DB32T3762.6-2020新型冠狀病毒檢測技術(shù)規(guī)范 第6部分：血清IgM和IgG抗體膠體金免疫層析檢測程序

ICS11.020

C62

DB32

江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB32/T3762.6—2020

新型冠狀病毒檢測技術(shù)規(guī)范

第6部分：血清IgM和IgG抗體膠體金免疫

層析檢測程序

TechnicalspecificationsforSARS-CoV-2detection

Part6:Colloidalgoldimmunochromatograohicassaytestprocedureforserum

IgMandIgG

2020-03-02發(fā)布2020-03-03實(shí)施

江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB32/T3762.6—2020

新型冠狀病毒檢測技術(shù)規(guī)范

第6部分：血清IgM和IgG抗體膠體金免疫層析檢測程序

1范圍

本部分規(guī)定了新型冠狀病毒IgM和IgG抗體的膠體金免疫層析檢測的環(huán)境與設(shè)施、設(shè)備與耗材、

試劑與材料、血清樣本采集、膠體金免疫層析檢測步驟和結(jié)果判定。

本部分適用于新型冠狀病毒肺炎流行期間被檢測者血清中的IgM和IgG抗體的膠體金免疫層析檢

測方法。其它呼吸道病毒血清樣本中的IgM和IgG抗體檢測程序可參照執(zhí)行。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

Doc9284-AN/905危險(xiǎn)品航空安全運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則

DB32/T3762.1-2020新型冠狀病毒檢測技術(shù)規(guī)范第1部分：生物樣本采集、運(yùn)輸和保存

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件

3.1

膠體金colloidalgoldnanoparticles

由氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小

的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，稱為膠體金。

3.2

免疫層析法immunochromatography

將特異的抗原或抗體先固定于硝酸纖維素膜的某一區(qū)帶，當(dāng)該干燥的硝酸纖維素一端浸入樣本（如

血清）后，由于毛細(xì)管作用，樣本將沿著該膜向前移動(dòng)，當(dāng)移動(dòng)至特定區(qū)域時(shí)，樣本中相應(yīng)的抗體或抗

原即與該區(qū)域的對應(yīng)抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合，若用免疫膠體金或免疫酶染色可使該區(qū)域顯示一定的

