WS-T 421-2024 抗酵母樣真菌藥物敏感性試驗標(biāo)準(zhǔn) 肉湯稀釋法

WSWS/T421—2024Standardsforantifungalsusceptibilitytestingofyeasts—BrothdilutionmethodWS/T421—2024I II 1 1 1 2 4 4 5 8 10 12 15 16 23 28WS/T421—2024——更改了結(jié)果解釋內(nèi)容：按CLSI（ClinicalandLaboratoryStandardInstitute）有折點(diǎn)的onAntimicrobialSusceptibilityTesting)折點(diǎn)和流WS/T421—20241抗酵母樣真菌藥物敏感試驗標(biāo)準(zhǔn)肉湯稀釋法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用經(jīng)典的宏量肉湯稀釋方法（BrothMacrodilut有良好一致性的微量肉湯稀釋方法（BrothMi本標(biāo)準(zhǔn)適用于引起感染的酵母樣真菌（包括念珠菌屬某些種Candidaspp.和隱球菌屬某些種Cryptococcusspp.）的藥物敏度（MIC）質(zhì)控參考范圍、折點(diǎn)、結(jié)果解釋性3.13.2用于區(qū)分菌株為敏感、劑量依賴性敏感、中介、耐藥的3.3根據(jù)建立的折點(diǎn)將藥敏結(jié)果所得的MIC值進(jìn)行敏感3.43.5劑量依賴性敏感susceptible-dosedependen指分離株的敏感性依賴于對患者的用藥方案，即對于藥敏結(jié)果在SDD范圍內(nèi)的分離株，為了使血藥濃度達(dá)到臨床療效，采用較高劑量和/或增加用藥頻率的給藥方案，使藥物暴露高于常用敏感折點(diǎn)的劑3.6WS/T421—20242區(qū)，以防止微小的、不可控的技術(shù)因素導(dǎo)致較嚴(yán)重的3.73.8流行病學(xué)界值epidemiologicalcutoffvalue;ECV/epidemiologicalcu3.9ECV將分離菌株歸類為對某種檢測的抗菌藥物無獲得性耐藥機(jī)制或無敏感性降低的生物型。3.10ECV將分離菌株歸類為對某種檢測的抗菌藥物具有推測的/已知獲得性耐藥機(jī)制或敏感性降低的生3.113.123.134抗真菌藥物的配制4.1抗真菌藥物標(biāo)準(zhǔn)品或參考品4.2稱量藥物可使用式（1）、式（2）計算藥物重量及稀釋液體積:WS/T421—20243m——藥物的重量，單位為毫克（mg4.3.1藥物稱量4.3.2溶劑表1抗真菌藥物的儲存液使用的溶劑、稀釋液種類及藥物Manogepixc培養(yǎng)基指RPMI-1640肉湯培養(yǎng)基，如使用商品化RPMI-1640肉湯干粉配制，步驟見表A.4.3.3過濾WS/T421—20244取出的當(dāng)天使用，現(xiàn)用現(xiàn)取，未用完的應(yīng)丟棄。大4.4非水溶性抗真菌藥物稀釋液推薦使用RPMI-1640肉湯培養(yǎng)基（配制方法見表A.1），若無商品化RPMI-164微量肉湯稀釋法推薦使用葡萄糖含量為2％的RPMI-1640肉湯培養(yǎng)基，配方b6253448354262171085-19b配制步驟1舉例，取5120μg/mL的儲存液1.0mL，加入7.0mL溶劑，得到中間濃度為640濃度，取1.0mL，加入1.0mL溶劑，得到中間濃度320μg/mL，以此類推；宏量肉湯稀釋法取0.1mL中間濃度液與10WS/T421—202456.1宏量肉湯稀釋法操作步驟確保菌株的純度和活性。念珠菌于35℃培養(yǎng)24h，新型隱球菌培養(yǎng)48落，加入5mL0.85％無菌鹽水混勻，用濁度儀或0.5麥?zhǔn)蠁挝涣蛩徜^濁度標(biāo)準(zhǔn)管（配制見表A.4）配制），濃度為0.5×103CFU/mL～2在無菌試管中分別加入表2所示系列中間濃度液0.1mL，15min內(nèi)（4℃下可6.2微量肉湯稀釋法操作步驟按本標(biāo)準(zhǔn)第6.1.1條方法培養(yǎng)和制備0.5麥?zhǔn)蠁挝粷舛葹?×106CFU/mL～5×106根據(jù)藥物濃度檢測范圍（可參考表2）由低濃度到高濃度依次用（多道）加樣器，從96孔板的第1對于微量肉湯稀釋法，念珠菌及新型隱球菌培養(yǎng)溫度均為35℃,所有抗真菌藥物的質(zhì)控范圍基于可用于培養(yǎng)48h結(jié)果判讀。