GB-T色素中生物毒素的快速檢測(cè) 膠體金免疫快速定量法征求意見(jiàn)稿

ICSXXXX

A21

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/TXXXXX—201X

色素中生物毒素檢測(cè)膠體金快速定量法

DetectionofmycotoxininpigmentRapidquantitativemethodof

colloidalgoldtechnique

（征求意見(jiàn)稿）

201X-XX-XX發(fā)布201X-XX-XX實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)1化管理委員會(huì)

GB/T××××—201×

GB/T××××—201×

色素中生物毒素檢測(cè)膠體金快速定量法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了色素產(chǎn)品中黃曲霉素B1、桔青霉素、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素的膠體金快速定量檢

測(cè)方法原理、儀器設(shè)備、試劑和材料、操作步驟、結(jié)果分析。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于色素產(chǎn)品中黃曲霉素B1、桔青霉素、嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮的快速定量檢測(cè)。

方法檢出限為：黃曲霉毒素B12.0μg/kg，桔青霉素40μg/kg，玉米赤霉烯酮60μg/kg，

嘔吐毒素500μg/kg。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB5491糧食、油料檢驗(yàn)扦樣、分樣法

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

3原理

試樣提取液中的生物毒素在層析過(guò)程中與檢測(cè)試劑條中的膠體金微粒發(fā)生呈色反應(yīng)，顏色深淺與試

樣中生物毒素含量相關(guān)。用讀數(shù)儀檢定檢測(cè)條上檢測(cè)線和質(zhì)控線顏色深淺，根據(jù)顏色深淺和讀數(shù)儀內(nèi)置

曲線自動(dòng)計(jì)算出試樣中生物毒素含量。

4試劑材料

除另有說(shuō)明外，所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)室用水應(yīng)符合GB/T6682中二級(jí)水的要求

4.1黃曲霉毒素B1

純度≥98.0%。

4.2桔青霉素

純度≥98.0%。

4.3玉米赤霉烯酮

純度純度≥98.0%。

4.4嘔吐毒素

純度純度≥98.0%。

4.5苯+乙腈混合液

量取98.0mL苯，加2.0mL乙腈，混勻。

4.6稀釋緩沖液

1

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由膠體金免疫檢測(cè)試紙條提供，或根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)配制。

4.770％甲醇溶液提取液

取70.0mL的甲醇加水30.0mL，混勻；或由膠體金生產(chǎn)商提供。

4.8PBS緩沖溶液

稱取8.0g氯化鈉、1.2g磷酸氫二鈉、0.2g磷酸二氫鉀、0.2g氯化鉀,用水溶解，調(diào)節(jié)pH至

7.0，用水定容至1000mL。

4.90.1%吐溫20-PBS溶液

準(zhǔn)確移取1mL吐溫20，以PBS緩沖溶液定容至1000mL。

4.100.1%磷酸溶液

準(zhǔn)確移取1mL磷酸，加水定容至1000mL。

4.110.1mg/L的生物毒素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液

準(zhǔn)確稱取一定量的生物毒素標(biāo)準(zhǔn)品，用苯+乙腈（98:2）溶液（3.4.1）溶解，容量瓶定容至10

mL，配置0.1mg/L的生物毒素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，保存于4℃?zhèn)溆茫杀４?年。

5儀器設(shè)備及材料

1.1天平：精度0.01g。

1.2粉碎機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于3000r/min。

1.3離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于4000r/min。

1.4渦旋振蕩器。

1.5讀數(shù)儀

1.6膠體金免疫層析檢測(cè)試紙條：技術(shù)要求見(jiàn)附錄A.

