DB32T3762.15-2021新型冠狀病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 第15部分：血清血漿IgM和IgG抗體化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)程序

ICS13.100

C50

DB32

江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB32/T3762.15—2021

新型冠狀病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)范

第15部分：血清/血漿IgM和IgG抗體磁

微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)程序

TechnicalspecificationsforSARS-CoV-2detection

Part15:Serum/PlasmaIgMandIgGantibodiestestprocedurebyMCLIA

2021-12-09發(fā)布2022-01-09實(shí)施

江蘇省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB32/T3762.15—2021

前??言

DB32/T3762《新型冠狀病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》目前分為以下部分：

——第1部分：生物樣本采集、運(yùn)輸和保存；

——第2部分：病毒分離與鑒定；

——第3部分：核酸熒光PCR檢測(cè)程序；

——第4部分：重組酶介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增程序；

——第5部分：血清IgM和IgG抗體酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)程序；

——第6部分：血清IgM和IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)程序；

——第7部分：空氣樣本檢測(cè)與評(píng)估；

——第8部分：物體表面檢測(cè)與評(píng)估；

——第9部分：醫(yī)務(wù)人員職業(yè)暴露檢測(cè)與評(píng)估；

——第10部分：微量血清中和試驗(yàn)；

——第11部分：全基因組高通量測(cè)序；

——第12部分：藥物體外抗病毒效果測(cè)定；

——第13部分：疊氮溴化丙錠-熒光PCR檢測(cè)程序；

——第14部分：N亞基因組熒光PCR檢測(cè)程序；

——第15部分：血清/血漿IgM和IgG抗體磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)程序；

——第16部分：核酸數(shù)字PCR法；

——第17部分：核酸檢測(cè)用假病毒陽(yáng)性質(zhì)控品；

——第18部分：規(guī)?；怂釞z測(cè)程序。

本文件為DB32/T3762的第15部分。

本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起

草。

本文件由江蘇省衛(wèi)生健康委員會(huì)提出。

本文件由江蘇省衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。

本文件主要起草單位：江蘇省疾病預(yù)防控制中心、鹽城市疾病預(yù)防控制中心、揚(yáng)州市疾病預(yù)防控制

中心、淮安市疾病預(yù)防控制中心、南京市疾病預(yù)防控制中心、鎮(zhèn)江市疾病預(yù)防控制中心、東南大學(xué)。

本文件主要起草人：朱立國(guó)、陳國(guó)清、王艷、楊鵬飛、何敏、朱寶立、李楚楚、周璐、田華、孔筱

筱、張宇、沈俐、韓靜、金輝、張?jiān)婈稀?/p>

II

DB32/T3762.15—2021

新型冠狀病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)范

第15部分：血清/血漿IgM和IgG抗體磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)程序

1范圍

本文件規(guī)定了新型冠狀病毒血清/血漿IgM和IgG抗體磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法的檢測(cè)程序。

本文件適用于新型冠狀病毒確診病例、無(wú)癥狀感染者、疑似病例、密切接觸者以及一般人群血清/

血漿樣本中新冠特異性IgM和IgG抗體磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)操作。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

WS233微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則

DB32/T3762.1新型冠狀病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)范第1部分：生物樣本采集、運(yùn)輸和保存

新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南（第二版）

可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定原中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部

3術(shù)語(yǔ)和定義

本文件沒有界定的術(shù)語(yǔ)和定義。

4縮略語(yǔ)

下列縮略語(yǔ)適用于本文件。

IgG：免疫球蛋白G（ImmunoglobulinG）

IgM：免疫球蛋白M（ImmunoglobulinM）

MCLIA：磁微粒化學(xué)發(fā)光法（MagneticChemiluminescenceEnzymeImmunoassay）

RLU：相對(duì)發(fā)光單位（RelativeLightUnit）

5原理

磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法綜合了磁微粒載體技術(shù)和化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)。人血清/血漿中待測(cè)的新型冠

