尿激酶原的研究概況

關(guān)于尿激酶原的研究概況一、前言

尿激酶原（Pro-urokinase,Pro-UK）

單鏈尿激酶型纖溶酶原激活劑

(Single-ChainUrokinase-typePlasminogenActivtor)

尿型纖溶酶原激活劑

(Urinary-typeplasminogenactivtor)

第2頁,共62頁，2024年2月25日，星期天二、尿激酶原的研究歷史1973年Bernik從組織培養(yǎng)液中發(fā)現(xiàn)尿激酶原。1970年代末到1980年代初人們先后從新鮮人尿、人和動物的正常細胞、腫瘤細胞中純化出單鏈尿激酶并命名為尿激酶原。1980年代中期開始，歐美日等發(fā)達國家用基因重組技術(shù)克隆表達尿激酶原的工程菌或工程細胞株純化制備尿激酶原。第3頁,共62頁，2024年2月25日，星期天1985國際血栓形成和止血委員會正式命名尿激酶原為單鏈尿激酶型纖溶酶原激活劑。1986歐美開始小規(guī)模的臨床研究，到1994年以后開始大規(guī)模的臨床試驗，德國用大腸桿菌表達的尿激酶原(Saruplase)先后完成了6775例心肌梗塞病人的臨床試驗。1994美國Abotte公司研制的尿激酶原(Prolyse)

做了400多例心肌梗塞和腦梗塞病人的臨床試驗，現(xiàn)正在做第Ⅲ期臨床試驗。第4頁,共62頁，2024年2月25日，星期天三、國內(nèi)研究概況〝七五〞期間，北京大學、南京大學和軍事醫(yī)學科學院生物工程研究所開始研究重組人尿激酶原，都得到國家科技部〝863〞委員會的資助。我所率先獲得全長人尿酶原基因cDNA克隆，接著又構(gòu)建出高產(chǎn)工程細胞株。并于〝八五〞中期和〝九五〞期間完成了重組尿激酶原的中試工藝研究和臨床前安全評價，于2001年完成Ⅰ期臨床試驗。第5頁,共62頁，2024年2月25日，星期天五、pro-UK的化學結(jié)構(gòu)

pro-UK由411個氨基酸殘基組成的單鏈多肽（簡稱pro-UK），分子量約為49KD左右，在302位天冬酰胺殘基有一個糖鏈，分子量約2320Da，由巖藻糖、甘露糖、半乳糖和N-乙酰-葡萄糖胺組成，在第18位蘇氨酸殘基上有一個糖基

巖藻糖，分子量180Da。其一級結(jié)構(gòu)如下圖所示：第6頁,共62頁，2024年2月25日，星期天尿激酶原的結(jié)構(gòu)第7頁,共62頁，2024年2月25日，星期天

Pro-UK屬于絲氨酸蛋白酶類，分子內(nèi)有12對二硫鍵。pro-UK分子按結(jié)構(gòu)功能可分為四個結(jié)構(gòu)域，依次為：

（1）表皮生長因子結(jié)構(gòu)域(第5-49位氨基酸殘基），與表皮生長因子高度同源，其功能與促進pro-UK的生物合成有關(guān)，該區(qū)有三對二硫鍵，即在11與19、13與31、33與42氨基酸殘基之間各有一對二硫鍵；

（2）Kringle（指環(huán)）結(jié)構(gòu)域（第50-136位氨基酸殘基），其功能與血小板蛋白和細胞膜蛋白結(jié)合有關(guān)，該區(qū)也有三對二硫鍵，即50與130、71與113、102與126氨基酸殘基之間各有一對二硫鍵；

第8頁,共62頁，2024年2月25日，星期天（3）絲氨酸蛋白酶結(jié)構(gòu)域(144-411位氨基酸殘基),位于其羧基端的His204、Asp255與Ser356三個氨基酸殘基構(gòu)成該酶的活性中心，Asn302為糖化位點,該區(qū)共有5對二硫鍵，即在148-279、189-205、197-268、293-258和368-380氨基酸殘基之間各有一對二硫鍵；

