DB32T3806-2020獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病監(jiān)測(cè)規(guī)范

ICS65.020.30

B16

DB32

江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB32/T3806—2020

獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病監(jiān)測(cè)規(guī)范

Guidelineforsurveillanceofkiwifruitbacterialcanker

2020-05-25發(fā)布2020-06-25實(shí)施

江蘇省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB32/T3806—2020

獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病監(jiān)測(cè)規(guī)范

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了獼猴桃潰瘍病的監(jiān)測(cè)原理、監(jiān)測(cè)準(zhǔn)備、監(jiān)測(cè)區(qū)域、監(jiān)測(cè)時(shí)期、監(jiān)測(cè)方法、可疑樣本檢

測(cè)方法、監(jiān)測(cè)結(jié)論和資料保存。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于江蘇地區(qū)獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病的疫情監(jiān)測(cè)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T23621—2009農(nóng)業(yè)植物檢疫實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)條件

LY/T1681—2006林業(yè)有害生物發(fā)生及成災(zāi)標(biāo)準(zhǔn)

3監(jiān)測(cè)原理

丁香假單胞菌獼猴桃致病變種（Pseudomonassyringaepv.actinidiae，Psa）屬于薄壁菌門(mén)

（Gracilicutes）變形菌綱（Proteobacteria）假單胞菌科（Pseudomonadaceae）假單胞菌屬（Pseudomonas），

是引發(fā)獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病的致病細(xì)菌。設(shè)置監(jiān)測(cè)區(qū)域，通過(guò)踏查和調(diào)查，依據(jù)獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病田

間癥狀（參見(jiàn)附錄A）、可疑樣本病原菌檢測(cè)及病原細(xì)菌生物學(xué)特征、致病性和分子生物學(xué)檢測(cè)鑒定結(jié)

果進(jìn)行病害監(jiān)測(cè)。

4監(jiān)測(cè)準(zhǔn)備

收集當(dāng)?shù)孬J猴桃屬植物種植情況、獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病發(fā)生歷史和現(xiàn)狀等相關(guān)資料，制定有效易行

的獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病監(jiān)測(cè)計(jì)劃。

5監(jiān)測(cè)區(qū)域

5.1一般要求

監(jiān)測(cè)區(qū)域包含獼猴桃栽培種植果園、林場(chǎng)、種質(zhì)資源圃、種苗繁育基地、砧穗繁殖圃、境外引進(jìn)獼

猴桃種苗種植區(qū)等，重點(diǎn)監(jiān)測(cè)紅陽(yáng)、金艷、楚紅、Hort16A、西選2號(hào)等易感病獼猴桃品種的集中種植

區(qū)域。

5.2未發(fā)生區(qū)

重點(diǎn)監(jiān)測(cè)疫情高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域，包括毗鄰發(fā)生區(qū)的區(qū)域、有獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病發(fā)生歷史的果園、新建

果園；獼猴桃產(chǎn)品集散地周?chē)J猴桃種植區(qū)，通往疫情發(fā)生區(qū)域交通要道沿線獼猴桃屬、種植物等。

5.3發(fā)生區(qū)

1

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重點(diǎn)監(jiān)測(cè)發(fā)生獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病的種植區(qū)及周邊區(qū)域。

6監(jiān)測(cè)時(shí)期

在每年3~4月春芽膨大期和9~10月初秋潰瘍病發(fā)病小高峰時(shí)期分別進(jìn)行1次監(jiān)測(cè)；11月下旬至來(lái)年1

月期間遭遇大風(fēng)、暴雨、極速降溫等異常天氣應(yīng)及時(shí)增加1次監(jiān)測(cè)。

7監(jiān)測(cè)方法

7.1訪問(wèn)調(diào)查

向果農(nóng)、相關(guān)生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)者、農(nóng)技人員等詢問(wèn)調(diào)查當(dāng)?shù)孬J猴桃種植和獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病發(fā)生的情況，

特別是苗木、接穗和花粉來(lái)源和有無(wú)獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病疑似癥狀等情況，將調(diào)查記錄填入附錄B中表

B.1。

7.2踏查

對(duì)訪問(wèn)調(diào)查過(guò)程中發(fā)現(xiàn)的疫情發(fā)生區(qū)、可疑發(fā)生區(qū)和高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域進(jìn)行重點(diǎn)踏查，踏查面積不小于被

