微生物的顯微鏡直接計數(shù)法

關(guān)于微生物的顯微鏡直接計數(shù)法實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)使用目鏡測微尺和鏡臺測微尺在顯微鏡下測定微生物大小的方法。

學(xué)習(xí)使用血球記數(shù)板測定微生物數(shù)量的方法。

第2頁,共11頁，2024年2月25日，星期天實驗材料顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺測微尺、血球記數(shù)板、酵母菌懸液、蓋玻片、無菌滴管、吸水紙、擦鏡紙。第3頁,共11頁，2024年2月25日，星期天實驗步驟測定酵母菌細(xì)胞的大小

測定的工具：目鏡測微尺鏡臺測微尺目鏡測微尺每格實際代表的長度隨物鏡的放大倍數(shù)而改變，也會因使用不同的顯微鏡而產(chǎn)生誤差，因此在使用前必須用鏡臺測微尺進(jìn)行校正。

目鏡測微尺的每格長度(μm)=鏡臺測微尺×10/目鏡測微尺第4頁,共11頁，2024年2月25日，星期天酵母菌顯微直接計數(shù)

方法：活菌計數(shù)法——平板菌落計數(shù)法；總菌計數(shù)法——血球計數(shù)板或霍瑟（PeroffHausser）細(xì)菌計數(shù)板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已）。細(xì)胞數(shù)/ml=100小格內(nèi)細(xì)胞總數(shù)÷100×400×10×1000×稀釋倍數(shù)細(xì)胞數(shù)/ml=80小格內(nèi)細(xì)胞總數(shù)÷80×400×10×1000×稀釋倍數(shù)第5頁,共11頁，2024年2月25日，星期天取清潔無油的血球計數(shù)板，在計數(shù)室上面加蓋血蓋片。取酵母菌液，搖勻，用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴，使菌液自行滲入，計數(shù)室內(nèi)不得有氣泡。用4×鏡觀察并將計數(shù)室移至視野中央。在4×鏡下計數(shù)：計數(shù)4個（或5個）中格的平均值，然后求得每個中格的平均值。乘上16（或25）就得出計數(shù)區(qū)總菌數(shù)，最后再換算到每mL菌液中的含菌數(shù)。注意事項：計上不計下，計左不計右。出芽計一半第6頁,共11頁，2024年2月25日，星期天實驗結(jié)果目鏡測微尺標(biāo)定結(jié)果：

×目鏡下

倍物鏡目鏡測微尺每格長度是

μm。菌號酵母的直徑大小測定結(jié)果

目鏡測微尺格數(shù)實際直徑/μm1

2

3

4

5

均值

第7頁,共11頁，2024年2月25日，星期天將顯微計數(shù)結(jié)果記錄于下表中。T表示五個中方格中的總菌數(shù)；D表示菌液稀釋倍數(shù)。

各中格中菌數(shù)TD二室平均值個/ml12345第一室

第二室

第8頁,共11頁，2024年2月25日，星期天問題與討論為什么目鏡測微尺必須用鏡臺測微尺來校正？

在顯微鏡下直接測定微生物數(shù)量有什么優(yōu)缺點？第9頁,共11頁，2024年2月25日，星期天本次實驗課結(jié)束

請確保血球計數(shù)板清洗干凈！

請值日生同學(xué)留下值日

下周再見！

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