（4）連接區(qū)(第136-143位氨基酸殘基)。

第9頁,共62頁，2024年2月25日，星期天六、pro-UK的理化性質(zhì)

pro-UK分子有四個酶切位點：（1）第一個酶切位點在158位賴氨酸與159位異亮氨酸之間，纖溶酶、激肽釋放酶、胰蛋白酶和半胱氨酸內(nèi)肽酶及因子Ⅻ

可水解該酶切位點之間的肽鍵。該位點被切開后，148位與279位的二硫鍵將A鏈和B鏈相連接，A鏈C末端的賴氨酸自動脫落，pro-UK即變成具有高度催化活性的雙鏈尿激酶(UK)；

第10頁,共62頁，2024年2月25日，星期天（2）第二個酶切位點在135和136兩個賴氨酸之間，高分子雙鏈UK可被纖溶酶繼續(xù)水解該酶切位點，并脫去N-末端的第136位賴氨酸，變成低分子雙鏈UK，分子量為33KD，其活性與高分子UK相同；

（3）第三個酶切位點在143位谷氨酸與144位亮氨酸之間，蛋白酶可裂解該肽鍵產(chǎn)生分子量為32KD的單鏈低分子尿激酶原(pro-UK)，其溶血栓活性生花特性與高分子pro-UK相似；

第11頁,共62頁，2024年2月25日，星期天（4）第四個酶切位點在156位的精氨酸與157位的苯丙氨酸之間，凝血酶可水解該位點的肽鍵，生成雙鏈pro-UK，由148位與279位的二硫鍵將A、B兩條鏈相連接起來，其活性只有雙鏈UK的1/500，但其催化活性與生化特性與單鏈pro-UK相似。纖溶酶可水解B鏈N-端第157和158兩個氨基酸，生成雙鏈UK。

pro-UK在溶液中不穩(wěn)定，容易逐漸水解成小分子尿激酶原或變成雙鏈尿激酶，但其凍干品在4℃以下是穩(wěn)定的。

第12頁,共62頁，2024年2月25日，星期天七、尿激酶原的血栓溶解特異性1、pro-UK本身活性很低，在血漿中只有微弱的活性，對體內(nèi)纖溶系統(tǒng)影響很小，當給藥劑量太大時（超過1mg/kg），部分水解成雙鏈UK，則對體內(nèi)纖溶系統(tǒng)有影響。pro-UK到達血栓表面，被那里的纖溶酶激活，部分變成雙鏈UK，后者激活結(jié)合在血栓表面構(gòu)型有所改變的纖溶酶原變成纖溶酶，使血栓纖維蛋白部分溶解。第13頁,共62頁，2024年2月25日，星期天2、當血栓纖維蛋白暴露出E-片段，單鏈pro-UK能直接激活結(jié)合在該片段C-端兩個賴氨酸殘基上的纖溶酶原，其活性增加500倍，產(chǎn)生大量纖溶酶，使血栓纖維蛋白迅速溶解，因此pro-UK是特異性的纖溶酶原激活劑。單鏈pro-UK被纖溶酶、嗜熱桿菌金屬蛋白酶完全激活后，其比活性與尿激酶相同（1-1.2

105IU/mg，天然尿激酶或尿激酶原的比活性的國際標準為104,000IU/mg）。

第14頁,共62頁，2024年2月25日，星期天尿激酶原作用機理示意圖

D-domain

E-domainEABEABCDFCDF

EEEDDDPro-UKplasminogenplasminogenPlasminogenplasmonogenFDPUK，t-PA，SKplasminplasminplasminplasmin

EEEE第15頁,共62頁，2024年2月25日，星期天八、尿激酶原的生產(chǎn)工藝1、尿激酶原工程細胞的構(gòu)建將人體分泌尿激酶的Detroit562細胞RNA提取出來，用反轉(zhuǎn)錄及基因重組技術(shù)得到構(gòu)建了Detroit562細胞cDNA文庫，用合成的基因探針篩選獲得人尿激酶原全長cDNA，并構(gòu)建成含人尿激酶原全長cDNA的重組表達質(zhì)粒pMTSVT-du，采用磷酸鈣法將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CHO細胞。經(jīng)酶切鑒定正確后，最終挑選得到表達水平最高的CL-11G工程細胞株。該工程細胞株進行了一系列鑒定的結(jié)果表明，它符合生物制品生產(chǎn)細胞的要求。第16頁,共62頁，2024年2月25日，星期天2、細胞的微載體灌流培養(yǎng)