查面積的50%。以自然界線、道路等為單位進(jìn)行線路（目測(cè)）踏查，重點(diǎn)檢查枝蔓及其分杈處、莖蔓幼

芽、皮孔、落葉痕和新生葉片等（參見(jiàn)附錄A第A.4節(jié)）。

踏查發(fā)現(xiàn)可疑癥狀應(yīng)直接采樣進(jìn)行室內(nèi)檢測(cè)。確認(rèn)有疫情需進(jìn)一步掌握危害情況的，應(yīng)設(shè)樣方做詳

細(xì)調(diào)查。

7.3樣方調(diào)查

7.3.1種苗、接穗繁育基地樣方設(shè)置與調(diào)查

樣方的累積面積應(yīng)不少于調(diào)查總面積的5%。每塊樣方面積為0.1hm2，采取棋盤(pán)式取樣法，抽取樣

樹(shù)5株~10株，進(jìn)行病害分級(jí)調(diào)查（參見(jiàn)附錄C）。

7.3.2果園樣方設(shè)置與調(diào)查

按果園面積設(shè)置，10hm2以下（含10hm2）設(shè)1塊樣方，每增加5hm2增設(shè)1塊樣方。每塊樣方面積為

0.1hm2，采取棋盤(pán)式取樣法，抽取樣樹(shù)10株，進(jìn)行病害分級(jí)調(diào)查（參見(jiàn)附錄C），將調(diào)查數(shù)據(jù)填入附錄

B中表B.2。

8可疑樣本檢測(cè)方法

8.1采集部位

所采集的樣品應(yīng)包含植物的感病葉片、花蕾、嫩梢、枝條等部分，應(yīng)盡可能采集病株感病初期的部

位，以利于病原細(xì)菌的分離。

8.2樣品保存

樣品置于聚乙烯袋內(nèi)或其他合適容器內(nèi)防止污染。樣品應(yīng)冷藏存放，避免受到陽(yáng)光的照射。

8.3實(shí)驗(yàn)室要求

2

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獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病菌鑒定用實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置與管理符合GB/T23621—2009中農(nóng)業(yè)植物檢疫實(shí)驗(yàn)室

基礎(chǔ)條件要求。

8.4常規(guī)檢測(cè)

8.4.1溢菌檢查

用手術(shù)刀取一小塊病健交界處組織，放于載玻片上，向病變組織上滴1~2滴無(wú)菌水或蒸餾水，加蓋

玻片后在低倍顯微鏡下（10X）觀察，檢查在水滴與組織交界處是否有云霧狀菌溢。

8.4.2革蘭氏染色檢測(cè)

檢查到菌溢的載玻片將植物組織移去，水滴干燥后通過(guò)火焰固定，采用結(jié)晶紫草酸胺染色法染色，

觀察染色反應(yīng)。

8.4.3形態(tài)特征檢測(cè)

病原菌分離純化、保存過(guò)程參見(jiàn)附錄D。獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病菌落和病原菌形態(tài)特征參見(jiàn)附錄A第

A.6章，根據(jù)菌落特征選取可疑菌落做進(jìn)一步致病性測(cè)定和分子生物學(xué)檢驗(yàn)。

8.4.4致病性的測(cè)定

8.4.4.1煙草過(guò)敏性反應(yīng)

將8.4.3純化的獼猴桃潰瘍病病原菌菌株劃線培養(yǎng)后，取生長(zhǎng)旺盛的菌株用平板計(jì)數(shù)法配成

3×108CFU/mL的菌懸液，采用表皮皮下注射法注射2μl菌懸液在六葉齡煙草葉片的細(xì)胞間，以注射2μl

蒸餾水為對(duì)照，3次重復(fù)，置于25℃培養(yǎng)，12h后觀察煙草葉片過(guò)敏性反應(yīng)。

8.4.4.2常規(guī)接種測(cè)定

對(duì)煙草葉片呈過(guò)敏反應(yīng)的菌株，取濃度為3×108CFU/ml的菌懸液2μl，對(duì)紅陽(yáng)獼猴桃健康葉片和枝條

進(jìn)行離體針刺涂抹法接種，以蒸餾水接種為對(duì)照，3次重復(fù)，置于20℃恒溫保濕環(huán)境，5d后逐日觀察其

發(fā)病情況，至20d。

8.5分子生物學(xué)檢驗(yàn)

