通過四個(gè)不同檢測系統(tǒng)完成的。

(1)嗜酸性粒細(xì)胞檢測系統(tǒng)：將血液與嗜酸性粒細(xì)胞特殊

稀釋液混合，使嗜酸性粒細(xì)胞以外的所有細(xì)胞溶解或萎縮，

含有完整的嗜酸性粒細(xì)胞的稀釋液通過小孔，用電阻抗法進(jìn)

行計(jì)數(shù)。

(2)嗜堿性粒細(xì)胞檢測系統(tǒng)：也是用特殊的嗜堿性粒細(xì)胞

稀釋液處理后再計(jì)數(shù)。

(3)淋巴、單核、粒細(xì)胞(包括中性、嗜酸性、嗜堿性)

檢測系統(tǒng)：采用電阻抗和射頻聯(lián)合檢測。

(4)幼稚細(xì)胞檢測系統(tǒng)：基于幼稚細(xì)胞膜上脂質(zhì)較成熟細(xì)

胞少的現(xiàn)象，在細(xì)胞懸液中加入含硫氨基酸，使幼稚細(xì)胞與

成熟細(xì)胞區(qū)分。

二、各項(xiàng)參考區(qū)間及臨床意義

1、白細(xì)胞(WBC)

［正常參考值］4.0~L0X109/L

［臨床意義］

生理性白細(xì)胞增高多見于劇烈運(yùn)動(dòng)、進(jìn)食后、妊娠、

新生兒。另外采血部位不同，也可使白細(xì)胞數(shù)有差異，如耳

垂血比手指血的白細(xì)胞數(shù)平均要高一些。

病理性白細(xì)胞增高多見于急性化膿性感染、尿毒癥、白

血病、組織損傷、急性出血等；病理性白細(xì)胞減少再生障礙

性貧血、某些傳染病、肝硬化、脾功能亢進(jìn)、放療化療等。

2、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)

［正常參考值］

男：4.0X1012—5.5X1012/L

女：3.5X10125.0X1012/L

兒童：4.0X1012—5.3X1012/L

［臨床意義］

紅細(xì)胞減少多見于各種貧血，如急性、慢性再生障礙性貧血、

缺鐵性貧血等。

紅細(xì)胞增多常見于身體缺氧、血液濃縮、真性紅細(xì)胞增多癥、

肺氣腫等。

3、血紅蛋白測定(Hb)

［正常參考值］

男：120-160g/L(12-16g/dL)o

女：110-150g/L(ll-15g/dL)o

兒童：120-140g/L(12-14g/dL)o

［臨床意義］

血紅蛋白減少多見于各種貧血，如急性、慢性再生障礙

性貧血、缺鐵性貧血等。

血紅蛋白增多常見于身體缺氧、血液濃縮、真性紅細(xì)胞

增多癥、肺氣腫等。

根據(jù)Hb濃度，成人貧血程度劃為4級：①輕度：Hb參考值

下限至91g/L癥狀輕微；②中度：Hb90—60g/L,體力勞動(dòng)

時(shí)心慌氣短；③重度：Hb60—31g/l,休息時(shí)心慌氣短；④

極重度HbW30g/L,合并貧血性心臟病。

4、紅細(xì)胞比積(HCT)男0.40-0.50

女0.35-0.45

5、平均紅細(xì)胞體積（MCV）80-100FL

6、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量（MCH）27-34pg

7、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC）320-360g/L

8、紅細(xì)胞體積分布密度（RDW）<0.15（15%）

貧血MCV、MCH和MCHC分類

貧血類型MCV(fl)MCH(Pg)MCHC(g/L)病因

正常細(xì)胞性貧血80~9426~323r35失血，急性溶血、再障，白血病

小細(xì)胞低色素貧血<80<26<31缺鐵性貧血，慢性失血

單純小細(xì)胞性貧血<80<2631-35感染、中毒、尿毒癥

大細(xì)胞性貧血>94>3232~36維生素B12、葉酸缺乏

9、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)（DC）

［正常參考值］

中性桿狀核粒細(xì)胞：0.01-0.05（1%-5%）。

中性分葉核粒細(xì)胞：0.50-0.70（50%-70%）o

嗜酸性粒細(xì)胞：0.005-0.05（0.5%。％）。

淋巴細(xì)胞：0.20-0.40（20%-40%）o

單核細(xì)胞：0.03-0.08（3%。％）。

［臨床意義］

中性桿狀核粒細(xì)胞增高見于急性化膿性感染、大出血、

嚴(yán)重組織損傷、慢性粒細(xì)胞膜性白血病及安眠藥中毒等。

中性分葉核粒細(xì)胞減少多見于某些傳染病、再生障礙性貧

血、粒細(xì)胞缺乏癥等。

嗜酸性粒細(xì)胞增多見于牛皮癬、天疤瘡、濕疹、支氣管

哮喘、食物過敏，一些血液病及腫瘤，如慢性粒細(xì)胞性白血

病、鼻咽癌、肺癌以及宮頸癌等。嗜酸性粒細(xì)胞減少見于傷

寒、副傷寒早期、長期使用腎上腺皮質(zhì)激素后。

淋巴細(xì)胞增高見于傳染性淋巴細(xì)胞增多癥、結(jié)核病、瘧

疾、慢性淋巴細(xì)胞白血病、百日咳、某些病毒感染等。

淋巴細(xì)胞減少見于淋巴細(xì)胞破壞過多，如長期化療、X射線

照射后及免疫缺陷病等。

單核細(xì)胞增高見于單核細(xì)胞白血病、結(jié)核病活動(dòng)期、瘧

疾等。

10、血小板計(jì)數(shù)(PLT)

［正常參考值］

100X109—300X109/L(10萬-30萬個(gè)/mm3)。

［臨床意義］

血小板計(jì)數(shù)增高見于血小板增多癥、脾切除后、急性感

染、溶血、骨折等。

血小板計(jì)數(shù)減少見于再生障礙性貧血、急性白血病、急

性放射病、原發(fā)性或繼發(fā)性血小板減少性紫瘢、脾功能亢進(jìn)、

尿毒癥等。

11、平均血小板體積(MPV)9.4~12.5fL

12、血小板分布寬度(PDW)0.155-0.181

13、正常白細(xì)胞直方圖:血細(xì)胞分析儀通常在35?450fl的范

圍內(nèi)分析白細(xì)胞。根據(jù)正常白細(xì)胞在溶血?jiǎng)┳饔煤篌w積的大

小，在直方圖上從左至右可確認(rèn)其相應(yīng)的三個(gè)細(xì)胞群:小細(xì)胞

群是位于左側(cè)又高又陡的峰，分布在35?90fl范圍，以成熟淋

巴細(xì)胞(LYM)為主要特征細(xì)胞;大細(xì)胞群是位于右側(cè)較低且

分布寬的峰，跨越160?450fl，以中性粒細(xì)胞為主要特征細(xì)胞;

位于大、小細(xì)胞群之間的較平坦的區(qū)域,分布在90?160fl范

圍,是單個(gè)核細(xì)胞(MONO)，也被稱為中間細(xì)胞(MID)，以單核

細(xì)胞為主要特征。在三分類血細(xì)胞分析儀上，白細(xì)胞直方圖

形態(tài)為“兩峰一谷”。第一峰細(xì)胞體積在35fl—95(98)fl,代

表成熟淋巴細(xì)胞(占白細(xì)胞總數(shù)的20-40%)；第