將工程細胞CL-11G細胞株從生產(chǎn)種子庫取出，復蘇依次在方瓶、攪拌瓶、轉(zhuǎn)瓶內(nèi)培養(yǎng)，基礎(chǔ)培養(yǎng)基為DMEM/F12，再轉(zhuǎn)入5升罐培養(yǎng)，細胞密度達到1×107細胞/ml后轉(zhuǎn)入20L罐培養(yǎng)，采用多孔微載體無血清灌流培養(yǎng)。待細胞密度達到1×107/ml左右時，采用間隙更換部分微載體的工藝，即每隔10～15天更換約1/4微載體，每天收集培養(yǎng)上清11.2個體積。我們用20L罐連續(xù)培養(yǎng)91天，細胞密度最高達2.6×107/ml，共獲培養(yǎng)上清1909L,平均活性為6280IU/ml,最高達11200IU/ml，總產(chǎn)量達到113g。第17頁,共62頁，2024年2月25日，星期天3、產(chǎn)品純化制備工藝

采用StreamlineSP-陽離子交換色譜—SephacrylS-200HR凝膠色譜—對氨基苯甲醚親和色譜—QAE-Sepharose陰離子交換色譜四步純化工藝，從1909升培養(yǎng)上清，獲得半成品80g，回收率70%以上，純度高于98%，單鏈含量

98%。半成品加入保護劑和賦形劑后，經(jīng)無菌過濾、分裝、凍干，即成產(chǎn)品78.4g。連續(xù)生產(chǎn)5批產(chǎn)品，其中三批樣品送國家衛(wèi)生部生物制品檢定所檢定，23項指標全部合格。

第18頁,共62頁，2024年2月25日，星期天三批pro-UK電泳結(jié)果第19頁,共62頁，2024年2月25日，星期天九、重組人尿激酶原的

臨床前安全試驗1急性毒性試驗：小鼠急性毒性試驗結(jié)果顯示，pro-UK的半數(shù)致死量（LD50）

97.5mg/kg。在14天觀察期內(nèi)，小鼠體重增加正常，未見任何異常，死亡率為零。第20頁,共62頁，2024年2月25日，星期天2

pro-UK的長期毒性試驗Beagle狗的長期毒性研究結(jié)果表明，pro-UK28mg/kg和8mg/kg組每次靜脈滴注后可見牙齦不同程度充血，給藥后半小時明顯減輕，4小時內(nèi)恢復正常。用藥后注射部位容易出血，需要適當延長壓迫止血時間。2mg/kg組未觀察到上述癥狀。28mg/kg組動物的Tchol、TP和Alb含量有升高趨勢，凝血時間明顯延長，病理學檢查未觀察到藥物造成直接的臟器損傷。第21頁,共62頁，2024年2月25日，星期天3Wistar大鼠的長期毒性試驗

大鼠靜脈注射pro-UK3、10和30mg/kg后，三個劑量組受試動物均未出現(xiàn)毒性反應癥狀，食量、體重增長正常。13項血液學檢查結(jié)果顯示，RBC、Hgb、Reti、HCT、MCHC、MCH與對照組比較有顯著差別或非常顯著差別（P

0.05,P

0.01)，但都在正常范圍波動，沒有明顯的時效關(guān)系和量效關(guān)系。TP、Alb與對照組比較有升高趨勢，APTT時間明顯延長，組織病理學檢查及臟器系數(shù)測定均未發(fā)現(xiàn)具有毒理學意義的改變。第22頁,共62頁，2024年2月25日，星期天4.pro-UK的特殊毒性試驗研究結(jié)果1).小鼠骨髓細胞微核試驗昆明小鼠靜脈注射pro-UK90mg/kg后，12、24、36、48及72小時取材檢查，對多染紅細胞微核率及紅系細胞造血均無明顯影響。各取樣點的微核率及PCE/NCE值均在正常范圍之內(nèi)。第23頁,共62頁，2024年2月25日，星期天2).pro-UK的遺傳毒性研究

