藥品微生物檢驗技術(shù)基礎(chǔ)操作規(guī)范課件

藥品微生物檢驗技術(shù)基礎(chǔ)操作規(guī)范

藥品微生物檢驗技術(shù)基礎(chǔ)操作規(guī)范

微生物檢驗是一門微生物應(yīng)用技術(shù)，也是一門綜合的專業(yè)技術(shù)。它包括的范圍非常廣泛；基本分為；無菌技術(shù)和微生物檢驗技術(shù)兩大類。藥品微生物檢驗技術(shù)基礎(chǔ)操作規(guī)范一、無菌技術(shù)

1、無菌技術(shù)概念

2、無菌環(huán)境⑴無菌室⑵無菌器材藥品微生物檢驗技術(shù)基礎(chǔ)操作規(guī)范3、無菌操作

無菌操作一般是指在無菌環(huán)境條件下，使用無菌器材進(jìn)行檢驗，可保證檢驗物品不被二次污染、保證試驗結(jié)果的真實性及檢驗人員的安全。無菌操作涉及的方面很廣，現(xiàn)簡述如下：藥品微生物檢驗技術(shù)基礎(chǔ)操作規(guī)范⑴試驗前準(zhǔn)備

消毒(工作臺面和地面)↓

進(jìn)行空間滅菌處理(開啟凈化系統(tǒng)和紫外線燈↓試驗器具與供試品進(jìn)入無菌室(通過物流)↓

操作人員進(jìn)入第一緩沖間(洗手、消毒液消毒手)↓

操作人員進(jìn)入第二緩沖間(穿戴無菌工作服、鞋、帽、口罩)↓

操作人員進(jìn)入無菌室↓點燃酒精燈，消毒液的棉球消毒手↓進(jìn)行試驗操作。藥品微生物檢驗技術(shù)基礎(chǔ)操作規(guī)范⑵檢驗操作規(guī)程

①試驗全過程應(yīng)在近火焰處操作，動作要輕。②標(biāo)記③使用接種環(huán)（針），灼燒滅菌。④用吸管吸取供試液或培養(yǎng)液等，用橡膠乳頭吸取。⑤用過的玻璃器皿應(yīng)立即放入消毒液缸（桶）內(nèi)進(jìn)行滅菌。⑥用注射器吸取供試品或培養(yǎng)物時，注射器內(nèi)應(yīng)無空氣，從密封容器內(nèi)抽取液體時，應(yīng)通過火焰注入無菌空氣。⑦在開啟菌種管或其他供試品安瓿之前，應(yīng)用碘伏溶液、碘酒棉球消毒容器。刻痕用的砂輪、鋸刀也應(yīng)消毒，截斷時要防止污染，安瓿切口通過火焰滅菌。藥品微生物檢驗技術(shù)基礎(chǔ)操作規(guī)范

⑧在接種霉菌、放線菌時，應(yīng)在鋪有浸過消毒液的濕紗布上操作，以防孢子散落傳播。⑨試驗時使用的培養(yǎng)皿打開蓋時開口朝向火焰，不得將蓋放工作臺上，拔出玻璃容器塞子時應(yīng)用小指夾住塞子拔出，不得將塞子放在工作臺上，以免造成污染。⑩在實驗過程中觀察平板培養(yǎng)物時，一般不宜開蓋觀。如取菌落或菌苔涂片、染色，或做玻片凝集實驗時，在近火焰處操作，平皿蓋可適當(dāng)開啟（45°），開口朝向火焰，挑取菌落。

⑩在涂片、染色時．應(yīng)使用夾子夾持載玻片，切勿用手直接拿載玻片，用過的玻載片和蓋玻片應(yīng)置消毒液中消毒后，洗刷清潔的器皿經(jīng)消毒后再洗刷，放置固定處，備用。藥品微生物檢驗技術(shù)基礎(chǔ)操作規(guī)范二、微生物檢驗操作技術(shù)