用已知的獼猴桃潰瘍病菌菌株作為陽(yáng)性對(duì)照，非獼猴桃潰瘍病菌的植物病原細(xì)菌作為陰性對(duì)照，無(wú)

菌水作為空白對(duì)照進(jìn)行PCR檢測(cè)。待測(cè)菌株DNA提取和PCR檢測(cè)方法參見(jiàn)附錄E，如采用市售的試劑盒，

按說(shuō)明操作。

8.6結(jié)果判定

8.6.1癥狀識(shí)別判定

田間植株發(fā)病癥狀符合附錄A描述獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病典型癥狀，判定為獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病。

8.6.2常規(guī)診斷判定

鏡檢有溢菌現(xiàn)象，革蘭氏染色菌體呈紅色，即呈現(xiàn)陰性反應(yīng)，分離培養(yǎng)物在選擇培養(yǎng)基上的菌落特

征和培養(yǎng)特性符合附錄A第A.5章描述，致病性測(cè)定產(chǎn)生典型癥狀，并再次從接種病斑成功分離病原菌，

確定病原菌為獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病菌。

8.6.3分子生物學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果判定

觀察PCR檢測(cè)電泳結(jié)果，如擴(kuò)增產(chǎn)物的片斷大小與附錄E第E.6描章描述相符，可以判定樣品攜帶獼

猴桃細(xì)菌性潰瘍病病菌，否則為陰性反應(yīng)，即樣品不攜帶獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病病菌。

8.7檢驗(yàn)記錄

3

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檢驗(yàn)記錄應(yīng)包括：樣品來(lái)源、種類（品種）、時(shí)間，檢測(cè)的時(shí)間、地點(diǎn)、方法和結(jié)果，PCR檢測(cè)需

要有電泳結(jié)果照片等，并要有檢測(cè)人員、審核人員簽字。上述材料應(yīng)歸檔并妥善保存。

9監(jiān)測(cè)結(jié)論

整理匯總獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病監(jiān)測(cè)調(diào)查記錄，包括獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病的發(fā)生面積、發(fā)生范圍、危

害程度和變化趨勢(shì)，病原鑒定過(guò)程中的各類信息（包括照片、影像等）等詳細(xì)資料，并根據(jù)LY/T

1681—2006林業(yè)有害生物發(fā)生及成災(zāi)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估疫情狀況，形成監(jiān)測(cè)報(bào)告，按國(guó)家、省林業(yè)主管部門(mén)規(guī)

定上報(bào)。

10資料保存

監(jiān)測(cè)過(guò)程中的各類信息（包括照片、影像等）等詳細(xì)資料應(yīng)建立專門(mén)監(jiān)測(cè)檔案，妥善保存以備查。