顏色，從而實(shí)現(xiàn)特異性的免疫診斷。

4環(huán)境與設(shè)施

在BSL-2級實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

5設(shè)備與耗材

1

DB32/T3762.6—2020

5.1設(shè)備：生物安全柜、洗板機(jī)、酶標(biāo)儀（含有450nm波長濾光片）、高壓鍋、生物安全運(yùn)輸箱、水

浴鍋

5.2耗材：個(gè)人防護(hù)裝備：N95及以上防護(hù)口罩、護(hù)目鏡、一次性防護(hù)面罩、醫(yī)用無紡布帽、連體防

護(hù)服、一次性手術(shù)衣、乳膠手套、防水靴套、真空釆血管、無菌螺旋口塑料管。

6試劑與材料

新型冠狀病毒人IgM抗體膠體金檢測試劑盒、新型冠狀病毒人IgG抗體膠體金檢測試劑盒。

7樣本采集

用真空負(fù)壓采血管采集血液樣本5mL，室溫靜置30分鐘，1500rpm～2000rpm離心10分鐘，收集血

清于無菌螺口塑料管中。

8樣本運(yùn)輸

按照DB32/T3762.1-2020中6.1和6.2的要求。

9膠體金免疫層析檢測步驟

9.1將待測樣本及所需試劑從儲存條件下取出，平衡至室溫。融化后，在測試前將樣本充分混勻。

9.2準(zhǔn)備檢測時(shí)，從撕口處打開鋁箔袋，將檢測卡取出，平放于生安柜臺面上。

9.3在檢測卡上標(biāo)注樣本號。

9.4用移液槍或者一次性滴管吸取待測血清樣本20μL于檢測卡上樣本孔內(nèi)，立即在樣本孔內(nèi)滴加2～

3滴（約70μL～100μL）樣本稀釋液，并確保操作過程中沒有氣泡產(chǎn)生。

9.510分鐘后判讀結(jié)果。

10結(jié)果判定

10.1陰性結(jié)果

僅出現(xiàn)質(zhì)控線C，檢測線G和M都不顯色，說明沒有檢測到新型冠狀病毒抗體，結(jié)果為陰性。

10.2陽性結(jié)果

10.2.1質(zhì)控線C和檢測線M都出現(xiàn)，說明檢測到新型冠狀病毒IgM抗體，結(jié)果為IgM抗體陽性。

10.2.2質(zhì)控線C和檢測線G都出現(xiàn)，說明檢測到新型冠狀病毒IgG抗體，結(jié)果為IgG抗體陽性。

10.2.3質(zhì)控線C、檢測線M和檢測線G都出現(xiàn)，說明檢測到新型冠狀病毒IgM和IgG抗體，結(jié)果為

IgM和IgG抗體陽性。

10.3無效結(jié)果

質(zhì)控線Ｃ未出現(xiàn)，無論檢測線是否出現(xiàn)，均為無效結(jié)果。

_________________________________

2

DB32/T3762.6—2020

前言

DB32/T3762《新型冠狀病毒檢測技術(shù)規(guī)范》目前分為以下部分：

——第1部分：生物樣本采集、運(yùn)輸和保存；

——第2部分：病毒分離與鑒定；

——第3部分：核酸熒光PCR檢測程序；

——第4部分：重組酶介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增程序；

——第5部分：血清IgM和IgG抗體酶聯(lián)免疫吸附檢測程序；

——第6部分：血清IgM和IgG抗體膠體金免疫層析檢測程序；

——第7部分：空氣樣本檢測與評估；

——第8部分：物體表面檢測與評估；

——第9部分：醫(yī)務(wù)人員職業(yè)暴露檢測與評估。

本部分為DB32/T3762的第6部分。

本部分按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。

本部分由江蘇省衛(wèi)生健康委員會提出。

本部分由江蘇省衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。

本部分主要起草單位：江蘇省疾病預(yù)防控制中心、南京醫(yī)科大學(xué)、蘇州第五人民醫(yī)院、蘇州大學(xué)附

二院、昆山市疾病預(yù)防控制中心。

本部分主要起草人：黃超、朱寶立、溫恬、吳斌、程軍平、徐佳南、錢志遠(yuǎn)、羅曉明、沈歡喜。

I

DB32/T3762.6—2020

新型冠狀病毒檢測技術(shù)規(guī)范

第6部分：血清IgM和IgG抗體膠體金免疫層析檢測程序

1范圍

本部分規(guī)定了新型冠狀病毒IgM和IgG抗體的膠體金免疫層析檢測的環(huán)境與設(shè)施、設(shè)備與耗材、

試劑與材料、血清樣本采集、膠體金免疫層析檢測步驟和結(jié)果判定。

本部分適用于新型冠狀病毒肺炎流行期間被檢測者血清中的IgM和IgG抗體的膠體金免疫層析檢

測方法。其它呼吸道病毒血清樣本中的IgM和IgG抗體檢測程序可參照執(zhí)行。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

Doc9284-AN/905危險(xiǎn)品航空安全運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則

DB32/T3762.1-2020新型冠狀病毒檢測技術(shù)規(guī)范第1部分：生物樣本采集、運(yùn)輸和保存

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件

3.1

膠體金colloidalgoldnanoparticles

由氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小

的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，稱為膠體金。

3.2

免疫層析法immunochromatography

將特異的抗原或抗體先固定于硝酸纖維素膜的某一區(qū)帶，當(dāng)該干燥的硝酸纖維素一端浸入樣本（如

血清）后，由于毛細(xì)管作用，樣本將沿著該膜向前移動(dòng)，當(dāng)移動(dòng)至特定區(qū)域時(shí)，樣本中相應(yīng)的抗體或抗

原即與該區(qū)域的對應(yīng)抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合，若用免疫膠體金或免疫酶染色可使該區(qū)域顯示一定的

顏色，從而實(shí)現(xiàn)特異性的免疫診斷。

4環(huán)境與設(shè)施

在BSL-2級實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

5設(shè)備與耗材

1

DB32/T3762.6—2020

5.1設(shè)備：生物安全柜、洗板機(jī)、酶標(biāo)儀（含有450nm波長濾光片）、高壓鍋、生物安全運(yùn)輸箱、水

浴鍋

5.2耗材：個(gè)人防護(hù)裝備：N95及以上防護(hù)口罩、護(hù)目鏡、一次性防護(hù)面罩、醫(yī)用無紡布帽、連體防

護(hù)服、一次性手術(shù)衣、乳膠手套、防水靴套、真空釆血管、無菌螺旋口塑料管。

6試劑與材料

新型冠狀病毒人IgM抗體膠體金檢測試劑盒、新型冠狀病毒人IgG抗體膠體金檢測試劑盒。

7樣本采集

用真空負(fù)壓采血管采集血液樣本5mL，室溫靜置30分鐘，1500rpm～2000rpm離心10分鐘，收集血

清于無菌螺口塑料管中。

8樣本運(yùn)輸

按照DB32/T3762.1-2020中6.1和6.2的要求。

9膠體金免疫層析檢測步驟

9.1將待測樣本及所需試劑從儲存條件下取出，平衡至室溫。融化后，在測試前將樣本充分混勻。

9.2準(zhǔn)備檢測時(shí)，從撕口處打開鋁箔袋，將檢測卡取出，平放于生安柜臺面上。

9.3在檢測卡上標(biāo)注樣本號。

9.4用移液槍或者一次性滴管吸取待測血清樣本