1.7微量移液器：1μL~10μL，10μL~100μL，100μL~1000μL。

1.8免疫親和柱:柱體積6mL,最大柱容量20ng,或等效柱。

2樣品制備

2.1試樣取樣

按照GB5491執(zhí)行

2.2試樣制備

2.2.1固體樣品：取有代表性的固體或樣品500g，其中300g用粉碎機(jī)（4.2）粉碎至全部通過(guò)20目

篩，混勻，分兩份密封冷凍保存。

2.2.2取一份保存樣品準(zhǔn)確稱取10.0g試樣于50mL具塞錐形瓶中，加入20.0mL試樣提取液，密閉，

2

GB/T××××—201×

用渦旋振蕩器振蕩2min-3min，靜置后用濾紙過(guò)濾，或取1.5mL混合液于離心管中，用離心

機(jī)離心1min。

取濾液或離心后上清液100μL于另一離心管中，加入1.0mL稀釋緩沖液，充分混勻待測(cè)。如

樣品為特殊材料，需將稀釋后的混合液用針頭過(guò)濾器過(guò)濾，即為待測(cè)液

2.2.3液體樣品：液體待測(cè)樣品用均質(zhì)器（處理不少于2min）充分混勻后，用微量移液器分別吸取1.0

mL加入2個(gè)2.0mL離心管中，一份密封冷凍保存，一份用于檢測(cè)。

從待測(cè)離心管中吸取200μL液體樣品于另一離心管中，加入2mL稀釋緩沖液（3.3.2），充分

混勻待測(cè)。

2.2.4凈化處理：參考國(guó)標(biāo)GB5009.222-2016中紅曲及其制品的凈化方法：

將免疫親和柱連接在10mL玻璃針筒下，準(zhǔn)確移取10.0mL上述樣品濾液過(guò)免疫親和柱，以1

滴/s~2滴/s的流速全部通過(guò)親和柱；加入10mL0.1%吐溫20-PBS溶液，以1滴/s~2滴/s的

流速淋洗柱子,直至空氣進(jìn)入到親和柱中，棄去全部流出液。準(zhǔn)確加入1.0mL洗脫液進(jìn)行洗脫,

洗脫流速為1滴/s~2滴/s。收集全部洗脫液于離心管中備用。

注：凈化處理僅針對(duì)紅曲紅等對(duì)膠體金反應(yīng)結(jié)果產(chǎn)生嚴(yán)重背景干擾的色素產(chǎn)品。

3樣品測(cè)定

3.1參考膠體金免疫層析檢測(cè)試紙條的儲(chǔ)存要求，如需低溫保存（2~8℃），使用前需將檢測(cè)試紙條取出，

室溫放置20~30min。

3.2將放至室溫的膠體金免疫層析檢測(cè)試紙條浸入含300-500μL待測(cè)溶液的離心管中，或?qū)?00μL

待測(cè)溶液加入到檢測(cè)孔中。

3.3室溫孵育5min后。

4結(jié)果判定

7.1反應(yīng)結(jié)束后，取出膠體金免疫層析檢測(cè)試紙條觀察C線（質(zhì)控線）和T線（檢測(cè)線）的顯色情

況。若出現(xiàn)下述情況，視為無(wú)效檢測(cè)：

a）C線不出現(xiàn)；

b）C線出現(xiàn)，但彌散或嚴(yán)重不均勻；

c）C線出現(xiàn)，但T線彌散或嚴(yán)重不均勻。

7.2選擇讀數(shù)儀的相應(yīng)生物毒素檢測(cè)頻道，以目標(biāo)毒素檢測(cè)的陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)樣品,開(kāi)始樣品測(cè)定，

測(cè)定需要在2min內(nèi)完成，讀數(shù)儀自動(dòng)計(jì)算并顯示樣品中相應(yīng)生物毒素的含量，單位為微克每千克

（μg/kg）或微克每升（μg/L）。

5重復(fù)性

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GB/T××××—201×

在重復(fù)性條件下獲得的2次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的20％。

附錄A

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GB/T××××—201×

(規(guī)范性附錄)

膠體金快速檢測(cè)試紙條性能要求

A.1準(zhǔn)確性

采用最低檢測(cè)限2倍、5倍、8倍濃度水平的實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)樣品，每個(gè)濃度水平測(cè)定不低于6次。計(jì)算

檢測(cè)條檢測(cè)結(jié)果與實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)樣品的偏差，3個(gè)濃度水平的偏差均應(yīng)控制在-20％~+20％之間。

A.2精密度

采用最低檢測(cè)限5倍濃度水平的實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)樣品，測(cè)定不低于6次，計(jì)算檢測(cè)條批次內(nèi)變異系數(shù)，變

異系數(shù)