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AA

附錄A

（資料性附錄）

獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病菌(Psa)相關(guān)資料

A.1英文名稱

Kiwifruitbacterialcanker

A.2學(xué)名

Pseudomonassyringaepv.actinidiae

A.3發(fā)病規(guī)律

潰瘍病菌主要在枝蔓病組織內(nèi)越冬，春季從病部伴菌膿溢出，通過(guò)風(fēng)、雨、昆蟲(chóng)和農(nóng)事作業(yè)、工具

傳播，從傷口或自然孔口侵染寄主。經(jīng)過(guò)一段潛伏繁育期，逐漸導(dǎo)致發(fā)病。新菌斑溢出菌膿后，經(jīng)傳播

進(jìn)行再侵染為害。該病菌屬于低溫高濕性侵染病菌，一年有兩個(gè)發(fā)病高峰時(shí)期，第一個(gè)高峰時(shí)期是獼猴

桃萌芽前10天至落花期。春季旬均氣溫10℃~14℃時(shí)（江蘇省一般為3月上旬）開(kāi)始發(fā)病，以主干、枝

蔓發(fā)病為主，葉片發(fā)病很少。隨溫度升高，主干和枝蔓逐漸停止發(fā)病，葉片、花蕾和花瓣上開(kāi)始發(fā)病。

如遇高溫陰雨天氣，病害容易流行。入夏氣溫升高，病害停止流行。第二個(gè)發(fā)病時(shí)期是秋季果實(shí)成熟期

前后。一般在9月中旬開(kāi)始發(fā)病，主要危害秋梢葉片，主干、枝蔓很少發(fā)病。受害植株發(fā)病，上部枝條

枯死后，又可萌發(fā)新枝，翌年感病后再次死亡，循環(huán)2~3年后，整株死亡。

A.4癥狀診斷

主要危害枝蔓、枝條，也可為害葉片和果實(shí)，以枝蔓受害最重。

A.4.1枝潰瘍癥狀

枝蔓受害，多從萌芽初期開(kāi)始發(fā)病，初期呈水漬狀，后擴(kuò)大，顏色加深，皮層組織隆起變軟，有淡

黃色或黃褐色病斑。后期病斑處皮層縱向線狀開(kāi)裂，傷口、皮孔、芽眼、葉痕等部位流出滴狀黃白色菌

膿，干后在菌斑表面形成紅褐色點(diǎn)狀膿膠，剝開(kāi)皮層后可見(jiàn)木質(zhì)部呈黑褐色，韌皮部腐爛。小枝條受害，

多從芽周?chē)l(fā)生，初期產(chǎn)生暗綠色或暗褐色水漬狀，后很快擴(kuò)展為暗褐色腐爛病斑，稍凹陷，易造成新

梢枝葉萎蔫枯死。

A.4.2葉斑癥狀

主要危害新生葉片，感病初期葉面呈現(xiàn)紅褐色小點(diǎn)，后擴(kuò)展為2mm~3mm深褐色不規(guī)則或多角形病

斑，病斑周?chē)?mm~5mm的明顯黃色水漬狀暈圈。病葉向里或向外翻卷，易脫落。

A.4.3花果腐癥狀

花蕾受害后不能張開(kāi)，變褐死后脫落；果實(shí)受害，造成果實(shí)軟腐，傷口處有褐色汁液流出。

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A.5病原菌形態(tài)特征及培養(yǎng)性狀

獼猴桃潰瘍病菌為革蘭陰性細(xì)菌，好氧。菌體短桿狀，兩端鈍圓，單細(xì)胞，菌體大小為（1.4~2.3）

μm×（0.3~0.5）μm，鞭毛極生，多為1根，少數(shù)為2~3根，無(wú)莢膜，無(wú)芽孢。

在牛肉蛋白胨培養(yǎng)基（BPA）平板上培養(yǎng)，菌落直徑1mm~3mm，乳白色、圓形、凸起、邊緣整

齊，有光澤。在金氏B培養(yǎng)基（KBA）平板上培養(yǎng)形成白色或淺黃色、表面光滑、有黃綠色熒光的菌落。

病原菌生長(zhǎng)最適溫度為25℃~28℃，生長(zhǎng)最高溫度為35℃，生長(zhǎng)最低溫度為-12℃以下，致死溫度為

55℃10min。

A.6傳播途徑

在田間，該病原菌主要通過(guò)雨水、灌溉水、農(nóng)具、昆蟲(chóng)等傳播，由傷口、自然孔口侵入寄主組織。

可隨種苗、接穗、砧木、花粉和昆蟲(chóng)等病菌攜帶者遠(yuǎn)距離傳播。

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BB

附錄B

（規(guī)范性附錄）

獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病調(diào)查記錄表

表B.1獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病訪問(wèn)調(diào)查記錄表

調(diào)查單位：調(diào)查人：

調(diào)查地點(diǎn)：市縣調(diào)查日期：年月日

鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）

村（組）

經(jīng)度/緯度坡度/坡向

土壤質(zhì)地、濕度與土壤厚度（cm）

當(dāng)?shù)販囟群徒涤辏ㄌ貏e記錄休眠期11-1月以及萌芽期3-4月的情形）

業(yè)主姓名：聯(lián)系方式：

品種：平均樹(shù)齡（年）

種植面積（hm2）調(diào)查面積（hm2）

種苗來(lái)源：接穗來(lái)源：花粉來(lái)源：

灌溉和排水情形施肥情形

栽培方法（指出特點(diǎn)）

癥狀描述：

感病各級(jí)株數(shù)：Ⅰ：_______Ⅱ：_______Ⅲ：_______Ⅳ：_______Ⅴ：_______Ⅵ：_______

果園感病等級(jí)：

備注：

7

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表B.2獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病監(jiān)測(cè)調(diào)查記錄表

調(diào)查單位：

調(diào)查時(shí)間：年月日

檢測(cè)作物品種及類型監(jiān)測(cè)面積調(diào)查感病等級(jí)監(jiān)測(cè)（鑒定）

調(diào)查地點(diǎn)