用沙門氏菌誘變性實驗平皿摻入法檢測pro-UK對測試菌株TA97、TA98、TA100

和TA102的致突變作用。結(jié)果表明，pro-UK在0.1

2000

g/皿濃度范圍內(nèi),在活化和非活化條件下，誘發(fā)四菌株產(chǎn)生的回變菌落數(shù)與相應的自發(fā)突變率和S9對照組相比無明顯增加，表明pro-UK對沙門氏菌無致基因突變作用。第24頁,共62頁，2024年2月25日，星期天3).pro-UK的CHL細胞染色體畸變試驗

pro-UK100、200、400

g/ml分別與CHL細胞接觸培養(yǎng)24、48小時(加S96h)收獲細胞，三個劑量pro-UK對CHL細胞染色體畸變率均無明顯影響，也未見誘發(fā)CHL細胞染色體畸變及數(shù)目改變。第25頁,共62頁，2024年2月25日，星期天4).pro-UK的生殖毒性研究

小鼠致畸胎試驗結(jié)果表明，小鼠妊娠后第6

15天，每天靜注pro-UK1、5、15、45mg/kg，連續(xù)10天，5、15、45mg/kg各劑量組均有流產(chǎn)和母鼠死亡，1mg/kg和15mg/kg組存活的胎鼠各發(fā)現(xiàn)一個足外翻畸形，畸形率為0.9%和0.7%，均在正常范圍，5mg/kg和45mg/kg組及溶劑對照組存活胎鼠未發(fā)現(xiàn)畸形。第26頁,共62頁，2024年2月25日，星期天1mg/kg劑量組未見母鼠流產(chǎn)、死亡，但個別母鼠仍見宮內(nèi)輕度出血。15mg/kg和45mg/kg組腭裂畸形率明顯增高，5mg/kg及1mg/kg組的腭裂畸形率與空白對照組相當。實驗結(jié)果提示，該藥與其它溶栓藥一樣，孕婦患者要慎用。第27頁,共62頁，2024年2月25日，星期天十、pro-UK的一般藥理學試驗

通過小鼠(劑量：5.2、10.4、20.8mg/kg)，大鼠(劑量:3.6、6.0、12.0mg/kg)，犬(劑量:0.6、1.2、2.4mg/kg)和豚鼠回腸(劑量:1

10-6和1

10-5g/ml)的一般藥理學試驗的結(jié)果表明，pro-UK對受試動物的一般行為、狀態(tài)及中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等均無明顯影響。對出血時間和血小板凝結(jié)功能也無明顯影響。僅發(fā)現(xiàn)犬實驗中手術(shù)創(chuàng)面有滲血現(xiàn)象，實驗結(jié)束后全身血液有類似肝素化狀態(tài)。第28頁,共62頁，2024年2月25日，星期天十一、pro-UK的藥效學試驗結(jié)果

11.1pro-UK對家兔外源性血栓的溶栓作用:

用體外血栓形成儀制備血栓，染色后經(jīng)頸靜脈注入家兔體內(nèi)，觀察不同劑量pro-UK的溶栓作用，并與UK進行比較。結(jié)果表明，pro-UK與UK同等劑量的溶栓作用相似，pro-UK的溶血栓功能隨劑量增加而增強，其溶栓率與對照組比較差異非常明顯(P

0.001)，正常家兔對注入的血栓有一定生理性溶解作用。揭示pro-UK對家兔試驗性血栓有明顯的溶解作用。第29頁,共62頁，2024年2月25日，星期天表1pro-UK對實驗兔肺血栓的溶解作用組別劑量動物數(shù)原血栓重24h后栓重溶栓率

(U/kg)(只)(mg)(mg)(%)