接種、分離、培養(yǎng)是微生物檢驗工作中應(yīng)用最多的基本操作技術(shù)。藥品微生物檢驗技術(shù)基礎(chǔ)操作規(guī)范1、接種技術(shù)

接種方法有多種，根據(jù)接種的菌株不同所使用的培養(yǎng)基也不同，接種時經(jīng)常使用接種環(huán)、接種針、無菌吸管或無菌注射器等。藥品微生物檢驗技術(shù)基礎(chǔ)操作規(guī)范

⑴接種方法斜面培養(yǎng)基接種法適用于純培養(yǎng)、擴(kuò)大培養(yǎng)及短時間保存菌種。

藥品微生物檢驗技術(shù)基礎(chǔ)操作規(guī)范2、分離技術(shù)

使用平板培養(yǎng)基進(jìn)行分離達(dá)到分離出單個菌落的目的，以供微生物的鑒別、純菌的保留，分離的方法有多種，常用的方法如下：⑴劃線分離法⑵傾注分離法⑶涂布分離法藥品微生物檢驗技術(shù)基礎(chǔ)操作規(guī)范3、培養(yǎng)方法

細(xì)菌培養(yǎng)，要掌握溫度、濕度、時間、環(huán)境等因素，《中國藥典2010版》規(guī)定微生物限度檢驗細(xì)菌培養(yǎng)溫度為30~35℃，此溫度適于中溫菌生長，某些高溫菌在該溫度下也可以生長。藥品污染的控制菌多是中溫菌。根據(jù)不同菌株及檢驗?zāi)康倪x擇不同的培養(yǎng)時間。根據(jù)細(xì)菌對環(huán)境要求不同常用培養(yǎng)方法如下：藥品微生物檢驗技術(shù)基礎(chǔ)操作規(guī)范

需氧培養(yǎng)法

此為最常用的培養(yǎng)方法，適于需氧菌和兼性厭氧菌的培養(yǎng)。

厭氧培養(yǎng)法

厭氧菌的培養(yǎng)，必須在無氧的環(huán)境中進(jìn)。厭氧培養(yǎng)箱法、抽氣換氣法、厭氧缸法、厭氧培養(yǎng)罐、厭氧袋。藥品微生物檢驗技術(shù)基礎(chǔ)操作規(guī)范

微需氧培養(yǎng)法

有些細(xì)菌為微需氧菌在微需氧環(huán)境（5％02、10％CO2、85％N2）生長良好，微需氧培養(yǎng)法常用的有以下幾種：混合氣體法、氣袋法、雙平板法、燭缸法

藥品微生物檢驗技術(shù)基礎(chǔ)操作規(guī)范微生物限度檢查法

藥品微生物檢驗技術(shù)基礎(chǔ)操作規(guī)范

供試液制備方法、抑菌成分的消除方法及細(xì)菌、霉菌及酵母菌計數(shù)方法應(yīng)盡量選擇微生物限度檢查法中操作簡便、快速的方法，且應(yīng)避免損傷供試品中污染的微生物。對于抑菌作用較強(qiáng)的供試品，在供試品溶液性狀允許的情況下，應(yīng)盡量選用薄膜過濾法進(jìn)行試驗。藥品微生物檢驗技術(shù)基礎(chǔ)操作規(guī)范供試液的制備

根據(jù)供試品的理化特性與生物學(xué)特性，采取適宜的方法制備供試液。供試液制備若需加溫時，應(yīng)均勻加熱，且溫度不應(yīng)超過45℃。供試液從制備至加入檢驗用培養(yǎng)基，不得超過1小時。除另有規(guī)定外，常用的供試液制備方法如下。藥品微生物檢驗技術(shù)基礎(chǔ)操作規(guī)范1.液體供試品2.固體、半固體或黏稠性供試品3.需用特殊供試液制備方法的供試品⑴非水溶性供試品⑵膜劑供試品⑶腸溶及結(jié)腸溶制劑供試品⑷氣霧劑、噴霧劑供試品⑸貼劑供試