狀病毒IgM、IgG抗體與熒光素標(biāo)記的重組抗原結(jié)合，隨后加入包被著抗熒光素抗體的磁微粒，通過

抗熒光素抗體與熒光素的特異性結(jié)合使抗原抗體復(fù)合物連接在磁微粒上。在外加磁場(chǎng)中直接沉淀，去上

清后清洗沉淀的復(fù)合物，加入酶標(biāo)抗體，形成磁微粒－抗原－抗體－酶標(biāo)抗體夾心免疫復(fù)合物。再次清

洗后，加入酶促化學(xué)發(fā)光底物。底物在堿性磷酸酶作用下被催化裂解，形成不穩(wěn)定的激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)

激發(fā)態(tài)中間體回到基態(tài)時(shí)便發(fā)出光子，形成發(fā)光反應(yīng)，通過光量子閱讀系統(tǒng)記錄光子能量，并通過計(jì)算

1

DB32/T3762.15—2021

機(jī)處理系統(tǒng)將光能量強(qiáng)度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上RLU轉(zhuǎn)換為待測(cè)抗體的濃度，樣本的RLU與其中的新型冠狀

病毒IgM、IgG抗體濃度呈正相關(guān)，從而檢測(cè)人血清/血漿中的新型冠狀病毒IgM、IgG抗體。

6實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)要求

6.1實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)及級(jí)別

檢測(cè)工作應(yīng)在BSL-2級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。生物安全應(yīng)遵照GB19489和WS233對(duì)生物安全2級(jí)

（BSL-2）實(shí)驗(yàn)室的生物安全要求。

6.2操作人員資質(zhì)及防護(hù)

實(shí)驗(yàn)中的個(gè)人防護(hù)遵照GB19489和新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南（第二版）。

6.3廢棄物的處理

實(shí)驗(yàn)室使用過的實(shí)驗(yàn)用品應(yīng)遵照GB19489對(duì)廢棄物的處理要求進(jìn)行無(wú)害化處理。

7準(zhǔn)備

7.1實(shí)驗(yàn)室

生物安全防護(hù)二級(jí)（BSL-2）或以上等級(jí)實(shí)驗(yàn)室和相應(yīng)的配套設(shè)施。

7.2儀器設(shè)備

常用儀器設(shè)備如下：

——生物安全柜

——化學(xué)發(fā)光免疫分析儀

——離心機(jī)

——移液器

——高壓鍋

——生物安全運(yùn)輸箱

——水浴鍋

7.3試劑

常用試劑如下：

——磁性顆粒-抗熒光素抗體

——熒光素標(biāo)記新型冠狀病毒重組抗原

——堿性磷酸酶標(biāo)記鼠抗人IgM/IgG單克隆抗體

——清洗液

——底物液

——樣本稀釋液

8樣本采集、要求、保存和運(yùn)輸

8.1樣本采集

2

DB32/T3762.15—2021

血清/血漿樣本按照DB32/T3762.1中5.3的要求采集。

8.2樣本要求

出現(xiàn)嚴(yán)重黃疸、溶血、脂血和微生物污染的樣本，均不可進(jìn)行檢測(cè)。

8.3樣本保存

血清/血漿樣本可于2℃～8℃條件下保存3d、-20℃及以下條件下可長(zhǎng)期保存，并避免反復(fù)凍

融。用于存放樣本的冰箱應(yīng)當(dāng)專用。

8.4樣本運(yùn)輸

按照可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定、DB32/T3762.1中6.1、

6.2的要求。

9檢測(cè)方法

9.1血清/血漿IgM抗體磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法

9.1.1試劑制備

將新型冠狀病毒陰陽(yáng)性對(duì)照和底物液在室溫18℃~25℃下平衡30min。用純水將清洗液稀釋到

工作濃度。若清洗液有結(jié)晶，可將清洗液置于室溫或37℃待結(jié)晶溶解后再進(jìn)行稀釋。

9.1.2磁微粒化學(xué)發(fā)光法反應(yīng)體系和反應(yīng)程序

取1mL樣本稀釋液，加入20μL樣本（至少15μL），用漩渦混勻儀混勻5s，靜止15min后

開始實(shí)驗(yàn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，如質(zhì)量控制，設(shè)置陰性、陽(yáng)性對(duì)照各2管及處理后樣本若干。分別加入50