上述所有抗真菌藥物對于隱球菌屬的MIC值應(yīng)在培養(yǎng)72h讀7.1結(jié)果判讀WS/T421—20246宏量肉湯稀釋法質(zhì)控菌株的參考范圍見表B.1，微量肉湯稀釋法質(zhì)控菌株的參考范圍見表B——0完全清亮；——2濁度顯著降低(≈50%);——3濁度輕微降低；——4濁度沒有變化。氟胞嘧啶和吡咯類抗真菌藥物有拖尾生長現(xiàn)象，生長終點(diǎn)判斷標(biāo)準(zhǔn)為50％抑7.2結(jié)果解釋與折點(diǎn)不同，ECV值不能預(yù)測臨床治療效果。對于既有折點(diǎn)又有ECV的不能預(yù)測治療的臨床反應(yīng)。當(dāng)評估的真菌種類和抗真菌藥物存在折點(diǎn)時，不應(yīng)在臨床實踐中使表D.3）作為參考而非明確的耐藥折點(diǎn)。患者使用其他抗真菌藥物無效的情況下，即使某抗真菌藥物的WS/T421—202477.3抗真菌藥物結(jié)果解釋之前的CLSI折點(diǎn)不再使用。無折點(diǎn)念珠菌屬的氟胞嘧啶ECV值已建立無折點(diǎn)的念珠菌屬對阿尼芬凈和米卡芬凈的ECV值（表D.EUCAST微量肉湯稀釋法24h質(zhì)控菌株MIC范圍見表E.1；念珠菌體外微量肉湯稀釋7.4結(jié)果報告WS/T421—20248a)有MIC判斷折點(diǎn)（念珠菌MIC折點(diǎn)見表c)無MIC判斷折點(diǎn)且無ECV值：只報告MIb)無MIC判斷折點(diǎn)但有ECOFF值，見表E.3和表E.4，報告MIC值；如果MIC值低于或等于ECOFF值報當(dāng)使用新批次的培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿或RPMI-1640肉湯培養(yǎng)基以及微量稀釋96孔板伊曲康唑和其他三唑類藥物適合用于比對試驗，并用已確定MIC的質(zhì)控菌株和參考菌株進(jìn)行終點(diǎn)判生長后，于-70℃凍存。用15％甘油制成菌懸液或保存在真菌凍存管中-70℃挑選菌落進(jìn)行藥敏試驗。若MIC值在質(zhì)控范圍之內(nèi)（見表若短期使用，可在沙保羅培養(yǎng)基或馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基培養(yǎng)后2℃~8℃保存，每兩周進(jìn)行一次傳WS/T421—20249從-70℃或液氮中取出凍存管，待室溫融化后，轉(zhuǎn)種于馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基，于35℃培養(yǎng)（念珠WS/T421—2024用商品化RPMI-1640肉湯干粉配制1LRPMI-1640肉湯培養(yǎng)基步驟見表A.1，若無肉湯干粉，配制12345L-蘇氨酸D-泛酸鈣D-葡萄糖L-亮氨酸L-蛋氨酸MOPS123456宏量肉湯稀釋法質(zhì)控菌株MIC范圍見表B.1，微量肉湯稀釋法質(zhì)控菌株MIC范表B.1宏量肉湯稀釋法質(zhì)控菌株MIC范圍(μg/mL，48h）MICs在范圍內(nèi)比例%ATCC90018a標(biāo)準(zhǔn)菌株：由菌種保藏機(jī)構(gòu)保藏的、有且僅有永久保藏號、遺傳學(xué)特性得到確認(rèn)和保證并可追溯的WS/T421—2024表B.2微量肉湯稀釋法質(zhì)控菌株MIC范圍(μg/mL，24h和48h）比例%MIC范圍比例%128–––211122–––11表B.2微量肉湯稀釋法質(zhì)控菌株MIC范圍(μg/mL，24h和48h續(xù)）比例%MIC范圍比例%WS/T421—2024––––––杜布斯希木龍念珠菌–––––––––––––––––––球菌（以前的格特–––注1：如果24h生長對照顯示生長不足，此折點(diǎn)也可用于培養(yǎng)WS/T421—2024念珠菌屬體外微量肉湯稀釋法MIC折點(diǎn)見表D.1，無折點(diǎn)的念珠菌屬和隱球菌屬ECV值分別見表D.2和表D.3，有折點(diǎn)的念珠菌屬的ECV值見表D.4，耳念珠菌體外微量肉湯稀釋法MIC暫定折點(diǎn)表D.1念珠菌屬體外微量肉湯稀釋法MIC折點(diǎn)(μg/mL,24h）MIC折點(diǎn)和判讀SIR––4––4––––4––4––––4––4–––4–––––––4–4WS/T421—2024表D.1念珠菌屬體外微量肉湯稀釋法MIC折點(diǎn)(μg/mL,24h續(xù)）MIC折點(diǎn)和判讀SIR–––––1–––a如果24h生長對照顯示生長不足，此折點(diǎn)也可用于b對于近平滑念珠菌復(fù)合群，由于擬平滑念珠菌和似平滑念珠菌流行率較低，當(dāng)未進(jìn)行進(jìn)一步種屬測定時，可采清楚。