對照組0832.25

2.05

23.88

2.30

25.95

5.42

100008

31.75

1.58

15.38

4.96

52.47

14.58

UK200008

30.25

1.49

13.38

4.72

56.27

14.90

40000730.43

1.62

9.71

3.25

68.30

9.70

80000731.43

1.99

11.71

6.29

63.12

18.82

pro-UK100005

32.00

2.35

15.40

5.13

52.48

14.47

20000830.25

1.28

15.88

3.18

51.54

9.75

40000832.38

1.77

12.88

3.94

59.72

14.19

80000831.25

1.49

9.50

3.63

69.69

11.25

160000832.38

1.85

8.25

3.33

74.44

10.25

第30頁,共62頁，2024年2月25日，星期天11.2pro-UK對豬冠狀動脈血栓的

溶栓作用及相關(guān)指標的影響

中國試驗小型豬直接用電刺激冠狀動脈形成冠脈內(nèi)血栓，用不同劑量pro-UK進行溶栓治療，結(jié)果表明，UK和pro-UK對豬冠脈血栓有顯著的溶栓作用，pro-UK4×104IU/kg、8×104IU/kg、16×104IU/kg三個劑量組與對照組相比均能明顯縮小冠脈血栓橫切面積，減輕心肌缺血程度和范圍，縮小梗塞區(qū)。UK(80000IU/kg)溶栓率為40.1%，pro-UK三個劑量組的溶栓率依次為34.4%、45.6%、47.3%；對照組自溶率為6.7%。第31頁,共62頁，2024年2月25日，星期天對照UK（8萬IU/kg)U-PA(4萬IU/kg)U-PA(8萬IU/kg)U-PA(16萬IU/kg)UK和u-PA對冠脈血栓溶解的作用第32頁,共62頁，2024年2月25日，星期天pro-UK對豬冠狀動脈血栓

的溶栓作用第33頁,共62頁，2024年2月25日，星期天pro-UK的三個劑量組的纖溶指標均無明顯變化。試驗結(jié)果揭示，pro-UK和UK對豬冠脈血栓均有明顯溶解作用，pro-UK對全身纖溶系統(tǒng)影響很小，UK明顯降低

2-AP含量。第34頁,共62頁，2024年2月25日，星期天第35頁,共62頁，2024年2月25日，星期天第36頁,共62頁，2024年2月25日，星期天第37頁,共62頁，2024年2月25日，星期天十二、pro-UK動物體內(nèi)的

藥代動力學研究1、用HPLC法研究家兔pro-UK和UK的藥代動力學結(jié)果表明，單鏈pro-UK和雙鏈UK分別按雙指數(shù)函數(shù)和單指數(shù)函數(shù)衰減。單鏈pro-UK的初相半衰期(t1/2(

)=7

2分鐘)與雙鏈UK的初相半衰期（t1/2(

)=9

3分鐘比較接近；單鏈pro-UK的末相半衰期為t1/2(

)=43

10分鐘，提示單鏈pro-UK在體內(nèi)的作用機理與雙鏈UK不同。單鏈pro-UK和雙鏈UK的藥時曲線下的面積(AUC)分別為398

46KBq.min.ml-1和151

15KBq.min.ml-1。第38頁,共62頁，2024年2月25日，星期天2、用測定酶活力方法研究pro-UK在獼猴體內(nèi)的藥代動力學結(jié)果表明，當分別靜注75000、150000和300000IU/kgpro-UK后，其消除半衰期分別為6.3

1.8、11.5

2.1和12.3

2.9min，半衰期隨劑量增加延長，提示該藥在體內(nèi)存在非線性過程。靜注UK150000IU/kg后，其消除半衰期為13.7

2.7min。第39頁,共62頁，2024年2月25日，星期天3、pro-UK的排泄實驗結(jié)果表明，pro-UK主要經(jīng)尿排泄，其次少量經(jīng)糞便排泄。48小時經(jīng)尿和糞便排泄86.2%，經(jīng)尿排出的大部分是pro-UK的降解產(chǎn)物碎片。組織分布實驗結(jié)果表明，pro-UK進入體內(nèi)主要分布于尿、腎、肝臟、膽汁、心臟、血液、肺等血流豐富的組織，大腦、脂肪等組織含量很低。第40頁,共62頁，2024年2月25日，星期天十三、Ⅰ期臨床耐受性試驗1、健康受試者的遴選：受試者共23人，男11人，女12人，年齡20-35歲，平均27±6歲；體重51-73kg，平均63.7±5.2kg。所有入選者的凝血和纖溶指標均合格，乙肝表面抗原均為陰性，生化檢測和心電圖正常。第41頁,共62頁，2024年2月25日，星期天表2.23名受試者的性別、年齡、體重等情況