μL磁性顆粒-抗熒光素抗體、75μL處理后樣本或陰性對(duì)照/陽(yáng)性對(duì)照、50μL熒光素標(biāo)記新型冠狀病

毒重組抗原、75μL堿性磷酸酶標(biāo)記鼠抗人IgM單克隆抗體。反應(yīng)時(shí)間35min；完成第二次清洗后每

管加入底物液200μL，避光檢測(cè)，反應(yīng)5s讀數(shù)。磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法反應(yīng)體系的總體積可根據(jù)不同廠

家、型號(hào)的化學(xué)發(fā)光儀做相應(yīng)調(diào)整。

9.1.3結(jié)果分析

根據(jù)RLU自動(dòng)計(jì)算Cutoff值，樣本檢測(cè)的結(jié)果以S/CO值進(jìn)行判定：

a)陰性（－）：S/CO＜1.000，待檢樣本未檢出新型冠狀病毒IgM抗體；

b)陽(yáng)性（＋）：S/CO≥1.000，待檢樣本檢出新型冠狀病毒IgM抗體。

9.1.4質(zhì)量控制

根據(jù)不同廠家、型號(hào)的化學(xué)發(fā)光儀和配套試劑的要求，陽(yáng)性、陰性對(duì)照S/CO應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)。

以上要求不符合，應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)，重新進(jìn)行的試驗(yàn)應(yīng)從試劑制備開始。

9.1.5結(jié)果表述

當(dāng)質(zhì)量控制符合要求：

a)S/CO＜1.000，結(jié)果表述為“待檢樣本未檢出新型冠狀病毒IgM抗體”。

b)S/CO≥1.000，結(jié)果表述為“待檢樣本檢出新型冠狀病毒IgM抗體”。

3

DB32/T3762.15—2021

9.2血清/血漿IgG抗體磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法

9.2.1試劑制備

將新型冠狀病毒陰陽(yáng)性對(duì)照和底物液在室溫18℃~25℃下平衡30min。用純水將清洗液稀釋到

工作濃度。若清洗液有結(jié)晶，可將清洗液置于室溫或37℃待結(jié)晶溶解后再進(jìn)行稀釋。

9.2.2磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法反應(yīng)體系和反應(yīng)程序

取1ml樣本稀釋液，加入20μL樣本（至少15μL），用漩渦混勻儀混勻5s，靜止15min后

開始實(shí)驗(yàn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，在質(zhì)量控制時(shí)，設(shè)置陰性、陽(yáng)性對(duì)照各2管及處理后樣本若干。分別加入

50μL磁性顆粒-抗熒光素抗體、75μL處理后樣本或陰性對(duì)照/陽(yáng)性對(duì)照、50μL熒光素標(biāo)記新型冠狀

病毒重組抗原、75μL堿性磷酸酶標(biāo)記鼠抗人IgG單克隆抗體。反應(yīng)時(shí)間35min；完成第二次清洗后

每管加入底物液200μL，避光檢測(cè)，反應(yīng)5s讀數(shù)。磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法反應(yīng)體系的總體積可根據(jù)不同

廠家、型號(hào)的化學(xué)發(fā)光儀做相應(yīng)調(diào)整。

9.2.3結(jié)果判讀

根據(jù)RLU自動(dòng)計(jì)算Cutoff值，樣本檢測(cè)的結(jié)果以S/CO值進(jìn)行判定

a)陰性（－）：S/CO＜1.000，待檢樣本未檢出新型冠狀病毒IgG抗體；

b)陽(yáng)性（＋）：S/CO≥1.000，待檢樣本檢出新型冠狀病毒IgG抗體。

9.2.4質(zhì)量控制

根據(jù)不同廠家、型號(hào)的化學(xué)發(fā)光儀和配套試劑的要求，陽(yáng)性、陰性對(duì)照S/CO應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)。

以上要求不符合，應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)，重新進(jìn)行的試驗(yàn)應(yīng)從試劑制備開始。