當(dāng)檢測卡泊芬凈時，敏感結(jié)果可報告“敏感”。但當(dāng)實米卡芬凈或阿尼芬凈耐藥，或具有特征性fks熱點(diǎn)突變的念珠菌屬應(yīng)視為對所有棘白菌素耐藥，包括對卡泊芬e克柔念珠菌對氟康唑天然耐藥，不應(yīng)使用此表格解釋其MIC。f對于光滑念珠菌和伏立康唑，目前的數(shù)據(jù)不足以證明WS/T421—2024842182122WS/T421—2024表D.3耳念珠菌體外微量肉湯稀釋法MIC暫定折點(diǎn)(μg/mL）MIC暫定折點(diǎn)注1：/fungal/candida-auris/c-auris-antifungal菌素類抗真菌藥物都產(chǎn)生耐藥，在其他國家發(fā)現(xiàn)泛耐藥性的報告。在美國，約90％的耳念珠菌分離株對氟康g/mL。應(yīng)根據(jù)藥敏試驗結(jié)果選擇適合的藥表D.4無折點(diǎn)的念珠菌屬ECV(μg/mL）2222221212WS/T421—2024表D.4無折點(diǎn)的念珠菌屬ECV(μg/mL續(xù)）1121181142142111表D.4無折點(diǎn)的念珠菌屬ECV(μg/mL續(xù)）1111WS/T421—2024表D.5無折點(diǎn)a的隱球菌屬ECV值(μg/mL）18481b流行病學(xué)界值ECV[9]是使用肉湯微量稀釋參考方法建立的[1]。如果使用另WS/T421—2024液；接種量：最終濃度0.5×105CFU/mL～2.5×105CFU/mL；培養(yǎng)時間：18h～菌ATCC22019或克柔念珠菌ATEUCAST微量肉湯稀釋法質(zhì)控菌株MIC范圍見表E.1,念珠菌體外微量肉湯稀釋法MIC折點(diǎn)見表E.2,有折點(diǎn)的念珠菌屬的ECOFF值見表E.3,EUCAST有折點(diǎn)的隱球菌屬的EC表E.1EUCAST微量肉湯稀釋法質(zhì)控菌株MIC范圍(μg/mL）211注：Version5.0,2020,hWS/T421—2024表E.2EUCAST念珠菌體外微量肉湯稀釋法MIC折點(diǎn)(μg/mL）MIC折點(diǎn)和判讀SIR-----------4444-----------表E.2EUCAST念珠菌體外微量肉湯稀釋法MIC折點(diǎn)(μg/mLMIC折點(diǎn)和判讀SIR注1：Version2.0,2020,.注3：*代表ATU：技術(shù)不確定性區(qū)域，白念珠菌對米卡芬凈的ATU值是0.03mg/L，如果對阿尼芬凈敏感表E.3EUCAST有折點(diǎn)的念珠菌屬的ECOFF值(μg/mL）111114WS/T421—2024表E.3EUCAST有折點(diǎn)念珠菌屬的ECOFF值(μg/mL續(xù)）2212121表E.3EUCAST有折點(diǎn)念珠菌屬的ECOFF值(μg/mL續(xù)）11注1：Version2.0,2020,.表E.4EUCAST有折點(diǎn)的隱球菌屬的ECV值(μg/mL）1注1：Version2.0,2020,.WS/T421—2024AntifungalSusceptibilityTestingofYeasts.4thEdition,M27,2017.derivingbreakpoints.InfectClinMicrobiolInfecsusceptibilitytestsoftenantifungalagents.invasivecandidiasisduetoCandidaglabrata.AntimicrobAgentsChem56(9):4862-4869.InfectDis.2011,70(3):330AntifungalSusceptibilityTesting.3rdEdition,M59,2020.SusceptibilityTestingofFilamentousFungi.2ndEdition,M61gattii/Cryptococcusneoformansspeciescomplex.FungalGeClinMicrobiolInfecandvoriconazole.AntimicrobA