A組3/325.5

1.961.8

3.1B組3/328.5

6.359.3

2.7C組3/327.2

6.160.2

6.2D組2/325.0

6.457.0

4.5組別性別(男/女)年齡（歲）體重（kg）第42頁,共62頁，2024年2月25日，星期天表3.23名受試者凝血指標的體檢結(jié)果劑量組PT(S)PA(%)APTT(S)FIB(mg/dl)A組11.12

0.4489.33

4.9328.50

1.22229.67

42.08B組10.57

0.2995.73

6.8529.13

2.86229.50

42.53C組11.22

0.6188.40

6.7431.37

2.77284.67

92.87D組11.80

0.5782.66

5.8329.24

2.34230.00

16.43第43頁,共62頁，2024年2月25日，星期天2、各個劑量組受試者應用不同劑量藥物后均未見有不良反應，心率、心律、血壓、呼吸和心電圖等均無異常變化。藥物注射局部也未見有刺激性反應表現(xiàn)或血腫、皮下出血或皮膚瘀斑等變化。每位受試者均隨訪5～7天，隨訪期間亦未發(fā)現(xiàn)不良反應。第44頁,共62頁，2024年2月25日，星期天2、受試者應用藥物前后血常規(guī)和

血液生化指標的檢查結(jié)果23名受試者應用藥物前后血常規(guī)和血液生化指標的檢查結(jié)果表明，各個劑量組試驗前與給藥后24小時比較，四項血常規(guī)指標，50mg組RBC稍有上升，其余各項指標都輕微減少，其結(jié)果都在正常范圍，統(tǒng)計學分析無顯著性差異；第45頁,共62頁，2024年2月25日，星期天23名受試者26項血液生化指標檢查結(jié)果顯示，各個劑量組給藥后24小時都在正常范圍內(nèi)變化，其中35mg組堿性磷酸酶、肌酸磷酸激酶，50mg組乳酸脫氫酶、肌酸磷酸激酶在用藥24小時后稍有降低，經(jīng)過統(tǒng)計學分析，雖然有顯著性意義，但無臨床意義。尿常規(guī)給藥前后無明顯變化。第46頁,共62頁，2024年2月25日，星期天3、受試者應用藥物前后

凝血指標的測定結(jié)果

受試者應用藥物前后凝血和纖溶指標的測定結(jié)果表明，四個劑量組PT和INR值在給藥后第2小時均略有上升。PA在給藥后第2小時均稍有下降，24小時后均恢復至用藥前水平，從統(tǒng)計結(jié)果看用藥前后均無顯著性。四個劑量組APTT在給藥后第2小時均略有延長，24小時也均恢復到正常水平，雖然20mg組統(tǒng)計學分析有顯著性，但延長值未超過正常值一倍,沒有臨床意義。第47頁,共62頁，2024年2月25日，星期天表4

各劑量組給藥前后凝血指標和纖溶指標的變化劑量組項目時間PT(S)

PA(%)APTT(S)INRFIB(mg/dl)

FDP(

g/ml)PLG(%)

2-AP(%)5mg給藥前11.43

0.6286.17

5.6047.00

35.391.15

0.06225.83

185.26

10114.67

38.7684.03

6.99給藥后2小時11.50

0.4376.55

17.9964.00

41.601.29^

182.75

49.48

10114.27

37.2483.55

3.65給藥后24小時11.25

0.4087.67

4.3728.33

1.751.15

0.07219.20

64.20

1040*117.03

36.33105.53

34.6020mg給藥前11.08

0.6490.25

6.8530.75

3.101.11

0.09192.00

34.13

1091.05

34.8788.78

9.99給藥后2小時11.92

1.7183.17

14.0554.83*

14.361.27

0.30196.17*

78.6610-4099.60

35.8692.95

8.94給藥后24小時11.27

0.7188.00

7.6231.67*

3.081.15

0.10262.00*

79.9610-40110.90

35.06113.92

31.97第48頁,共62頁，2024年2月25日，星期天表5

各劑量組給藥前后凝血指標和纖溶指標的變化(續(xù))劑量組項目時間PT(S)