9.2.5結(jié)果表述

當(dāng)質(zhì)量控制符合要求時(shí)，

a)S/CO＜1.000，結(jié)果表述為“待檢樣本未檢出新型冠狀病毒IgG抗體”。

b)S/CO≥1.000，結(jié)果表述為“待檢樣本檢出新型冠狀病毒IgG抗體”。

_________________________________

4

DB32/T3762.15—2021

目??次

前??言.............................................................................................................................................................II

1范圍.................................................................................................................................................................1

2規(guī)范性引用文件.............................................................................................................................................1

3術(shù)語(yǔ)和定義.....................................................................................................................................................1

4縮略語(yǔ).............................................................................................................................................................1

5原理.................................................................................................................................................................1

6實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)要求.............................................................................................................................2

7準(zhǔn)備.................................................................................................................................................................2

8樣本采集、要求、保存和運(yùn)輸.....................................................................................................................2

9檢測(cè)方法.........................................................................................................................................................3

I

DB32/T3762.15—2021

新型冠狀病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)范

第15部分：血清/血漿IgM和IgG抗體磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)程序

1范圍

本文件規(guī)定了新型冠狀病毒血清/血漿IgM和IgG抗體磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法的檢測(cè)程序。

本文件適用于新型冠狀病毒確診病例、無(wú)癥狀感染者、疑似病例、密切接觸者以及一般人群血清/

血漿樣本中新冠特異性IgM和IgG抗體磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)操作。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

WS233微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則

DB32/T3762.1新型冠狀病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)范第1部分：生物樣本采集、運(yùn)輸和保存

新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南（第二版）

可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定原中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部

3術(shù)語(yǔ)和定義

本文件沒有界定的術(shù)語(yǔ)和定義。

4縮略語(yǔ)

下列縮略語(yǔ)適用于本文件。

IgG：免疫球蛋白G（ImmunoglobulinG）

IgM：免疫球蛋白M（ImmunoglobulinM）

MCLIA：磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法（MagneticChemiluminescenceEnzymeImmunoassay）

RLU：相對(duì)發(fā)光單位（RelativeLightUnit）

5原理

磁微粒化學(xué)發(fā)光法綜合了磁微粒載體技術(shù)和化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)。人血清/血漿中待測(cè)的新型冠

狀病毒IgM、IgG抗體與熒光素標(biāo)記的重組抗原結(jié)合，隨后加入包被著抗熒光素抗體的磁微粒，通過

抗熒光素抗體與熒光素的特異性結(jié)合使抗原抗體復(fù)合物連接在磁微粒上。在外加磁場(chǎng)中直接沉淀，去上

清后清洗沉淀的復(fù)合物，加入酶標(biāo)抗體，形成磁微粒－抗原－抗體－酶標(biāo)抗體夾心免疫復(fù)合物。再次清

洗后，加入酶促化學(xué)發(fā)光底物。底物在堿性磷酸酶作用下被催化裂解，形成不穩(wěn)定的激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)

激發(fā)態(tài)中間體回到基態(tài)時(shí)便發(fā)出光子，形成發(fā)光反應(yīng)，通過光量子閱讀系統(tǒng)記錄光子能量，并通過計(jì)算

1

DB32/T3762.15—2021

機(jī)處理系統(tǒng)將光能量強(qiáng)度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上RLU轉(zhuǎn)換為待測(cè)抗體的濃度，樣本的RLU與其中的新型冠狀

病毒IgM、IgG抗體濃度呈正相關(guān)，從而檢測(cè)人血清/血漿中的新型冠狀病毒IgM、IgG抗體。

6實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)要求

6.1實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)及級(jí)別

檢測(cè)工作應(yīng)在BSL-2級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。生物安全應(yīng)遵照GB19489和WS233對(duì)生物安全2級(jí)

（BSL-2）實(shí)驗(yàn)室的生物安全要求。

6.2操作人員資質(zhì)及防護(hù)

實(shí)驗(yàn)中的個(gè)人防護(hù)遵照GB19489和新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南（第二版）。

