儀器分析高效液相色譜法

關(guān)于儀器分析高效液相色譜法2024/4/25第2頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25凝膠柱上加上中藥提取物第3頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25洗脫的效果第4頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25HPLC基本組成示意圖HPLC主要由色譜柱、加壓泵和檢測器組成第5頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25色譜柱色譜柱是液相分離的核心部件第6頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25輸液泵輸液泵分單元等度泵和多元梯度泵第7頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25檢測器對沒有紫外吸收的物質(zhì)的檢測，以蒸發(fā)光散射檢測器用得較多檢測器種類很多，現(xiàn)在最常用的是紫外檢測器第8頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25進(jìn)樣器—手動(dòng)進(jìn)樣器Rheodyne7725i幾乎成了所有液相色譜儀的進(jìn)樣器第9頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25進(jìn)樣器—手動(dòng)進(jìn)樣器—六通閥第10頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣器可由軟件完全控制Waters717Agilent第11頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25色譜工作站色譜工作站就是HPLC的控制系統(tǒng)外企的在數(shù)萬元左右，國產(chǎn)的幾千元。第12頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25色譜工作站工作站的兩大功能1.控制儀器2.處理數(shù)據(jù)第13頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25液相色譜儀器常見種類

highperformanceliquidchromatograph第14頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25液相色譜儀（2）第15頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25液相色譜儀（3）安捷倫Agilent1100第16頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25液相色譜儀（4）第17頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25液相色譜儀（5）上海伍豐科學(xué)儀器有限公司第18頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25液相色譜儀（6）戴安公司Ultimate3000第19頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25高效液相色譜法的特點(diǎn)

特點(diǎn)：高壓、高效、高速現(xiàn)代藥物分析最有用的工具和方法第20頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25高效液相色譜法在藥典中的使用

1985年版1990年版1995年版2000年版2005年版數(shù)量8561212791327比例%0.53.25.110.441.3第21頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25高效液相圖譜各成分依次流出色譜柱，從進(jìn)樣到出峰的時(shí)間稱為保留時(shí)間第22頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25定性方法定性:確定成分歸屬，依據(jù)與對照品相比較時(shí)，相同的保留時(shí)間第23頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25定量方法外標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法歸一法第24頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25定量方法——外標(biāo)法第25頁,共42頁，2024年2月25日，星期天內(nèi)標(biāo)法對照溶液：精密稱（量）取對照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，分別配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子測定用的對照溶液。供試品溶液：再取各品種項(xiàng)下含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，注入儀器，記錄色譜圖。

第26頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25定量方法——內(nèi)標(biāo)法對照品供試品內(nèi)標(biāo)物第27頁,共42頁，2024年2月25日，星期天2024/4/25定量方法——?dú)w一法第28頁,共42頁，2024年2月25日，星期天29（1）吸附色譜法（2）正相色譜法（3）反相色譜法①一般反相色譜法②反相離子對色譜③反相離子抑制色譜主要分離方法第29頁,共42頁，2024年2月25日，星期天流動(dòng)相的選擇在選擇溶劑時(shí)，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)。常用溶劑的極性順序：水(最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六環(huán)>四氫呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>異丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>環(huán)己烷>己烷>煤油(最小)第30頁,共42頁，2024年2月25日，星期天31流動(dòng)相的制備供試品和對照品溶液配制（各兩份）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)操作前的準(zhǔn)備第31頁,共42頁，2024年2月25日，星期天32理論塔板數(shù)（n）：分離度（R）：系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)：

重復(fù)性

對照溶液連續(xù)進(jìn)樣5次

相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%第32頁,共42頁，2024年2月25日，星期天33拖尾因子（T）：

w0.05h為0.05峰高處的峰寬；

為峰極大至峰前沿之間的距離。除另有規(guī)定外，T應(yīng)在0.95～1.05之間第33頁,共42頁，2024年2月25日，星期天實(shí)例：高效液相色譜外標(biāo)法測定頭孢拉定含量

取含頭孢拉定為94.1%和頭孢氨芐為2.3%的對照品35.35mg溶解定容為50ml，取10μl注入高效液相色譜儀，測得頭孢拉定峰面積為13842558，頭孢氨芐峰面積為354934；另稱取頭孢拉定供試品35.88mg，溶解定容為50ml，取10μl注入高效液相色譜儀，測得頭孢拉定峰面積為14158286，頭孢氨芐峰面積為472368；按供試品的總量分別計(jì)算頭孢拉定和頭孢氨芐的百分含量。第34頁,共42頁，2024年2月25日，星期天第35頁,共42頁，2024年2月25日，星期天第36頁,共42頁，2024年2月25日，星期天內(nèi)標(biāo)液

取正三十二烷加正己烷溶解并稀釋成1.0mg/ml溶液對照液

精密稱取VitE對照品0.2011g置棕色具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)液10ml，密塞，振搖使溶解，取1~3ul注入GC儀，測定，計(jì)算供試液

精密稱取供試品0.1998g置棕色具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)液10ml，密塞，振搖使溶解，取1~3ul

注入GC儀，測定，計(jì)算維生素E含量測定對照液供試液第37頁,共42頁，2024年2月25日，星期天第38頁,共42頁，2024年2月25日，星期天按《中國藥典》2015版（二部）的規(guī)定測定維生素E，做系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)時(shí)的數(shù)據(jù)如上表。取維生素E對照品20.80mg(98.0%)，精密加入濃度為1.044mg/ml的內(nèi)標(biāo)物（正三十二烷）溶液10.00ml溶解，取1μl注入氣相色譜儀，對照品峰面積為481736，內(nèi)標(biāo)物峰面積為238787，求維生素E的理論塔板數(shù)、維生素E與內(nèi)標(biāo)物的分離度和校正因子各為多少？再精密稱取維生素E供試品22.68mg，內(nèi)標(biāo)物28.00mg，用氣相色譜法測得供試品峰面積為529887，內(nèi)標(biāo)物峰面積為644911，計(jì)算供試品中維生素E的含量。

物質(zhì)Rt/minW(1/2h)/minW/min對照品8.880.2