PA(%)APTT(S)INRFIB(mg/dl)

FDP(

g/ml)PLG(%)

2-AP(%)35mg給藥前11.10

0.1489.30

1.7231.67

4.581.13

0.02262.38

121.38

10120.07

39.07126.83

26.33給藥后2小時12.05

1.8081.82

13.5440.90

10.321.30

0.32234.50

132.610-40

4096.52

32.04110.83

22.64給藥后24小時11.87

1.5083.22

11.8829.97

2.951.26

0.26305.17

78.6810-40

40,

10128.00

34.37112.35

30.8050mg給藥前11.66

0.6184.42

5.7928.92

2.441.22

0.10238.80

90.99

10109.42

33.9779.62

7.44給藥后2小時13.00

1.7573.20

10.9045.96

18.151.46

0.33211.40

57.58

104096.66

30.9299.02*

3.24給藥后24小時11.60

0.6884.40

7.1630.20

2.391.22

0.12242.00

35.82

10120.60

40.2797.28*

4.20第49頁,共62頁，2024年2月25日，星期天第50頁,共62頁，2024年2月25日，星期天第51頁,共62頁，2024年2月25日，星期天第52頁,共62頁，2024年2月25日，星期天第53頁,共62頁，2024年2月25日，星期天結(jié)論

（1).23名正常受試者靜脈接受重組人尿型纖溶酶原激活劑(pro-UK)5～50mg后，均未觀察到任何不良反應，皮膚黏膜及其它部位未見出血；注射局部皮膚無刺激反應表現(xiàn)。尿常規(guī)、血常規(guī)、心電圖以及血液生化26項測定指標也均在正常范圍。表明該藥物對身體各系統(tǒng)、以及對肝、腎功能均無明顯毒性作用。

第54頁,共62頁，2024年2月25日，星期天（2)給藥后第2小時，受試者凝血指標有所變化，PA均略有下降，APTT有延長趨勢，僅在20mg組與用藥前比較有顯著性意義，其它各組均無顯著性。纖溶指標,各個劑量組用藥后FDP稍有升高，F(xiàn)IB、PLG和

2-AP無明顯變化，說明本藥對全身的纖溶系統(tǒng)影響小，安全性好。但因有個體差異，在用藥后仍應嚴密觀察可能出現(xiàn)的出血等副作用。試驗結(jié)果可以認為pro-UK給藥劑量在50mg以內(nèi)是安全的，能耐受的。第55頁,共62頁，2024年2月25日，星期天十四、健康受試者iv重組pro-UK

的藥代動力學

正常受試者顯示健康受試者iv劑量為20mg，35mg和50mg重組pro-UK后(其中25%推注，75%在1h內(nèi)恒速滴注)，血漿總pro-UK、scpro-UK和纖溶酶活性濃度-時間變化的結(jié)果顯示，血漿總pro-UK、scpro-UK和纖溶酶活性濃度均依賴于劑量或滴注速度明顯增高。第56頁,共62頁，2024年2月25日，星期天

推注后1min至1小時滴注期間，各劑量組間的各個測定時間點之間都有非常明顯的統(tǒng)計差別(P<0.001)。而且曲線呈穩(wěn)定平坦形狀，表明25%的推注劑量使藥物迅速達到穩(wěn)態(tài)血藥濃度，而恒速滴注藥量有效地保持濃度在相應水平上。在滴注結(jié)束后，所有成分的濃度都迅速下降，在開始給藥后6h已基本上恢復至給藥前內(nèi)源性物質(zhì)水平。而且在滴注結(jié)束后1h內(nèi)各劑量組間也可以觀察到濃度的差異。第57頁,共62頁，2024年2月25日，星期天表6健康志愿者iv不同劑量重組pro-UK后

血漿pro-UK的藥代動力學參數(shù)參數(shù)單位20mg35mg50mgN=7N=6N=6AUC(0-6h)

ng.h.mL-1

216.9±50.6501.3±152.5638.2±62.7AUC(0-

)ng.h.mL-1229.0±56.1535.0±177.1652.0±65.2MRTh1.5±0.21.5±0.1

1.2±0