實(shí)驗(yàn)一-顯微鏡的使用及細(xì)菌的簡單染色法

2011級(jí)微生物實(shí)驗(yàn)課程要求上課要求：在上課時(shí)間必須穿好白大褂，不遲到，不吃東西,桌面無雜物。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，每人將自己做實(shí)驗(yàn)的操作臺(tái)整理干凈。分組要求：根據(jù)學(xué)號(hào)分組，位置固定，不得私自調(diào)離。值日要求：根據(jù)學(xué)號(hào)分組。顯微鏡領(lǐng)?。簩?shí)驗(yàn)1-5次，實(shí)驗(yàn)課開始前每人到二樓208室借一臺(tái)顯微鏡。本課程課件放在公共郵箱里，請(qǐng)同學(xué)們自行下載

。

公共郵箱：shianshiyan2011@163.com

密碼：2011shianshiyan6.實(shí)驗(yàn)報(bào)告由學(xué)習(xí)委員收齊后送到食品學(xué)院B2317.考試成績按以下公式計(jì)算：

平時(shí)（30％）＋作業(yè)（30％）＋操作考試（40％）實(shí)驗(yàn)報(bào)告的撰寫要求實(shí)驗(yàn)報(bào)告必須以實(shí)事求是、嚴(yán)肅認(rèn)真的科學(xué)態(tài)度，按照指導(dǎo)書的要求按時(shí)完成。實(shí)驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該簡明扼要、敘述準(zhǔn)確、數(shù)據(jù)完整、繪圖清晰且寫實(shí)，應(yīng)有討論、有分析，結(jié)論明確。一般應(yīng)包括以下一些內(nèi)容：1．實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱；2．實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?．實(shí)驗(yàn)原理；4.實(shí)驗(yàn)材料；

5．實(shí)驗(yàn)步驟；6．實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論。7.思考題

實(shí)驗(yàn)一

顯微鏡油鏡的使用及

細(xì)菌的簡單染色法

背景著色而細(xì)菌本身不著色用無毒性的染料實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)方法和步驟實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄思考題一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.學(xué)習(xí)并掌握普通光學(xué)顯微鏡油鏡的使用技術(shù)；2.學(xué)習(xí)微生物制片、染色的基本技術(shù)，掌握細(xì)菌的簡單染色法及無菌操作技術(shù)；3.觀察細(xì)菌的基本形態(tài)。二、實(shí)驗(yàn)原理：1、顯微鏡油鏡工作原理：油鏡的透鏡很小，從載玻片透過的光線通過空氣時(shí)，因介質(zhì)折光率不同，光線將發(fā)生散射現(xiàn)象，使射入鏡筒的光線很少，物象不清。若在油鏡與玻璃片之間加入與玻璃折射率相近的香柏油，則使通過的光線不至因折射而減弱，因此能清楚地看到物象。2、染色原理由于細(xì)菌細(xì)胞機(jī)體小而透明，與周圍背景沒有明顯的反差,在普通光學(xué)顯微鏡下不易識(shí)別，必須對(duì)它們進(jìn)行染色，使經(jīng)染色后的菌體與背景形成明顯的色差，從而能更清楚地觀察到其形態(tài)和結(jié)構(gòu)。堿性染料的離子帶正電荷，能和負(fù)電荷物質(zhì)結(jié)合。因細(xì)菌細(xì)胞等電點(diǎn)較低，當(dāng)它在中性、堿性或偏酸性培養(yǎng)基中時(shí)帶負(fù)電荷，容易與帶正電荷的堿性染料結(jié)合，所以通常采用堿性染料使其著色（如美蘭，結(jié)晶紫，堿性復(fù)紅或孔雀綠）。

三、實(shí)驗(yàn)材料1、菌種：

大腸桿菌和蠟狀芽孢桿菌2、染色液和試劑：

草酸銨結(jié)晶紫、二甲苯、香柏油。3、器材：載玻片、接種環(huán)、酒精燈、擦鏡紙、顯微鏡。四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟：簡單染色法:是只用一種染料使細(xì)菌著色以顯示其形態(tài)的染色法，簡單染色不能辨別細(xì)菌細(xì)胞的構(gòu)造。1、涂片：

在潔凈無油膩的玻片中央放一小滴蒸餾水（或用接種環(huán)挑1-2滴水），用無菌的接種環(huán)挑取少量菌種與水滴充分混勻，涂成極薄的菌膜，涂布面積約1cm2

整個(gè)過程中要注意無菌操作。（示范無菌操作技術(shù)）

2、干燥：讓涂片自然晾干或者在酒精燈火焰上方溫火烘干，切勿緊靠火焰或加熱時(shí)間過長，以防標(biāo)本烤枯而變形。

3、固定：手執(zhí)玻片一端，讓菌膜朝上，通過火焰2-3次固定（以不燙手為宜）。4、染色：將固定過的涂片加適量草酸銨結(jié)晶紫染色1-2min。5、水洗：斜置載玻片，在自來水龍頭（或洗瓶）下用小股水流沖洗，直至洗下的水呈無色為止。6、干燥：涂片放在空氣中晾干或用吸水紙輕輕吸干，。7、鏡檢：先低倍觀察，再高倍觀察，并找出適當(dāng)?shù)囊曇昂?，將高倍鏡轉(zhuǎn)出，在涂片上加香柏油一滴，將油鏡頭浸入油滴中仔細(xì)調(diào)焦觀察細(xì)菌的形態(tài)。8、繪圖：9、實(shí)驗(yàn)完畢后的處理：

將浸過油的鏡頭按下述方法擦拭干凈：

a.先用擦鏡紙將油鏡頭上的油擦去。b.用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭擦2—3次。c.再用干凈的擦鏡紙將鏡頭擦2—3次。注意擦鏡頭時(shí)向一個(gè)方向擦拭。各部分還原，將電源燈亮度調(diào)至最低后關(guān)閉，將最低放大倍數(shù)的物鏡轉(zhuǎn)到工作位置，同時(shí)將載物臺(tái)降到最低位置

看后的染色玻片用廢紙將香柏油擦干凈。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄菌名染色液名稱菌體顏色高倍鏡下菌體形態(tài)油鏡下菌體形態(tài)六、思考題1、油鏡與普通物鏡在使用方法上有何不同？應(yīng)注意些什么？

2、固定細(xì)胞的目的是什么？七、注意事項(xiàng)1、在粗調(diào)時(shí)，先從側(cè)面注視小心調(diào)節(jié)物鏡靠近標(biāo)本，然后用目鏡觀察，慢慢調(diào)節(jié)物