6.3廢棄物的處理

實(shí)驗(yàn)室使用過的實(shí)驗(yàn)用品應(yīng)遵照GB19489對(duì)廢棄物的處理要求進(jìn)行無(wú)害化處理。

7準(zhǔn)備

7.1實(shí)驗(yàn)室

生物安全防護(hù)二級(jí)（BSL-2）或以上等級(jí)實(shí)驗(yàn)室和相應(yīng)的配套設(shè)施。

7.2儀器設(shè)備

常用儀器設(shè)備如下：

——生物安全柜

——化學(xué)發(fā)光免疫分析儀

——離心機(jī)

——移液器

——高壓鍋

——生物安全運(yùn)輸箱

——水浴鍋

7.3試劑

常用試劑如下：

——磁性顆粒-抗熒光素抗體

——熒光素標(biāo)記新型冠狀病毒重組抗原

——堿性磷酸酶標(biāo)記鼠抗人IgM/IgG單克隆抗體

——清洗液

——底物液

——樣本稀釋液

8樣本采集、要求、保存和運(yùn)輸

8.1樣本采集

2

DB32/T3762.15—2021

血清/血漿樣本按照DB32/T3762.1中5.3的要求采集。

8.2樣本要求

出現(xiàn)嚴(yán)重黃疸、溶血、脂血和微生物污染的樣本，均不可進(jìn)行檢測(cè)。

8.3樣本保存

血清/血漿樣本可于2℃～8℃條件下保存3d、-20℃及以下條件下可長(zhǎng)期保存，并避免反復(fù)凍

融。用于存放樣本的冰箱應(yīng)當(dāng)專用。

8.4樣本運(yùn)輸

按照可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定、DB32/T3762.1中6.1、

6.2的要求。

9檢測(cè)方法

9.1血清/血漿IgM抗體磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法

9.1.1試劑制備

將新型冠狀病毒陰陽(yáng)性對(duì)照和底物液在室溫18℃~25℃下平衡30min。用純水將清洗液稀釋到

工作濃度。若清洗液有結(jié)晶，可將清洗液置于室溫或37℃待結(jié)晶溶解后再進(jìn)行稀釋。

9.1.2磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法反應(yīng)體系和反應(yīng)程序

取1mL樣本稀釋液，加入20μL樣本（至少15μL），用漩渦混勻儀混勻5s，靜止15min后

開始實(shí)驗(yàn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，如質(zhì)量控制，設(shè)置陰性、陽(yáng)性對(duì)照各2管及處理后樣本若干。分別加入50

μL磁性顆粒-抗熒光素抗體、75μL處理后樣本或陰性對(duì)照/陽(yáng)性對(duì)照、50μL熒光素標(biāo)記新型冠狀病

毒重組抗原、75μL堿性磷酸酶標(biāo)記鼠抗人IgM單克隆抗體。反應(yīng)時(shí)間35min；完成第二次清洗后每

管加入底物液200μL，避光檢測(cè)，反應(yīng)5s讀數(shù)。磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法反應(yīng)體系的總體積可根據(jù)不同廠

家、型號(hào)的化學(xué)發(fā)光儀做相應(yīng)調(diào)整。

9.1.3結(jié)果分析

根據(jù)RLU自動(dòng)計(jì)算Cutoff值，樣本檢測(cè)的結(jié)果以S/CO值進(jìn)行判定：

a)陰性（－）：S/CO＜1.000，待檢樣本未檢出新型冠狀病毒IgM抗體；

b)陽(yáng)性（＋）：S/CO≥1.000，待檢樣本檢出新型冠狀病毒IgM抗體。

9.1.4質(zhì)量控制

根據(jù)不同廠家、型號(hào)的化學(xué)發(fā)光儀和配套試劑的要求，陽(yáng)性、陰性對(duì)照S/CO應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)。

以上要求不符合，應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)，重新進(jìn)行的試驗(yàn)應(yīng)從試劑制備開始。

9.1.5結(jié)果表述

當(dāng)質(zhì)量控制符合要求：

a)S/CO＜1.000，結(jié)果表述為“待檢樣本未檢出新型冠狀病毒IgM抗體”。

b)S/CO≥1.000，結(jié)果表述為“待檢樣本檢出新型冠狀病毒IgM抗體”。