編號(hào)（苗圃、果園）（hm2）株數(shù)株數(shù)結(jié)果

調(diào)查人（簽字）：

8

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CC

附錄C

（資料性附錄）

獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病病害分級(jí)表

單株感病分級(jí)

級(jí)數(shù)癥狀描述

Ⅰ級(jí)主干無(wú)病斑，全株枝條、蔓、葉無(wú)病

Ⅱ級(jí)主干無(wú)病斑，1~20片葉片或1/3枝條發(fā)病

Ⅲ級(jí)主干無(wú)病斑，21~30片葉片或1/3~1/2枝條發(fā)病

Ⅳ級(jí)病斑繞主干1/4~1/2或31片以上葉片或1/2以上枝條發(fā)病

Ⅴ級(jí)病斑繞主干1/2~3/4，或植株部分枯死

Ⅵ級(jí)病斑繞主干超過(guò)3/4，或全株死亡

果園感病分級(jí)（以感病株率計(jì)）

無(wú)未發(fā)現(xiàn)感病株

輕感病株率3%~10%

中感病株率11%~20%

重感病株率21%以上

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DD

附錄D

（資料性附錄）

獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病菌(Psa)分離純化步驟

D.1病原菌分離純化步驟

無(wú)菌條件下用手術(shù)刀取病健交界處組織（2mm~3mm）×（2mm~3mm），分別用70%乙醇和0.5%~1.0%

的次氯酸鈉表面消毒3min~5min，再用無(wú)菌水沖洗3次后，放在滅菌研缽中，用解剖刀充分切碎，加1ml

無(wú)菌蒸餾水研磨成漿狀。靜置10min，用滅菌接種環(huán)蘸取以上組織液，在培養(yǎng)基平板上劃線培養(yǎng)；先在

平板的一側(cè)順序劃3條~5條線，再將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)60°，將接種環(huán)滅菌后，從第二條線末端劃出3條~5條線。

將培養(yǎng)皿倒置于25℃恒溫培養(yǎng)48h~72h。篩選疑似單菌落進(jìn)行劃線純化，25℃恒溫培養(yǎng)48h后，觀察菌

落形態(tài)和病原菌形態(tài)特征。

D.2培養(yǎng)基配方

D.2.1牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（BPA）：

牛肉浸膏3.0g

蛋白胨5.0g

酵母粉1.0g

蔗糖10.0g

瓊脂粉15.0g

蒸餾水補(bǔ)充至1000mL

將上述藥品溶于蒸餾水，

并調(diào)pH值到6.8~7.0，滅菌（121℃）15min

D.2.2金氏B培養(yǎng)基（KBA）：

蛋白胨20.0g

甘油10.0g

磷酸氫二鉀（K2HPO4）1.5g

硫酸鎂（MgSO4·7H2O）1.5g

瓊脂粉15.0g

蒸餾水補(bǔ)充至1000mL

將上述藥品溶于蒸餾水，

并調(diào)pH值到6.8~7.0，滅菌（121℃）15min

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EE

附錄E

（資料性附錄）

獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病菌(Psa)的PCR檢測(cè)方法

E.1試劑及配制

PCR試劑：特異引物對(duì)（10μmol/l）、dNTP（25mmol/l）、PCR緩沖液（10×）、氯化鎂（25mmol/l）、

TaqDNA聚合酶（5U/μl）。

2000bpDNAMarker、5mol/lNaCl、蛋白酶K（20mg/ml）、RNaseA（10mg/ml）、無(wú)水乙醇、70%

乙醇、核酸染料

電泳緩沖液TBE（5×）（pH8.0）：每升溶液中含54gTris，27.5g硼酸，10mMEDTA。電泳時(shí)稀釋

成1×濃度使用。

瓊脂糖凝膠（1%）：稱取0.1g瓊脂糖加入到10ml1×TBE溶液中，微波爐煮沸后加入1‰體積核酸染

料，混勻后制膠。

E.2細(xì)菌DNA提取

用接種環(huán)挑取1～2個(gè)9.4.3中純化菌苔加入150μl無(wú)菌水中，混勻，100℃煮沸10min，12000rpm/min

離心10min，取上清作為待測(cè)模板。亦可按常規(guī)方法或試劑盒提取細(xì)菌DNA后作為模板。4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

E.3PCR檢測(cè)

E.3.1PCR檢測(cè)引物

使用基于16SrDNA和16S-23SrDNA間隔區(qū)序列（ITS）開(kāi)發(fā)的獼猴桃潰瘍病鑒定引物27F/1492R、

PsaF1/PsaR2引物類型見(jiàn)下表：

表E.1引物類型

引物類型上下引物產(chǎn)物大小引物序列（5’-3’）

27F上引物AGAGTTTGATCCTGGCTCAG

27F/1492R1500bp

1492R下引物TACGGTTACCTTGTTACGATT

PsaF1上引物TTTTGCTTTGCACACCCGATTTT

PsaF1/PsaR2280bp

PsaR2下引物CACGCACCCTTCAATCAGGATG

E.3.2PCR反應(yīng)體系及擴(kuò)增條件

PCR反應(yīng)體系為25μL體系：細(xì)菌DNA模板1.2μl、10μmol/l正反引物各0.7μl、2mmol/ldNTPs0.5μl、

10×PCRBuffer1.5μl、25mmol/lMgCl21.5μl、TaqDNA聚合酶0.2μl、滅菌水18.7μl。

PCR擴(kuò)增條件：95℃預(yù)變性3min；95℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，30個(gè)循環(huán)；72℃5min，

16℃保持。

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E.4凝膠電泳

取出PCR樣品，吸取8μlPCR產(chǎn)物加入到1%瓊脂糖凝膠點(diǎn)樣孔中，同時(shí)用2000bpDNAMarker作為

片段大小的標(biāo)準(zhǔn)，置于1×TBE電泳緩沖液中進(jìn)行電泳20min~30min。

E.5成像觀察與記錄

電泳結(jié)束后，取出瓊脂糖凝膠置于凝膠成像儀下，根據(jù)DNAMarker片段判斷擴(kuò)增出的目的條帶的

大小，記錄觀察結(jié)果，并將電子文件存檔備查。

E.6結(jié)果判定

在陰性對(duì)照無(wú)擴(kuò)增條帶，陽(yáng)性對(duì)照在280bp和1500bp處出現(xiàn)特異性條帶的前提下，待測(cè)樣品出現(xiàn)與

陽(yáng)性對(duì)照相同大小的特異性條帶，樣品判定為陽(yáng)性，即攜帶有獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病菌；待測(cè)樣品未出現(xiàn)

與陽(yáng)性對(duì)照相同大小的特異性條帶，樣品判定為陰性，即未攜帶有獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病菌。

12

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前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)制定由江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所提出。

本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇省林業(yè)局歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所，江蘇長(zhǎng)江果品產(chǎn)業(yè)研究院有限公司。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：賈展慧、王剛、張計(jì)育、王濤、郭忠仁、宣繼萍、張英、沈強(qiáng)、王建。

I

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獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病監(jiān)測(cè)規(guī)范

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了獼猴桃潰瘍病的監(jiān)測(cè)原理、監(jiān)測(cè)準(zhǔn)備、監(jiān)測(cè)區(qū)域、監(jiān)測(cè)時(shí)期、監(jiān)測(cè)方法、可疑樣本檢

測(cè)方法、監(jiān)測(cè)結(jié)論和資料保存。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于江蘇地區(qū)獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病的疫情監(jiān)測(cè)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T23621—2009農(nóng)業(yè)植物檢疫實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)條件

LY/T1681—2006林業(yè)有害生物發(fā)生及成災(zāi)標(biāo)準(zhǔn)

3監(jiān)測(cè)原理

丁香假單胞菌獼猴桃致病變種（Pseudomonassyringaepv.actinidiae，Psa）屬于薄壁菌門(mén)

（Gracilicutes）變形菌綱（Proteobacteria）假單胞菌科（Pseudomonadaceae）假單胞菌屬（Pseudomonas），

是引發(fā)獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病的致病細(xì)菌。設(shè)置監(jiān)測(cè)區(qū)域，通過(guò)踏查和調(diào)查，依據(jù)獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病田

間癥狀（參見(jiàn)附錄A）、可疑樣本病原菌檢測(cè)及病原細(xì)菌生物學(xué)特征、致病性和分子生物學(xué)檢測(cè)鑒定結(jié)

果進(jìn)行病害監(jiān)測(cè)。

4監(jiān)測(cè)準(zhǔn)備

收集當(dāng)?shù)孬J猴桃屬植物種植情況、獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病發(fā)生歷史和現(xiàn)狀等相關(guān)資料，制定有效易行

的獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病監(jiān)測(cè)計(jì)劃。

5監(jiān)測(cè)區(qū)域

5.1一般要求

監(jiān)測(cè)區(qū)域包含獼猴桃栽培種植果園、林場(chǎng)、種質(zhì)資源圃、種苗繁育基地、砧穗繁殖圃、境外引進(jìn)獼

猴桃種苗種植區(qū)等，重點(diǎn)監(jiān)測(cè)紅陽(yáng)、金艷、楚紅、Hort16A、西選2號(hào)等易感病獼猴桃品種的集中種植

區(qū)域。

5.2未發(fā)生區(qū)

重點(diǎn)監(jiān)測(cè)疫情高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域，包括毗鄰發(fā)生區(qū)的區(qū)域、有獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病發(fā)生歷史的果園、新建

果園；獼猴桃產(chǎn)品集散地周?chē)J猴桃種植區(qū)，通往疫情發(fā)生區(qū)域交通要道沿線獼猴桃屬、種植物等。

5.3發(fā)生區(qū)

1

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重點(diǎn)監(jiān)測(cè)發(fā)生獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病的種植區(qū)及周邊區(qū)域。

6監(jiān)測(cè)時(shí)期

在每年3~4月春芽膨大期和9~10月初秋潰瘍病發(fā)病小高峰時(shí)期分別進(jìn)行1次監(jiān)測(cè)；11月下旬至來(lái)年1

月期間遭遇大風(fēng)、暴雨、極速降溫等異常天氣應(yīng)及時(shí)增加1次監(jiān)測(cè)。

7監(jiān)測(cè)方法

7.1訪問(wèn)調(diào)查

向果農(nóng)、相關(guān)生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)者、農(nóng)技人員等詢問(wèn)調(diào)查當(dāng)?shù)孬J猴桃種植和獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病發(fā)生的情況，

特別是苗木、接穗和花粉來(lái)源和有無(wú)獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病疑似癥狀等情況，將調(diào)查記錄填入附錄B中表

B.1。

7.2踏查

對(duì)訪問(wèn)調(diào)查過(guò)程中發(fā)現(xiàn)的疫情發(fā)生區(qū)、可疑發(fā)生區(qū)和高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域進(jìn)行重點(diǎn)踏查，踏查面積不小于被

查面積的50%。以自然界線、道路等為單位進(jìn)行線路（目測(cè)）踏查，重點(diǎn)檢查枝蔓及其分杈處、莖蔓幼

芽、皮孔、落葉痕和新生葉片等（參見(jiàn)附錄A第A.4節(jié)）。

踏查發(fā)現(xiàn)可疑癥狀應(yīng)直接采樣進(jìn)行室內(nèi)檢測(cè)。確認(rèn)有疫情需進(jìn)一步掌握危害情況的，應(yīng)設(shè)樣方做詳

細(xì)調(diào)查。

7.3樣方調(diào)查

7.3.1種苗、接穗繁育基地樣方設(shè)置與調(diào)查

樣方的累積面積應(yīng)不少于調(diào)查總面積的5%。每塊樣方面積為0.1hm2，采取棋盤(pán)式取樣法，抽取樣

樹(shù)5株~10株，進(jìn)行病害分級(jí)調(diào)查（參見(jiàn)附錄C）。

7.3.2果園樣方設(shè)置與調(diào)查

按果園面積設(shè)置，10hm2以下（含10hm2）設(shè)1塊樣方，每增加5hm2增設(shè)1塊樣方。每塊樣方面積為

0.1hm2，采取棋盤(pán)式取樣法，抽取樣樹(shù)10株，進(jìn)行病害分級(jí)調(diào)查（參見(jiàn)附錄C），將調(diào)查數(shù)據(jù)填入附錄

B中表B.2。

8可疑樣本檢測(cè)方法

8.1采集部位

所采集的樣品應(yīng)包含植物的感病葉片、花蕾、嫩梢、枝條等部分，應(yīng)盡可能采集病株感病初期的部

位，以利于病原細(xì)菌的分離。

8.2樣品保存

樣品置于聚乙烯袋內(nèi)或其他合適容器內(nèi)防止污染。樣品應(yīng)冷藏存放，避免受到陽(yáng)光的照射。

8.3實(shí)驗(yàn)室要求